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FACTORES FISICOS PARA EL CONTROL DEL CRECIMIENTO

BACTERIANO
Fundamentos del control de los microorganismos
Las razones principales para controlar los microorganismos son: prevenir
la transmisin de enfermedades, evitar el deterioro de los alimentos y
evitar la contaminacin tanto en procesos industriales que requieran
cultivos puros, como en laboratorios de diagnstico o investigacin.
Trminos importantes al hablar del control de microorganismos
Esterilizacin es el efecto de destruir toda forma de vida (un objeto
esterilizado es aquel que no posee ninguna forma de vida, ni siquiera
esporas)
Agente antimicrobial es un compuesto por lo general qumico que
mata o interfiere con el crecimiento y actividad de los microoganismos.
Se clasifica de acuerdo a su aplicacin y a como acta.
1. El germicida es un agente qumico que mata los microorganismos
pero no necesariamente las esporas (ejemplo el bactericida, mata
bacterias, el fungicida, mata hongos y el viricida mata los virus).
2. El agente microbiosttico es uno que inhibe el crecimiento de los
microoganismos, pero no los mata (ejemplo los agentes
bacteriostticos, inhiben crecimiento bacterial).
3. El desinfectante es un compuesto que mata microorganismos, pero
no necesariamente las esporas. Se aplica sobre objetos inanimados.
4. El antisptico es parecido al desinfectante, pero ste se puede aplicar
sobre tejido biolgico (cuerpo).
Condiciones que influyen en la accin microbiana
Hay ciertos factores que tienen que ser considerados a la hora de aplicar
agentes qumicos o fsicos para el control de microorganismos.
Concentracin del agente qumico Mientras ms concentrado est el
agente qumico, ms rpido se destruirn los organismos.
Intensidad del agente fsico Cuanto ms intenso es el agente fsico
(calor o radiacin ) ms rpidamente mata a los micoorganismos.
Tiempo de exposicin A mayor tiempo de exposicin, mayor es el
nmero de organismos destruidos.
Temperatura A mayor temperatura se acelera la destruccin de los
organismos.
Nmero de organismos Mientras mayor sea el nmero de
microorganismos, ms tiempo se requiere para destruirlos.
Clase de organismo Las clulas vegetativas (las que estn
metabolicamente activas) son ms suceptibles que la esporas
bacteriales.
Estado fisiolgico de las clulas Mientras ms viejas sean las
clulas, ms rpido se destruyen.

Naturaleza del medio ambiente Algunos ambientes desfavorecen la


destruccin rpida de los microorganismos, como por ejemplo los
medios viscosos.
Factores fsicos para el control de los microorganismos
Temperatura
La temperatura es de suma importancia para el crecimiento de los
organismos. A medida que aumenta sta por encima de la temperatura
ptima de crecimiento, mayor es la velocidad de muerte de los
microorganismos. Es por ello que altas temperaturas se usan en el
control microbiolgico. Las temperaturas altas pueden aplicarse de dos
formas: calor hmedo (con agua) o calor seco.
El calor hmedo es mucho ms eficiente que el calor seco, ya que este
acta mediante la coagulacin de las protenas celulares, por otro lado el
calor seco destruye la clula por la oxidacin de agentes qumicos de la
clula.
Formas de aplicacin de calor hmedo
1. Vapor a presin Es el calor en forma de vapor saturado a presin,
es el agente de esterilizacin ms prctico y ms seguro. El autoclave
es el instrumento que se utiliza para aplicar vapor a presin regulada. Se
aplica a una temperatura de 121C durante 15 minutos con 20 libras de
presin. El autoclave se utiliza para esterilizar substancias, cierto tipo de
cristalera y otros. Productos como grasas o aceites no se deben
esterilizar en el autoclave pues el vapor no penetra bien.
2. Tindalizacin o esterilizacin fraccionada Algunas substancias
no pueden calentarse a temperaturas mayores de 100C, ya que su
composicn puede alterarse. Para esos casos se utiliza este mtodo que
consiste en calentar el material a 100C tres das consecutivos con
periodos de incubacin entre ellos, de manera tal que las substancias
vuelven a enfriarse. Esto ayuda a destruir las esporas que estn
presentes, ya que germinan en los intrvalos de enfriamiento y se
destruyen como clulas vegetativas al subir la temperatura a 100C.
3. Agua hirviendo Los materiales contaminados que se tratan con
agua hirviendo no quedan esterilizados, slo desinfectados.
4. Pasteurizacin Es un tratamiento de calor controlado el cual es por
debajo de los 100C. El proceso puede ser de 63C por 30 minutos, a
71C por 15 segundos o el proceso con temperaturas extremas que es
141 C por 2 segundos. La pasteurizacin no destruye todos los
organismos.
Formas de aplicacin de calor seco
1. Horno Es el instrumento usado para la aplicacin del calor seco y se
usa cuando no se quiere que los materiales queden humedecidos por
vapor.

