UNIDADE CURRICULAR OCEANOGRAFIA

CURSO DE BIOLOGIA MARINHA E BIOTECNOLOGIA

4 SEMESTRE - ANO LECTIVO 2007/2008

Determinao espectrofotomtrica do teor em Fosfato Inorgnico numa amostra

de gua salgada

1. Objectivo
O objectivo do trabalho determinar o teor em Fosfatos inorgnicos dissolvidos na gua do
mar utilizando a tcnica de espectroscopia de absoro molecular (UV-Vis).

2. Introduo

Lei de Lambert-Beer:

O fsforo um constituinte da matria orgnica viva, encontrado no ambiente marinho sob a

forma de fosfatos orgnicos em suspenso ou em soluo, e sob a forma de fosfatos
inorgnicos insolveis (tais como os de clcio ou ferro) ou adsorvidos por partculas em
suspenso e principalmente sob a forma de fosfatos inorgnicos solveis, ou seja ies HPO4-2 e
PO4-3. A concentrao de fsforo inorgnico na gua do mar varia usualmente de 0,0 a 3,2 M.

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3. Amostragem
As amostras devem ser recolhidas em frascos previamente lavados com soluo ligeiramente
cida (HCl a 5%) e abundantemente enxaguados com gua destilada. Os frascos devem ser
de vidro mbar ou de plstico com capacidade para 250 ml. Se as amostras no forem
realizadas imediatamente aps a colheita, devem ser congeladas a -20C.

4. Procedimento
4.1 Princpio
Baseia-se na formao do cido molibdofosfrico e na sua subsequente reduo com cido
ascrbico, resultando no complexo de fosfomolibdnio de cor azul. No possvel escrever as
reaces acertadas porque no so conhecidas as reaces exactas. Primeiro formado o
complexo cido de cor amarela. Com a adio do cido ascrbico, ocorre a reduo.
Normalmente esta reduo lenta, porm a adio de um catalisador, o tartarato de antimnio
e potssio, faz com que esta reaco ocorra rapidamente.

A quantidade do complexo azul de fosfomolibdnio formado proporcional concentrao de

fsforo presente como fosfato inorgnico na amostra de gua. Portanto, o fsforo pode ser
quantificado por espectrofotometria que relaciona a concentrao com a absorvncia pela Lei
de Lambert-Beer.
4.1. Material

Bales volumtricos de 100, 200 e 1000 ml

Frascos de 100, 200 e 1000 ml

Provetas de 50 ml

Pipetas volumtricas de 0,5, 1 e 2 ml

Goblets de 125 ml

4.2. Reagentes

Soluo de molibdato de amnio 0,08 M

Dissolver 9,5 g de (NH4)6Mo7O24.4H20 em 90 ml de gua destilada e desionizada e diluir para
100 ml. Guardar a soluo em frasco de vidro ou polietileno.

Soluo de cido sulfrico ~ 9,0 N

Adicionar 250 ml de H2SO4 concentrado (d = 1,84) a 500 ml de gua destilada e desionizada.
Esperar que arrefea e diluir para 1000 ml. Guardar em frasco de vidro mbar.

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Soluo de tartarato de antimnio e potssio ~ 0,1 M

Dissolver 3,25 g de K(SbO)C4H4O6 em 100 ml de gua destilada e desionizada. Guardar em
frasco de vidro. O reagente pode ser usado enquanto permanecer claro.
Soluo de mistura
Adicionar 45 ml da soluo de molibdato de amnio a 200 ml da soluo de cido sulfrico e
em seguida, 5 ml da soluo de tartarato de antimnio e potssio. Guardar a mistura em frasco
de vidro mbar. Esta mistura estvel por alguns meses.
Soluo de cido ascrbico 0,4 M
Dissolver 7,0 g de C6H8O6 em 100 ml de gua destilada e desionizada. Guardar em frasco de
vidro mbar sob refrigerao.
Soluo padro de fosfato 0,01 M
Secar ~ 200 mg de fosfato dicido de potssio anidro (KH2PO4) a 110C por trs horas e deixar
arrefecer num exsicador. Pesar exactamente 136,1 mg e dissolver em gua desionizada,
qual foi adicionado 1 ml de cido sulfrico 9,0 N. Diluir para 100 ml. Guardar em frasco de vidro
sob refrigerao.
4.3. Padres para calibrao

Soluo me de padro fosfato (0,1 mM)

Pipetar 1 ml da soluo padro de fosfato (10 mM) e diluir para 100 ml com gua desionizada.

Solues diludas
A partir da soluo me, fazer as seguinte diluies no momento:

Soluo diluda

Concentrao

Volume da

Volume

(M)

Soluo me (mL)

final (mL)

0,5

100

1,0

100

2,0

100

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4.4. Anlise
Transferir 35 ml das solues de padres diludas e das amostras de gua do mar para
os frascos de reaco. Utilizar gua desionizada para a anlise do branco.
Adicionar 1 ml da mistura de reagentes e agitar
Adicionar 1 ml do cido ascrbico e agitar
Aps 5 minutos, ler a absorvncia a 880 nm em cuvettes de 5 cm.

5. Clculos
5.1 Curva de calibrao
Com as medidas de absorvncia dos padres, descontado o valor do branco, construir uma
curva de calibrao e obter o factor F que relaciona a concentrao com a absorvncia.

F=

C
A

onde: C = concentrao e A = absorvncia

5.2 Clculo da concentrao de fosfato na amostra

[PO4-3] = F.A onde A = absorbncia da amostra

6. Interferentes e preciso do mtodo

Os principais interferentes so os silicatos e arsenatos que tambm formam complexos azuis
com o molibdato, no entanto a velocidade de reaco mais lenta e a concentrao destes
ies normalmente no importante na gua do mar (at 200 M para silicatos e 0,03 M para
arsenatos). Deste modo os problemas de interferentes podem ser eliminados se as amostras
forem lidas no mximo at aps 5 minutos de reaco. A preciso deste mtodo de cerca de
5 a 15%.

7. Referncias Bibliogrficas

Grasshoff, K., 1976. Methods of seawater analysis. Weihein, Verlag Chemie. 317 pg.
Grasshoff, K., Ehrhardt, M. & Kreamling, K. 1983. Methods of seawater analysis. Weihein,
Verlag Chemie. 419 pg.