Enzimas

ENZIMAS
Son Protenas altamente especializadas que tienen como
funcin la catlisis o regulacin de la velocidad de las
reacciones qumicas que suceden en la clula.
Hace posible que en condiciones fisiolgicas tengan lugar
reacciones que sin catalizador requeriran condiciones
extremas de presin y temperatura o tiempos muy largos.
Las enzimas son generalmente protenas globulares que
pueden
presentar
tamaos
muy
variables,
desde
62 aminocidos como en el caso del monmero de la 4oxalocrotonato tautomerasa, hasta los 2 500 a.a. presentes en
la sintasa de cidos grasos. (Grisham Et.al, 1999)
Las sustancias cuya transformacin qumica es acelerada por
accin de una enzima se llaman substratos.

PROPIEDADES GENERALES
ESTRUCTURA GLOBULAR.
ALTO PODER CATALITICO.
Catalizadores inorgnicos. 102-103
veces, y las enzimas. 106-1020
CONDICIONES DE REACCIN
Temperatura ambiental.
pH neutro: la mayora 6.5 7.5
Presin atmosfrica normal
CAPACIDAD DE REGULACIN
Por concentracin de sustrato, o
de la enzima
Por inhibidores competitivos
Por regulacin alostrica

ALTA ESPECIFICIDAD DE
REACCIN
No hay productos colaterales

ACCIN A CONDICIONES AMBIENTALES

Produccin de NH3 por sntesis qumica.

Fijacion biolgica de nitrgeno.

Proceso enzimtico
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)
pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5
Presin atmosfrica normal

ESPECIFICIDAD.
Solo catalizan reacciones especficas. Ejplo. Accin de
enzimas amilasa.
Se debe a que la reaccin enzima-sustrato sucede en lugar
especfico denominado centro activo.
En l se encuentran los residuos catalticos que participan
en la reaccin enzimtica.

CARACTERSTICAS DEL CENTRO ACTIVO

Es una parte muy pequea del volumen total de la
enzima.
Tienen una estructura tridimensional en forma de hueco
que facilita encajar al sustrato.
Estn formados por aminocidos lejanos en la secuencia
polipeptdica, que debido a los repliegues de sta, quedan
prximos.
Los radicales de estos aminocidos presentan afinidad
por el sustrato, lo atraen y establecen enlaces dbiles con
l.
Esto limita la reaccin a sustratos especficos..

Accin del sitio activo

AMINOCIDOS COMUNES, EN SITIOS ACTIVOS DE ENZIMAS

MODO DE ACCIN
DE LAS ENZIMAS

Para que una reaccin qumica tenga lugar, las molculas de los
reactantes deben:
Chocar con una energa y una orientacin adecuadas.
La actuacin de la enzima
aumenta la concentracin efectiva de los sustratos (aumenta la
probabilidad de choque)
permite que los reactantes (sustratos) se unan a su centro activo
con una orientacin ptima para que la reaccin se produzca.
modifica las propiedades qumicas del sustrato unido a su centro
activo, debilitando los enlaces existentes y facilitando la formacin
de otros nuevos

EN UNA ENZIMA SE PUEDEN DISTINGUIR TRES TIPOS DE AMINOCIDOS

Aminocidos estructurales.
Son los ms abundantes y los
responsables de la forma de la enzima.
En la lisozima de 129 aminocidos, 124
son estructurales y slo 5 no lo son.

Aminocidos de fijacin.
Son los que establecen enlaces dbiles
con el sustrato y lo fijan.
Se encuentran en el centro activo de la
enzima
Aminocidos catalizadores.
Son los que al establecer enlaces, con el
sustrato, provocan la reaccin.
Son
los
responsables
de
su
transformacin.
Tambin estn en el centro activo

Centro activo

MODELOS DE INTERACCIN (ESPECIFICIDAD)

Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une
al centro activo del enzima: el modelo llave-cerradura, y el
modelo del ajuste inducido

a.- Modelo de llave y cerradura.

La estructura del sustrato y la del centro activo son
complementarias
Este modelo es vlido en muchos casos, pero no es
siempre correcto

b.- Modelo del ajuste inducido

El centro activo adopta la conformacin idnea slo en
presencia del sustrato.
La unin del sustrato al centro activo del enzima
desencadena un cambio conformacional que da lugar a la
formacin del producto.

COFACTORES Y COENZIMAS
Segn su composicin, las enzimas se clasifican en dos
grupos:
Enzimas holoprotenas: Constituidos solamente por
secuencias de aminocidos. Son poco frecuentes, ejemplo: la
ribonucleasa y la lisozima.
Enzimas heteroprotenas: Estn formados por dos
componentes, uno de naturaleza proteica llamado apoenzima
y otro no proteico grupo prosttico, que puede ser
inorgnico (cofactor), o bien orgnico, en cuyo caso se
denomina coenzima.
El conjunto de los dos componentes, apoenzima y coenzima,
forma la enzima completa que se llama holoenzima.

Cofactores enzimticos

Slo protenas
Cationes metlicos (Ca2+ Fe2+..)