2. Incineracin La
incineracin
de
materiales
destruye
los
microoganismos. Se usa para esterilizar las agujas de inocular y otros
materiales, adems es una forma de destruir cadveres.
Contrario al calor, las temperaturas bajas o el fro no desnaturalizan las
protenas. Las bajas temperaturas hacen que la reproduccin de los
microoganismos se detenga, pero no las mata. Se dice que las
temperaturas bajas son microbiostticas, mientras que las temperaturas
altas son microbicidas.
Desecacin
La falta de agua detiene los procesos vitales en los microorganimos, por
lo cual el crecimeinto se detiene. La desecacin se logra evaporando el
agua presente para lo cual se usa aire caliente. La preservacin de
alimentos por secado an se utiliza. Esta tcnica tiene un efecto
microbiosttico, pues detiene el crecimiento bacterial, pero no mata los
organismos. De hecho los microoganismos pueden preservase por
secado. Cuando se seca junto con congelacin el proceso se llama
liofilizacin.
Presin osmtica
La pared celular de las bacterias las protege de cambios en la presin
osmtica del medio, pero si la presin osmtica externa es mucha, el
organismo puede morir; esto sucede si las concentraciones de solutos en
el medio en que crece el organismo son extremos. Altas concentraciones
de sal interrumpen los procesos de transporte a travs de la membrana
y desnaturalizan las protenas.
Radiacin
Ciertas formas de radiacin pueden matar los microorganismos.
1. Radiacin ionizante Los rayos X y gamma tienen un gran poder de
penetracin y matan los microorganismos formando iones txicos. Estos
iones afectan toda la bioqumica de la clula. Las esporas bacteriales
son ms resistentes a los diferentes tipos de radiacin.
2. Luz ultravioleta (UV) La luz UV no tiene poder de penetracin, por lo
que es til para matar microorganismos en las superficies. Las
radiaciones de luz UV ms germicidas son las de largo de onda de 260
nm. El principal modo de accin de la luz UV es la formacin de dmeros
de timina en la molcula de DNA. La luz UV se utiliza para: esterilizar
salas de hospitales, para el mantenimiento de cuartos aspticos para el
envasado de medicinas en la industria farmacutica y para el

tratamiento de superficies contaminadas en la industria de alimento y


de leche.
Ondas ultrasnicas (sonicacin)
En general, los microorganismos suspendidos en un lquido y somedtidos
a la accin de ondas ultrasnicas de altas intensidades (20,000
ciclos/seg.) durante cierto tiempo se destruyen porque se rompe la
pared celular y se pierde el contenido de la clula.
Filtracin
La filtracin se emplea para esterilizar lquidos o soluciones que se
afectan si se les aplica calor (sueros, algunas enzimas, vitaminas,
antibiticos). Generalmente se usan filtros que tienen unos poros de 0.2
micras de dimetros. Los poros de este tamao retienen las bacterias,
pero no los virus.
Factores qumicos para el control de microorganismos
El fenol y sus derivados
El fenol se adhiere a superficies inertes y proporciona lo que se llama
una desinfeccin residual. Su accin se prolonga por varias horas. Los
compuestos de fenol pueden actuar como microbicidas o
microbiostticos dependiendo de la concentracin que se utilice. Los
fenoles poseen efecto germicida pues daan la membrana y
desnaturalizan las protenas bacteriales. Uno de los derivados del fenol
se llama cresol; stos tienen un efecto germicida superior al fenol. Los
cresoles se usan en jabones lquidos (ej. lysol es un jabn ms un
cresol). Otro derivado del fenol es el hexaclorofeno, el cual se usa en
jabones para las manos (en ciruga y hospitales). Un ejemplo de este
ltimo es el Phisohex. El fenol y sus derivados por lo general no matan
esporas.
Los alcoholes
Los alcoholes daan la membrana, desnaturalizan las protenas,
disuelven lpidos y deshidratan la clula. La concentracin ms efectiva
de alcohol es el 70% y los ms utilizados son el alcohol etlico e
isoproplico.
Halgenos
Los halgenos actan sobre los microorganismos oxidando las protenass
y enzimas esenciales. No matan las esporas. Los halgenos ms
comunmente usados son el cloro y el iodo.

