Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular

Facultad de Medicina

Biosntesis de DNA.
Cambios post-replicacin

C. Arizmendi

Cambios en el DNA genmico

Epigentica
Reparacin
Recombinacin
Transposicin

la epigentica ayuda a entender el desarrollo de

muchos tumores, pero, adems, es lo que permite
explicar porqu el hombre y el chimpanc son tan
distintos si comparten el 99% de los genes, y otras
muchas cuestiones que escapan a la gentica.
porqu un organismo clonado no es exactamente
igual al original? porqu dos gemelos idnticos tienen
enfermedades y personalidades distintas si tienen el
mismo DNA? Dr. M. Esteller. (Centro Nacional de Investigaciones
Oncolgicas. Especialista en Epigentica)
epignesis.
(De epi- y -gnesis).
1. f. Biol. Doctrina segn la cual los rasgos que caracterizan a un ser vivo se configuran en el curso
del desarrollo, sin estar preformados en el huevo fecundado. (Diccionario de la RAE)
C. Arizmendi

Procariotas: Catalizada por metilasas con S-Adenosil

metionina como donador de -CH3. Ejs.:

1- A en secuencias GATC: Dam metilasas
2- Cs en secuencias CCA/TGG: Dcm metilasas
Funcin:
Distinguir la hebra antigua de la recin replicada (reparacin)
Distinguir DNA propio de extrao, y as poder atacar este por
enzimas modificadoras

C. Arizmendi

Metilacin del DNA

Un evento temprano en la carcinognesis de
los tumores slidos parece ser una alteracin
en la metilacin del DNA.

C. Arizmendi

Eucariotas: 5-Metil citosina en secuencias CG

Funcin:
-Evidencias circunstanciales indican que la metilacin

desconecta la expresin de genes

-La expresin diferencial de genes de herencia paterna o
materna podra depender de su grado de metilacin
(imprinting= impronta)

-El perfl de metilacin se autoperpeta, si bien no se sabe

cmo se establece en la lnea germinal (por primera vez)

o se modifica en la diferenciacin celular

C. Arizmendi

C. Arizmendi

C. Arizmendi

Secuencias Alu
Las repeticiones Alu son las secuencias repetitivas mviles ms abundantes
del genoma humano. Son secuencias cortas, de unos 300 pares de bases,
ricas en guanina y citosina.
El genoma humano puede albergar una secuencia Alu cada 3 kilobases.
Cada secuencia Alu est formada por dos repeticiones de una
secuencia de unos 120 pares de bases a las que se les llama monmeros.
Flanqueando los monmeros hay repeticiones directas de menor tamao
(de 6 a 18 pares de bases) y, en el extremo de cada monmero aparece
una zona rica en adenina, en una hebra, y de timina en la hebra
complementaria.
Las secuencias Alu son retrotransposones. Las secuencias Alu participan
tambin en la regulacin epigentica de la expresin gnica. Las citosinas
de estas repeticiones puede ser metiladas alterando as el grado de
empaquetamiento del DNA.
En procesos como el envejecimiento y el cncer se aprecia una desmetilacin
significativa de los elementos Alu.

Cambios en la secuencia del DNA

Errores de la replicacin

Tautomera amino><imino, ceto><enol.

preferencia formas ceto y amino, pero pueden
aparecer las otras y cambiar el emparejamiento.
Debern ser reparados antes de la siguiente
replicacin.

Cambios espontneos: despurinacin

Cambios causados por agentes ambientales:
Qumicos:Nitrosaminas, agentes
intercalantes/metilantes
Fsicos: radiaciones
UV
Ionizantes, istopos radiactivos

C. Arizmendi
http://www.abc.es/20110313/ciencia/abci-radiacion-nuclear-201103131638.html

Citosina

Adenina
(Tautmero imino, raro)

Radiaciones solares
La luz solar son radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas.
Ultravioletas: UVC, UVB y UVA. Pueden provocar cncer de piel,
tanto de tipo melanoma como de no melanoma.
Factores que influyen en la accin del sol sobre la piel
Altitud geogrfica, a mayor, mayor intensidad.
La estacin del ao, el momento del da y la latitud de la zona
geogrfica.
El clima: la lluvia y las nubes absorben parte de las radiaciones.
La superficie: la nieve refleja hasta el 85% de los rayos, y la arena
seca hasta el 17%.