Enzimas
Cofactor

Coenzimas

Molculas
orgnicas

Holoenzimas
Apoenzima (parte proteica)

NAD, FAD

COENZIMAS Y VITAMINAS
Muchos coenzimas son sustancias conocidas como
vitaminas.
Las vitaminas son una serie de sustancias de naturaleza
qumica variada que, en cantidades mnimas, son necesarias
para el normal desarrollo y funcionamiento de muchos
organismos.
Su importancia biolgica se manifest debido a que algunos
organismos no las pueden sintetizar y deben adquirirlas del
exterior.
En la actualidad est perfectamente establecida la funcin
coenzimtica de la mayora de las vitaminas
hidrosolubles: a excepcin de la vitamina C todas forman
parte de alguno de los coenzimas conocidos. Por ejemplo la
coenzima NAD, es una molcula derivada de la vitamina B5
(acido nicotnico).

MUCHAS VITAMINAS SON COENZIMAS O PRECURSORES

COENZIMA: NAD+
Deriva de la Vitamina B5
(cido nicotnico)

La coenzima se encuentra en dos formas: NAD+ y NADH.

El NAD+, que es un agente oxidante, acepta electrones de otras
molculas y se reduce a NADH, que puede ser utilizado entonces
como agente reductor para donar electrones. Estas reacciones de
transferencia de electrones son la principal funcin del NAD+.

 Del par de electrones que libera el sustrato, un electrn es

transferido al nitrgeno cargado positivamente del anillo
nicotinamida del NAD+, y el segundo tomo de hidrgeno es
transferido al tomo de carbono C4 opuesto a este nitrgeno.
La reaccin es fcilmente reversible, cuando el NADH reduce otra
molcula y es re-oxidado a NAD+. Esto significa que la coenzima
puede ciclar de forma continua entre las formas NAD+ y NADH sin
que se consuman.

EFECTO CATALITICO DE ENZIMAS

De acuerdo con la teora cintica de las reacciones, para que
se produzca una reaccin es necesario que las molculas
reactantes choquen entre s, y que tal choque suceda con
suficiente energa como para vencer la barrera energtica entre
las molculas (choques efectivos).
La accin de los catalizadores consiste en disminuir la
Energa de activacin
Por ejm. la descomposicin del agua oxigenada (H2O2)
puede ocurrir
sin catalizador
Ea= 18 Kcal/mol
con un catalizador inorgnico (platino) Ea= 12 Kcal/mol
con una enzima especfico (catalasa)
Ea= 6 Kcal/mol

As:
platino acelera la reaccin 20.000 veces,
catalasa la acelera 370.000 veces.

La velocidad de reaccin esta determinada por el nmero de

molculas con energa suficiente para alcanzar el estado de
transicin.
. Mientras menor sea la energa de activacin y ms molculas
puedan alcanzarla, la velocidad de la reaccin ser mayor

La accin cataltica de las enzimas slo se cumple en el centro

activo donde confluyen grupos residuales con caractersticas
especiales para provocar la rotura de un enlace y la formacin de
otros nuevos
MECANISMO DE CATLISIS ENZIMTICA
puede ser abordado como la suma de los efectos que usan las
enzimas en dos fases:

por la energa de fijacin del sustrato en el centro activo

por el efecto del poder reactivo de sus grupos funcionales.

MECANISMO DE CATLISIS ENZIMTICA

1.-En cuanto a la energa de fijacin: es la suma de dos
factores; proximidad y orientacin favorable de los reactantes
Efecto de proximidad. La enzima puede fijarse a las molculas
reaccionantes (sustratos) de manera que queden muy prximas entre
s sobre el centro activo y a su vez prximos a eventuales grupos
catalticos del propio enzima.
Efecto de orientacin. La enzima se fija a las molculas de sustrato
de manera que quedan no slo prximas, sino adems orientadas en
la relacin geomtrica ms favorable para que la reaccin tenga lugar
con los R aminoacdicos reactivos.
Las colisiones al azar de molculas reaccionantes en el medio de
reaccin son extremadamente improbables, y an en el caso de
producirse, la orientacin de los grupos funcionales reaccionantes no
ser la ms favorable en la mayor parte de los casos.
Sin embargo, en el centro activo del enzima, al fijar a los sustratos de
manera energticamente favorable mediante interacciones dbiles, y
al hacerlo con una orientacin precisa, facilitan la reaccin

MECANISMO DE CATLISIS ENZIMTICA

2.- Los mecanismos segn los cuales actan los grupos catalticos, en
general se pueden encuadrar en alguna de las siguientes
modalidades: cido-base, formacin de complejos.
a. Catlisis cido-base.
El mecanismo de la accin de donadores y aceptores de protones
(cidos y bases), puede quedar explicitado observando la hidrlisis de
sacarosa en glucosa y fructosa por la accin de iones hidronio.
En esta hidrlisis, el enlace acetal que compromete al oxgeno
exterior a los anillos se hidroliza tomado una molcula de agua del
entorno.

MECANISMO DE CATLISIS ENZIMTICA

b. Catlisis en complejos. Un ejemplo es la hidrlisis del acetato de
m-clorofenil catalizada por la ciclohexamilosa
La molcula de ciclohexamilosa es no polar y esta formada por seis
molculas de glucosa unidas en la forma de una rosca, en la que calza
un grupo fenilo.
El grupo m-clorofenilo no polar, puede entrar en la cavidad de la
ciclohexamilosa y formar un complejo.
En este complejo el grupo ster del sustrato queda prximo a uno de
los muchos hidroxilo de la ciclohexamilosa y tienen lugar la accin
nucleoflica mediante el grupo hidroxilo, libera el acetato.

