Grupo: 4QM2

Navarro Gabriel

Seccin 4

Perez

Gamboa Contreras Alain

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS
Laboratorio de Bioqumica
SEPARACIN DE FOSFOLPIDOS POR CROMATOGRAFA
EN CAPA FINA

INTRODUCCIN
Lpidos y su clasificacin
Los lpidos son un grupo muy heterogneo de
biomolculas, que en general presentan
caractersticas como:
*Hidrofobia
polares).

(insolubilidad

en

Son
lpidos
complejos,
saponificables,
formadores principales de la membrana
citoplsmica.
Estn
compuestos
estructuralmente por CIDO FOSFATDICO y
un grupo unido a l (mediante el grupo
fosfato), ste grupo puede ser un alcohol, un
aminoalcohol, etc

solventes

*Lipofilia (solubilidad en solventes apolares).

Al ser un grupo tan extenso, se pueden dividir
en diversas clasificaciones, siendo una de
ellas:
COMPLEJOS: Lpidos que contien cidos grasos
y son saponificables (forman jabones). En este
grupo encontramos: Acilglicridos, cridos,
glcidos, fosfolpidos y esfingolpidos.
SIMPLES: Lpidos que son derivados del
isopreno, no contienen cidos grasos y no son
saponificables. En este grupo encontramos:
Terpenos, esteroides y prostaglandinas.
Funciones
Estas molculas tienen diversas funciones en
los organismos, tales como:
*Reserva energtica
*Estructural (en la membrana citoplsmica)
*Reguladora / de sealizacin qumica (en el
caso de las hormonas, esteroides, vitaminas)
Fosfolpidos

Figura 1 Estructura del cido

fosfatdico

Los fosfolpidos tienen un carcter

ANFIPTICO, ya que una porcin de la
molcula es soluble en solventes no polares, y
otra parte es soluble en solventes polares.
OBJETIVOS
*Separar los fosfolpidos de la yema de
huevo
aplicando
la
tcnica
de
cromatografa en capa fina.

*Identificar diversos fosfolpidos por su

naturaleza qumica, mediante la utilizacin
de reactivos reveladores.
RESULTADOS

Grupo: 4QM2
Navarro Gabriel

Seccin 4

Perez

MOLIBDATO
Gamboa Contreras Alain

Yema de huevo de
Yema de huevo de gallina
codorniz
Manch RECORRID FREN
RECORRID FREN
a
O
TE
RF
O
TE
RF
0.06
1
0.4
6
67
0.3
6
0.05
0.13
2
0.9
6
0.15
0.8
6
3
0.17
3
2.1
6
0.35
1.05
6
5
4

2.7

0.45

2.4

3.6

0.6

3.55

5.1

0.85

0.4
0.59
2
0.83
3

YODO
Yema de huevo de
Yema de huevo de gallina
codorniz
Manch RECORRID FREN
RECORRID FREN
a
O
TE
RF
O
TE
RF
0.24
0.14
1
1.45
6
17
0.85
5.9
4
0.36
0.23
2
2.2
6
67
1.4
5.9
7
0.27
3
2.4
6
0.4
1.6
5.9
1
0.48
0.41
4
2.9
6
33
2.45
5.9
5
0.63
5
3.9
6
0.65
3.75
5.9
6
0.96
0.93
6
5.8
6
67
5.5
5.9
2

Figuras2 y 3: Revelado de los

cromatogramas. Desde la izquierda:
molibdato, yodo

Tablas 1, 2,3 y 4 Clculo de Rf,

revelado con distintos reactivos:
molibdato, yodo, bismuto y
ninhidrina.

3,4

. Figuras 4 y 5: Revelado de los

cromatogramas. Desde la izquiera bismuto
y ninhidrina

BISMUTO

DISCUSIN

Yema de huevo de
Yema de huevo de gallina
codorniz
Manch RECORRID FREN
RECORRID FREN
a
O
TE
RF
O
TE
RF
0.13
0.13
1
0.8
5.8
79
0.8
5.9
6

La yema de huevo es una emulsin de

grasas en agua, que est constituida
principalmente por lpidos, pero contiene
tambin una porcin de protenas.

