4.

CLCULO Y RESULTADOS
4.1 PREPARACIN DE LA CURVA DE CALIBRACION
Siguiendo la formula . . 1. 1 = 2. 2 se calcularon las concentraciones de cada uno de los
tubos para lectura en el espectrofotmetro de la siguiente manera
TUBO 1

0,00 10

1 =
1,00

TUBO2

0,20 10

2 =
1,00

TUBO 3

0,40 10

3 =
1,00

TUBO4

0,60 10

4 =
1,00

TUBO5

0,80 10

5 =
1,00

TUBO6
6

1,00 10

=
1,00

1 = 0,00

2 = 2,00

3 = 4,00

4 = 6,00

5 = 8,00

=
6 = 10,00

La absorbancia leda y corregida por mnimos cuadrados junto con el porcentaje de transmitancia
para cada tubo son los valores de la tabla 1.
tubo
1
2
3
4
5
6
Tabla1.

absorbancia promedio
0,000
0,096
0,182
0,268
0,354
0,440
Lectura fotomtrica de la SOLUCION BSA en la curva de calibracin del
espectrofotmetro.

La representacin grfica (grafico1.) de la funcin lineal que hay entre la concentracin y la

absorbancia es la lo que se reconoce como la ley de Lambert Beer.

ABSORBANCIA

Grafico 1. Curva de calibracin patrn de

BSA 10 mg/ml
0,500
0,450
0,400
0,350
0,300
0,250
0,200
0,150
0,100
0,050
0,000

y = 0,0431x + 0,0096
R = 1
0

10

12

CONCENTRACION DE PATRON BSA MG/ML

Adems para dar valor a la lectura y garantizar el cumplimiento de la ley de Lambert Beer se realiz
la representacin grfica denominada curva de RIngboom (grafico2.) De la funcin de variable
abscisa logaritmo de la concentracin (log C) y de variable ordenada porcentaje de transmitancia
(%T).

La curva de Ringboom se interpreta trazando una lnea que toque a la mayor cantidad de puntos en la
funcin graficada, en este caso la mayor cantidad de puntos que toca la lnea dibujada es desde el
punto que es igual al logaritmo de 0,600 hasta el punto con valor de logaritmo de 1 y este segmento
de recta en la funcin se representa el valor mnimo y mximo de concentracin en la muestra para
que exista la ley de Lambert Beer (tabla2.)

optimas
concentraciones
Log C
%T
mg/ml
0,000
100,000
0,301
80,210
0,602
65,777
4 mnimo
0,778
53,942
6
0,903
44,236
8
1,000
36,276
10 mximo
Tabla 2. Relacin logartmica para
verificar la ley de Lambert Beer con la
curva de Ringboom
4.3. DETERMINACIN DE LAS PROTENAS TOTALES DE LA MUESTRA
Ahora bien las concentraciones que sern apropiadas para interpretarse en la lectura fotomtrica con
luz visible, y cumplen la ley de Lambert Beer deben encontrarse en el rango permitido por la curva
de Ringboom son de mnimo 4 mg/ml de protena hasta 10 mg/ml de protena y/o del complejo
cprico formado por el nitrgeno presente en la muestra.

Con la digestin de la muestra de salchichn tipo cervecero de la marca Zen se prepararon tres
diluciones que formaron complejo cprico coloreado por efecto del reactivo de Biuret.
Donde se dispusieron tres tubos con las referencias:
A1 para el tubo con 0,2 ml de muestra aforado a 1 ml con agua.
A2 para el tubo con 0,4 ml de muestra aforado a 1 ml con agua.
A3 para el tubo con 0,6 ml de muestra aforado a 1 ml con agua.
Las muestras pasaron a lectura de absorbancia en el equipo de trabajo experimental, procedimiento
que se efectu tres veces y cuyos valores resultados se expresan en la tabla 3.
A1
0,166
0,165