NOMENCLATURA
Hay varias formas de nombrar una enzima:
Nombres particulares
Nombre sistemtico
Cdigo de la comisin de enzimas
NOMBRES PARTICULARES.
Antiguamente, los enzimas reciban nombres particulares,
asignados por su descubridor.
Ejemplos:
amilasa, pepsina.
NOMBRE SISTEMATICO
Consta de 3 partes:
el sustrato preferente, el tipo de reaccin realizado y la
terminacin "asa. ejemplo: la glucoquinasa

ATP : glucosa fosfo transferasa

Glc + ATP Glc-6P + ADP

COMISIN DE ENZIMAS
N
o.
1

2
3
4

5
6

Clase

Tipo de reaccin que

catalizan

Ejemplo

Deshidrogenasas
Oxidorreductasas De xido reduccin
Peroxidasa
(transferencia de e-)
Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas
Transferasas
Transferencia de grupos
Kinasas
Transaminasas
Hidrolasas
Hidrlisis, con transferencia de
Pirofosfatasa
grupos funcionales del agua
Tripsina
Aldolasa
Liasas
Lisis de un substrato, generando (Sintasas)
un doble enlace, o
Descarboxilasa
Adicin de un substrato a un
pirvica
doble enlace de un 2o. substrato
(Sintasa)
Isomerasas
Transferencia de grupos en el
Mutasas
interior de las molculas para dar
Epimerasas
formas ismeras
Racemasas
Ligasas
Formacin de enlaces C-C, C-S,
C-O y C-N. Mediante reacciones de Sintetasas
condensacin, acopladas a la
ruptura del ATP

NOMENCLATURA: COMISIN DE ENZIMAS

El nombre es identificado por un cdigo numrico:
Encabezado por las letras EC (Enzyme Commission)
Seguidas de cuatro nmeros separados por puntos.
el primer nmero indica a cual de las seis clases
pertenece la enzima,
el segundo se refiere a distintas subclases.
el tercero se refiere al grupo qumico especfico que
interviene en la reaccin.
El cuarto al orden de descubrimiento.
Ej.:
ATP:glucosa fosfotransferasa

(glucoquinasa)
Glc + ATP Glc-6P + ADP
EC. 2..7..1..2.
2: transferasa
7: fosfotransferasa
1: el aceptor es un grupo OH
2: es un OH de la D-glucosa

Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreduccin, es decir, transferencia
de hidrgeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a otro, segn
la reaccin general:
AH2 + B
Ared + Box

A + BH2
Aox + Bred

Ejemplos: la succinato deshidrogenasa o la citocromo c

oxidasa.

CLASE 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo qumico (distinto del
hidrgeno) de un sustrato a otro, segn la reaccin:
A-B + C

A + C-B

Ejemplo: glucoquinasa (ATP:glucosa fosfo transferasa), que

cataliza la reaccin:
glucosa + ATP

ADP + glucosa-6-fosfato
Los grupos transferidos son:
aldehdos

acilos

glucosilos

fosfatos (kinasas)

Ejemplo. ATP:glucosa fosfo transferasa

Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrlisis:
A-B + H2O
AH + B-OH
Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reaccin:
lactosa + agua
glucosa + galactosa
Transforman polmeros en monmeros. Actan sobre: enlace
ster, enlace glucosdico, enlace peptdico, enlace C-N

Clase 4. LIASAS
(adicin o ruptura de dobles enlaces)

Son enzimas que catalizan la ruptura de enlaces C-C, C-O,

C-N y otros enlaces por medios distintos a la hidrlisis o
la oxidacin.
Una peculiaridad de las liasas es que requieren de la
participacin de un solo sustrato para efectuar una reaccin
en un sentido y de dos para realizar la reaccin contraria.

Descarboxilasas, son liasas carbono-carbono que agregan o

remueven carboxilos de diferentes compuestos orgnicos.
Ejemplo: La piruvato carboxilasa, que cataliza la decarboxilacin del
cido pirvico a acetaldehdo y dixido de carbono.

Descarboxilacin de Histidina

Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversin de ismeros:
A
B
Ejemplo: la fosfotriosa isomerasa que cataliza las reaccin:
gliceraldehdo-3-fosfato
dihidroxiacetona-fosfato

Enzima glucosa isomerasa

La fructosa tiene capacidad edulcorante 30% mayor que la

sacarosa, 2.5 veces mayor que la glucosa y es 2 veces ms
soluble que la glucosa

Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis
simultnea de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.):
A + B + XTP

A-B + XDP + Pi

Ejemplo: ADN-ligasa, que une los nucletidos a la cadena del ADN,

con consumo de ATP. forma enlaces covalentes entre el extremo 5
de una cadena polinucleotdica y el extremo 3 de otra cadena
polinucleotdica.

