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Foto: Gustavo Adolfo Saavedra Pinto

on line

ISSN 1679-6535
Dezembro, 2005
Fortaleza, CE

Imobilizao de Tanase
em Suportes Vtreos Utilizando
aminopropiltrietoxilano
(ATPS)

(A)

Tanino-acil-hidrolase (E.C. 3.1.1.20), usualmente chamada

de tanase, catalisa a hidrlise de ligaes steres e
depsdicas de vrios taninos hidrolisveis, como o cido
tnico. Essa enzima pode ser encontrada em diferentes
vegetais, porm, seus principais produtores so os
microrganismos, destacando-se os fungos filamentosos
dos gneros Aspergillus e Penicillium.
A aplicao industrial dessa enzima bastante diversa,
atuando nas indstrias de alimentos, na produo de
antioxidantes; de bebidas, diminuindo a turbidez de
bebidas ricas em compostos fenlicos, como tambm na
preparao de chs gelados instantneos, preservando,
assim, os componentes responsveis pelo sabor; na
indstria de rao animal, removendo compostos indesejveis, promovendo o aumentando da digestibilidade e
favorecendo a assimilao de certos nutrientes; e no
tratamento de efluentes de curtumes que apresentam altas
quantidades de polifenis.
As enzimas proticas so constitudas por longas cadeias
de aminocidos unidas por ligaes peptdicas. Esto
presentes em todas as clulas vivas onde desempenham

1 Graduanda

Ariana Farias Melo1

Gustavo Adolfo Saavedra Pinto2
Luciana Rocha Barros Gonalves3
Andrea Lopes de Oliveira Ferreira4

uma funo vital, controlando processos metablicos.

Devido sua eficcia, sua ao especfica, s condies
amenas em que atuam e ao seu alto grau de
biodegradabilidade, as enzimas so apropriadas para uma
ampla gama de aplicaes industriais.
Apesar de suas enzimas serem excelentes catalisadores,
sua aplicao industrial pode ser limitada, em razo de
alguns fatores, como: solubilidade em gua; menos
estveis quando comparadas com catalisadores qumicos;
de uma forma geral, no poderem ser usadas em solventes
orgnicos; no resistirem a temperaturas elevadas e
estarem presentes em baixas concentraes, conseqentemente, seu processo de purificao se torna mais difcil,
tornando seu custo elevado e muitas vezes no sendo
economicamente vivel a sua separao do produto final.
Desta forma, a imobilizao de enzimas pode minimizar ou
at mesmo eliminar problemas encontrados com as
enzimas livres. Segundo Chibata (1978), enzimas imobilizadas so definidas como enzimas que esto fisicamente
confinadas ou localizadas numa certa regio do espao,
com reteno de suas atividades catalticas e que podem

em Engenharia de Alimentos/UFC - Bolsista PIBIC/CNPq/Embrapa Agroindstria Tropical

Tecnolgico, D.Sc., Embrapa Agroindstria Tropical, R. Dra. Sara Mesquita, 2270, Pici, Cep 60511-110, Fortaleza, CE. E-mail: gustavo@cnpat.embrapa.br
3 Eng. Qumica, D.Sc., Profa. Adjunta do Dep. de Engenharia Qumica da Universidade Federal do Cear, CE, Caixa Postal 12168, Cep 60356-000, Fortaleza, CE
4 Eng. Qumica, D.Sc., Profa. Visitante do Dep. de Engenharia Qumica da Universidade Federal do Cear, CE.
2 Qumico

Imobilizao de Tanase em Suportes Vtreos Utilizando aminopropiltrietoxilano (ATPS)

ser utilizadas de forma contnua e ou repetidas vezes. Em

termos de processos enzimticos, a imobilizao dos
biocatalisadores traz vantagens como: aumento da estabilidade, do nvel de controle do processo, do rendimento e
da pureza do produto final, alm de possibilitar o uso de
reatores de diferentes configuraes (Chibata & Tosa, 1978).
A imobilizao de enzimas por ligaes covalentes ocorre
por meio de combinaes qumicas entre grupos reativos
do suporte e grupos funcionais da enzima que no so
essenciais para a atividade cataltica, porm poucos
suportes contm esses grupos reativos que permitam o
acoplamento direto (suporte-enzima), necessitando, na
maioria das vezes, de uma silanizao ou de uma ativao,
ou at mesmo dos dois.
Esse tipo de processo apresenta algumas vantagens em
relao aos outros existentes na literatura, podemos citar:
grande fora de ligao, com conseqente estabilidade do
complexo suporte-enzima; alta reteno de sua atividade; e
a alterao ocorrida na enzima com a ligao ao suporte
pode ser favorvel, porem um mtodo mais complexo.
Dentre a grande variedade de suportes para imobilizao

