Trabajo practico numero: 3

Membranas
Cura, Reinero, Petitti
Introduccin
La membrana plasmtica de las clulas vegetales y animales tienen permeabilidad selectiva
por lo cual es paso de sustancias est relativamente limitado, esto ocasiona que cuando estas
no puedan difundir se realice la osmosis, produciendo la salida o entrada de agua a la clula,
lo cual puede provocar que esta altere su forma.

Lisis y crenado
Veremos los efectos en la apariencia/volumen bajo microscopio, de los glbulos rojos frente a
distintas soluciones de diferente tonicidad. Adems, se observarn, en tubos, suspensiones
que en caso de ocurrir la hemolisis tomarn un tono traslucido.

a) Observacin en tubo
Materiales:
Solucin de NaCl 0,154M
H2O destilada
Solucin de NaCl 3M
Suspensin de glbulos rojos 1/30 en solucin fisiolgica (NaCl 0,154M)
Tubos de hemlisis
Pipetas Pasteur
Nylon para inversin Procedimiento de trabajo:
1. Colocar 2 ml de las soluciones indicadas en cada tubo y rotularlos.
2. Agregar 2 gotas de suspensin de glbulos rojos a cada tubo.
3. Mezclar suavemente por inversin.
4. Observar y registrar los datos en la tabla 1, columna 2. Indicar si la solucin es turbia
o
traslcida
5. Infiera si hubo hemlisis o no.
Solucin

Turbia/traslucida

H 2 O dest . Traslucida

Hemolisis

Volumen
celular

Si

Disociacin
de
osmolitos
en agua
-

Osmolarida
d

NaCl
0.154M

Turbia

No

Normal

+ C l
N a

0.308 Osm

NaCl 3M

Turbia

No

Menor

+ C l
N a

6 Osm

Tonicidad

Hipotnic
o
Isotnico

Hipertni
co

Podemos observar la lisis celular en la suspensin de glbulos rojos y agua destilada

debido a que el agua destilada al no contener molculas que no difunden en solucin,
esta es hipotnica, por lo tanto, esta entrara al interior del glbulo rojo produciendo la
Hemolisis.
Adems de ser intuido debido a conocer las concentraciones de las sustancias y los
efectos de la tonicidad sobre el volumen de los glbulos rojos, estas suspensiones
podran ser sido llevadas bajo microscopio y podramos observar los cambios en el
volumen.
Podramos tomar como control positivo el agua destilada y como control negativo el
NaCl 3M ya que el primer es hipotnico y el ultimo hipertnico.
Tendra que ser isotnico, podramos utilizar el NaCl 0.154M

Observacin al microscopio
Materiales:
Suspensin de glbulos rojos en NaCl 3M
Suspensin de glbulos rojos en NaCl 0,154M
Portaobjetos
Cubreobjetos
Microscopio
Procedimiento de trabajo:
1) Con una pipeta Pasteur tomar una gota de cada suspensin de glbulos rojos preparada en
el
tem anterior y colocarlas, separadamente, en un mismo portaobjetos.
2) Cubrir con cubreobjetos.
3) Observar al microscopio.
4) Registrar, los tamaos celulares observados, en la tabla 1, columna 4
5) Dibujar, en forma esquemtica clara, las formas de los GRs observadas.

El cambio de volumen es debido a la Osmosis que es un tipo de difusin pasiva en la

cual pasa agua desde el medio menos concentrado al ms concentrado (De solutos no
difusibles) a travs de la membrana para igualarlas.

Podramos identificar las soluciones a travs de la observacin bajo microscopio ya que

la isotnica se veran los Glbulos rojos de forma normal mientras que en la hipertnica
se veran crenados.

Plasmolisis y crenacin

Una clula vegetal cuando es rodeada por un medio hipotnico expande su volumen
celular (mediante el ingreso de agua) volvindose Turgente, esta no se rompe como
en la hemolisis ya que la clula vegetal posee pared celular que le confiere firmeza.
Cuando es rodeada por un medio hipertnico se produce perdida de agua y por
consecuencia el citoplasma se retrae y su membrana se separa de la pared celular,
esto proceso se denomina plasmlisis. Cuando se le rodea por un medio isotnico
esta conserva su apariencia normal.
Agua destilada: Hipotonico. NaCL 3M: Hipertonico
Los hongos al tener pared celular, podran presentar turgencia y no lisis
Los protozoos de vida libre evitan la lisis a travs de vacuolas contrctiles que permiten
mantener contante la concentracin del medio celular

Observacin de suspensiones de glbulos rojos en medios conteniendo

soluciones isosmolares de solutos de tamao molecular e hidrofobicidad
variados
En este ensayo se evaluar la capacidad de un compuesto de atravesar por difusin simple
las bicapas lipdicas segn su tamao y su estructura qumica.
Materiales:
NaCl 0,154 M
Urea 0,30 M
Glicerol 0,30 M
Sacarosa 0,30 M
H2O destilada
Suspensin de glbulos rojos
Pipetas Pasteur
Tubos de Khan

Nylon para inversin Procedimiento:

1) Preparar tubos de hemlisis conteniendo 2 ml de las soluciones de la Tabla 1 y
rotularlos.
2) Agregar 2 gotas de glbulos rojos en el tubo n 1. Homogeneizar suavemente el tubo por
inversin e inmediatamente anotar la hora (tiempo inicial).
3) Observar constantemente.
4) Si observa hemlisis total, anote la hora (tiempo final) y por diferencia entre este y el
tiempo
inicial obtendr el tiempo que tard la suspensin en hemolizarse.
Nota: Se considerar hemlisis total cuando la suspensin se torne completamente
translcida.
5) Continuar con los otros tubos del mismo modo, agregando las 2 gotas de suspensin de
glbulos rojos y anotando los tiempos iniciales (tiempo al cual se agregaron los G.R.) para
cada solucin. Homogeneizar peridicamente, de manera suave, los tubos donde no se haya
completado la hemlisis.
6) Registe los resultados