CLASES Y SUBCLASES E. C. PARA ENZIMAS

1. XIDORREDUCTASAS
(Reacciones de oxidacin-reduccin)
1. Actan sobre CH-OH
2. Actan sobre C=O
3. Actan sobre CH=CH
4. Actan sobre CH-NH2
5. Actan sobre CH-NH
6. Actan sobre NADH o NADPH
7. Actan sobre otros compuestos nitrogenados
8. Actan sobre un grupo sulfuro
9. Actan sobre un grupo hemo
10. Actan sobre difenoles
11. Actan sobre perxido de hidrgeno
12.
Actan sobre hidrgeno
13.
Actan sobre donadores sencillos con incorporacin de 0, (oxigenasas)
14.
Actan sobre donadores complejos con incorporacin de 02
15.
Actan sobre radicales superxido
16.
Oxidan iones metlicos
17.
Actan sobre CH2
18.
Actan sobre ferredoxina reducida
19.
Actan sobre flavodoxina reducida Otras xidorreductasas

2.TRANSFERASAS
(Transferencia de grupos
funcionales)
1. Grupos con un carbono
2. Grupos aldehdo o cetona
3. Grupos acilo
4. Grupos glicoxilo
5. Grupos alquilo o arilo
6. Grupos nitrogenados
7. Grupos que contienen
fsforo
8. Grupos que contienen
azufre

3.HIDROLASAS
(Reacciones de hidrlisis)
1. steres
2. Enlaces glucosdicos
3. Enlaces ter
4. Enlaces peptdicos
5. Otros enlaces C-N
(diferentes del peptdico)
6. Anhdridos de cido
7. Enlaces C-C
8. Enlaces haluro
9. Enlaces P-N
10.Enlaces S-N
11.Enlaces C-P

4. LIASAS
(Adicin a dobles enlaces)
1. Liasas C-C
2. Liasas C-O
3. Liasas C-N
4. Liasas C-S
5. Liasas C-haluro
6. Liasas P-O
7. Liasas C-P
5. ISOMERASAS
1. Racemosas y epimerasas
2. Isomerasas cis-trans
3. Oxidorreductasas intramoleculares
4. Transferasas intramoleculares
5. Liasas intramoleculares

6. Ligasas.
EC 6.1, incluye ligasas usadas para formar uniones oxgenocarbono.
EC 6.1.1 Ligasas forman aminoacil-ARNt y compuestos
relacionados.
EC 6.1.2 Ligasas cido-alcohol (sintasas ster).
EC 6.2, ligasa usadas para formar uniones carbono-azufre.
EC 6.2.1 Ligasas cido-tiol.
EC 6.3, incluye ligasas usadas para crear uniones carbononitrgeno.
EC 6.3.1 cido-amoniaco (o amina) ligasas (sintasas amida).
EC 6.3.2 Ligasas cido-aminocidos (pptido sintasas).
EC 6.3.3 Ciclo-ligasas.
EC 6.3.4 Otras ligasas carbono-nitrgeno.
EC 6.3.5 Carbono-nitrgeno ligasas con glutamina como amidoN-donador.
EC 6.4, abarca ligasas que forman uniones carbono-carbono.
EC 6.5, incluye ligasa que forman steres fosfricos.
EC 6.6, ligasa usadas como unin nitrgeno-metal.
EC 6.6.1 Formando complejos de coordinacin

BASES DE LA CINETICA ENZIMATICA

Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas
enzimticamente
Los principios generales de las reacciones qumicas se
aplican tambin a las reacciones enzimticas

FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD

1.Concentracin de Enzima
2.Concentracin de sustrato
3.pH
4.Temperatura
5.Presencia de activadores

1. CONCENTRACIN DE ENZIMA
En presencia de exceso de sustrato, la actividad es proporcional
a la concentracin enzimtica

2. CONCENTRACIN DE SUSTRATO
Las reacciones enzimaticas se saturan con el sustrato

EFECTO AUTOSATURANTE

3. EFECTO DEL PH
La actividad enzimtica pasa por un mximo (pH ptimo).
El pH ptimo de las enzimas vara ampliamente; para la pepsina,
del estmago, es de 1,5, la arginasa tiene un pH ptimo de 9,7.
La gran mayora de enzimas tienen un ptimo alrededor del pH
fisiolgico de, ~7.0

Explicacin:
El sitio activo de la enzima esta frecuentemente compuesto
de grupos ionizables que deben estar en la forma inica para
tener actividad, unir los sustratos o catalizar la reaccin.
Una enzima que se someta a valores extremos de pH, se
desnaturaliza.

4. Temperatura
En el efecto de la temperatura hay dos
componentes:
1.Aceleracin de la reaccin segn la
ecuacin de Arrhenius. (dentro del
margen de actividad)
k = A exp (-Ea/RT)
Al aumentar la temperatura, la
velocidad de reaccin aumenta y, para
casi todas las enzimas, un incremento
de 10C duplica e incluso triplica la
velocidad de reaccin.
2. Desnaturalizacin trmica de la
protena.
Para muchas enzimas la regin de
inactivacin trmica est muy prxima
de la temperatura ptima.

