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travers
la
membrane
cytoplasmique
(orthomyxoviridae)
Nomenclature virale
Ecriture en italique avec 1re lettre majuscule
Niveau taxonomique Suffixes
Exemples
Ordre
-virales
Mononegavirales
Famille
-viridae
Paramyxoviridae
Sous-famille
-virinae
Paramixovirinae
Genre
-virus
Morbillivirus
Espce
(virus individuel)
Virus de la rougeole
Lenveloppe
Virus nus (N)
Virus envelopps (E)
Systme de la capside
Symtrie hlicodale (H)
Symtrie icosadrique (I)
Symtrie inconnue (?)
1. Etape initiale :
a. Attachement :
- Interactions protine virale-rcepteur cellulaire
- Cest le 1er facteur conditionnant le tropisme dun virus pour
une cellule, un tissu, un organe ou un hte particulier
(permissivit)
- Les rcepteurs cellulaires sont spcifiques ou non
- Les rcepteurs sont prsents sur certains types cellulaires
- Notion de Co rcepteurs
- Cet attachement se fait en plusieurs tapes
b. Pntration : Trois mcanismes : endocytose fusion des
membranes transfert du matriel viral travers la membrane
cellulaire
Lendocytose :
Virus envelopps : Orthomyxoviridae, Bunyaviridae, Togaviridiae, Flaviviridae
Virus non envelopps : Adenoviridae, Polyomaviridae
- Le virus est internalis au sein dune vsicule (endosome).
- Lacidification de lendosome modifie la conformation des protines virales dattachement (HA pour influenza A) qui sinsrent
dans la membrane cellulaire
- Lacidification du virus induite par une pompe protons (la
protine M2 pour le virus influenza A) entrane une dcapsidation et une dissociation des constituants viraux (M1 et RNP)
- Libration des gnomes qui pourront pntrer dans le noyau
b. Assemblage :
Les protines de structure sautoassemblent en capsomres puis en nuclocapside par intgration du gnome
rpliqu.
Lassemblage a lieu au niveau du :
- Noyau (virus ADN : Adnovirus, Herps)
- Cytoplasme (virus ARN : Picornavirus, ADN pox)
-> anomalies morphologiques de la cellule : inclusions contenant des virions
c. Libration :
+ Virus envelopps : libration par BOURGEONNEMENT
Ces virus acquirent leur enveloppe par bourgeonnement partir
de la membrane cellulaire (celle-ci peut-tre : la nuclaire interne,
membrane de Golgi, membrane endoplasmique, MP externe)
+ Virus nus : libration par LYSE
Aprs accumulation des virions en quantit importante, il y a rupture de la cellule hte et libration des particules virales compltes
et matures. Elles vont alors trouver une nouvelle cellule hte pour
perptuer le cycle.
Virus
Membrane travers
laquelle seffectue le
bourgeonnement
HSV
Poxvirus
Golgi
Flavivrus
Membrane endoplasmique
Orthomyxovirus
Membrane plasmique
interne
Paramyxovirus
MP externe
Rhabdovirus
MP externe
Retrovirus
MP externe
2. Les muqueuses
a. Loropharynx et le tractus intestinal :
+ Ingestion deau ou daliments souills
+ Porte dentre pour de nombreux virus
+ Seuls les virus rsistants peuvent infecter les cellules
du tube digestif
+ Certains se multiplient dans les cellules du tractus
intestinal et sont responsables dune infection localise
(gastroentrites)
+ Dautres diffuseront via le sang ou la lymphe vers un
organe cible (entrovirus) ou donneront une infection
systmique
b. Muqueuses respiratoires :
c. Muqueuses gnitales :
+ La pntration est possible par les microtraumatismes de cette muqueuse.
+ Les HPV sy multiplient et sont responsables dune infection locale.
+ Les HSV sy multiplient et diffusent par les
voies nerveuses.