Solucion

Hemolisis

Osmolaridad

Tonicidad

No

Tiempo de
hemolisis
-

NaCl 0.154M
C.Neg
Urea 0,30M
Glicerol 0,30M
Sacarosa 0,30M
Agua Destilada
C.Pos

0.308

Isotonica

Si
Si
No
Si

3 Min. 30 Seg.
No
-

0.3
0.3
0.3

Hipotonica
Hipotonica
Isotonica
Hipotonica

El NaCl no difunde por la membrana plasmtica al ser un ion, pero su concentracin es

0.154, por lo tanto al disociarse en agua este es isotnico por lo que no se produce
hemolisis.
La Urea al ser una molcula polar pequea sin carga difunde, por lo cual al ingresar al
interior de la celular produce que el exterior sea hipotnico (los elementos que
difunden no aportan a la tonicidad) lo que produce la hemolisis.
El Glicerol es una molcula polar, pero podemos suponer que no es lo suficientemente
pequea para difundir rpidamente, lo cual podra justificar el tiempo que tardo en
producir la hemolisis.
La Sacarosa es una molcula polar grande por lo cual no difunde a travs de la
membrana, sin embargo esta es isotnica, entonces no se presenta hemolisis.
El agua destilada difunde al ser una molcula polar pequea la hemolisis es producida
por la misma razn que la Urea.

NaCl < Sacarosa < Glicerol < Urea < Agua destilada
El Tubo 1 (NaCl 0.154M) es el control negativo y el 5 (Agua destilada) es el positivo

Observacin de suspensiones de glbulos rojos en soluciones conteniendo dos

solutos, difusibles o no, de diferentes osmolaridades.
En este ensayo se analizarn los flujos de agua y solutos mediante la observacin en tubo de
la
hemlisis o no de glbulos rojos colocados en distintas soluciones con ms de un soluto.
Materiales:
NaCl 0,154 M

NaCl 0,308 M
NaCl 0,6 M
Glicerol 0,3 M
Glicerol 0,6 M
H2O destilada
Suspensin de glbulos rojos
Tubos de Khan
Pipetas Pasteur
Nylon para inversin

Procedimiento:
1) Preparar las soluciones a testear (Tabla 2) a partir de las soluciones madres disponibles
(ver
materiales).
2) Agregar 2 ml de las soluciones de la tabla 2 a cada tubo y rotularlos.
3) Agregar dos gotas de la suspensin de glbulos rojos en el primer tubo. Inmediatamente
despus anotar la hora (tiempo inicial) y homogeneizar suavemente por inversin.
4) Cuando observe hemlisis total en el tubo (si la hubiere) anote la hora (tiempo final) y por
diferencia con el tiempo inicial obtenga el tiempo de hemlisis.
5) Continuar con los otros tubos del mismo modo, agregando las 2 gotas de suspensin a
cada
tubo y anotando los tiempos iniciales y finales para cada uno.
6) Invertir con cuidado y peridicamente los tubos donde no se haya completado la hemlisis
para homogeneizar la suspensin de GRs.
7) Registrar los resultados
Hemolisis

1ml NaCl
0.154M +
1ml Glic.
0.3M
1ml NaCl
0.154M +
1ml Glic.
0.6M
2ml Glicerol
0.6M
1ml NaCl
0.3M
+ 1ml Glic
0.6M
1ml NaCl
0.6M
1 ml
Glicerol
0.6M
2ml NaCl
0.6M

Tiempo de
hemolisis

Osmolaridad

Tonicidad

Nacl 0.154M
NaCL 0.077M
Glicerol 0.15M

No
Si

0.308 Osm
0.304 Osm

Isotonica
Hipotonica

NaCl 0.077M
Glicerol 0.3M

Si

1:30

0.454 Osm

Hipotonica

Glicerol 0.3M

Si

1:40

0.6 Osm

Hipotonica

NaCl 0.154M
Glicerol 0.3M

No

0.608 Osm

Isotonica

NaCl 0.3M
Glicerol 0.3M

No

0.9 Osm

Hipertonica

Propuesta:
NaCl 0.6M
Agua destilada

No

0.6 Osm

Hipertonica

Si

Hipotonica

Deducir la tonicidad de una solucin incgnita con respecto al interior celular a partir del
comportamiento de glbulos rojos en dicho medio.
Procedimiento:
Disee un protocolo para evaluar la tonicidad de las soluciones incgnitas (ver materiales) a
partir de
los materiales que se listan a continuacin:
Materiales:
Soluciones incgnitas 1, 2 y 3
NaCl 0,154M
H2O destilada
Suspensin de glbulos rojos
Pipetas Pasteur
Tubos de Khan
Nylon para inversin
Microscopio

Para deducir la tonicidad de las soluciones incgnitas realizaremos el mismo mtodo que para
presenciar la hemolisis.
Colocaremos 2 gotas de suspensin de glbulos rojos a 2ml de las soluciones incgnitas,
mezclaremos por inversin y veremos que las soluciones traslucidas son hipotnicas, en caso
de que tengamos soluciones turbias, estas sern observadas bajo microscopio para ver si los
glbulos rojos se encuentran en estado normal (isotnico) o crenados (hipertnico).