1. El cloro Es uno de los desinfectantes ms usados y es microbicida


contra la mayora de los microorganismos. Se usa para limpiar las aguas
contaminadas y se aplica en agua potable.
2. El iodo Se utiliza comnmente como un antisptico y es uno de los
mejores que hay para la piel. Se aplica principalmente como tintura de
iodo. Es microbicida para la mayora de los organismos. El iodo tambin
se emplea como iodforo (compuesto de iodo con otros agentes). Los
iodforos no manchan ni irritan, un ejemplo es el betadine.
Metales pesados y sus compuestos
La accin antimicrobial de los metales pesados y sus compuestos se
debe a la combinacin del in metlico con protenas y las enzimas del
microorganismo, daando as el sistema.
1. Compuestos de mercurio Los ms importantes de este grupo son
los orgnicos como: mercurocromo, metiolato y metafen. Todos estos se
usan como antispticos y son principalmente microbiostticos.
2. Compuestos de plata El ms que se usa es el nitrato de plata en
solucin al 1% y se usa en los ojos de los recin nacidos.
3. Compuestos de cobre El sulfato de cobre se usa para controlar el
crecimiento de algas en las piscinas.
Tintes
Algunos tintes se usan como agentes selectivos en medios de cultivos
por su efecto bacteriosttico. Ejemplos de estos tintes son el cristal
violeta (violeta geneciana), azul de metileno, eosina, carbol fuchsin,
verde brillante. Estos tintes inhiben las bacterias Gram+. El modo de
accin no est claro, pero se cree que intervienen en los procesos de
oxidacin celular.
Jabones y detergentes
Un jabn es una sal de sodio o de potasio de un cido graso. Los agentes
que reducen la tensin superficial del agua (surfactantes) y que se
emplean principalmente para la limpieza de superficies se llaman
detergentes (el jabn es un ejemplo de un detergente). Los detergentes
se clasifican en catinicos, aninicos y no-inicos. Los detergentes
catinicos son mejores desinfectantes que los dems. Otro nombre con
que se conocen a los detergentes catinicos son cuaternarios de
amonio. Estos son bacteriostticos a bajas concentraciones y
bactericidas a concentraciones mayores. Ejemplos de estos compuestos
son el Zephiran y el Roccal, que se usan como antispticos para la piel,
adems de usarse para el saneamiento de lecheras y plantas
elaboradoras de alimentos. Estos compuestos no matan esporas.

Acidos
Hay una serie de cidos orgnicos que se usan como conservantes en
muchos alimentos como el cido actico, cido benzoico, cido lctico,
cido propinico y cido srbico. El cido baja el pH y esto desnaturaliza
las protenas. No matan las esporas.

Control de Microorganismos
JUEVES, 24 DE MAYO DE 2007

Control de los Microorganismos


Los microorganismos ofrecen diversos beneficios a la sociedad en diferentes formas. En
otro aspecto son tambin los microorganismos un vehculo para la produccin de
enfermedades, por la produccin de toxinas propiamente dichas o metabolitos txicos.
Adems de daos en cultivos, descomposicin de alimentos y enfermedades en

