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ESTERILIZACION
El trmino esterilizacin puede definirse como el conjunto de operaciones destinadas a eliminar o matar
todos los microorganismos presentes en un objeto o sustancia. Como consecuencia de sta definicin un
objeto o sustancia estar estril cuando se demuestre ausencia absoluta de toda forma viable de vida, no
existiendo grados de esterilidad.
Para comprender el fundamento de la esterilizacin por agentes letales es necesario conocer la cintica de
muerte de una poblacin microbiana. El nico criterio vlido de muerte en el caso de los
microorganismos es la prdida irreversible de su capacidad de reproduccin.
Cuando una poblacin microbiana se somete a un proceso de esterilizacin, el nmero de sobrevivientes
(N) disminuye exponencialmente con el tiempo de exposicin hasta que no puedan detectarse ms
organismos viables (Fig. 1). Si se representa grficamente el logaritmo decimal o natural de N en funcin
del tiempo, se observar un comportamiento lineal, donde la pendiente de la recta obtenida corresponde a
la constante de inactivacin del proceso (k), que es una medida de la velocidad de muerte de los
microorganismos viables (Fig. 2).
La funcin que representa el comportamiento descripto corresponde a una cintica de primer orden,
donde la velocidad de destruccin de clulas es directamente proporcional al nmero de sobrevivientes.
Esto puede expresarse mediante la siguiente
ecuacin:
dN=-kN
(1)
dt
donde
N: es el nmero de microorganismos viables en el
volumen considerado
es el tiempo de exposicin al agente letal
constante de velocidad de muerte celular
dN/dt: velocidad de muerte celular

t:
k:

Si se considera que k no dependen del tiempo, la integracin de esta ecuacin (1) permite calcular el
tiempo necesario para reducir la poblacin a un determinado valor de N como:
t= 2,303 log N0
k
N

(2)

donde
N0: es el nmero de microorganismos viables iniciales
N: es el nmero de microorganismos viables luego del tiempo de exposicin t.
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De las grficas puede verse que no es posible, tericamente, alcanzar el valor N=0. Cuando el valor es
inferior a la unidad, indica la probabilidad de encontrar un microorganismo viable.
De lo expuesto se desprende que cuanto
mayor sea N0 y menor la velocidad de
muerte, mayor ser el tiempo que el material
deber ser expuesto al agente esterilizante,
para
alcanzar
la
probabilidad
de
contaminacin que se considere adecuada.
Esta tendr un margen de variacin segn la
futura utilizacin del material a esterilizar, el
mtodo
utilizado,
condiciones
de
esterilizacin y otras variables del sistema a
considerar.
Hemos visto hasta aqu que la muerte de los
microorganismos responde tericamente a
una cintica de primer orden. Sin embargo,
existen desviaciones al modelo por
diferentes causas. A continuacin se
muestran curvas que presentan desviaciones
del modelo terico. En estos ejemplos el
agente esterilizante es calor hmedo a temperatura constante.
En la figura 3 se representa el comportamiento observado en un cultivo de microorganismos esporulados.
En los primeros minutos del proceso son ms los esporos que se activan que aquellos que mueren por
accin del calor hmedo.

FIGURA 3

La figura 4 muestra un caso

similar al anterior donde la
velocidad de activacin de
los
esporos
es
aproximadamente igual a la
velocidad de muerte.

FIGURA 4

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FIGURA 5

Finalmente, se observa en la curva de la figura 5, el comportamiento

de un cultivo de dos poblaciones microbianas con diferente
sensibilidad al agente esterilizante.

-Parmetros de referencia en las curvas de muerte

A partir de las grficas de las curvas de muerte se pueden definir una serie de parmetros tiles para
caracterizar y comparar procesos de esterilizacin. En la
figura 6a y 6b se indican los valores correspondientes al
tiempo de reduccin decimal D (3) y a Z (4).
D se define como el tiempo en minutos necesario para
reducir en un 90% el nmero total de microorganismos
viables.
Z es el incremento de temperatura requerido para reducir
en un 90% el valor de D, e indica la respuesta de un
organismo al cambio en el valor del factor de muerte.
de la ecuacin (2) se obtiene
D= 2,303
cuando N es el 10% de N0
k
De la grfica de log D en funcin de la temperatura se
deduce (fig. 6b)
1= log D2-log D1
Z
T1-T2
Figura 6a

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Figura 6b
Conclusiones
Basndose en las consideraciones anteriores tericamente no es posible alcanzar un valor de N=0,
definiremos en forma prctica a la esterilizacin, como un tratamiento que tiene por finalidad lograr que
la probabilidad de encontrar tan slo un microorganismo viable en el material tratado sea infinitamente
pequea. Esta definicin solo tiene validez cuando se trata de procesos que utilizan agentes letales para
lograr la esterilizacin.