Anillo
ciclobutilo

La exposicin a luz ultravioleta

(principalmente UVA) provoca la
formacin de dmeros entre
bases pirimidnicas consecutivas
en una misma hebra

Reparacin por sistemas mltiples:

- Reparacin directa: Fotoliasa

- Reparacin por escisin

Las distancias interatmicas entre los C
del ciclobutilo no estn a escala

- Reparacin por recombinacin

C. Arizmendi

XERODERMA PIGMENTOSO (XP) es una enfermedad

hereditaria autosmica recesiva que se caracteriza por una

gran sensibilidad a la luz solar.
En XP, aumenta 2000 veces la velocidad de desarrollo de
cancer de piel con desenlace fatal.
La etiologa molecular de la enfermedad es el defecto de alguno
de los sistemas de reparacin de dmeros de pirimidina. Se conocen
hasta 7 defectos genticos distintos XP-A a XP-G, lo que indica que al
menos hay 7 genes distintos implicados en la reparacin de daos
por luz U.V., cuya mutacin causa la enfermedad.
C. Arizmendi

Sustancias
cancergenas
y mutagnicas
Sustancias
cancergenas

C. Arizmendi

Mutgenos qumicos
Auerbach y Robson (1946) demostraron la
capacidad mutagnica del gas mostaza y sus
derivados.
(Un arma qumica, el gas mostaza, que provoca
metilacin del DNA , fue considerado secreto militar
durante la Segunda Guerra Mundial)

C. Arizmendi

BASES CON
RADICALES ALQUILO

AGENTES ALQUILANTES

Mostaza nitrogenada

Etil nitroso urea

O6-metil guanina

Los agentes alquilantes provocan transversiones

Esta metilacin es mutagnica: NO CONFUNDIR CON LA

METILACIN EPIGENTICA!
C. Arizmendi

5-Bromo uracilo
(tautmero enol)

Guanina

 La presencia de Bromo desoxiuridina,

adems, provoca roturas en el DNA,
por lo que se ha propuesto como
antiviral y antineoplsico

Si los cambios no se reparan, aparecen:

-Mutaciones puntuales (transiciones o
transversiones)
-Delecciones
-Inserciones

La acumulacin de mutaciones
>>>>>>>CANCER

DETECCIN Y
REPARACIN DE
EMPAREJAMIENTOS
ERRNEOS
EN PROCARIOTAS

EN EUCARIOTAS SE HAN
DESCRITO PROTENAS
CON FUNCIN SIMILAR

REPARACIN del DNA

___________________
Sistemas mltiples
-directo: fotoliasa y alquil transferasas
-escisin:
-de bases: cuando una base est modificada o se ha
perdido (espontneamente):
DNA glicosilasas
Endonucleasas AP
DNA polimerasa y ligasa
-de nucletidos: ej: en reparacin de dmeros de timinas

-recombinacin:
C. Arizmendi

Reparacin directa
- Fotoliasa enzima foto-reactivante.
Rompe ciclobutilo en dos etapas:
La primera puede ocurrir en
oscuridad; la segunda, requiere luz
visible (300-500nm) que es captada por
N5,N10 metilenFH4, el cual, a travs del
intermediario coenzima FADH, cede un
electrn al anillo ciclobutilo, que se
deshace .

C. Arizmendi

Reparacin directa

-Alquil transferasas
Protenas que captan los residuos metilo y
etilo de las bases aminadas, modificndose ellas.
(No se deberan llamar enzimas porque se modifican covalente e

irreversiblemente en el transcurso de la reaccin que catalizan).

Los agentes alquilantes provocan cancer si

fracasa la reparacin.
C. Arizmendi

Reparacin por escisin de bases:

DNA Glicosilasa o despurinacin espontnea

C. Arizmendi

Endonucleasas apurnicas y apirimidnicas:

catalizan la hidrlisis de dos enlaces fosfodister: se libera

una pentosa fosforilada si esta ha perdido la base prica y
pirimidnica, respectivamente.