de enzimas, os inorgnicos apresentam uma srie de

vantagens, tais como: elevada fora mecnica, estabilidade
trmica, resistncia a ataque de microrganismos e de
solventes orgnicos (Hernndez-Jstiz et al., 1998). Alm
disso, os materiais inorgnicos no apresentam modificao na sua estrutura em uma larga faixa de presso,
temperatura e pH. Sabe-se, tambm, que as propriedades
dos preparados de enzima imobilizada so governadas
pelas caractersticas da enzima e do suporte usados
(Tischer & Kasche, 1999), bem como pela estratgia de
imobilizao empregada (Crdias et al., 1999). Essas
interaes so responsveis pelas propriedades qumicas,
bioqumicas, mecnicas e cinticas do sistema imobilizado
suporte-enzima.
O processo proposto a seguir trata de ligar covalentemente
uma enzima a um suporte vtreo (slica), aps silanizao e
ativao com glutaraldedo. O processo de silanizao
refere-se formao de uma ponte orgnica no suporte por
meio da reao com aminopropiltrietoxilano (ATPS),
onde o radical etil do ATPS reage com o grupo silanol do
suporte, gerando uma terminao amina, que ser ativada
com o glutaraldeido, formando grupo aldedos necessrios
para permitir a ligao enzima-suporte (Fig. 1).

Fig. 1. Esquema da imobilizao de enzimas em slica, utilizando-se APTS.

Imobilizao de Tanase em Suportes Vtreos Utilizando aminopropiltrietoxilano (ATPS)

Seqncia do processo de imobilizao

Suporte utilizado

Foto: Gustavo Adolfo Saavedra Pinto

Slica macroporosa com granulometria de 150 a 300 m,

com porosidade igual a 0,57 e dimetro mdio de poro de
270 . A Fig. 2 mostra o suporte utilizado neste trabalho.

7,0 por uma hora a 23 C. Utiliza-se a razo de 3 mL de

soluo por grama de suporte. Aps a ativao, o suporte
ser exaustivamente lavado com gua ultra-pura. Aps a
lavagem, deve-se iniciar imediatamente a etapa de imobilizao, adicionado ao suporte uma soluo de tanase em
tampo acetato 20 mM, pH 5,0 na razo de 20 mL de
soluo por grama de suporte. A imobilizao ser realizada
a 20 C por cinco horas, sob agitao moderada.

Agradecimentos
Ao Prof. Henrique Celso Trevisan do Instituto de Qumica
da UNESP pela doao das amostras de silica.

Referncias

Fig. 2. Fotografia do suporte (slica macroporosa) utilizado

neste trabalho para imobilizao da tanase.

Etapa I Limpeza
Inicialmente, o suporte deve ser colocado em mufla a
370 C por trs horas e, em seguida, protonado com
soluo de cido ntrico 10%v/v durante 30 minutos
temperatura ambiente na razo de 30 mL por grama de
suporte.

Etapa II Lavagem e secagem

Aps a etapa de limpeza, o suporte deve ser, primeiramente, lavado exaustivamente com gua ultra-pura. Em
seguida, lava-se, tambm, com solues de aquosas com
concentraes crescentes de acetona (25, 50, 75% e
100%v/v), na razo de 10 mL de soluo por grama de
suporte. Ao final da ltima etapa de lavagem, o suporte
dever ser colocado a 40 C por uma hora para secagem.

Etapa III Silanizao

A silanizao do suporte ser feita com soluo de ATPS
0,5%v/v, pH 3,3 75 C por trs horas, na razo de 3 mL
de soluo por grama de suporte.

Etapa IV Lavagem e secagem

Aps a silanizao, repete-se a etapa de lavagem e
secagem descrita anteriormente (etapa II).

Etapa V Ativao e Imobilizao

O suporte silanizado ser ativado com soluo de
glutaraldedo a 2,5%v/v em tampo fosfato 100 mM, pH

CARDIAS, H.C.T., GRININGER, C.C., TREVISAN, H.C.,

GUISAN, J.M; GIORDANO, R.L.C. Influence of activation
on the multipoint immobilization of penicillin g acylase on
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Comunicado
Tcnico, 109

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Comit de
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Presidente: Valderi Vieira da Silva

Secretrio-Executivo: Marco Aurlio da Rocha Melo
Membros: Henriette Monteiro Cordeiro de Azeredo,
Marlos Alves Bezerra, Levi de Moura Barros, Jos
Ednilson de Oliveira Cabral, Oscarina Maria Silva
Andrade e Francisco Nelsieudes Sombra Oliveira.

Expediente

Supervisor editorial: Marco Aurlio da Rocha Melo

Reviso de texto: Maria Emlia de Possdio Marques
Editorao eletrnica: Arilo Nobre de Oliveira
Normalizao bibliogrfica: Ana Ftima Costa Pinto.