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Mtodos de esterilizacin
Los mtodos convencionalmente usados se pueden clasificar de acuerdo al agente y/o proceso esterilizante en:

Calor hmedo
Calor seco
Qumicos
Radiaciones
Filtracin
Calor Hmedo

El calor hmedo es el mtodo de eleccin para la esterilizacin de materiales capaces de resistir altas
temperaturas. El proceso es rpido y todos los microorganismos resultan sensibles.
Los mecanismos de esterilizacin por calor hmedo se basan en la desnaturalizacin de protenas, aunque
es posible que tambin tenga alguna importancia la fusin de los lpidos de la membrana. Las
temperaturas a las que se llevan a cabo stos procesos corresponden a las que desnaturalizan la mayora
de las protenas.
La esterilizacin por calor hmedo se lleva a cabo en equipos denominados autoclaves. La operacin
puede realizarse a presin atmosfrica (100C), vapor fluente, o a presiones superiores a la atmosfrica,
logrndose temperaturas mas elevadas. En la siguiente tabla se muestran algunas relaciones entre
temperaturas
Temperatura (C)
100
114
121
135

Presin (atm)
1
0,75
1
2

Vapor saturado a presin superior a la normal

Bajo estas condiciones se logran temperaturas superiores al punto de ebullicin del agua. Generalmente se
emplea una presin de vapor de una atmsfera por encima de la presin normal, lo que corresponden a
una temperatura de 121C. El poder de penetracin del vapor a esta temperatura es muy alto, lo suficiente
como para destruir en 15 a 20 minutos, dependiendo del volumen del material a esterilizar, esporas que
sobreviviran a la ebullicin durante horas. Por ste mtodo se pueden esterilizar soluciones, medios de
cultivo, material de vidrio, ropa, en general materiales que soporten la temperatura de esterilizacin.
Existen varios tipos de autoclaves siendo el ms comnmente usado el de Chamberland. El equipo
consiste en una caldera metlica (en general de cobre) rodeada por una camisa externa tambin metlica
de forma cilndrica, en cuya parte inferior, y por debajo de la caldera, se encuentra la fuente de calor.
La caldera lleva en su interior un doble fondo desmontable y perforado sobre el cual se coloca el material
a esterilizar. La parte superior cierra con una tapa de bronce que ajusta perfectamente mediante una junta
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de goma de siliconas y una serie de tornillos de bronce. La tapa presenta tres elementos que comunican
con el interior de la caldera: el manmetro, que generalmente indica presin sobre la atmosfrica, la
vlvula de seguridad, y la llave de salida de vapor o espita.
Instrucciones para su uso.
Cuando el autoclave se usa con vapor saturado a presin superior a la normal se deben seguir los
siguientes pasos:
1. Colocar agua en la caldera procurando que su nivel no alcance a los objetos que se colocarn en
su interior. Al material a esterilizar slo le debe llegar el vapor que es el agente esterilizante.
2. Cargar el material a esterilizar debidamente acondicionado.
3. Cerrar el autoclave ajustando los tornillos de su tapa en posicin cruzada, a fin de asegurar un
cierre parejo y hermtico. De sta manera se prolonga la vida til de la junta de siliconas, cuyo
espesor debe ser homogneo en todo el recorrido.
4. Abrir la salida de vapor y encender la fuente de calor.
5. Asegurarse el correcto estado de la vlvula de seguridad.
6. La salida de vapor debe estar abierta para desalojar el aire interior, hasta que salga un chorro
contino y abundante de
vapor. La temperatura de
trabajo,
121C
se
alcanzar a la presin de
una atmsfera sobre la
normal solo si dentro del
autoclave existe vapor en
equilibrio con el agua,
por lo cual es necesario
asegurar la eliminacin
de aire del interior de la
caldera. Si no se logra la
adecuada eliminacin del
aire, la presencia de aire
mezclado con vapor de
agua resultara en una
temperatura inferior a
121C. De lo dicho se
deduce que el manmetro
podr marcar una atmsfera de sobrepresin, pero si no se ha efectuado una correcta
eliminacin de aire la temperatura ser inferior a la esperada.
7. Purgar el aparato: se cierra y se abre tres veces la llave de salida de vapor, para eliminar los
restos de aire.