DNA polimerasa y ligasa:

catalizan la formacin de un enlace fosfodister que inserta
el nucletido que falta (polimerasa) y sella la ltima unin
fosfodister (ligasa)
C. Arizmendi

MECANISMO DE REPARACIN POR ESCISIN DE

DMEROS DE PIRIMIDINAS y REPARACIN DE MELLAS

UvrABC endonucleasa

DNA polimerasa, ligasa

12 NT en E.coli;
>25 NT en
eucariotas

REPARACIN DE MELLAS

C. Arizmendi

REPARACINPOR
PORRECOMBINACIN
RECOMBINACIN
REPARACIN
DNA con dmero de pirimidina
REPLICACIN

Hebra parental daada

Hebra hija mellada

DNA bicatenario normal

Reparacin por
recombinacin

Reparacin de
mella

Hebra parental daada

Hebra hija reparada
Hebra hija normal
Hebra hija mellada
DNA con dmero de pirimidina a
reparar por otra va
C. Arizmendi
DNA bicatenario normal

MUCHOS GENES DE REPARACIN SE ACTIVAN CONJUNTAMENTE:

RESPUESTA SOS*

Protena represora
LexA

Niveles bajos de mRNA

de protenas de
reparacin
*SOS= Save Our Souls

Autoproteolisis
activada por
ssDNA-RecA

Protena LexA
degradada

Niveles elevados de
mRNA de protenas de
reparacin
C. Arizmendi

Recombinacin homloga
Dos molculas de DNA bicatenario
intercambian parcialmente secuencias
homlogas.
En clulas eucariotas se ha observado que
ocurre durante la meiosis.

INTERSECCIN DE HOLLIDAY

Alineamiento
Corte
Migracin
Invasin
Empalme

Migracin de la rama

Giro, resolucin y
separacin

Holliday,
1967

RecA implicada en la
recombinacin
DNA triple

R
RecA
DNA cudruple

RecA utilizaDIRECCIN
energa de
ATP, que hidroliza
DEL INTERCAMBIO DE
LA HEBRA

Rec A es una protena de E.Coli. En eucariotas la

protena homloga funcional de RecA se llama
RAD51.
La importancia de la reparacin por
recombinacin en humanos se pone de manifiesto
por la observacin de que los defectos en las
protenas BRCA1 y BRCA2, -que ambas interactan
con RAD51-, estn asociados con un aumento en la
incidencia de cnceres de pncreas, ovarios, mama,
y prstata.

Rec BCD (300 kD;

actividad helicasa y
nucleasa) y RuvA, B
y C (migracin de la
rama y resolucin)
participan en la
recombinacin,
adems de SSBs,
topoisomerasa, y
ligasa
RuvB: ATPasa
necesaria para
conducir la migracin
de la rama

Transposicin
Barbara McClintock (1931 a 1957) en maz. Recibi el premio
Nobel de Fisiologa y Medicina en 1983.
"for her discovery of mobile genetic elements
Lecture:The Significance of Responses of the
Genome to Challenge

.The responses of genomes to unanticipated challenges are not so precisely

programmed. Nevertheless, these are sensed, and the genome responds in a
descernible but initially unforeseen manner

LOS TRANSPOSONES MS SENCILLOS SON

SECUENCIAS DE INSERCIN: IS

(<2000 pb)

SECUENCIA DIANA
EN DNA
RECEPTOR

SECUENCIA IS

Codifican slo genes implicados en la

transposicin

SECUENCIA
DIANA EN DNA
RECEPTOR

TRANSPOSN

REPETICIN

INVERTIDA

REPARACIN DE MELLA Y
LIGACIN

TRANSPOSONES (nivel de complejidad

superior a IS):

COMPLEJOS: con genes implicados en el

mecanismo de transposicin y, adems, genes
de resistencia a antibiticos. P.e., el transposn
Tn3 (4957 bp) de E. Coli.

SITIO DE
RESOLUCIN
INTERNA

REPETICIN
INVERTIDA

tnpA

REPETICIN
INVERTIDA

amp

tnpR

b-Lactamasa

TRANSPOSASA
Represor y
resolvasa

MAPA DEL TRANSPOSN Tn3 (E. coli)

TRANSPOSONES (nivel de complejidad

superior a IS):
COMPLEJOS: con genes implicados en el
mecanismo de transposicin y genes de
resistencia a antibiticos, p.e., el transposn
Tn3
COMPUESTOS: con genes de cualquier tipo
en la regin central, adems de los genes que
llevan los transposones complejos

LA TRANSPOSICIN ES RESPONSABLE
DE MUCHOS REORDENAMIENTOS GENTICOS.