animales. Es por esto que el ser humano ha buscado los procedimientos necesarios
para destruir o controlar el crecimiento de los microorganismos perjudiciales.
DEFINICIONES IMPORTANTES:
- Muerte microbiana: Prdida irreversible de la capacidad de reproducirse.
- Esterilizacin: Proveniente del latn sterilis incapaz de reproducirse. Proceso por el
cual las clulas vivas, esporas viables, virus y viroides destruidos o eliminados de un
objeto o hbitat.
- Desinfeccin: Destruccin, eliminacin o inhibicin de los microorganismos que
pueden producir enfermedad de una superficie u objeto. Se mantienen viables las
esporas.
- Germicida: Terminacin _cida del latn que significa destruir. Es un agente que
puede destruir microorganismos patgenos y muchos no patgenos pero no
necesariamente esporas. (Bactericida, fungicida, viricida)
- Terminacin _statico: proveniente del griego statikos que causa detencin, agente
con capacidad de inhibir el crecimiento microbiano, pero sin matarlos. (Bacteriosttico,
fungisttico)
Condiciones que influyen en la eficacia de un antimicrobiano:
La destruccin de los microorganismos y la inhibicin del crecimiento no es un proceso
simple, debido a que la eficacia de un agente antimicrobiano es afectada por 6
factores:
1. Tamao de la poblacin: Debido a que la muerte es exponencial, una poblacin
muy grande requiere de mayor tiempo.
2. Composicin de la poblacin: la eficiencia del antimicrobiano vara
considerablemente con respecto a la naturaleza de los organismos que son tratados
porque su susceptibilidad es distinta. Por ejemplo: las endosporas bacterianas son ms
resistentes que las clulas vegetativas, las clulas jvenes mueren con mayor facilidad
y algunas especies soportan mejor condiciones adversas.
3. Concentracin o intensidad del agente antimicrobiano: A menudo, pero no
siempre, entre mayor sea la concentracin del agente qumico o ms intenso agente
fsico, ms rpidamente se destruyen los microorganismos. Pero generalmente la
eficiencia no est relacionada con la concentracin o intensidad. (alcohol)
4. Tiempo de exposicin: cuanto ms tiempo se exponga una poblacin a un
determinado agente, ms organismos se destruirn.
5. Temperatura: A menudo, un aumento en la temperatura aumenta la actividad de
un agente qumico.
6. Entorno: la poblacin que se quiere destruir no se encuentra aislada, est rodeada
de diversos factores ambientales que pueden protegerla o facilitar su destruccin. Por
ejemplo: el calor es ms efectivo en un medio cido, la materia orgnica les da
proteccin contra el calor y los desinfectantes qumicos.

Modo de accin de los antimicrobianos:


- Alteracin de la permeabilidad de la membrana citoplasmtica
- Dao a la pared celular o inhibicin de la sntesis de sus componentes
- Alteracin del estado fsico qumico de las protenas y cidos nucleicos, o inhiben su
sntesis
- Inhibicin enzimtica
Procedimientos para el control microbiano:
- Mtodos fsicos
- Mtodos qumicos
- Agentes Antimicrobianos

MTODOS FSICOS: Los mtodos fsicos se utilizan a menudo para lograr la


descontaminacin, la desinfeccin y la esterilizacin microbiana.
CALOR: La exposicin al agua en ebullicin durante 10 minutos es suficiente para
destruir clulas vegetativas, pero no es suficiente para destruir endosporas. No
esteriliza.
La eficacia del calor como agente antimicrobiano, se puede expresar como el
Tiempo de muerte trmico (TMT), que se define como el tiempo ms corto necesario
para destruir los microorganismos en una suspensin, a una temperatura especfica y
en condiciones definidas. Sin embargo como la destruccin es logartmica no es posible
eliminar completamente los microorganismos de una muestra.
Existen diversos mtodos de control de microorganismos por medio del calor:
a. Esterilizacin por vapor (calor hmedo o autoclave): El agua es llevada a
punto de ebullicin de manera que el vapor llena la cmara, desplazando el aire fro.
Cuando todo el aire es expulsado, se cierran las vlvulas de seguridad y el vapor satura
toda la cmara, por lo que incrementa la presin, hasta que se alcanzan los valores
deseados (121C y 15 lb presin).
En estas condiciones se destruyen todas las clulas vegetativas y endosporas en un
tiempo que por lo general es de 15 minutos. Se piensa que el calor hmedo degrada
los cidos nucleicos, desnaturaliza protenas y adems alterar las membranas
celulares.
Si no se cumplen las condiciones adecuadas, no hay esterilizacin. Para controlar el
buen funcionamiento del equipo, se pueden incluir con la esterilizacin un control
biolgico o un indicador qumico.