+ HIV et HBV peuvent pntrer dans lorganisme par cette voie sans se multiplier dans
les
cellules pithliales de la muqueuse gnitale.
d. Muqueuses conjonctivales :
+ lADV-8 est transmis par les instruments
ophtalmiques et les piscines, donne une conjonctivite saisonnire
+ lADV-37, HSV-1, virus de la vaccine et lentrovirus-70 donnent des viroses oculaires.
HPV= Human Papillomavirus
HSV= Herpes simplex virus : virus de lherps
HIV= human immunodeficiency virus
a. Voie hmatogne :
+ partir du site de pntration, le virus emprunte les canaux lymphatiques affrents et migre jusquaux ganglions
lymphatiques rgionaux o ils peut se multiplier.
+ Via les canaux lymphatiques effrents puis le canal thoracique, ils atteignent la circulation sanguine systmique o il
est responsable dune premire virmie de faible intensit.
+ Certains virus se multiplient dans les cellules de lendothlium vasculaire ou dans les cellules (monocytes, LB, LT, rarement des rythrocytes). Ils sont ensuite souvent librs dans
le plasma. Ainsi, la virmie peut tre plasmatique (particules
virales libres dans le plasma) et/ou cellulaire (virus intracellulaire).
+ La dissmination du virus entrane une virmie secondaire
avec des concentrations virales plus importantes.
+ La virmie est un phnomne dynamique avec en permanence une production et une limination. Les cellules du systme rticuloendothlial de la rate, du foie, des poumons et
des tissus lymphodes jouent un rle important dans llimination du virus. Ils peuvent aussi tre le lien de multiplication virale secondaire.
+ Dans la majorit des cas, la virmie est de courte dure
(quelques jours) disparaissant avec lapparition des anticorps
neutralisants.
+ Dans certains cas, la virmie persiste, la cause peut tre :
- La formation de complexes immuns (virus-Ac) qui conservent linfectivit initiale des virus
- Un phnomne de tolrance qui peut apparatre lorsque
linfection a eu lieu in utero avant la maturation du systme
immunitaire : exemple les infections HBV ou rubole.
b. Voie neuronale : voie de dissmination utilise soit exclusivement (rage, certains rovirus), soit une alternative la
voie hmatogne (HSV).
La pntration du neurone seffectue selon les mcanismes
dcrits pour les autres cellules.
A lintrieur du neurone, le virus se dplace grce aux systmes de transport de la cellule selon un sens rtrograde
dans les nerfs sensitifs ou antrograde dans les nerfs moteurs.
3. Les barrires :
a. Barrire hmato-encphalique :
Soppose la diffusion virale, elle est forme par
les cellules endothliales des capillaires sanguins
et est caractrise par lexistence de jonctions serres.
Les prolongements astrocytaires associs aux cellules endothliales participent la formation de la
BHE.
Le plexus chorode : Lpithlium chorode est compos dune range de cellules pithliales jointes
par des jonctions serres crant ainsi une barrire.
b. Passage transplacentaire :
+ Prnatal : rubole, CMV, parvovirus B19, VZV
(virus varicelle-zona)=> embryopathie, foetopathie
+ Prinatal : HSV, HBV, HIV, CMV, VZV, HPV?
CMV= cytomgalovirus => infection du Nn gnralise ou non
+ Postnatal : HTLV, HIV, HBV, CMV HTLV = Virus
T-lymphotropique humain => infection du nourrisson
Organes cibles
Organe dont latteinte au cours de linfection virale
donne les signes cliniques caractristiques de la
maladie.
