6.

TECNICAS DE PREPARACION DE MUESTRAS

La preparacin de muestras es el paso entre el muestreo y el anlisis. Este es el
punto en el cual los contaminantes son transferidos de la matriz ambiental a una
forma adecuada para el anlisis. La extraccin es a menudo el primer paso en la
preparacin de la muestra. Los analitos deben ser separados de la muestra,
porque muchas muestras ambientales no pueden ser directamente introducidas
dentro de un instrumento. La extraccion esta hecha para ambos contaminantes
organicos e inorgnicos. Algunos de los mtodos de extraccion y los tipos de
muestra para los cuales ellos son apropiados se muestran en la figura 6.1. por
ejemplo, las trazas de pesticidas pueden ser extraidas para un volumen grande de
agua usando una cantidad relativamente pequea de un solvente organico como
el cloruro de metileno. Si los contaminantes estn fuertemente ligados a la matriz,
la extraccion quizs se dificulte. Algunos metales estn fuertemente ligados a el
suelo y requieren solventes agresivos para recuperar estos cuantitativamente, los
compuestos organicos tambin pueden ser fuertemente atacados y los solventes
en este caso no pueden ser agresivos o los compuestos organicos pueden ser
destruidos. Similarmente, entre mas soluble esta un analito organico en el agua,
mucho mas difcil es su extraccion dentro de un solvente organico.
Idealmente, un mtodo de extraccion debe ser rpido, simple, econmico y debe
proporcionar un rendimiento alto de extraccion con buena precisin. La cantidad
de solvente requerido para la extraccion debe ser mantenido a lo minimo para
producir el extracto mas concentrado, y por que los solventes en si mismo son un
residuo peligroso. Mientras que uno le gustara que la muestra estuviera lista para
el anlisis sin uno de los pasos adicionales, este no siempre es el caso. En
primera instancia, una pequea cantidad de analito puede salirse de un volumen
grande de extracto. El extracto diluido aumenta el limite de deteccin y un paso de
preconcentracion adicional ser necesario para el anlisis de trazas.
Otro problema comn es encontrado con muestras ambientales. La matriz en si
misma es muy compleja y puede contener componentes que interfieren durante el
anlisis. Esto pasa frecuentemente en la determinacin de analitos organicos
usando tcnicas cromatograficas. En estos casos, junto con el paso de
concentracin, un paso de limpieza de la muestra puede ser necesario.
Finalmente, una de las tareas mas difciles en la preparacin de muestras para la
determinacin de concentraciones bajas de analitos es dejar fuera la preparacin
de la muestra sin contaminar la muestra. Los contaminantes pueden estar al
acecho sobre superficies que parecen limpias o pueden estar a la deriva dentro de
muestras con polvo en el aire. algunos principios que bajaran la oportunidad de
contaminacin si estos son seguidos son:

Minimizar la manipulacin de las muestras

Usar pequeas piezas de aparatos como sea posible
Mantener el rea de trabajo de preparacin de muestra lo mas limpio
posible
Usar la minima cantidad de reactivos

6.1 EXTRACCION DE ANALITOS ORGANICOS DE MUESTRAS LIQUIDAS

Para la extraccion de analitos organicos de liquidos, la extraccion liquido-liquido y
la extraccion en fase solida pueden ser empleadas.
6.1.1 EXTRACCION LIQUIDO-LIQUIDO
La extraccion liquido-liquido es un mtodo popular para la extraccion de
contaminantes organicos de matrices liquidas, especialmente agua. Las tcnicas
de extraccion son usualmente empleadas para compuestos que no pueden ser
analizados eficientemente por purga y trampa, por que el analito no esta
suficientemente voltil para ser purgado en un tiempo razonable. Las muestras
acuosas que contienen el contaminante son agitadas con un solvente organico
inmiscible. Los componentes de la muestra se distribuyen en si mismos entre la
fase acuosa y la fase del solvente. Cuando las dos soluciones alcanzan el
equilibrio, el radio de la concentracin de el soluto en las dos fases es constante.
1. D=Cs/Cw
Donde D es coeficiente de distribucin o particin y Cs Y Cw son la concentracin
en el solvente y en la fase acuosa, respectivamente. El coeficiente de particin es
independiente del volumen del radio de los dos solventes. Si un volumen de
solvente grande es usado, una cantidad grande del analito se particionara dentro
de la fase organica puesto que D permanece constante. La fraccin de el analito
extraida por el solvente esta dada por E.
E=(Cs*Vs)/(Cs*Vs+Cw*Vw)
Donde Vs y Vw son el volumen de el solvente y agua respectivamente. Al dividir el
numerador y el denominador por Cs*Vs,
E=

1
Cw Vw
1+
Cs Vs

Ahora sustituyendo en la ecuacin 1

E=

1
Vr
1+
D

Donde Vr es el volumen del radio, el radio del volumen de agua o este del
solvente.
Para anlisis de trazas, esto es importante ya que la mxima cantidad de analito
es extraida de la muestra. De las ecuaciones anteriores, esto es obvio ya que la
fraccin de analito extraida puede estar aumentando por el aumento del volumen
de solvente organico.