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8. Cerrar. Calentar hasta que el manmetro indique la presin deseada. Regular la fuente de calor
para mantener la presin constante. A partir de ese momento comenzar a contar el tiempo de
esterilizacin.
El tiempo de exposicin vara con el volumen de los lquidos contenidos en distintos recipientes:
RECIPIENTE

VOLUMEN
(ml)
vaso de precipitado
20
erlenmeyer
50
erlenmeyer
200
erlenmeyer
1000
erlenmeyer
2000
Los tiempos son vlidos para un tratamiento a 121C

TIEMPO DE EXPOSICIN
(min)
12-14
12-14
12-15
20-25
30-35

Una vez transcurrido el tiempo de tratamiento, apagar la fuente de calor y esperar que el manmetro
marque cero. Recin en ese momento se puede abrir la llave de salida de vapor y luego la tapa del
autoclave para retirar el material.
Vapor fluente o vapor a presin normal
El autoclave puede utilizarse empleando vapor saturado a 100 C (presin atmosfrica). En este caso se
trabaja con la llave de salida de vapor abierta. Cuando sale un chorro de vapor continuo y abundante, se
purga el aparato y se deja abierta la llave. A partir de ese momento se cuenta el tiempo de exposicin.
Este proceso conocido como tyndalizacin utiliza la accin intermitente del vapor o la esterilizacin
fraccionada. Se utiliza para la esterilizacin de materiales que no soportan temperaturas superiores a
100C. El proceso consiste en un calentamiento a 100C durante 30 minutos en el que mueren las
bacterias en estado vegetativo. Luego se deja a temperatura ambiente durante una noche y se repite la
operacin, se deja nuevamente a temperatura ambiente y se procede aun tercer y ltimo calentamiento.
El mtodo se basa en que en el primer calentamiento se logra destruir las formas vegetativas y se estimula
la sensibilizacin de las formas esporuladas por accin de la temperatura y el medio lquido. En los
posteriores calentamientos las formas esporuladas , ahora sensibilizadas, sern destruidas.
Este mtodo puede utilizarse para la esterilizacin de leche, gelatina nutritiva, solucin de azcares con
concentraciones superiores al 10 %, etc.
Calor Seco
El calor seco a temperaturas por encima de 140C mata a las esporas bacterianas probablemente por
oxidacin destructiva. Este proceso es de menor eficiencia de muerte que la coagulacin e hidrlisis de
protenas y por lo tanto requiere de temperaturas ms elevadas y tiempos de exposicin ms prolongados
que la esterilizacin por calor hmedo. Este procedimiento deteriora ms los materiales como la goma,
los tejidos y el papel, por lo que se lo usa, en general, para la esterilizacin de cajas de Petri, jeringas de
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vidrio, materiales hidrfobos anhidros como aceites y polvos, material de vidrio en general y otros
materiales termorresistentes.
Fuego directo o flameado
Consiste en exponer a la llama del mechero Bunsen el objeto a esterilizar. Se emplea para ansas, pinzas,
bocas de tubos de ensayo, puntas de pipetas, etc.
Aire caliente
Para esterilizar por medio de aire caliente es necesario colocar los objetos en estufas u hornos de
esterilizacin elctricos o a gas. A fin de lograr una llegada homognea del calor a los elementos a
esterilizar es necesario que el material sea distribuido espaciadamente y que las bandejas de la estufa sean
perforadas. Es deseable que exista circulacin de aire forzado. El proceso debe realizarse a un a
temperatura de 180 C durante 90 minutos.
Mtodos Qumicos
Se recurre a agentes qumicos cuando es necesario esterilizar materiales que no soportan altas
temperaturas. El requisito fundamental para que un agente qumico sea empleado como esterilizante es
que adems de ser letal para los microorganismos, sea voltil y fcilmente eliminable luego de la
esterilizacin, que no reaccione con el material tratado ni deje residuos txicos.
Esterilizacin con xido de etileno
Si bien existe una amplia gama de sustancias gaseosas con propiedades germicidas, solamente el xido de
etileno (OET), es de amplio uso en esterilizacin en el rea mdica, farmacutica e industrial.
Se utiliza OET para esterilizar equipamiento mdico quirrgico tal como vlvulas, prtesis, equipos de
anestesia, tubos endotraqueales, etc.; material descartable de enfermera como jeringas, apsitos,
tampones, sondas; productos farmacuticos y cosmticos (polvos); productos alimenticios (alimentos
desecados, especies, aditivos); elementos aeroespaciales.
Algunas propiedades del xido de etileno son: es soluble en agua en todas las proporciones, tiene bajo
punto de ebullicin, posee alto poder de penetracin, por hidrlisis produce etilenglicol que tiene bajo
poder germicida, razn por la cual la esterilizacin con OET slo es aplicable a materiales slidos.
Puede actuar como vesicante por contacto con la piel, es irritante para los ojos y membranas mucosas.
Hay evidencias de su accin mutagnica y carcinognica sobre bacterias, semillas, Drosophila y
determinadas lneas celulares.
En presencia de aire u oxgeno da lugar a mezclas explosivas por ello se lo emplea en mezclas con
freones o CO2.
El OET resulta letal para todas las bacterias inclusive para esporos.
Su accin letal sobre los microorganismos se ha explicado por reaccin de alquilacin con los principales
componentes de la materia viva, particularmente protenas y cidos nucleicos, atacando los grupos
sulfhidrilo, hidroxilo, aminas y carboxilos de los centros activos esenciales.