CINETICA ENZIMATICA
Cintica de reacciones con un slo substrato
Michaelis y Menten propusieron un modelo para relacionar la
velocidad de reaccin con la concentracin de substrato.
Suponiendo la existencia de un solo complejo central, el
esquema de reaccin sera:

Velocidad de reaccin VS concentracin

La ecuacin de MichaelisMenten describe como vara la
velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas de
acuerdo a la concentracin de
sustrato:

1. Vmax = velocidad mxima terica = la velocidad cuando todos

los centros activos estn ocupados con sustrato (nunca alcanzada
en la realidad)
2, Km (constante de Michaelis-Menten para cada enzima) =
concentracin de S a la que la V es 1/2 Vmax.

Caractersticas de Km:
Es una medida de la afinidad del enzima por el S.
Cuanto menor es Km, mayor es la afinidad del enzima por el S.
Una Km pequea, refleja una gran afinidad por el sustrato, ya que bajas
concentraciones de sustrato son suficientes para saturar al 50% de la
enzima es decir, para alcanzar Vmax.
Una Km grande, refleja una baja afinidad de la enzima por su sustrato, ya
que son necesarias grandes concentraciones de sustrato para saturar el
50% de la enzima.

Km de algunas enzimas
ENZIMA

SUSTRATO

Km (mM)

Catalasa

H2O2

25.0

Hexoquinasa

ATP

0.4

D-Glucosa

0.05

D-Fructosa

1.5

HCO3-

9.0

Anhidrasa carbnica
Quimotripsina

Gliciltirosinilglicina
N-Benzoiltirosinamida

108.0
2.5

-Galactosidasa

D-Lactosa

4.0

Treonina deshidrogenasa

L-Treonina

5.0

Vmax
Vmax es una constante
Vmax es la velocidad mxima
terica de la reaccin. Se
alcanzara si todos los centros
activos estan ocupados.
Para alcanzar la velocidad
mxima se requiere que [S] >>
[E] y que TODAS las molculas
de enzima estn unidas al
sustrato.
Vmax se alcanza
asintticamente a medida que la
concentracin de sustrato
aumenta

CALCULO DE PARMETROS DE LA ECUACIN

La Linearizacin de LineweaverBurk .
Artificio matemtico que
permite deducir grficamente
los valores de km y Vm.
El artificio consiste en convertir
a la ecuacin M-M en la
ecuacin de una recta.
Recta de forma Y = A + BX,
donde:
Y = 1/v,
A = 1/Vm,
B = km/Vm, y
X = 1/[S]

Ploteo de Eadie-Hostee
El ploteo se realiza vi/ vi/[S], con ese fin se
multiplica ambos miembros de la inversa de
la ecuacin M-M por vi.Vmax obtenindose:
Vmax (vi) = KmVmax(vi) + Vmax(vi)[S]
vi
Vmax[S]
Vmax [S]

Vmax = Km.vi + vi

[S]
Ordenando:

vi = Vmax - Km.vi

[S]
Esta es una ecuacin de lnea recta de la
forma Y = a bX.
Pendiente= Km,
Ordenada en el origen= Vmax.

Ploteo de Hanes- Wolf

[S] = Km.
Vi
Vmax

1 . . [S]
Vmax

[S]
V

a
Vm

Km
V max

[S]
0

Ploteo Eisentahl-Cornish
Vmax

= vi + vi. Km
[S]
V

V max

[S]
Km

Limitaciones de Cintica Michaeliana

Para utilizar la ecuacin de Michaelis-Menten deben asumirse:
Concentraciones relativas de E y S: La concentracin de sustrato
[S] es mucho mayor que la concentracin de enzima [E], de
manera que la proporcin de ES es relativamente pequea.
La reaccin esta en equilibrio: [ES] no cambia en el tiempo (la
velocidad de formacin de ES, es igual a la velocidad de su
transformacin en E + S y en E + P).
Deben usarse velocidades iniciales (vo). Esto significa que la
velocidad de la reaccin debe determinarse tan pronto como el
sustrato y la enzima se mezclan. En dicho tiempo, la concentracin
de productos es despreciable y, por lo tanto, la reaccin inversa de
productos a sustratos puede ser ignorada
Existen enzimas que no siguen la cintica Michaeliana como las
enzimas alostricas

Actividad enzimtica
Las cantidades de enzima pueden ser expresadas en moles,
como otros compuestos qumicos, o pueden ser cuantificadas por
su actividad.
La actividad expresa la cantidad de sustrato convertido por unidad
de tiempo, teniendo en cuenta el volumen de reaccin y las
condiciones ambientales.
En el Sistema Internacional de Unidades la unidad para la
actividad cataltica es el katal (kat), pero es una unidad demasiado
grande y suele usarse la unidad de actividad enzimtica (UI).
1 kat = 1 mol sustrato convertido x s-1 = 6 x 107 UI
1 UI = 1 mol sustrato convertido x min-1 = 16,67 nkat
Otra unidad comnmente usada es la actividad especfica. sta
se refiere a la actividad de una enzima por miligramo (mg)
de protena, y se suele expresar en: mol x min-1 x mg-1). La
actividad especfica da una idea de la pureza de la enzima.

REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

INHIBIDOR: molcula o ion que al unirse a la enzima
produce una disminucin en la velocidad de la reaccin
catalizada.
ACTIVADOR: Molcula o ion que al unirse a la enzima
produce un aumento de la velocidad de la reaccin
catalizada
Los inhibidores y los activadores, se usan en la
formulacin de: medicamentos, antibiticos, insecticidas,
herbicidas. etc

INHIBIDORES
IRREVERSIBLES. Si la inhibicin es
permanente
Unin por medio de enlaces
covalentes.
Modificada la enzima por el enlace
covalente.
(En general, el inhibidor sustituye a la
cadena lateral de un aminocido del sitio
activo).
Ejemplo. Las toxinas bacterianas,
neurotoxinas, DDT, cianuro, cido
acetilsaliclico y gases nerviosos.
Ejplo: efecto del mercurio, plomo, gases
neurotxicos y compuestos arsenicales.
In cianuro, CN-: Se fija con gran
afinidad a la sexta posicin de
coordinacin del Fe del complejo
citocromo oxidasa.
Penicilinas: Inhiben enzimas sernicas
que participan en la formacin de la
pared bacteriana

REVERSIBLES.
La unin del inhibidor y la
enzima es reversible.
Al quitar el inhibidor del
medio, se
recupera la
actividad.
Se unen a la enzima por el
mismo tipo de interacciones
que se producen entre las
enzimas y los sustratos.
Tipos: inhibidores
competitivos, no
competitivos, y acompetitivos

a.- Inhibidores Reversibles

La unin del inhibidor y la enzima es reversible.
Al quitar el inhibidor del medio, se recupera la actividad.
Hay 3 tipos:
Competitiva
No Competitiva
Acompetitiva (Alostrica)

Inhibidores competitivos

Los inhibidores competitivos tienen gran parecido estructural

con el sustrato natural.
Compiten con el sustrato por ocupar el sitio activo de la enzima.
Esta unin es reversible y aumentando la concentracin de
sustrato aumentamos el nmero de molculas de enzima libre.
Una caracterstica de este inhibidor es que puede ser revertida
aumentando la concentracin de sustrato. Si ste predomina en
la mezcla, tiende a desplazar al inhibidor de su unin con la
enzima.
Estos han encontrado aplicacin farmacolgica.

Ejemplo1: efecto
antibitico de sulfas
Las bacterias sensibles requieren del
(para amino benzoico) PABA para
producir cido dihidroflico, un paso
en la produccin de purinas y la
sntesis de cidos nucleicos.
Las sulfamidas son anlogos
estructurales del PABA, inhibiendo
competitivamente a la enzima
dihidropteroato sintasa, y bloquea la
sntesis del cido flico

Ejemplo 2. Efecto reversible metanol/etanol

El alcohol metlico, se produce durante la obtencin de bebidas
alcoholicas fermentadas, especialmente cuando proceden de
frutas con alto contenido de pectina, generando as una mezcla
de etanol y metanol, que en ltima instancia va al consumidor.
La dosis txica de metanol presenta variaciones individuales;
algunas personas han muerto con dosis de 15 ml y otros han
sobrevivido con 500-600 ml.
Los sntomas se inician entre los 40 minutos y 72 horas
postingesta al formarse los metabolitos txicos (formaldehdo y
el cido frmico) y consisten en embriaguez, cefalea, nuseas;
dolor abdominal; disminucin de la agudeza visual, visin
borrosa, y ceguera, disminucin de la fuerza, insuficiencia renal
aguda, depresin del SNC, hipotensin; finalmente las
convulsiones, coma y muerte.

Ejemplo 2. Efecto reversible metanol/etanol

El metanol es metabolizado por la enzima alcohol deshidrogenasa, la misma
que metaboliza el etanol, pero esta enzima es 22 veces ms afn por el
etanol que por el metanol, razn por la cual se utiliza el etanol como
antdoto de esta intoxicacin, ya que al preferir la enzima como sustrato el
etanol estamos evitando la formacin de los metabolitos txicos del
metanol. (fuente: Llins Chica, Vladimir)

Cintica competitiva
En la Inhibicin competitiva el sustrato (S) y el I compiten por la enzima libre,
pudiendo unirse uno o el otro, pero no ambos simultneamente, hay una
interaccin mutuamente excluyente del S y de I con la enzima. La unin de E
a I conduce a la formacin de un complejo no productivo.

Ejemplo 3: inhibicin de la succinato

deshidrogenasa por malonato
Esta enzima cataliza la eliminacin de 2H de 2 carbonos metilnicos
del succinato en el ciclo de Krebs. El malonato es similar al succinato
en que posee 2 COO- ionizados a pH 7, pero no es deshidrogenado
por la enzima.
Adems tienen la misma accin otros cidos con dos grupos
aninicos como el pirofosfato.

Esto indica que el sitio activo de la enzima posee dos grupos de

carga positiva separados de modo que atraen a los COO- del
sustrato.
Esto permite estudiar la geometra del centro activo

Inhibicin No Competitiva
El inhibidor se combina con la enzima o con el complejo ES,
interfiriendo con la accin de ambos.
Se unen a la enzima en un lugar diferente del sitio activo y provocan
la distorsin del centro activo, alterando la formacin de ES a su
velocidad normal y que una vez formado de lugar a la formacin de
P
Disminuye Vmax, pero Km permanece constante.