1.45

5.8

2.55

5.8

0.25
0.43
97

1.3

5.9

2.35

5.9

0.22
0.39
8

NINHIDRINA
Manch
Yema de huevo de
a
Yema de huevo de gallina
codorniz
RECORRID FREN
RECORRID FREN
1
O
TE
RF
O
TE
RF
0.33
0.30
2
2
5.9
9
1.78
5.9
2
0.66
0.61
3
3.9
5.9
1
3.65
5.9
9

Para extraer los fosfolpidos de la yema de

huevo se utiliz una solucin de cloroformo
metanol. El cloroformo es un solvente no
polar y el metanol es un solvente
ligeramente polar. Al aadir esta solucin a
la yema y agitar, se observ que se

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Navarro Gabriel

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Gamboa Contreras Alain

formaron grumos. El metanol, al reducir la
constante dielctrica del medio provoca la
aglomeracin y precipitacin de todas las
protenas, adems, debido a su polaridad se
disuelve en el agua que forma parte de la
yema. Los fosfolpidos al ser molculas no
polares, se disuelven en el cloroformo. Por lo
tanto, en la fase clorofrmica se van a
depositar los fosfolpidos y algunas otras
molculas
no
polares
(como
algunos
aminocidos) y en la fase acuosa se va a
depositar el metanol y las molculas polares.
Luego de aadir la solucin de cloroformo
metanol, se filtr el precipitado para
recolectar el extracto fosfolipdico. En el
filtrado se obtuvo una fase clorofrmica
(inferior) y una fase acuosa (superior). Para
purificar este extracto se realiz un lavado
con KCl, que al ser una sal inica, permite que
los aminocidos no polares (y algunas
molculas y iones) se incorporen a la fase
acuosa.
El perfil cromatogrfico de fosfolpidos de la
yema
de
huevo
es:
*LISOFOSFATIDILCOLINA
*ESFINGOMIELINA
*FOSFATIDILSERINA
*FOSFATIDILCOLINA
*FOSFATIDILETANOLAMINA
*COLESTEROL
*LPIDOS
NEUTROS
*TRIACILGLICRIDOS
Se realiz el cromatograma para 2 muestras:
huevo de gallina de pelea y huevo de
codorniz, y se observa que presentan los
mismos fosfolpidos, pero en diferente
cantidad. Para revelar el cromatograma se
utilizaron 4 reactivos: molibdato, ninhidrina,
bismuto y yodo.
*El molibdato revela los fosfolpidos en
general y se obtuvieron 5 manchas que
corresponden a LFC, EM, FS, FC, FEA, y otra
que contiene colesterol, lpidos neutros y
triacilglicridos.
*El bismuto revela fosfolpidos que contienen
colina y se obtuvieron 3 manchas que
corresponden
a
FC,
LFC
y
EM.

*La ninhidrina revela grupos amino libres y se

obtuvieron 2 manchas de color violeta que
corresponden a FS y FEA y otra que contiene
aminocidos. Al existir un grupo amino, la
ninhidrina reacciona con l y forma un
complejo de color violeta (azul de Ruhemann).
*El yodo revela dobles enlaces y se obtuvieron
5 manchas que corresponden a LFC, EM, FS,
FC, FEA y otra que contiene colesterol, lpidos
neutros
y
triacilglicridos.
Todos
los
fosfolpidos estn constituidos por 2 cidos
grasos (excepto la LFC) y uno de ellos puede
ser insaturado. Al presentar un doble enlace
el yodo se adiciona en l y revela un color
caf.
CONCLUSIONES
*Los fosfolpidos son molculas no polares y
por tanto deben disolverse en sustancias no
polares.
*El perfil cromatogrfico de fosfolpidos
consiste en 5 fosfolpidos, colesterol, lpidos
neutros y algunos triglicridos.
*Cuando se obtiene un extracto debe
purificarse y procurar que no exista perdida
de muestra.
*La tcnica de cromatografa en capa fina nos
permite caracterizar los fosfolpidos por su Rf.
*Utilizando diversos reactivos reveladores
podemos conocer la naturaleza qumica o
algn grupo especfico que contiene un
fosfolpido.

PREGUNTA EXTRA
Cmo ser el perfil de fosfolpidos de los
extractos de pata, guajolota, gorriona,

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Gamboa Contreras Alain

tiranosauria rex, y cerebro de ratn, cuando
se comparan con el de gallina?
Evolutivamente las aves provienen de los
dinosaurios,
por
lo
tanto
el
perfil
cromatogrfico de todas las aves y del
dinosaurio ser igual al de la gallina, que
contiene lisofosfatidilcolina, esfingomielina,
fosfatidilserina,
fosfatidilcolina,
fosfatidiletanolamina, algunos lpidos neutros,
colesterol y triacilglicridos, en diferente
cantidad segn sea el ave.
En el caso del cerebro de ratn
mamferos el perfil cromatogrfico
esfingomielina, esfingiosina y
adems de contener algunos otros
en muy pequea cantidad.

y de otros
consiste en
ceramidas,
fosfolpidos

REFERENCIAS
*Nelson, David L Lehninger, PRINCIPIOS DE
BIOQUIMICA , 6 ed,
editorial Omega,
Espaa.

*Campos Lucas, Maria Isabel. (2010). UN

HUEVO EN MI LABORATORIO. pp. 154 ISBN
9788490096093
*Koolman Jan, Bioqumica, texto y atlas,
editorial Panamericana, 2005