Facteurs de tropisme : sensibilit, permissivit
Voies dexcrtion
+ Tractus respiratoire : toux, ternuement
(rougeole, grippe, variole)
+ Peau : liquide vsiculaire HSV
+ Selles : entrovirus, VHA, rotavirus
+ Urine : R.O.R, HBV, CMV, arnavirus
+ Sperme : HIV, HBV, CMV
+ Lait : CMV, oreillons, rtrovirus
Facteurs intervenant dans la pathogense
1. Facteurs lis au virus
+ Quantit de virus, voie dinoculation, cytopathognicit, tropisme
+ chappement du virus la rponse immunitaire :
- Latence
- Variabilit gntique
- Inhibition de lexpression du CMH
+ Rsistance aux antiviraux
+ Bases molculaires de pathognicit
- Souches attnues
- Augmentation de la virulence
2. Facteurs lis lhte
+ Dficits immunitaires primaires ou acquis
(transplantations, SIDA)
+ ge, grossesse, tat hormonal, malnutrition
+ Rponse immunitaire vis--vis de linfection : maladies auto-immunes, bronchiolites VRS (virus
respiratoire syncytial)
VACCINATION ANTIVIRALE
Gnralits
Introduction
La vaccination est un moyen de prvention
efficace en sant publique. Elle permet llimination ou lradication de certaines infections
pidmiques
Dfinition
Immuno prophylaxie active spcifique une
maladie infectieuse virale ou bactrienne,
donnant une protection diffre et durable.
Principe
Introduction dans lorganisme dune prparation antignique drive dun agent pathogne
spcifique (ou apparent celui-ci), capable
dinduire, chez un sujet rceptif, une raction
immunitaire protectrice vis--vis de cet agent.
Bases immunologiques de la vaccination
Rponse cellulaire et humorale
Les macrophages phagocytent lantigne et le
p r se n te nt
aux
c e l l u le s
immunocomptentes :
+ LT : support de limmunit mdiation cellulaire et de la mmoire immunologique
+ LB : qui se diffrencient en plasmocytes scrteurs dimmunoglobulines spcifiques IgM
IgG IgA supports de limmunit humorale
Rponse primaire et secondaire
Le premier contact avec lantigne est suivi
dune rponse primaire caractrise par une
ascension diffre et lente des anticorps qui
culmine entre le 2me et 4me semaine un
niveau faible, pour dcrotre ensuite rapidement.
Tout contact ultrieur, mme trs lointain,
avec le mme antigne induira une rponse
secondaire, mettant en oeuvre la mmoire immunologique thymodpendante, caractrise
par une ascension rapide (en quelques jours)
importante et durable des anticorps protecteurs (effet rappel).
Inconvnients
Exemples :
* Vaccins bactriens : 1 seul commercialis : BCG -> tuberculose, compt parmi les + tolrs (la meilleure voie = intradermique)
* Vaccins viraux :
+ Rougeole : souche schwarz
+ Oreillon : souche jeryl-lynn dans ROR
+ Rubole : souche Wistal RA 27/3 M
+ Poliomylite : vaccin oral => 3 types sauvages : 1, 2 et 3; 3
administrations sont ncessaires
+ Fivre jaune : souche AMARIL 17D
+ Varicelle
Nouveaux vaccins :
Vaccins attnus empiriquement : varicelle (souche OKA),
dengue, CMV (souche TOWNE), rotavirus (souche WC3)
Vaccins obtenus par mutagnse dirige : shigellose, fivre
thyphode sont dispo // HSV et vibrion cholrique sont en
voie de recherche
Vaccins vivants recombins : (chimriques) linstitut pasteur
=> un vaccin (voie orale) contre la shigellose fait lobjet dessais chez lHomme
Inconvnients
- Facile prparer
- Excellente innocuit
- Excellente conservation :
stables la chaleur (avantage
dans les pays chauds)
- Peuvent tre administrs
limmunodprim, femme enceinte et peuvent tre administrs au nouveau n en prsence
dAc maternels ce qui permet
une vaccination prcoce
Vaccins du futur
+ Associations vaccinales + Amlioration de vaccins existants
+ Nouveaux vaccins : VRS, Helicobacter pylori, ETEC, Lyme,
Herpes, Papillomavirus
+ Exploiter limmunit muqueuse :
- Immunit systmique : humorale, cellulaire
- Immunit muqueuse : cellulaire, IgA scrtoires
Dans le but de mettre au point ces nouveaux vaccins, de
nouvelles stratgies vaccinales ont t dveloppes depuis
1980 :
+ Vaccins recombinants + Vaccins DNA
+ Peptides ou particules virales recombinantes