Inhibicin No Competitiva
Este tipo de inhibicin no puede ser revertida por aumento de la
concentracin de sustrato.
Pertenecen a esta categora ciertos iones metlicos: Cu2+,
Hg2+, Ag+
Yodoacetato. Se une a SH de cistena de una protena y
modifica el centro activo
Ejemplo: El acetato de yodo es un agente alquilante que acta
como un potente inhibidor de la enzima deshidrogenasa
gliceraldehdo-3-fosfato, dando un derivado (carboximetilado)
con un grupo SH.

Cintica No competitiva
Dado que una fraccin de molculas de la enzima es inactiva, no se
alcanza Vmax (Vmax disminuye)

V = Vmax. S .
.1.

Kmax+S (1+I/Ki)

Km se mantiene

Los inhibidores no competitivos son a menudo intermediarios

metablicos y regulan la progresin de las vas metablicas.
Algunos inhibidores enzimticos se usan como frmacos

Inhibicin acompetitiva
Su denominacin no es muy adecuada.
El inhibidor se une solo al complejo ES para dar siempre un
complejo inactivo EIS, estabilizndolo e impidiendo la
formacin de P.
En este caso: Km y Vmax disminuyen.

Inhibicin acompetitiva
Su representacin en la forma linearizada toma la forma:

Esta forma de inhibicin es poco frecuente en las reacciones

monosustrato, pero es frecuente en las reacciones con dos
sustratos.

Diferenciacin de tipos de inhibiciones reversibles.

APLICACIONES:
Muchos medicamentos son inhibidores enzimticos.

b.- Inhibidores irreversibles: Venenos

Los gases nerviosos. (sarn, tabn, somn)
Organofosforados. El fluorofosfato de di-isopropilo DIPF
Carbamatos.
Inhiben la enzima acetilcolinesterasa del sistema nervioso que
en el sitio activo contiene residuos de serina que se unen a la
acetilcolina cortando los impulsos nerviosos.

Plaguicidas organofosforados
Organofosforados: malathion
Carbamatos: como el carbaril (Sevin).
Organofosforados: Esteres de fosfato
con O sustituidos con S u otros radicales.
Con enlace P-C fosfonato,
Con enlace P-N fosforamido,
Con enlace P-S fosfotiolato

Inhiben la acetilcolinesterasa

Neurotransmisin intoxicacin
Circuito elctrico de transmisin
de seal entre una sensacin
(nervio sensitivo) y un movimiento
muscular (nervio motor).
Acetilcolina --- colina + acetato
Enzima: acetilcolinesterasa

La reactivacin de la enzima
dura menos tiempo con los
carbamatos, que con los
organofosforados.
De ah que, los carbamatos se
consideran inhibidores reversibles
porque en poco tiempo dejan la
enzima libre, mientras que a los
organofosforados se les llama
inhibidores irreversibles

Neurotransmisin intoxicacin
Accin del fluorofosfato de di isopropilo DIPF

La inhibicin de la acetilcolinesterasa determina la parlisis

muscular, y el primer efecto se produce sobre los musculos del
sistema respiratorio.
El DIPF inhibe tambin a otras enzimas sernicas, como
quimotripsina, tripsina, fosfoglucomutasa, etc.
El sarin es un gas nervioso que tambien inactiva los restos de
serina

Antdotos: (Atropina, Oximas, PAM)

Las sustancias que tienen frente
al veneno una afinidad mayor
que a la serina son antdotos.
Ejemplo: PAM (piridn-2aldoxim-metayoduro). Tiene un
in amonio cuaternario que se
une al lugar aninico del centro
activo de la E inhibida.
El grupo hidroxilamina del PAM
ataca al fosforilo, liberando un
complejo PAM-DFP y liberando
la E.

REACCIONES CON MS DE UN SUBSTRATO

Algunas enzimas catalizan reacciones con dos o mas sustratos
que se influyen mutuamente, y tienen una cinetica mas compleja.
Entre ellas estn las transferasas que transfieren un grupo
especifico desde un sutrato a otro.
Mecanismos para explicar este tipo de reacciones, la mayora
pueden clasificarse en dos tipos:

a)Todos los substratos se unen a la enzima antes de la catlisis (en

caso de dos substratos se denomina mecanismo de formacin de
complejo ternario);
b)Se libera un producto a partir de un primer complejo binario
antes de la unin con el segundo substrato.(ping-pong)

a.- Reacciones mediante formacin de un complejo ternario.

El complejo ternario puede formarse independientemente del
orden de unin de los substratos (aleatorio), o bien nicamente
en un orden determinado (mecanismo ordenado).
Mecanismo aleatorio. Los substratos A y B forman un complejo
con la enzima. Cualquiera de ambos puede combinarse con el
otro substrato para formar el complejo ternario EAB, que
conduce a los productos X e Y y a regenerar la enzima:

Mecanismo ordenado. Un substrato (A) se une inicialmente con la

enzima formando el complejo EA. El segundo substrato slo se une al
complejo EA para conducir al complejo ternario EAB:

b.- Reacciones enzimticas sin formacin de un complejo ternario.