A2
0,307
0,306

A3
0,428
0,425

0,164
0,307
0,426
PROMEDIO 0,165
0,307
0,426
Tabla3. Absorbancia leda de la muestra diluida del
salchichn tipo cervecero marca Zen
Continuando, el proceso de clculos lleva a revisar la ecuacin de la recta que ofrece la curva de
calibracin Grafico1. De la forma y=mx+b
Ec. De la recta de calibracin
= (0,0431 ( )) + 0,0096

Desde aqu se efecta un despeje sencillo, remplazando la palabra absorbancia por cada dato
formulado por el equipo y de esta manera la concentracin puede calcularse ofreciendo como
resultado
( 0,0096)
0,0431

(0,165 0,0096)
CA1= 3,6 mg/ml
=
0,0431

(0,307 0,0096)
=
0,0431

(0,426 0,0096)
=
0,0431

CA2= 6,9 mg/ml

CA3= 9,7 mg/ml

Tanto CA1, CA2 y CA3 fueron las concentraciones obtenidas despus de leer las absorbancias de las
diluciones del complejo coloreado de cobre, este complejo se logr despus de aislar por centrifugado
la fase acuosa, y dicha fase tuvo como volumen 16 ml proveniente de la disociacin por reaccin de
solubilidad de las grasas presentes en la muestra crnica con ter de petrleo, esta fase acuosa es la
protena del embutido crnico en medio bsico. La masa de salchichn cervecero tomada por balanza
analtica fue de 1,1169 g.
Adems en consecuencia con lo reportado por la ley de Lambert Beer se debe discriminar las
diluciones proteicas que tengan concentraciones menores a 4 mg/ml como es el caso de la dilucin
A1 que tiene 3,6 mg/ml y esta concentracin no es proporcional a la absorbancia registrada por lo
que su clculo ya presenta error fotomtrico.
En esos trminos, la concentracin de protenas en la fase acuosa [CPfa] en la muestra resulta de:
[CPfa] =

CAn 1ml
volumen tomado

De esta forma queda as resuelto:

[CPfa] =

CA2 1ml
6,9 /
=
= 17,240 /
volumen tomado
0,4

[CPfa] =

CA3 1ml
9,7 /
=
= 16,123 /
volumen tomado
0,6

En promedio la cantidad de protena es 16,681 mg por cada ml de solucin, y como hubo aparicin
de 16 ml de fase acuosa con esta concentracin la cantidad promedio despus de operar

= 16,681

16
1000

= 0,667

Anteriormente se mencion que la masa de la muestra homogenizada del producto crnico en cuestin
fue de 1,1169 g el porcentaje peso a peso se describe a continuacin:
0,667 100%

% =
= 24 %
1,1169
Ahora bien teniendo el porcentaje de protena identificado por el Biuret de 24% p/p la desviacin
estndar del despus de efectuar los clculos:
( )2
=
1
=

(25% 24%)2 + (23% 24%)2

= 0,011
21

Es bastante pequea y adems el error la operacin para calcular el porcentaje de coeficiente de

varianza es:
% =

% =

100%

0,011
100% = 4,733%
24%

Si S tiende a 0 los valores resultan ser un mtodo muy satisfactorio y es confirmado por la
aceptacin que traduce l %CV < 5%, ahora lamentablemente el reporte de error relativo resulta muy
desalentador puesto que despus de realizar la frmula:
% =

100%

% =

24% 12%
100% = 99 %
12%

Resultan los datos tomados nada confiables e imprecisos.

Tabla 4. Determinacin de Protenas del Salchichn por el Mtodo de

Biuret
peso de la
muestra
mg
1116,9

volumen
fase acuosa
ml
16
promedio

concentracin
de protena en
la muestra
mg/ml

porcentaje de
protena en el
salchichn

17,240
16,123

25%
23%

16,681

24%

desviacin
estndar
0,011

%
coeficiente
de varia.
4,733%

error
relativo
99,139%