UNIVERSIDAD JUREZ AUTNOMA DE TABASCO

DIVISIN ACADMICA DE CIENCIAS BIOLGICAS

Prueba de evasin o migracin de lombrices

Report
e
INTEGRANTES
:

PROFESOR
VILLAHERMOSA, TABASCO, 2 DE DICIEMBRE DEL 2015

CONTENIDO

RESUMEN .........................................................................................................
3
I. INTRODUCCION ...........................................................................................3
II. MATERIALES Y METODOS..........................................................................4
III. RESULTADOS. .........................................................................................10
IV. DISCUSION12
V. BIBLIOGRAFIAS13
VI. ANEXOS14

RESUMEN

Los bioensayos con lombrices son ampliamente reconocidos como prueba para
evaluar la toxicidad de suelos contaminados. El gnero ms utilizado ha
sido Eisenia en sus especies E. ftida y E. andrei. En el presente trabajo se utiliz
la especie E. fetida para la evaluacin de la toxicidad en un suelo contaminado con
pilas marcas tectron doble A con el fin de conocerla evasin de las lombrices en un
medio contaminado con pilas con una duracin de 96 horas, sin alimento y en
completo aislamiento.
I. INTRODUCCION
Las lombrices de tierra son un grupo fundamental de la fauna del suelo, ya que
constituyen gran parte de la biomasa animal edfica en varios ecosistemas, tanto
en zonas templadas como tropicales. Asimismo, desempean un papel ecolgico
primordial por su influencia en la descomposicin de la materia orgnica, el
desarrollo de la estructura del suelo y el ciclo de los nutrientes.
La lombriz ms utilizada para diversos fines ha sido el gnero Eisenia en sus
especies ftida y andrei, las cuales pertenecen a la familia Lumbricidae. Estas
especies de lombriz son exgenas en Mxico, pero de amplia distribucin, fcil
manejo y cultivo (Fragoso, 2002). Su principal caracterstica morfolgica es la
presencia de segmentos externos e internos en su cuerpo, son hermafroditas y
cuando son adultas se observa una protuberancia epidrmica denominada clitelo,
en el que se forman los capullos en los cuales son depositados los huevos
(Santamara, 1996). Vive en ambientes hmedos y se nutre de restos orgnicos
vegetales y animales en descomposicin.
En particular, la lombriz roja californiana o Eisenia ftida se utiliza con gran
frecuencia como organismo prueba, puesto que presenta una longevidad de
aproximadamente 16 aos, es muy prolfica y muy voraz, ingiriendo diariamente
cada individuo una cantidad de materia orgnica equivalente a su propio peso
3

(alrededor de 1 gramo en individuos adultos). Se desarrolla bien en pH de 5 a 7 y

a temperaturas de 20 a 28 C (Kaplan et al., 1980).
En los ltimos aos el estudio de las lombrices de tierra se ha incrementado
debido al reconocimiento de su papel en la gnesis y fertilidad del suelo y hay
cada vez mayor inters en el suelo como fuente de diversidad. Durante el uso de
organismos para evaluacin de calidad de suelo, se ha reportado que las
lombrices suelen perder peso durante el proceso de exposicin al suelo artificial o
de control,
La contaminacin del suelo con compuestos orgnicos, metales pesados,
plaguicidas y lluvia cida puede afectar a las poblaciones de lombrices. Estos
contaminantes se acumulan en sus tejidos y pueden constituir un problema para el
gran nmero de animales que se alimentan de ellas, debido a su potencial
biomagnificacin

II. MATERIALES Y METODOS

Este ensayo es una prueba aguda (se desarroll en 48 h) que se puede aplicar
como una alternativa a la prueba de mortalidad. Se basa en la evaluacin de
efectos subletales caracterizados por el comportamiento de evasin de las
lombrices, para la cual se mide el nmero de lombrices que se desplazan desde
un suelo contaminado y que, por tanto, evaden la exposicin. Para realizarlo se
utilizaron los mtodos propuestos en el libro Mtodos ecotoxicolgicos para la
evaluacin de suelos contaminados con hidrocarburos que nos proporciona el
INNEC.
Para el siguiente bioensayo se necesit:

Para el Secado.
1. El secado se realiza con el propsito de facilitar el manejo de la muestra,
mejorar la homogeneizacin y disminuir los cambios qumicos indeseables.
4

2. Las muestras de suelo se secarn al ambiente.

3. El secado debe realizarse extendiendo la muestra de suelo sobre una
superficie que no contamine. Puede secarse sobre charolas de plstico, vidrio,
aluminio, fibra de vidrio o sobre una superficie de polietileno o papel.
4. La muestra debe extenderse logrando una profundidad inferior de 2.5 cm,
colocarse a la sombra a una temperatura no mayor a 35C y una humedad
relativa entre 30 y 70%.
Para la Molienda.
1. Para realizar la molienda, deben retirarse con anticipacin de la muestra, las
rocas y el material orgnico visible.
2. La molienda se realiza con un mazo de madera.
Para el Tamizado.
1. El suelo molido se hace pasar por un tamiz con aberturas de dos mm de
dimetro (malla 10) de acero inoxidable. Este grado de fineza es conveniente
para la mayora de los anlisis requeridos con el propsito de diagnosticar la
fertilidad de un suelo.
2. Una vez tamizado el material se separa 1.5 kg de suelo, cantidad suficiente
para realizar las determinaciones qumicas y fsicas que permitirn caracterizar el
suelo desde el punto de vista de su fertilidad.

Anlisis de pH basado en la NOM-021-RECNAT-2000: Que establece las

especificaciones de fertilidad, salinidad y clasificacin de suelos. Estudios,
muestreo y anlisis.
Mtodo electromtrico para la determinacin del pH en muestras de suelo en una
solucin de agua pura. La evaluacin electromtrica del pH se basa en la
determinacin de la actividad del ion H mediante el uso de un electrodo cuya
membrana es sensitiva al H.
5

Reactivos
Los reactivos utilizados en esta determinacin deben ser grado analtico y el
agua utilizada en la preparacin de las soluciones debe ser destilada o des
ionizada.
1. Agua destilada o des ionizada.
2. Soluciones reguladoras de referencia, pH 4.00, 7.00 y 10.00, las cuales se
adquieren preparadas o concentradas para diluirse de acuerdo a la instruccin.
Estas soluciones deben estar a temperatura ambiente al momento de calibrar el
medidor de pH.
Material y equipo
1. Potencimetro o medidor de pH equipado con electrodo de vidrio en
combinacin con electrodo de referencia.
2. Balanza con 0.1 g de sensibilidad.
3. vaso de precipitado transparente de 50 a 100 ml.
4. Pipeta volumtrica de 20 ml.
5. Varilla de vidrio que sirva como agitador manual.
6. Pizeta.
Procedimiento
1. Pesar 10 g de suelo en un frasco de vidrio o plstico de boca ancha.
2. Adicionar 20 ml. de agua destilada al frasco conteniendo el suelo.
3. Con una varilla de vidrio, agitar manualmente la mezcla de suelo: agua a
intervalos de 5 minutos, durante 30 minutos.
4. Dejar reposar durante 15 minutos.

5. Calibrar el medidor de pH con las soluciones reguladores pH 4.00 y 7.00 o 7.00

y 10.00 segn el suelo, enjuagando con agua destilada los electrodos antes de
iniciar las lecturas de las muestras.
6. Agite nuevamente la suspensin e introduzca el electrodo en la suspensin.
7. Registre el pH al momento en que la lectura se haya estabilizado.