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En la esterilizacin con OET la eficacia del ciclo est determinada por parmetros previamente calculados
para cada carga. Estos parmetros son: concentracin del gas, humedad relativa, temperatura y tiempo de
exposicin. El rango crtico es humedad relativa es de 33% a 60% y debe ser mantenido durante toda la
operacin. Como el OET posee un coeficiente de temperatura elevado debe utilizarse la mayor
temperatura posible (40 C a 50 C) para reducir el tiempo de exposicin requerido, dependiendo de la
naturaleza de los materiales a esterilizar. Para una concentracin de OET de 500mg/l, a una temperatura
de 50 C y una humedad relativa del 60 % el tiempo de exposicin requerido es de 2 horas. Sin embargo,
debido a la incertidumbre acerca de la eficiencia del proceso , en las condiciones mencionadas suelen
emplearse tiempos de exposicin que van de 3 a 4 horas para lograr un margen de seguridad ms amplio.
En general y dependiendo de las condiciones de concentracin del OET, temperatura y humedad relativa, los
tiempos de esterilizacin pueden variar entre 3 y 36 horas.

Debido a que el OET puede ser absorbido por muchas sustancias como gomas, plsticos y fibras debe ser
removido de los materiales esterilizados. La desgasificacin puede realizarse dejando el material en
depsitos o bien en estufas de desgasificacin que funcionan con circulacin de aire forzado. El tiempo de
desgasificacin depende de la capacidad de absorcin del material esterilizado y nunca es inferior a 24
horas.
Este mtodo de esterilizacin resulta inadecuado par alimentos con alto contenido de protenas y
vitaminas, o compuestos con grupos sulfhidrilos.
Dado que es altamente penetrante puede emplearse para la esterilizacin de artculos en paquetes sellados.
Descripcin del equipo
Se utilizan autoclaves diseados especialmente para trabajar con este gas. Hay equipos que funcionan con
una nica cmara, otros con dos: una destinada al proceso de esterilizacin y otra al de desgasificacin.
Poseen sistemas de control de temperatura, humedad, presin y tiempo. Pueden ser totalmente
automticos o semiautomticos. Se trabaja siempre con gas licuado que pasa a la forma gaseosa en la
etapa de inyeccin a la cmara. De acuerdo a la capacidad y diseo del equipo el OET licuado se dispone
en ampollas de vidrio, cpsulas de aluminio descartables con sistema en aerosol o cilindros de metal.
Los sistemas deben permitir el procesamiento de los distintos materiales en sus envases hermticos de
proteccin, logrando con la mayor seguridad posible, ciclos rpidos y confiables. El diseo debe ser tal
que se puedan operar en reas normales de esterilizacin con energa elctrica y sin suministro de
componentes especiales. El equipo consiste en una cmara consrtruida en acero inoxidable con una puerta
de cierre hermtico. La cmara est calefaccionada por un sistema de resistencias elctricas
termostticamente controladas. El interior del recinto posee las siguientes conexiones: 1 a un sistema de
vaco, 2 a un sistema inyector de humedad, 3 a un sistema inyector de gas, 4 a una entrada de aire filtrado.
Ciclo de operacin
Se carga el autoclave y se selecciona la temperatura.
Se hace vaco hasta 0,1 a 0,5 atm.