El indicador biolgico consiste en una ampolla estril con un medio y un papel cubierto
con esporas de Bacillus stearothermophilus o Clostridium. Luego de la esterilizacin se
rompe la ampolla y se incuba por unos das. El indicador qumico consiste en una cinta
especial con letras o lneas que cambian de color despus del tratamiento suficiente
con calor.
b. Pasteurizacin: Se utiliza para sustancias o medios que no pueden ser calentadas
a ms de su temperatura de ebullicin.
Un calentamiento breve a 55 o 60C destruir los microorganismos patgenos y
disminuye los causantes de la descomposicin de la sustancia. NO esteriliza.
Existen variaciones que son utilizadas en la industria de la leche: la pasteurizacin
rpida (HTST high temperature short-term) que consiste en calentar a 72C por 15
segundos. Y la pasteurizacin a temperatura ultra elevada (UTH ultrahigh temperature)
que calienta a 140-150C por 1 a 3 segundos.

c. Tindalizacin o esterilizacin fraccionada al vapor: se utiliza para qumicos o


material biolgico que no puede llevarse a ms de 100C. Se calienta a una
temperatura de 90C a 100C durante 30 minutos por tres das consecutivos y se
incuba a 37C entra cada calentamiento.
El primer calentamiento destruye clulas vegetativas pero no esporas, por lo que
germinan a 37C y luego son eliminadas con el siguiente calentamiento.
d. Calor seco: Se utilizan hornos o estufas a una temperatura de 160-170C por 2 o 3
horas. Es menos efectivo que el calor hmedo, pero no corroe utensilios metlicos. Es
lenta y no se puede utilizar para material termo sensible.

e. Incineracin: Destruye por completo los microorganismos. (calentar las asas en los
mecheros).
f. Temperaturas bajas: Refrigeracin y congelacin, son nicamente bacteriostticos.
En general, el metabolismo de las bacterias est inhibido a temperaturas por debajo de
0 C. Sin embargo estas temperaturas no matan a los microorganismos sino que
pueden conservarlos durante largos perodos de tiempo.
Esta circunstancia es aprovechada tambin por los microbilogos para conservar los
microorganismos indefinidamente. Los cultivos de microorganismos se conservan
congelados a -70 C o incluso mejor en tanques de nitrgeno lquido a -196 C.
g. Desecacin: Es de efecto bacteriosttico y las esporas permanecen viables.
FILTRACIN: es utilizada para materiales termosensibles.
a. Filtros de profundidad: Se utilizan materiales fibrosos o granulados que forman
una capa gruesa con canales de dimetro muy pequeo. La solucin es aspirada al
vaco y los microorganismos quedan retenidos o son adsorbidos por el material. Se
utilizan diatomeas, porcelana no vidriada, asbestos.

b. Filtros de membrana: Son circulares con un grosor de 0.1 mm y con poros muy
pequeos, de unos 2 m por lo que los microorganismos no pueden atravesarlo. Se
fabrican de acetato de celulosa, policarbonato, fluoruro de polivinilo u otros materiales
sintticos.

RADIACIN:
a. Ultravioleta: Es letal para todas las clases de microorganismos por su longitud de
onda corta y su alta energa. Es letal a 260 nm ya que es la longitud de onda que es
ms efectivamente absorbida por el ADN.
El mecanismo primario del dao al ADN es la formacin de dmeros de timina lo que
inhibe su funcin y replicacin. Son escasamente penetrantes y se utilizan para
superficies.
b. Ionizante: Niveles bajos pueden producir mutaciones e indirectamente resultar en
la muerte, niveles altos son letales. Especficamente causan una serie de cambios en
las clulas: ruptura de puentes de hidrgeno, oxidacin de dobles enlaces, destruccin
de anillos, polimerizacin de algunas molculas, generacin de radicales libres.
La mayor causa de muerte es la destruccin del ADN. Es excelente esterilizante y con
penetracin profunda en distintos materiales, por lo que se utilizan para esterilizar
materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas desechables, sondas, etc.
No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen
alteraciones de los componentes.

MTODOS QUMICOS:
Condiciones ideales para un agente antimicrobiano qumico:
- No txico para el ser humano, animales ni medio ambiente
- Actividad antimicrobiana
- No debe de reaccionar con la materia orgnica o corroer
- Estable y homogneo
Modo de accin:

- Bacteriostticos: Inhibidores de sntesis proteica por unin al ribosoma, que es


reversible, pues se disocia de este cuando disminuye en concentracin.
- Bactericidas: Causa la muerte celular pero no la lisis. No se eliminan por dilucin.
- Bacteriolticos: Inducen la lisis celular al inhibir la sntesis de la pared celular o
daan la membrana citoplasmtica.
Agentes antimicrobianos qumicos:
a. Fenoles: El primer desinfectante y antisptico utilizado, en 1867 Joseph Lister los
emple para reducir el riesgo de infeccin en las cirugas. Hasta ahora los fenoles y sus
derivados (cresol, xilenol) son utilizados como desinfectantes en laboratorios y
hospitales. Elimina micobacterias, eficaz an en presencia de materia orgnica y
permanece activo en la superficie despus de mucho tiempo de su aplicacin.
Desnaturaliza protenas y altera la membrana. Tiene olor desagradable y puede
producir irritaciones cutneas.
b. Alcoholes: No elimina esporas pero son bactericidas y fungicidas y algunas veces
viricida (virus que contienen lpidos), son comnmente utilizados principalmente el
etanol y el isopropanol en concentraciones de 70-80%. Tienen el mismo modo de
accin de los fenoles.
c. Metales pesados: mercurio, arsnico, plata, zinc y cobre. Son bacteriostticos ya
que el metal se combina con los grupos sulfihidrilos de las protenas inactivndolas o
precipitndolas. Son txicos. Ejemplos: sulfato de cobre (alguicida) y nitrato de plata
(gonorrea oftlmica en nios)
d. Halgenos:
- Yodo: antisptico cutneo. Oxida componentes celulares y forma complejos con las
protenas. En altas concentraciones puede destruir algunas esporas. Puede lesionar la
piel, dejar manchas y desarrollar alergias.
- Cloro: oxida componentes celulares, requiere un tiempo de exposicin de unos 30
minutos.El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio,
que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y adems es efectivo en
un amplio rango de temperaturas. La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se
debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido
en agua. La actividad germicida del in hipocloroso es muy reducida debido a que por
su carga no puede penetrar fcilmente en la clula a travs de la membrana
citoplasmtica. En cambio, el cido hipocloroso es neutro y penetra fcilmente en la
clula, mientras que el Cl2 ingresa como gas.
Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica, pues puede haber en el
medio sustancias capaces de reaccionar con los compuestos clorados que disminuyan
la concentracin efectiva de stos.
e. Compuestos cuaternarios de amonio (detergentes): Molculas orgnicas
emulsificantes porque contienen extremos polares y no polares, solubilizan residuos
insolubles y son agentes limpiadores eficaces.
Solo los catinicos son desinfectantes, alteran membrana y pueden desnaturalizar

protenas. No destruyen micobacterias ni esporas. Se inactivan con el agua dura y el


jabn.
f. Aldehdos: Formaldehdo y glutaraldehdo, se combinan con las protenas y las
inactivan. Eliminan esporas (tras 12 horas de exposicin) y pueden usarse como
agentes esterilizantes.
g. Gases esterilizantes: Esterilizacin de objetos termosensibles.
- Oxido de etileno: microbicida y esporicida, se combina con las protenas celulares.
Alto poder penetrante. En concentraciones de 10-20% mezclado con CO2 o
diclorodifluorometano. Se debe de airear ampliamente los materiales esterilizados para
eliminar el gas residual porque es muy txico.
AGENTES ANTIMICROBIANOS:
La medicina moderna depende de los agentes quimioterapeuticos para el tratamiento
de enfermedades. Estos agentes destruyen a los microorganismos patgenos o inhiben
su crecimiento para evitar un dao significativo al hospedador.
La mayora de estos agentes son antibiticos derivados de productos microbianos o sus
derivados. Existen tambin antibiticos sintticos. Caractersticas de los agentes
antimicrobianos:
- Toxicidad selectiva: debe de eliminar o inhibir exclusivamente el microorganismo
patgeno que est daando al hospedador.
- No causar efectos adversos: No deben de causar efectos indeseables para el
hospedador. (respuestas alrgicas, dao renal, dao gastrointestinal, nauseas,
deplecin de la mdula sea)
- Espectro de accin: Algunos agentes tienen un espectro de accin estrecho por lo
que su efecto es contra una limitada variedad de microorganismos. Otros tienen un
espectro de accin amplio, y pueden atacar diferentes clases de patgenos.
Para tener una idea de la efectividad de un agente antimicrobiano puede obtenerse:
- Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI), que es la mnima concentracin del
agente antimicrobiano que puede inhibir el crecimiento de un patgeno en particular.
- Concentracin Letal Mnima (CLM), es la mnima concentracin de un agente
antimicrobiano que mata a un patgeno.
Mecanismos de accin de los agentes antimicrobianos:
Las drogas antimicrobianas pueden causar un dao al organismo patgeno de varias
maneras:

- Los antibiticos ms selectivos son aquellos que interfieren con la sntesis de la pared
bacteriana. (penicilinas, vancomicina, bacitracina, cefalosporinas).
- Pueden inhibir la sntesis proteica al unirse al ribosoma procaritico. (estreptomicina,
gentamicina, cloranfenicol, eritromicina)
- Inhibicin de la sntesis de cidos nucleicos, inhibiendo la ADN girasa, interfiriendo
con la replicacin, transcripcin o traduccin, bloqueando la sntesis de ARN, etc.
(ciprofloxacina, quinolonas, rifampicina)
- Dao en la membrana plasmtica unindose a ella para daar su estructura y alterar
su permeabilidad. (polimixina B)
- Algunas drogas antimicrobianas pueden actuar como antimetabolitos: bloquean las
vas metablicas por competicin inhibitoria. Compiten por los metabolitos.
Determinacin del nivel de actividad antimicrobiana:
Existen diversos mtodos para determinar la actividad de los agentes antimicrobianos,
entre ellos tenemos:
Test de susceptibilidad por dilucin:
Se utiliza para determinar la CMI y la CLM. Es un mtodo de dilucin en caldo, en donde
se colocan concentraciones decrecientes del agente antimicrobiano, generalmente
diluciones 1:2, en tubos con un caldo de cultivo que sostendr el desarrollo del
microorganismo. El caldo ms comnmente usado para estas pruebas es el de MuellerHinton suplementado con los cationes magnesio y calcio.
Un tubo de caldo se mantiene sin inocular como control negativo de crecimiento. Luego
de la incubacin adecuada (usualmente de un da para el otro) se observa la turbidez
de los tubos que indicar desarrollo bacteriano. El microorganismo crecer en el tubo
control y en todos los otros que no contengan suficiente agente antirnicrobiano como
para inhibir su desarrollo. La concentracin de antibitico que presente ausencia de
crecimiento, detectada por falta de turbidez (igualando al control negativo), se designa
como la CMI. Para medir la CLM se debe realizar la prueba de actividad bactericida, que
emplea el mismo sistema de dilucin en caldo que para medir la sensibilidad.
Una vez determinada la CMI, se siembra una cantidad conocida de inculo de cada uno
de los tubos de caldo que no presentaban turbidez en placas de agar (la pequea
cantidad del agente antimicrobiano que es llevada junto con el inculo se elimina por
dilucin en el agar), y el nmero de colonias que crece en estos subcultivos, despus
de incubar durante la noche, se compara con el nmero de UFC/ml del cultivo original.
Dado que incluso las drogas bactericidas no siempre esterilizan totalmente una

poblacin bacteriana, la mnima concentracin del agente antibacteriano que permite


sobrevivir a menos de 0,1 % del inculo original se denomina CLM.
Prueba de Difusin en agar:
El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas de agar Mller-Hinton
y sobre su superficie se disponen los discos correspondientes a varios antibiticos.
Se incuban las placas durante 16-24 horas a 35C y al cabo de este tiempo se estudia
el crecimiento en ellas.
Se valora el dimetro de la zona de inhibicin que se forma alrededor de cada disco y
se compara con las referencias oportunas publicadas por el NCCLS.
Con esta referencia podemos informar si el micoorganismo es Sensible, Intermedio o
Resistente (S, I, R) a cada uno de los antibiticos ensayados en las placas.

Mtodo de E-test:
Se trata de una tcnica cuantitativa en placa que permite obtener una lectura directa
de CMI en g/ml, ya que se emplean tiras plsticas impregnadas en concentraciones
crecientes de antibitico indicadas en una escala graduada sobre la propia tira.
El microorganismo a investigar se inocula en una placa y sobre ella se deposita la tira
del antibitico (o antibiticos) a ensayar. Tras la incubacin de 16-24 horas a 35C se
observan las placas y se valora la zona de inbicin, de forma elptica, alrededor de
cada tira. La CMI se lee directamente observando el punto ms bajo de la elipse que
presente crecimiento.

Pruebas automatizadas:
La mayora de estos novedosos mtodos utilizan sistemas de microdilucin en medio

lquido sobre microplacas con pocillos en "U" e interpretan el crecimiento bacteriano en


los diferentes pocillos por medio de un autoanalizador (mediciones por turbidez o
fluorescencia).

Su manipulacin suele ser fcil y rpida, generalmente automatizada o


semiautomatizada, lo que los convierte en mtodos ideales para grandes volmenes
de trabajo. Una de sus grandes limitaciones es que slo ofrecen garanta para
investigar microorganismos de crecimiento rpido y que no tengan requerimientos
especiales.

