Introduccin

En trminos generales, la tincin de Gram permite, de acuerdo a la estructura y grosor

de la pared bacteriana, agrupar las bacterias en Gram Positivas, las cuales poseen una
capa gruesa de peptidoglicn y carecen de membrana externa; y Gram Negativas, que
tienen una capa ms delgada de peptidoglicn y poseen una membrana externa; adems,
mediante sta tincin, se correlaciona otras propiedades como susceptibilidad
antibitica, sensibilidad o resistencia a sales biliares, tensin superficial, entre otros. La
diferencia entre ambos tipos de clulas radica en la resistencia a la decoloracin por las
capas de peptidoglucano que poseen (1).
En cuanto a la identificacin bioqumica, la catalasa se encuentra presente en la mayora
de bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromos, con excepcin
de especies como Sterptococcus, que carecen de catalasa y la mayora de las bacterias
anaerobias poseen peroxidasa en lugar de catalasa como por ejemplo las especies de
Clostridiun (2). A continuacin se presenta la reaccin que se lleva a cabo en las
catalasas:
2H2O2

2H2O + O2(g)

Ec 1 (2)

La prueba de la catalasa da positiva si se observa la aparicin de burbujas luego de

agregar agua oxigenada sobre las bacterias (2).
La prueba de oxidasa se basa en la produccin bacteriana de una enzima oxidasa
intracelular. La reaccin se debe a un sistema de citocromo oxidasa que activa la
oxidacin del citocromo reducido por el oxgeno molecular y que tambin acta como
un aceptor de electrones en la fase terminal del sistema de transferencia de electrones
(2). Un resultado positivo de oxidasa consiste en una serie de reacciones, con un
componente autooxidable del sistema citocromo como catalizador final, los sustratos
artificiales pueden ser sustituidos por los aceptores de electrones en cualquier parte
dentro de la cadena de transporte de electrones donde estos pueden reducir el sistema ccitocromo oxidasa. Esta prueba se considera positiva si la tira de oxidasa se torna
morada al entrar en contacto con la bacteria en estudio (2).
Para determinar el pH cuando el microorganismo fermenta la glucosa, se utiliza la
prueba de rojo de metilo, la concentracin de iones hidrgeno depende de la relacin
entre el dixido de carbono y el hidrgeno molecular, los diferentes patrones de
fermentacin se deben a la variacin de las enzimas relacionadas con el metabolismo
del cido pirvico en cada organismo, la validez de la prueba radica en el tiempo de
incubacin que permita que se d una diferencia en el metabolismo de la glucosa, es
por ello que se recomienda la incubacin de por lo menos 2 das a 35-37C. La prueba
dar positiva si luego de la incubacin, al agregar el rojo de metilo, se desarrolla un
color rojo estable en la superficie del medio; si el color es amarillo, indica que no hubo
cambio de pH (2).

La prueba de Voges- Proskauer determina la presencia de acetona, la cual proviene de

la degradacin de glucosa en las bacterias como producto de una de las vas
metablicas. La acetona se forma por la descarboxilacin de dos molculas de cido
pirvico, siendo esta el estado intermedio para la formacin del 2,3-butanodiol. El
principal producto final en la degradacin del piruvato en los grupos Serratia,
Klebsiella-Enterobacter y especies de Bacillus es el 2,3-butanodiol; La prueba dar
positiva si se desarrolla un color rojo estable en la superficie del medio, en la figura 1 se
muestra el resultado positivo y negativo para esta prueba (2). La reaccin involucrada se
muestra a continuacin:
2 Piruvato

Acetona + 2 CO2

Ec 2 (2)

La prueba de urea determina la capacidad del microorganismo para hidrolizar la urea en

dos molculas de amonaco por la accin de la enzima ureasa, la cual se considera como
constitutiva debido a que las bacterias la sintetizan sin tomar en cuenta la presencia o
usencia de la urea, que es el sustrato de la enzima. La prueba dar positiva si luego de la
incubacin de la bacteria en un caldo urea se da un cambio de color a fucsia (2). A
continuacin se presenta la reaccin involucrada:

Figura 1. Hidrlisis de la urea para formar dos molculas de amonaco (2).

La prueba en azcar triple y hierro (TSI) determina la fermentacin de carbohidratos y
la produccin de H2S. Como producto del metabolismo de glucosa se genera CO 2 y H2,
el cual se refleja en la aparicin de burbujas en la parte inferior del medio, generando
grietas en su interior. Adems la presencia de sulfhdrico se refleja por el
ennegrecimiento del medio en la lnea de inoculacin o sobre la capa de inoculacin. La
produccin de cido a partir de sacarosa se refleja en el cambio de color del medio, que
puede pasar de rojo a amarillo (cido) (2).
En cuanto a la prueba del citraro, se busca si un microorganismo es capaz de utilizar el
citrato como nica fuente de carbono para el metabolismo y el crecimiento con
alcalinidad resultante. Los productos del metabolismo del citrato dependen del pH del
medio; a un pH alto, se produce ms acetato y formato y disminuye la produccin, de
lactato y CO2; mientras que a un pH bajo, los principales productos del metabolismo del
citrato son acelmetilcarbonil y lactato. Se considera positiva sta prueba si hay un color
azul intenso en la parte superior del recipiente de la prueba; mientras es negativo si no
hay cambio de color (verde) (2).

Conclusiones
La bacteria incgnita con la que se trabaj fue_____________, que
comnmente se halla en _____________________.
Hay gran importancia en la identificacin microbiana dentro del
campo del ejercicio profesional farmacutico, cosmtica y de
alimentos donde las normas de control de calidad exigen la ausencia
de ciertos microorganismos.
Las pruebas de identificacin de bacterias se fundamentan en
demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar azcares, la
presencia de enzimas, la degradacin de compuestos, la produccin
de compuestos coloreados, etc.; de esta manera,
bacterias
fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies
diferentes con base a pruebas bioqumicas.
Bibliografa

(1)Cavallini, E.; Gamboa, M.; Hernndez, F., Garca, J. Bacteriologa

General: Principios Y Prcticas de Laboratorio; Editorial
Universidad de Costa Rica: San Jos, Costa Rica, 2005. Pg. 63,
64, 450.
Mac Faddin, J. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de
importancia clnica. 3ra Edicion. Editorial Mdica Panamericana S.A.
Montevideo, Uruguay, 2003. Pg. 73-92, 98, 206-216, 301-305, 344-353, 397420.
(3) Sacsaquispe, R.; Velsquez, J. Manual de procedimientos para la prueba de
sensibilidad antimicrobiana por el mtodo de disco difusin. 1ra Edicin.
Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud, Lima, Per, 2002. Pg. 20, 21.
(4) Garca, P. et al. Microbiologa Clnica Prctica, 2da Edicin. Servicio de
Publicaciones de la Universidad de Cdiz, Andaluca, Espaa, 2001. Pg.. 134,
141.
(2)