Para la humedad y retencin del campo:

Reactivos
Agua des ionizada

Material y equipo
1. Papel filtro
2. Embudo de tallo corto
3. Balanza analtica
4. Probeta de 100 ml
5. Pizeta de 1 litro
6. Fraccin de unicel

Procedimiento
1. Humedecer el papel filtro con el agua des-ionizada y pesar en la balanza
analtica
7

2. Pesar el embudo de tallo corto

3. Colocar en el embudo el papel filtro hmedo y pesar ambos
4. Colocar 25 gr de suelo seco, molido y tamizado en el embudo
5. Colocar el embudo con el suelo en una probeta de 100 ml y llenar el
embudo con agua des-ionizada hasta el borde del embudo
6. Dejar filtrar por veinte minutos o hasta que el suelo deje de filtrar agua
7. Pesar el embudo con el suelo filtrado en una fraccin de unicel y hacer la
resta para conocer la humedad y capacidad de campo
Peso del embudo con suelo
-

Embudo

filtro hmedo

unicel

= suelo hmedo
-

suelo seco

= retencin de campo y humedad al 100%

Se recalcula para un 70% en funcin del suelo a utilizar en la prueba de
evasin.

Para la prueba de evasin:

Reactivos
Agua des ionizada
6 pilas de marca tectron usadas
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Material y equipo:
Molde para la evasin de lombrices de PVC realizado como se marca en
el libro Mtodos eco toxicolgicos para la evaluacin de suelos
contaminados con hidrocarburos
Guantes
Propipeta
Pipeta
Pizeta
Vaso de precipitado de 500 ml
Balanza granataria
Papel aluminio

Organismos de prueba
Se emplean lombrices adultas cliteladas de la misma especie que en la
prueba de mortalidad (E. andrei), con un peso de 0.250 a 0.500 g cada una.
Suelo
El suelo problema (2 kg) se tamiza a travs de una malla de 4 mm. Se
determina su pH y su capacidad de retencin de agua. En funcin de los
resultados de estas determinaciones se realiza el ajuste a un pH de 6.5 a 7.0
y un contenido de humedad del 70 %. Las concentraciones de muestra
provienen del suelo contaminado y de las fases del proceso de
biorremediacin,

por

lo

que

se

obtienen

suelos

muestras

con

concentraciones diversas.

Procedimiento
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1. Se coloca la mitad del suelo en cada una de las cmaras dentro del
molde
2. Posterior se coloca una, dos y tres pilas, dejando solo una cmara
como blanco o testigo
3. Se termina de llenar el molde con el suelo restante
4. Se coloca la cantidad de agua para obtener el 70 % de humedad con la
pipeta y propipeta respectivamente.
5. Posterior a esto se lavan las lombrices con agua des ionizada y se
pesan antes de introducirlas al molde
6. Despus de un tiempo que las lombrices se encuentren secas se
depositan en el centro del molde, si no presentan movimiento se le
coloca una lmpara para iniciar su migracin
7. Una vez realizado esto se tapa y dejan por 96 horas para su anlisis
posterior
8. Pasado las 96 se colocan separadores al lado de cada cmara para
evitar que la migracin contine.
9. Se retira el molde y se procede a extraer las lombrices por cada
cmara para su posterior anlisis
10. El suelo contaminado es depositado en bolsa para un posterior
tratamiento
11. Las bateras se limpian con paos secos y colocan en un recipiente
para su disposicin final de acuerdo al tipo de residuo que estas
pertenecen.
12. Una vez terminado se calcula la evasin de las lombrices:

E= CP
10

L x 100
Donde:
E = evasin (%)
C = nmero de lombrices en el control
P = nmero de lombrices en el suelo problema
L = nmero total de lombrices expuestas

III. Resultados
Se puedo observar los siguientes datos basados para conocer la retencin de
campo y humedad del suelo:

Humedad y retencin de

Peso inicial en gr

Peso final en gr

campo
Papel filtro hmedo
Embudo
Unicel
Suelo seco y tamizado
Suma de suelo seco,

2.4
75.8
5.2
25
108.4

2.4
75.8
5.2
0
0

filtro, embudo y unicel

Suma de suelo hmedo,

122.5

filtro, embudo y unicel

Suelo hmedo

14.1

Por lo tanto, la capacidad de campo y humedad del suelo al 100% es de 14.1 gr

posterior se corrige a 70% segn maneja el bioensayo.
14.1 gr = 100%
X

= 70%

11

Por medio de proporcin se obtiene que:

14.1 gr = 100%
9.87 gr

= 70%

Si se usaran 500 gr por las 4 cmara que posee el molde se realiza ahora una
proporcin entre el peso del suelo a una humedad de 70% en ml
9.87 ml = 25 gr
X

9.87 ml

= 500 gr

= 25 gr

197.4 ml = 500 gr
Se logra obtener que para 500 gr de suelos eco y tamizado por cmara se utilizara
197.4 ml de agua para obtener el 70 % de humedad significando que para los 2 kg
de suelo que se usara se necesitara 789.6 ml en total.
El pH se midi de acuerdo a la NORMA Oficial Mexicana NOM-021-RECNAT2000, Que establece las especificaciones de fertilidad, salinidad y clasificacin de
suelos. Estudios, muestreo y anlisis. Una vez realizado los procedimientos se
obtuvo por medio del potencimetro en una solucin buffer de 4 un PH de 7.1
Y para la prueba de evasin de lombrices se observ las lombrices que evadieron
el contaminante en este caso las pilas, as como el pH final y el peso de cada
lombriz al final de la prueba con duracin de 96 horas, a continuacin, se muestran
los datos obtenidos:

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suelos

No de

No de

Peso

PH

No de

Peso

PH al

lombrices

bateras

de

Inicio

lombrices

de

final de

Inicio

tectron

lombriz

de

al final

lombriz

prueba

Inicio

prueba

a final

de

de

prueba

prueba
7.1

en gr
1.4

7.1

Control

10

en gr
4

o blanco
Cmara

7.1

0.3

7.1

1
Cmara

7.1

0.4

7.1

2
Cmara

7.1

1.5

7.1

3
total

10

7.1

10

3.6

7.1

Obteniendo con la frmula de evasin la proporcin de evasin en las muestras:

E= CP
L x 100
E cmara 1 =

41
= 30%
10 x 100

E cmara 2 =

41
= 30%
10 x 100

E cmara 4 =

44
= 0%
10 x 100

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IV. DISCUSION
Una vez transcurridas las 96 horas se puede observar que la evasin de las
lombrices en un suelo contaminados con pilas de marca tectron doble A es muy
poca significativa, ya que en la cmara uno con una pila y la dos con dos pilas
hubo una evasin del 30% solo encontrado un individuo en cada cmara haciendo
de esta manera un suelo poco contaminado pero que es tolerable para las
lombrices.
Pero esto se descarta ya que en la cmara 3 que posee la mayor cantidad de pilas
tectron doble A con tres unidades se encontraban 4 lombrices de la misma forma
que en el suelo control, habiendo evasin nula, dejando esto con dos posibles
respuestas, una que el tiempo de exposicin fue muy poca y no hubo una
contaminacin significativa en el suelo, y dos que las pilas tectron no representan
contaminacin significativa en un suelo ya que ningn individuo analizado presento
mortandad en las 96 horas de pruebas.
Se denota de igual que el pH durante estas 96 horas no cambio se mantuvo
estable, lo que si vario fue el peso total de las lombrices ya que al ser un suelo
molido y tamizado no haba nutrientes necesarias para que estas se alimentaran
mientras se realizaba las pruebas teniendo una prdida de .4 gr en total los
individuos analizados.
V. BIBLIOGRAFIAS CONSULTADAS
http://dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=717582&fecha=31/12/2002
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/consultaPublicacion.html?
id_pub=665
http://biblioteca.semarnat.gob.mx/janium/Documentos/Ciga/libros2009/DO22
80n.pdf
http://genesis.uag.mx/escholarum/vol13/evaluacion.html
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/665/evaluacion.pdf

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VI. ANEXOS

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