Se humidifica.
Se inyecta el OET y se realiza la esterilizacin.
Se evaca el gas por medio del sistema de vaco, haciendo burbujear el gas en agua.
Se inyecta el aire filtrado hasta igualar la presin atmosfrica. Las operaciones 5 y 6 pueden repetirse.
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Radiaciones
Los tipos de radiacin disponibles para esterilizacin son rayos , rayos , protones y electrones.
Ninguno de los mencionados anteriormente tiene suficiente poder de penetracin como para resultar de
utilidad. Los neutrones rpidos pueden ser empleados en la prctica, con varias limitaciones. El tipo de
radiacin electromagntica ms ampliamente empleado tiene muy corta longitud de onda, se denominan
radiaciones ionizantes y entre ellas se encuentran los rayos X y los rayos . Otro tipo de radiacin usada
es la ultravioleta (UV) que se clasifica como no ionizante.
Radiacin UV
La muerte de las bacterias comienza a apreciarse a 330 nm y aumenta rpidamente al disminuir la
longitud de onda, observndose la accin letal ms efectiva a 260 nm, que corresponde al mximo de
absorcin de los cidos nucleicos. El efecto principal se debe a la formacin de dmeros de pirimidinas en
una de las cadenas del DNA lo que distorsiona la molcula e impide su replicacin normal.
Los factores que influyen en la efectividad de este proceso de esterilizacin son:
1.Cuanto ms prolongado sea el tiempo de exposicin mayor efectividad del tratamiento,
2. La intensidad depende de la potencia de la lmpara, distancia a la que se encuentra del objeto, clase y
cantidad de material que interfiere el paso de los rayos. La presencia de polvo sobre la lmpara reduce su
efectividad al igual que un exceso de humedad ambiente (ms del 80 %).
3. Poseen bajo poder de penetracin, no atraviesan el vidrio ni objetos opacos. Su utilizacin queda
limitada a la esterilizacin de aire, agua en delgadas capas y superficies.
Las clulas secas son ms resistentes a este tipo de radiacin que las hmedas y las pigmentadas ms
resistentes que las no pigmentadas.
La aplicacin de las radiaciones UV queda circunscripta a reducir la poblacin microbiana del aire y
superficie de quirfanos, cubculos de siembra en laboratorios, recintos de envasado en la industria
farmacutica y alimenticia.
Radiaciones ionizantes
La radiacin ionizante no mata por afectar directamente a los componentes de la clula, sino que lo hace
indirectamente al inducir la formacin de radicales libres en el medio. Estos reaccionan con
macromolculas fundamentales de la clula y las inactivan. Si bien actan sobre todos los componentes
celulares, la muerte se produce por afectar especialmente al DNA originando un dao irreversible.
La radiacin ionizante presenta la ventaja de poseer una mayor capacidad de penetracin (los rayos
penetran capas de hasta 60 cm de agua), pero requieren instalaciones costosas y rigurosas medidas de
seguridad para el operador.
Las formas esporuladas son extraordinariamente resistentes a este tipo de radiaciones, probablemente por
su bajo contenido de agua.
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Las radiaciones ionizantes se utilizan en la esterilizacin de productos farmacuticos, artculos mdicos y