Virus entiers : grippe, hpatite A, poliomylite, rage, mningo-encphalite tiques deurope centrale, encphalite japonaise
Sous-units virales : grippe (Ag de surface),
hpatite B (Ag de surface)
Cas particulier du vaccin de la rage : le
vaccin anti-rabique
Vaccins de 2me gnration prpars partir
de cultures cellulaires permettent une utilisation prophylactique et thrapeutique
Utilisation thrapeutique aprs apprciation
du risque de contamination et dsinfection
5 injections : j0, j3, j7, j14, j28
+/- Ig antirabiques sous contrle mdical
(centre antirabique)
Utilisation prophylactique chez les sujets exposs : vtrinaires, forestiers, personnes
ayant ou voyageant en zones denzootie rabique 3 injections : j0, j7, j28, 1 rappel 1 an
puis tous les 5ans
Effets indsirables
+ Complications dues aux vaccins vivants,
dexpression retarde
+ Des vaccins inertes, immdiats ou prcoces
relevant de ractions dhypersensibilit ou
deffets toxiques
+ Complication mineure ou bnigne considre comme acceptable
- Raction locale (prcoces avec les vaccins
inactivs ou diffre BCG)
- pisode fbrile pendant 1 3 jours (prcoce
avec les vaccins inactivs ou diffr avec les
vaccins vivants)
- Convulsions hyperthermiques (avec les vaccins anti-coquelucheux et anti-rougeoleux)
- ruption
- Arthralgies, arthrites (chez adulte avec vaccin rubole, Hpatite B)
- Parotidite, raction mninge (vaccin antiourlien)
+ Les accidents :
- Lis au vaccin anticoquelucheux (inactiv
complet) : syndrome des cris persistants,
choc, convulsions,
- Lis la vaccination anti-polyomylitique
orale : paralysies
- Bcgites gnralises pouvant compliquer
le BCG quand il est inocul un sujet porteur dune immunodficience congnitale ou
acquise
Voies dadministration
Voie intradermique : BCG face externe du
bras
Voie intramusculaire : deltode ou face antrolatrale de la cuisse
Voie sous cutane : deltode ; recommande
pour vaccins viraux et vaccins polysaccharidiques (Hib, pneumocoque)
Voie orale : polio orale
Varicelle : personnes en contact avec les
nourrissons et petits enfants
Rage : vtrinaires, gardes-forestiers et
gardes-chasses, personnel des abattoirs
Hpatite A : personnels des crches et
coles, personnels en contact des eaux uses
et alimentation de collectivit
Leptospirose : recommande pour vtrinaires, bouchers, employs dabattoirs
Brucellose : conseille pour les employs
dabattoirs
Anti mningocoque ttravalent : A, C, Y, W.
plerins
+ Vaccins inutiles en cas dinfection ultrieure : antiourlien, antirougeoleux, antiruboleux, antipolio inj, antihpatite B et A
+ Vaccins CI chez lImmunodprims : BCG
et VVA
Personnel de sant
+ Mise jour des vaccinations anti-ttanique, du polio (tous les
10ans), Hpatite B, grippe, varicelle et ROR (non immuniss)
+ La polio orale et la variole sont CI lentourage des patients immunodprims
+ Vaccination anti-typhode pour personnel de labo
+ Contact direct avec malade atteint de mningite C : vaccination
urgente
LA CHIMIOTHRAPIE ANTIVIRALE
Introduction
Substance virucide : substance visant obtenir
la mort ou llimination des micro organismes et/
ou linactivation des virus
Substances virostatique : inhibiteurs de la rplication virale, sans limination ni mort du virus
Activit compare de quelques produits dsinfectants
Gram
+
Gram MycoSpores
bactries
Champignons
et levures
Virus
Eau de javel
+++
+++
++
Aldhydes
+++
+++
++
++
++
++
Alcool 70
++
++
++
++
+++
Chlorhxidine +++
Antiseptiques et dsinfectants
Les antiseptiques et dsinfectants
sont des substances virucides
agissant par contact direct avec
les virions prsents sur la peau
(antiseptique), le matriel ou les
surfaces. Ils ne remplacent jamais les mesures dhygine universelles. Finalement, lobjectif
est de prvenir le danger biologique. Pour prvenir le risque biologique, il faut connatre le danger possder la carte didentit
de lagent pathogne manipuler
et connatre son niveau de scurit biologique situ entre 1 et 4.