Mecanismo ping-pong. Se forma un complejo de la enzima con un
substrato (EA), que libera el producto X, quedando como EA' ,el
segundo substrato se une al complejo

ENZIMAS REGULADORES
Todos los enzimas tienen forma de ser regulados por
factores externos: pH, [S], presencia de iones, etc.
Algunos enzimas adems poseen capacidad de regular el
metabolismo celular. Enzimas reguladores.
Estas enzimas pueden ser:
Enzimas alostricos. Su actividad cataltica es regulada por
la unin no covalente de un metabolito especfico, en un sitio
de la protena diferente al centro activo
Enzimas moduladas covalentemente. Se unen
covalentemente y se interconvierten en forma activa e
inactiva, por accin de otras enzimas

Enzimas alostricas

Presentan una cintica

sigmoidal, indicativa de efectos
cooperativos en la unin del
sustrato.
Su actividad est regulada por
otras molculas efectoras.
Pueden mantener las
concentraciones de sus
sustratos en valores bastante
constantes.
Existe una concentracin crtica
de sustrato ([S]c) por debajo de
la cul la enzima es
prcticamente inactiva
Siguen una cintica no
Micheliana, de forma sigmoidal.
Formas de control: control a
nivel de sustrato y feed back

1.- Control a nivel de sustrato

Mediante interaccin de los sustratos y productos de
cada reaccin con la enzima

hexoquinasa
Glucosa + ATP ----------> Glucosa-6-fosfato + ADP

El propio producto de la reaccin puede inhibir

competitivamente a la enzima
Un ejemplo es el control de la glicolisis en la enzima
fosfofructokinasa por accin de una baja concentracin del
ATP

2.- Control por retroalimentacin (Freed Back)

Un aumento de concentracin del producto final de una ruta
metablica inhibe una de las primeras reacciones de la ruta
(generalmente la primera)
A ---> B ---> C ---> D ---> E

E acta como inhibidor del primer enzima.

Ello impide:
La utilizacin innecesaria del primer sustrato
La acumulacin del producto final
Se evita la acumulacin de intermedios

Ejemplos de cintica.
1. En una reaccin enzimtica que transcurre con una
concentracin de enzimas de 0,015g/l, se obtienen los siguientes
datos:
[S] (g/l)
20
15
10
7.0 5.0 4.0 3.0
2.5
v(g/l-min
1.14 1.01 0.87 0.72 0.59 0.5 0.44 0.35
Deduzca el modelo que representa la cintica del proceso.

Representando grficamente se tiene:

1.2

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0

10

15

20

25

Deduccin de los, coeficientes de la ecuacin de

M-M y Lineweaver-Burk .
S

v (g/l-min)

1/S

1/v

20

1.14

0.05

0.877

15

1.01

0.066

0.990

10

0.87

0.10

1.149

6.5

0.70

0.15

1.428

5.0

0.59

0.20

1.695

4.0

0.50

0.25

2.000

3.3

0.44

0.30

2.273

2.5

0.35

0.40

2.857

Grfica Linewaber-Burk
1/v
3.0000

y = 5.3879x + 0.6147
R = 0.9914

2.5000

2.0000

1.5000

1.0000

0.5000

0.0000
0.000

0.050

0.100

0.150

0.200

0.250

0.300

0.350

0.400

0.450

1/s

y = 5.3879x + 0.6147
R = 0.9914

Intercepto.= 1/vmax=0.614
vmax = 1.628 g/l-min.
Pendiente: Km/vmax. = 5.387
Km = 8.776 g/l
El modelo ser.
V = Vmax.S/(Km+S)
V = 1.628S/(8.776+S)
Comprobar por Eadi-Hostie

Linearizacin de Eadie-Hostfee

V = Vmax Km.V/S

v/S
0.160
0.140
0.120
0.100
0.080
0.060

y = -0.1148x + 0.1861
R = 0.9758

0.040
0.020
0.000
0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.2

Ejercicio 2
Se investig el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una
reaccin catalizada enzimticamente sobre un solo sustrato,
obtenindose los siguientes resultados
Concentracin de sustrato
(mmol L -1)

0.05
0.10
0.20
0.40
0.50

Concentracin del inhibidor

(mmol L -1)
0
0.5
1.0
Velocidad de reaccin (mol L -1 min-1)
0.33
0.50
0.67
0.80
0.83

0.20
0.33
0.50
0.67
0.71

0.14
0.25
0.40
0.57
0.63

A) De que manera acta el inhibidor? B) Obtngase los valores

para Vmx, y Km.

SOLUCIN A) La manera ms sencilla de deducir cmo

acta un inhibidor es graficar 1/V0 en funcin de 1/[S]0 para
cada concentracin del inhibidor.

Grfica de Lineweaver-Burk del efecto de un inhibidor

A partir de la grfica se puede observar que la pendiente de las curvas

se modifica con los cambios en la concentracin del inhibidor pero no
la interseccin en el eje 1/n0 (1/Vmax).
Por ello los datos anteriores indican que el inhibidor I est actuando
como un inhibidor competitivo.
B) De la interseccin en el eje 1/n0 se puede estimar Vmax= 1(mmol L -1
min-1)
de la interseccin con el eje 1/[S]0 los valores de
Km=0,1 (mmol L -1) sin ihnhibidor,
Km=0,2(mmol L -1) con 0.5(mmol L -1) de inhibidor
Km=0,3 (mmol L -1) con 1(mmol L-1) de inhibidor