Los transposones promueven cambios

de secuencia y delecciones

MECANISMO
DE
INVERSIN
Transposones con
A) orientaciones invertidas

MECAN
DE
DELEC

B)

Transposon
misma ori

Emparejamiento de
repeticiones invertidas

Ap
repe

Recombinacin

Segmento invertido

Cromosoma conteniendo
un transposn

ANISMO
DE
ERSIN

sones con
es invertidas

B)

MECANISMO
DE
DELECCIN
Transposones con la
misma orientacin
Emparejamiento de
repeticiones directas

Apareamiento de
eticiones invertidas

invertido

Recombinacin

Cromosoma conteniendo
un transposn

Segmento deleccionado
conteniendo otro
transposn

COMPOSICIN DEL GENOMA HUMANO

DNA chatarra?

TRANSPOSONES
3%

Los transposones de eucariotas recuerdan

a los retrovirus: reciben el nombre de

retrotransposones o retroposones. Se
consideran fsiles genticos

Los retrovirus son virus RNA que mediante

la actividad transcriptasa inversa se
convierten en DNA bicatenario que se
puede integrar en el genoma de la clula
infectada.

RNA MONOCADENA

Transcriptasa
Inversa

dNTPs

DNA polimerasa dirigida por

RNA

Hbrido RNA-DNA

RNAsa H
NMP
DNA MONOCADENA

dNTPs

DNA polimerasa dirigida por DNA

DNA DOBLE CADENA

Transcriptasa inversa del virus HIV consiste en dos

subunidades, p66 :p51, codificadas por un nico gen del
genoma viral
p66 tiene dominio DNA polimerasa y
dominio RNAsa H.

p51 tiene dominio DNA polimerasa y

dominio RNAsa H truncado.

TRANSCRIPTASA INVERSA DEL VIRUS

HIV (SIDA)
(HIV-1 RT: Human Immunodeficiency Virus-1
Reverse Transcriptase)
ESTRUCTURA DIMRICA p66-p51

20% de los cnceres se atribuyen a virus exgenos. Por

ejemplo, HIV 1 y HIV2 son causa indirecta de linfomas y sarcoma de
Kaposi. Papilomavirus humanos pueden causar cncer de cuello de
tero y de pene.

Los virus endgenos HERV (Human Endogenous Retrovirus)

tambin se han asociado al desarrollo de diversas patologas. Existen
elementos ligados a HERVs que se repiten masivamente en el genoma
humano. Por ejemplo, los elementos Alu: secuencias genticas
especficas que pueden inducir mutaciones que alteran la expresin
gnica.

Secuencias Alu
Las repeticiones Alu son las secuencias repetitivas mviles ms abundantes
del genoma humano. Son secuencias cortas, de unos 300 pares de bases,
ricas en guanina y citosina.
El genoma humano puede albergar una secuencia Alu cada 3 kilobases.
Cada secuencia Alu est formada por dos repeticiones de una
secuencia de unos 120 pares de bases a las que se les llama monmeros.
Flanqueando los monmeros hay repeticiones directas de menor tamao
(de 6 a 18 pares de bases) y, en el extremo de cada monmero aparece
una zona rica en adenina, en una hebra, y de timina en la hebra
complementaria.

Las secuencias Alu son retrotransposones. Las secuencias Alu participan

tambin en la regulacin epigentica de la expresin gnica. Las citosinas
de estas repeticiones puede ser metiladas alterando as el grado de
empaquetamiento del DNA.
En procesos como el envejecimiento y el cncer se aprecia una desmetilacin
significativa de los elementos Alu.

Dichas secuencias Alu son retrotransposones, y se considera que son

responsables de:
- algunos trastornos en la lnea germinal, individual y/o familiar,
como neurofibromatosis, hemofilia, cncer de mama y sndrome de
Apert
- generar "recombinaciones ectpicas", que se consideran
subyacentes a la diabetes tipo 2 (insulinorresistente), a la enfermedad
de Tay- Sachs, a la hipercolesterolemia familiar y a la alfa-talasemia.
- cnceres como el sarcoma de Ewing, y la leucemia mieloide
aguda.

Existen incluso posibles interacciones de Alu con retrovirus

exgenos como el HIV-1.
Cnceres asociados con los HERV son el seminoma,
teratocarcinoma testicular, coriocarcinoma, y cncer pulmonar
de clulas pequeas.
(Asimismo, se han relacionado con HERV algunos casos de distrofia
muscular, con enfermedades autoinmunes como los trastornos
reumticos, lupus eritematoso sistmico y esclerosis mltiple.
Sin embargo, hasta la fecha no se ha probado ninguna de estas
asociaciones como causa definitiva de patologa).
Debe tenerse en cuenta que los HERV no son virus agudos,
sino elementos simbiticos que han estado integrados en el
genoma humano durante millones de aos.