Exemple
L1
Risque faible
Bacillus subtillis
L2
Risque modr
Virus de la rougeole
L3
Risque fort
Virus de la rage
L4
Virus de la variole
SRAS Coronavirus
Virus Ebola
Antiviraux :
Les antiviraux sont des substances virostatiques
qui ne sont actifs in vivo que sur des virus en
phase de multiplication, et inactifs sur les virus
quiescents. La majorit des antiviraux inhibent
laction denzymes spcifiques.
Sur la libration :
Neuraminidase des virus grippaux : alors que les protines de surface
des virus grippaux sont trs variables :
+ Le site actif des neuraminidases grippales est toujours trs conserv
+ La neuraminidase grippale est essentielle la multiplication virale et
la libration des nouveaux virus et constitue alors une cible idale pour
lintervention antivirale.
Exemple dinhibiteur de la neuraminidase : Zanamivir (Relenza), Oseltamivir (Tamiflu), Actifs sur les virus grippaux de type A et B
LE DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE
Introduction
Le diagnostic virologique est un ensemble de principes, de mthodes et de
stratgies visant dtecter, quantifier,
suivre et identifier prcisment les
infections virales humaines.
lments robustes
Principales
indications
du diagnostic virologique
lments
beaucoup
plus fragiles
Ac, Ag extracellulaires, ADN, vi- Virus infectieux destirus nus rsistants dans le milieu ns culture, surtout
extrieur
virus envelopps, Ag
intracellulaires, ARN
Les conditions de conservation et
de transport ont peu dinfluence
sur la fiabilit des analyses : prlvements peuvent tre conservs
+4C pendant plusieurs jours
et transports temprature ambiante.
Diagnostic direct /
indirect
+ Napportent pas les
mmes informations
+ Ne doivent pas tre
s ys t m a tiqu e me n t
pratiques ensemble
+ La srologie est
base sur la raction
lmentaire Ag-Ac :
- Dtection dune
protine virale : Ac
de rfrence -> Diag.
direct
- Dtection dun Ac
srique : protines
virales de rfrence > Diag. indirect
Plus simple
Rsultat positif > infection virale
productive
Sensibilit et
spcificit de la
technique utilise
Plus complexe
Ex : variation physiologique chez le nouveau n chez qui des
Ac maternels peuvent
persister
jusquau
18mois ou variation
pathologique chez lID
Microscopie
lectronique
Immunocytodiagnostic
Dtection dAg
Dtection du
gnome
Immunocytodiagnostic ELISA
Immunodiffusion
(bandelette,
savonette)
Agglutination des
particules
Latex
Hybridation sans
amplification
Hybridation
aprs
amplification
(PCR et ses variantes)
Squenage
Animal de
laboratoire
OEuf de poule
embryonn
Peu utilis en
routine.
Actuellement,
grand
intrt dans
la ralisation
des modles
exprimentaux.
Indispensable pour la
multiplication
de
certains
virus
Exceptionnel
Trs utilis
dans
pass
(virus
grippaux)
Actuellement,
il est utilis
pour la production de vaccins.
INCONVENIENTS
- Pouvoir infectieux
- Sensibilit +++ Rfrence
- Etude ultrieure des
caractristiques
fonctionnelles et structurales de la souche virale.