odontolgicos descartables como jeringas plsticas, catteres, guantes, bobinas de celofn para
hemodilisis y en la preservacin de alimentos.
Filtracin
El proceso de filtracin difiere de otros mtodos de esterilizacin en que slo puede aplicarse a fludos
(lquidos y gases) y los contaminantes slo son removidos, no destruidos. El mtodo es rpido, puede
llevarse a cabo a cualquier temperatura y es el mtodo de eleccin para soluciones que contienen
componentes termolbiles.
Los microorganismos en suspensin se comportan como partculas cargadas y pueden ser removidas
como tales. Los mecanismos de retencin de tales partculas en el lecho del filtro comprenden tamizacin,
adsorcin, efectos de tensin superficial en las pelculas capilares retenidas y atrapamiento en los pliegues
de los canales del filtro. Los dos primeros son de mayor importancia en la filtracin de lquidos; y el
primero y el ltimo en la filtracin de gases. Solamente la tamizacin, donde la partcula es de mayor
tamao que el poro, puede considerarse absoluto. Los otros procesos involucran un cierto grado de
probabilidad de retencin, lo cual depende de una variedad de factores tales como la velocidad de flujo, la
densidad de carga sobre la partcula, la profundidad y naturaleza del lecho filtrante, etc.
Los filtros de profundidad estn constituidos por una matriz de fibras o microesferas comprimidas y
orientadas al azar. El resultado es una estructura tortuosa con mltiples canales de muy diversos tamaos.
Ejemplos de este tipo de filtros son los de algodn, lana, papel poroso, porcelana, polmeros plsticos,
vidrio y metal sinterizado y tierra de diatomeas. Entre sus ventajas podemos enumerar que retienen
partculas en su superficie y tambin en su matriz interna, por lo que tienen una gran capacidad de
retencin cuantitativa de contaminantes. Las desventajas que poseen son:
no tienen un tamao de poro definido. Su matriz formada al azar no permite establecer un
lmite de tamao de partcula cuya retencin ser absoluta. Se asigna un tamao de poro de
manera en forma nominal.
debido a su estructura discontinua, se produce migracin del medio filtrante, apareciendo
fragmentos del propio filtro en la solucin filtrada.
los microorganismos retenidos en su matriz pueden alcanzar la cara inferior del filtro para luego
caer al lquido filtrado.
absorben lquido en su interior lo que genera mayor gasto econmico en la filtracin de lquidos
costosos.
Los filtros de membrana estn constituidos por una lmina uniforme, rgida y continua de material
polimrico poroso. Algunos de los materiales utilizados en la fabricacin de estos filtros son steres de
celulosa y policarbonato, entre otros. Las ventajas que tienen son que poseen un tamao de poro definido,
la membrana es muy fina y retiene muy poco lquido. El medio filtrante no migra y no contamina el fluido

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filtrado. Su desventaja es que la retencin de contaminantes se realiza exclusivamente en la superficie del

filtro por lo que su capacidad de retencin cuantitativamente es baja.
El filtro, ya sea de membrana o de profundidad, se monta convenientemente sobre un soporte y se inserta
en un kitasato receptor. El conjunto se esteriliza por calor hmedo.
A fin de favorecer la filtracin puede utilizarse presin positiva sobre el lquido no filtrado o conectar el
recipiente receptor a un sistema de vaco. La presin positiva resulta ms prctica pues permite el cambio
de recipiente sin tener que manejar el filtro y, adems, los filtrados que contienen protenas no forman
espuma. Otra ventaja del empleo de presin positiva es que se evita la posibilidad de contaminacin del
fluido filtrado debido a pequeas prdidas en el sistema de conexin o en el momento que se desconecta
el sistema de vaco. Para evitar posibles contaminaciones del filtrado, cuando se utiliza un sistema de
vaco, por la lnea de conduccin del vaco, se acopla al sistema un filtro de aire.
Controles de Esterilizacin
Son los controles que se efectan par comprobar si se cumplieron las condiciones del mtodo empleado.
Existen distintos tipos de controles de esterilizacin:
biolgicos. Utilizan suspensiones de esporas bacterianas, de resistencia conocida al
tratamiento, que se secan sobre un soporte como tiras de papel de filtro, por ejemplo. Segn
el proceso que se desea controlar deben usarse los siguientes indicadores biolgicos: para
calor hmedo Bacillus stearotermophilus, calor seco Bacillus subtilis var. niger o
Clostridium tetani, xido de etileno Bacillus subtilis var. niger, radiaciones ionizantes
Bacillus pumilus o Streptococcus faecium.
qumicos. Son sustancias qumicas de punto de fusin conocido y bien definido. Los
esterilmetros son tiras de papel marcadas con xidos minerales que cambian decolor al
alcanzarse una determinada temperatura. Algunos indican temperatura y tiempo.
fsicos. Consisten en registros de temperaturas que se realizan durante todo el ciclo de
esterilizacin por calor. Un dispositivo capaz de efectuar este tipo de registro es la
termocupla. Las termocuplas son alambres conductores y funcionan por un flujo de
corriente elctrica creado en un circuito continuo constituido por dos metales cuyas juntas
se encuentran a dos temperaturas diferentes. Puede representarse mediante el siguiente
diagrama