6.1.1.1 EXTRACCIONES SUCESIVAS. A menudo, una sola extraccion no

proporciona suficientemente una alta eficiencia de extraccion. Mejores eficiencias
pueden ser obtenidas llevando a cabo varias extracciones sucesivas usando
pequeos volmenes del solvente. Por esta razn, las extracciones analticas
liquido-liquido son a menudo llevadas a cabo repetidas extracciones de la muestra
acuosa, todo el tiempo usando el mismo volumen de solvente. Despus de la
primera extraccion la cantidad de analito sin extraer es 1- E, o U.
El porcentaje extraido permanece constante en cada paso si el mismo volumen de
solvente es usado en cada tiempo. La cantidad extraida en una serie de n pasos
es mostrada en la figura 6.2 si C0w fue la concentracin inicial de analito de la fase
acuosa, entonces la concentracin despus de una extraccion es C 1w
1
0
C w=C w [ ( Vw ) / ( DVs+Vw ) ]

Y despus de n extracciones de este tipo, la concentracin de analito en la fase

estacionaria es
n

C w=C w [ ( Vw ) / ( DVs +Vw ) ] n

En el siguiente ejemplo, la eficiencia de la extraccion incrementa de 0,83 a 0,92
cuando dos extracciones sucesivas son hechas usando la misma cantidad total de
solvente.
Ejemplo:
En un cierto sistema, el coeficiente de distribucin para el soluto es 5 y el volumen
de muestra es de 100 mL. La muestra puede ser extraida con una porcin de 100
mL de solvente o dos porciones de 50 mL. Como podr ser afectada la eficiencia?

Para una extraccion de 100 mL:

E=

1
=0.83
1+1/ 5 ( 100/ 100 )

Mientras para una extraccion de 50 mL :

E=

1
=0.71
1+1/5 ( 100/50 )

En una segunda extraccion de 50 mL, ya que el volumen del radio es el mismo, se

extraer 0.71 de el restante 0.29 de la muestra dando una eficiencia total de
extraccion de 0.92 comparada con 0.83 para la misma cantidad total de solvente
usado.
Tu puedes hacer los clculos para determinar si el trabajo extra para hacer 4
extracciones de 25 mL cada una es valido para mejorar en la eficiencia de la
extraccion. En un nivel practico, repetidas extracciones con cantidades muy
pequeas de solvente pueden volverse contraproducente, ya que la eficiencia de
la extraccion calculada no es alcanzada en la practica por que la separacin de
dos solventes nunca es perfecta. Esto es raramente beneficioso que hacer mas de
tres extracciones secuenciales, por que el incremento de la cantidad extraida en
cada paso sucesivo se vuelve menos y menos, mientras que las perdidas debidas
a tales efectos como la separacin incompleta de la fase y la adsorcin sobre la
superficie que permanece constante.

6.1.1.2 INSTRUMENTACION PARA LA EXTRACCION LIQUIDO-LIQUIDO. La

extraccion liquido- liquido es usualmente llevada a cabo en un embudo de
separacin(FIGURA 6.3). la muestra y una cantidad predeterminada de un
solvente adecuado son agitadas juntas para asegurar un contacto intimo entre los
dos liquidos. Las dos fases se dejan sedimentar y la capa del fondo es drenada
afuera por una abertura de la llave de cierre. Los anteriores pasos son repetidos
con solvente nuevo agregando para cada extraccion sucesiva.

6.1.1.3 EXTRACCION LIQUIDO-LIQUIDO CONTINUA. La extraccion liquidoliquido continua es una alternativa de multiples pasos procesando por lotes la
(LLE). gotitas de el solvente de extraccion son continuamente pasadas atravez de
la fase acuosa. Los aparatos usados en esta tcnica se muestran en la figura 6.4.
el solvente de extraccion es vaporizado en el matraz. Los vapores se condensan y
las gotas se dejan caer en el deposito de la muestra, entrando en contacto con la
muestra. Si la densidad del solvente es menor que la de la fase acuosa, el
solvente cae a travs del embudo en la parte inferior de la muestra, se eleva
atraves de la muestra y finalmente el extracto se desborda sobre el deposito de
extraccion del solvente. Si el solvente es mas denso que el agua, este es
permitido para gotear directamente sobre la fase acuosa, hundindose hasta abajo
y finalmente retornando a el deposito del solvente a travs del tubo adjunto a el
fondo de la cmara de extraccion. En cualquier caso, el solvente de extraccion es
reciclado y este volumen permanece constante, suministrando las eficiencia de las
funciones del condensador. Si el volumen de la cmara de extraccion es muy
grande, entonces las perlas de vidrio son usadas para llenar el espacio de exceso
y tambin para proveer un contacto cerrado entre las dos fases.

Un defecto de esta tcnica es que los analitos voltiles pueden ser reciclados de
nuevo a la cmara de extraccion a lo largo con el solvente, en cada caso la
eficiencia decrece. Un analito voltil tambin puede perderse a travs del
condensador, por estas razones, el uso de la LLE continua es usualmente
restringida para analitos semivolatiles y no voltiles. La LLE continua puede ser
operada sin vigilancia y esto es una labor menos intensiva que las extracciones
sucesivas. Mientras que es difcil para predecir la eficiencia de extraccion para un
extractor continuo, esto puede ser determinado experimentalmente por extraccion
de una muestra de concentracin conocida. La eficiencia de la extraccion
incrementa con el tiempo, pero la relacin entre tiempo y eficiencia es tambin
mejor deteminarla por experimentacin.