Resistencia a los antimicrobianos:


La resistencia los antimicrobianos es uno de los mayores problemas, se define como la
capacidad adquirida de un organismo para resistir los efectos de un agente
quimioterapeutico al que habitualmente es sensible. La mayor parte de la resitencia es
debida a genes de resistencia que se tranfieren por intercambio gentico.
Algunos microorganismos pueden ser naturalmente resistentes a algunos antibiticos y
existen diversas razones:
- El organismo puede carecer de la estructura que inhibe el antibitico (carencia de
pared celular).
- El organismo puede ser impermeable al antibitico.
- El organismo puede alterar el antibitico inactivndolo.
- El organismo puede modificar la estructura a la que es dirigido el antibitico.
- Por un cambio gentico, se pueden producir vas metablicas que bloqueen el
antimicrobiano.
- El organismo puede ser capaz de bombear hacia fuera el antibitico que haya entrado
a la clula.
Otras veces, la resistencia involucra otra serie de causas:
- Tratamientos incompletos (seleccin de cepas resistentes)
- Uso indiscriminado de antibiticos (flora normal resistente)
- Transferencia de genes de resistencia entre poblaciones bacterianas.

Se cual sea el mecanismo, esta resistencia est genticamente codificada en el


cromosoma o en plsmidos (plsmidos de resistencia).

Control De Microorganismos

Control de Microorganismos
Aunque muchos microorganismos son benficos y necesarios para el bienestar
humano, las actividades microbianas pueden tener consecuencias indeseables como la
putrefaccin de alimentos y el desarrollo de enfermedades, en consecuencia es
fundamental poder destruir o inhibir los microorganismos para minimizar sus efectos
dainos.
Trminos Utilizados en el control de Microorganismo:
Esterilizacin:
Proceso mediante el cual son destruidas o eliminadas todas las formas de vida
microscpicas de un objeto o hbitat.

Desinfeccin:

Se define como la destruccin, inhibicin o eliminacin de microorganismos de objetos


inanimados que pueden causar enfermedad, esto se lleva a cabo principalmente con
agentes qumicos llamados desinfectantes (esterilizan).

Saneamiento:

Se define como la reduccin de la poblacin microbiana que se consideran seguros


segn las normas de salud publica.

Antisepsia:

Se define como el control de microorganismos en tejidos vivos con agentes qumicos


para prevenir una infeccin o sepsis, esto se lleva a cabo con los antispticos que son
agentes qumicos que destruyen o inhiben el crecimiento de agentes patgenos.

El control de los microorganismos se lleva a cabo por mtodos fsicos y agentes


qumicos y son los siguientes:
a) Control por mtodos fsicos:
Los cuatro agentes empleadas con mas frecuencia son el calor, filtracin, radiacin
ultravioleta y radiacin ionizante.
1. Calor: Se lleva a cabo la esterilizacin de diferentes maneras y es uno de los
mas utilizados en el laboratorio de microbiologa. *Incineracion, por calor
Humedo, Calor seco.
2. Filtracion: Es un mtodo excelente para elimnar la poblacin microbiana de
materiales termosensibles mediante el uso de filtros de membrana como los
millipore.
3. Radiacin ultravioleta: Es letal pero no atraviesa eficazmente el cristal, pelculas
de sociedad, agua, ni otras sustancias; se utiliza para esterilizar aire y
superfcies expuestas.
4. Radiacion Ionizante: es un agente esterilizante excelente penetra
porfundamente los objetos, se utilizan para esterilizar en frio antibiticos,
hormonas, suturas, dispositivos desechables como jeringas.
b) Control por agentes qumicos:
Se lleva a cabo mediante el uso de sustancias qumicas y se utilizan con mas
frecuencia en la desinfeccin y la antisepsia, para la efectividad influyen factores
como: clase de microorganismos, concentracin y naturaleza del agente, tiempo de
exposicin, etc. Los ms utilizados son: Los fenoles, alcoholes, cloro, yodo, metales
pesados (mercurio) detergentes, gases (oxido de etileno).
c)

Control IN vivo:

Se refiere al control de microorganismos mediante el uso de antibiticos en los


individuos que presentan una infeccin o enfermedad. Para la eleccin de los
antibisticas en un tratamiento se realiza un antibiograma.