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T2 Junta
fra
T1 Junta
caliente

B
Termocupla
Autoclave

A y B son dos metales, T1 y T2 son las temperaturas de las juntas respectivas, i representa la corriente
termoelctrica que fluye por el circuito. A es tomada como referencia termoelctricamente positiva
respecto de B, si T2 es la temperatura menor.

Control de esterilidad
Este ensayo es realizado sobre muestras o alcuotas del material que fue sometido a algn proceso de
esterilizacin, con el fin de comprobar ausencia total de microorganismos viables.
Medios de cultivo
Medio fluido tioglicolato (MFT)
Este medio se utiliza para la investigacin de
grmenes anaerobios. Contiene L-cistena, dextrosa, NaCl, extracto de levadura, digerido
pancretico de casena, tioglicolato de sodio, resazurina, gar al 0,075 %. pH=7.1.
Condiciones de incubacin: 30 C-35 C en aerobiosis.
Medio de tioglicolato alternativo
dem anterior pero sin gar. Condiciones de
incubacin: 30 C-35 C en atmsfera anaerbica.
Medio caldo casena-soja (CaSoy)
Es un medio universal, sin inhibidores ni
indicadores. Apto para el crecimiento de microorganismos exigentes por aportar una gran
base nutritiva. Contiene: peptona de casena, peptona de harina de soja, NaCl, K 2HPO4,
glucosa. pH=7.3. Condiciones de incubacin: 20 C -25 C en aerobiosis.
Soluciones diluyentes y de lavado
Peptona 0,1 %. pH=7.1.
Peptona 0,1 % con Tween 80 (dispersante) al 0,1 %. pH=6.9.
Todo tipo de solucin que se considere apropiada para disolver, diluir o lavar un artculo en ensayos de
esterilidad no deber tener efecto inhibitorio.
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Control de los medios empleados

Se deber controlar la esterilidad de cada lote de medio empleado y la capacidad de permitir el desarrollo
de los posibles grmenes contaminantes.
La esterilidad de cada lote se puede confirmar mediante la incubacin de un nmero representativo de
medios, en condiciones de temperatura y tiempo especficos.
La capacidad de permitir el desarrollo se prueba inoculando cada tipo de medio empleado, por
duplicado, con 10-100 microorganismos viables. A continuacin se indican los microorganismos a
inocular en cada medio de cultivo
Resultados
El ensayo se considera positivo si hay desarrollo en todos los tubos sembrados dentro de los siete das. El
ensayo es negativo si algn tubo no presenta desarrollo.