- Etude de sensibilit
aux antiviraux
Le prlvement : (cest une tape trs importante parce que linfectiosit du virus
doit tre conserve)
+ La qualit du prlvement conditionne les
chances disoler un virus
+ Tout type de prlvement
+ Le plus prcoce possible, pendant la
phase aigu de la maladie (excrtion virale
maximale).
+ Doit se faire de prfrence au niveau de
lorgane cible si accessible ou sinon de la
porte dentre (arbre respiratoire), du site
dexcrtion virale (les urines), du site de
multiplication primaire (le sang).
+ Prserver la viabilit lors de lacheminement au laboratoire, labri de la dessiccation (desschement), chaleur, variations de
pH, viter toute pullulation microbienne.
+ Les prlvements sont effectus lcouvillon (ressemble au coton-tige) : dcharger dans milieu de transport contenant des
ATB
+ Par contre, les chantillons de sang,
urine, selles, LBA (lavage bronchopulmonaire), LCR, biopsies dorganes sont
recueillis dans un rcipient strile.
+ Au labo, en attendant la culture 2-6C
+ Si > 36h conglation -80C ou en azote
liquide parce que la conservation -20C
ne permet pas de conserver linfectivit du
virus sur une longue priode.
Lignes continues =
Htroplodes
INCONVENIENTS
Agglutination
Principe : Ac anti virus fixs sur microbilles. En prsence du virus, agglutination visible loeil nu.
Avantage : ralisation trs rapide,
facile < 30min, se fait directement
sur le prlvement.
Inconvnient : moins sensible que
ELISA
Applications : rotavirus et adnovirus
dans les selles riches en virus
Immunochromatographie
Inconvnients
Cot ++
+ Manque de sensibilit
(prlvement riche en virus)
+ ImmunoFluorescence: lecture en fonction de lexprience de lobservateur
Amplification gnique
Le chef de file de cette technique est la
PCR (Polymrase Chain Reaction)
+ Reproduction dune portion limite du
gnome viral, grce des amorces et
laction dune ADN polymrase.
+ Cette PCR constitue une rvolution du
diagnostic virologique puisquelle a la spcificit des techniques dhybridation et une
sensibilit celle de la culture cellulaire.
+ Applicable tous les agents viraux
Extraction
+ DADN ou ARN partir du prlvement.
+ Plusieurs mthodes :
- En routine: extraction par adsorption des
acides nucliques (chargs -) sur des particules de silice charges +, puis lution
- Extraction manuelle: colonnes dextraction
- Extraction automatise
Une PCR doit absolument se faire partir
dun ADN (donc si virus ARN, une RT le
transforme en ADN)
PCR Classique
Hybridation
Elongation
95
40-65
72
Description
Cette forte T
entraine une
sparation
des 2 brins
dADN.
On diminue la T pour
que
le
couple
damorces puisse se
fixer chacun sur le brin
complmentaire
Squenage nuclotidique
+ Caractrisation des acides nuclotidiques = tude
de la squence des acides nucliques (squenage
de Sanger)
+ Plusieurs objectifs :
- Typage molculaire : reconnaissance au sein
dune mme espce virale, dou sous-groupe particulier / sa rpartition gographique, son pidmiologie ou son pouvoir pathogne, ex : gnotypes HCV
- Reconnaissance de mutations dans gnes cibles
des antiviraux, associes des phnotypes de rsistance, ex : HIV
- Reconnaissance dune souche virale implique
dans un cas de transmission nosocomiale (HDC,
HIV) ou dune pidmie communautaire
- Comprhension de lvolution des virus dans le
temps, de leur relation phylogntique et des conditions de leur mergence
Prlvements
- Srum +++ - Plasma - LCR - Urine
- Salive - Humeur aqueuse, vitre - Liquide articulaire
+ Le plus tt possible aprs le dbut de linfection
+ Srodiagnostic initial: rfrence au cours de lvolution
+ Site du prlvement orient par les signes cliniques
+ Transport: but = maintien de la fonctionnalit des Ac
+ Ac : lments robustes conservation +4C pendant
plusieurs jours et transport temprature ambiante
+ Congeler les chantillons de srum : srothque
Lyse
- Fixation du complement
- Neutralisation : Sroneutralisation
Principe : Ac "neutralisants" car inhibent lECP viral
Technique laborieuse ncessite un laboratoire de culture cellulaire et un virus induisant un ECP rapide
Immunoassays
Immunofluorescence Assay (IFA)
Radioimmunoassay (RIA)
Enzyme immunoassay (EIA)
Interprtation :
Valeur seuil (VS) calcule
par rapport aux contrles
+ et - :
+ : DO > VS
- : DO < VS
douteux : DO = VS 10 ou
15%
Inconvnients
Microscope fluorescence
Lecteur expriment
Automatisation = 0
Utilise en 2 intention (confirmation) ou
pour des analyses avec nombre
dchantillons limite
WESTERN-BLOT :
Principe
+ Dtection Ac anti-HIV par immunoempreinte
+ Permet de caractriser les anticorps dirigs
contre chacune des protines virales trs spcifiquement
Electrophorse sur Gel
+ 1e tape : dnaturation du virus (V) par un
dtergent ou autre agent (SDS)
+ 2e tape: sparation protines du V (Ag) selon PM par lectrophorse sur gel de polyacrylamide
+ 3e tape : transfert des protines sur un buvard (blot) de nitrocellulose
Incubation :
+ La bandelette de nitrocellulose est incube
avec le srum du patient contenant (ou non!)
les Ac anti-HIV
+ Les Ac spcifiques se lient aux Ag du blot
+ La bandelette est rince pour liminer les Ac
non complexs Rvlation :
+ Les C* (complexes) Ag/Ac sont rvls par
un 2 Ac coupl une enzyme
+ Le nouvel Ac se lie au C* lors de lincubation
et les Ac non lis sont rincs
+ Au contact du substrat de avec lenzyme,
une couleur apparat
Bandes tmoins :
+ Contrle positif : mise en contact des Ag du
blot avec tous les Ac complexants emplacement sur le blot de chaque complexe
+ Contrle ngatif : sans prsence Ac
Interprtation du Western Blot
+ Positivit certaine : Au minimum 2 Ac antienv ET 1 Ac anti-gag ou anti-pol
+ Positivit probable : 1 Ac anti-gp24 ET 1 Ac
anti-gp 160, 2 Ac anti-en
Immuno-empreinte
+ Western-Blot (WB) + Immuno-Blot (IB)
+ RIBA : Recombinant IB Assay + SIA : Strip
IB Assay
Consiste analyser la spcificit antignique
des Ac
Principe du WB : Fractionnement pralable
des protines virales a partir dun lysat de cellules infectes (lectrophorse dnaturante
sur gel de polyacrylamide) transfert sur un
support ELISA (mais le support est une
bandelette)
Principe de lIB : Dpt directement sur
membrane de protines virales recombinantes
et/ou des oligopeptides synthtiques
Cintique des Ac
+ Infection rsolutive: aprs la gurison, les Ac permettent un diagnostic
rtrospectif (rougeole)
+ Infections latentes: les Ac signalent
la prsence du virus dans lorganisme
(Herpesvirus)
+ Infections chroniques: prsence dAc
avec rplication persistante du virus
(VIH, VHC)
Principales indications
Statut immunitaire
- Screening prnatal
- Screening pr et post vaccination
- Screening pr greffe
- Contact maladie contagieuse (ex : VZV femme enceinte)
Suivi :
- Femmes enceintes non immunes (Rubole, CMV)
- Patients greffs (ractivations, infections post-greffe)
- Accident par exposition au sang AES
Diagnostic infection rcente
- Virage des Ac: 2 srums prlevs 2 3 semaines dintervalle
- Dtection dIgM spcifiques sur un srum
Diagnostic infection congnitale
- Passage transplacentaire des IgG : reflet des Ac maternels
- Dtection dIgM
Epidmiologie, transfusion