Procedimiento general
El control de esterilidad puede realizarse segn dos tcnicas diferentes:
o transferencia directa al medio. Si la muestra a controlar es:
a) lquida. Inocular la muestra con pipeta o jeringa estril en los medios especficos para microorganismos
aerobios y anaerobios. El volumen de muestra y el volumen de medio de cultivo se especifica en la tabla
1. Deben tomarse 20 muestras representativas conteniendo la muestra, se incubarn los tubos de control
de medio, control de pipetas y dems controles que se consideren necesario, segn el artculo controlado.
Incubar todos los tubos durante 14 das, haciendo observaciones peridicas, por ejemplo: 1 al 5 da, 8 al
14 da. Los tubos de MFT se incubarn a 30-34C y los tubos de caldo CaSoy a 20-25C.
b) slida. Tomar una cantidad del producto (~ 300 mg) y transferirlo a 40 ml de caldo CaSoy y 40 ml de
MFT. Si se trata de algodn, gasas, vestimenta de ciruga, hilos de sutura, etc. Sembrar la muestra en 40
ml de cada medio. Si se trata de muestras nicas de gran tamao se sembrarn dos o ms porciones de
100 a 500 mg de peso. Si el material esta acondicionado para su uso individual tomar porciones de 250 a
500 mg o toda la muestra si es menor que 250 mg.
o filtracin por membrana. Se prepara la unidad filtrante adaptando el filtro con la
membrana de 0,45 m (esterilizado en autoclave) a un kitasato. La filtracin puede
realizarse mediante una bomba de vaco o sobrepresin.
a) Si se trata de muestras lquidas se filtra directamente un volumen determinado de cada
muestra. Se lava con una solucin de lavado. Terminada la filtracin se desajusta el filtro y
se toma la membrana con una pinza estril, luego se la corta con una tijera estril: una mitad
se siembra en 100 ml de MFT, la otra se coloca en igual volumen de caldo CaSoy.
b) En caso de slidos no filtrables (artculos que contienen recorridos estriles como sondas y
guas) se pasa un volumen suficiente solucin de peptona al 0,1 % ms Tween 80 al 0,1 % a
14

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travs de no menos que 20 muestras, de forma que se recuperen 100 ml de cada muestra.
Se juntan todas las soluciones de lavado en recipientes estriles y se filtran a travs de
membrana. Una vez terminada la filtracin se sigue como se mencion anteriormente.
El mtodo de eleccin, mientras sea posible, es por filtracin. Este procedimiento es usado para lquidos y
polvos solubles, que tengan efecto inhibitorio. Puede ser aplicado a cremas, aceites, ungentos. Tambin
es til para productos sin efecto inhibitorio. Asimismo, existen diseos que emplean la tcnica de
filtracin para ensayos de esterilidad de sondas y guas, por ejemplo.
Para la apertura de la muestra a controlar el exterior de los envases (ampollas, viales, frascos, bolsas,
cartuchos, pomos, etc.) se debe limpiar con un agente decontaminante, por ejemplo alcohol al 70 % o
formol al 5 %. Durante todo el ensayo se debe trabajar en rea estril y en forma asptica.

Tabla 1

Volumen mnimo de cada medio

Contenido de muestra
Mnimo Transferencia
Tcnica por
(ml)
volumen de
directa al
filtracin
muestra
medio
menor de 10 ml
1 ml o todo el
15 ml
100 ml
contenido si
es menor
0 ml a menos de 50 ml
5 ml
40 ml
100 ml
50 ml a menos de 100 ml
10 ml
80 ml
100 ml
100 ml a 500 ml
todo el
-100 ml
contenido
mayor de 500 ml
500 ml
-100 ml

Nmero de
muestras por
medio
20 ml
20 ml
20 ml
10 ml
10 ml

Interpretacin de los resultados

Primera etapa
Examinar a los intervalos mencionados todos los tubos sembrados segn la presencia de turbiedad. Si no
hay desarrollo el artculo rene los requisitos del test de esterilidad. Si hay desarrollo pero revisando los
controles de los materiales usados, procedimientos, etc., se encuentra que no hay asepsia en la tcnica
realizada, sta primera etapa se considera invalidada y debe repetirse. Si hay desarrollo pero no existe
evidencia de falta de asepsia, esta primera etapa es vlida y debe realizarse una segunda etapa.
Segunda etapa
Se trabajar con doble nmero de muestras ensayadas en la primera etapa. El volumen empleado de cada
muestra, medios y condiciones de incubacin no presentan variacin. Si luego de la incubacin no hay
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Microbiologa General
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desarrollo en ninguno de los tubos el artculo rene los requisitos del test de esterilidad. Si hay desarrollo
y los controles evidencian alguna falla en la metodologa se debe repetir esta segunda etapa. Si hay
desarrollo pero no existe evidencia de falta de asepsia en la tcnica empleada, el artculo no rene los
requisitos para pasar el test de esterilidad.

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