Microbiologa General

Facultad de Ciencias Exactas - UNLP

Seminario: Pruebas bioqumicas e identificacin

1- Con el propsito de conocer la calidad sanitaria de helados de fabricacin industrial y
la presencia de especies patgenas en los mismos, se examinaron una serie de
muestras procedentes de 5 establecimientos elaboradores de San Luis. Se investig la
presencia de Staphylococcus aureus y Yersinia enterocoltica en 1 g.
El St. aureus es un coco Gram+, anaerobio facultativo, reduce las sales de telurito a
teluro con ennegrecimiento de los medio e hidroliza lecitina (fosfolpido).
a) Seleccione y fundamente las pruebas mnimas que debera realizar para lograr la
identificacin del microorganismo investigado.
Prueba bioqumicas St. aureus
Lecitinasas
+
Reduccin de telurito +
OF-glucosa
F
Ferm. manitol
+
Reduccin de nitrato +
Hemolisinas
+
Novobiocina
S

St. epidermidis
+
+
F
V
V
S

St. saprophyticus
+
+
F
V
R

Micrococcus
+
+
O
ND

b) Explique y fundamente cmo puede determinar la tolerancia por el oxgeno que posee
el microorganismo.
c) Explique cmo se lleva a cabo la prueba de reduccin de nitratos y cul es el
fundamento de la prueba.
d) La siguiente Tabla presenta la proporcin de resultados positivos para una serie de
pruebas para cuatro cepas de Staphylococcus aureus. Considerando los resultados
obtenidos en pruebas complementarias, calcule la probabilidad de identificacin a nivel
de cepa del microorganismo estudiado: Pigmentos (+),-hemolisinas(-), hemolisinas(+), Cloranfenicol (S), Ampicilina(R) y Eritromicina (R).
Prueba
Pigmentos
-hemolisinas
-hemolisinas
Sensibilidad a:
Cloranfenicol
Ampicilina
Eritromicina

St.1
0.92
0.13
0.90

St.2
0.50
0.20
0.98

0.99
0.45
0.95

0.85
0.20
0.01

Microorganismos
St.3
0.65
0.15
0.75
0.01
0.05
0.10

St.4
0.05
0.65
0.01
0.90
0.80
0.70

2- Con el objetivo de determinar la especie de una cepa de Pseudomonas, se realizaron

las pruebas que figuran en la tabla obtenindose los siguientes resultados: NO 3- (+),
Gelatina (+), Manitol (+), Arabinosa (-) y Manosa (+)
Porcentaje de reacciones positivas en distintas especies del gnero Pseudomonas

Pruebas
Utilizacin de NO3Gelatina
Manitol as.
Arabinosa as.
Manosa as.

P. aeruginosa
96
92
89
1
1

P. putida
3
0,3
5
70
57

Especies
P. cepacia
39
85
96
75
99

P. stutzeri
94
1
67
1
10

a) Explique como puede determinar el tipo de metabolismo que posee y cul es el

fundamento de la prueba.
b) Cmo se realiza la prueba de asimilacin de azcares?
c) Exprese grficamente la relacin de semejanza existente entre la bacteria aislada y
las citadas como referencia. Justifique el procedimiento. Considere como positivos
aquellos valores 50%.
3- Usted desea realizar un anlisis de agrupamiento de tres cepas de E. coli aisladas
de agua (I, II y III) con tres cepas de referencia (E. coli 1, E. coli 2 y E. coli 3).
Utilizando un sistema de identificacin comercial, se encuentran los siguientes
resultados:
PRUEBA CEPAS
I
TDA
H2S
ESC
IND
+
URE
LDC
+
ODC
+
ADH
+
GLU
+
CIT
MAL
VP
RHA
+
SUC
ADO
INO
XYL
+
SORB
ONPG
+
ONPX
+
PGUR
+

II
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+

a) Construya la matriz de similitud.

III
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+

E. coli 1
+
+
+
+
+
+

E. coli 2
+
+
+
+
+
+
+

E. coli 3
+
+
+
+

b) Agrupe los microorganismos de la tabla utilizando un dendrograma. Utilice el mtodo del

ligamiento promedio.
4- La proporcin de resultados positivos para una serie de pruebas para cinco
microorganismos se muestra a continuacin:
PRUEBA
citrato
movilidad
VP
oxidasa
indol

MICROORGANISMOS
I
II
0.95
0.50
0.05
0.95
0.01
0.95
0.50
0.01
0.80
0.01

III
0.95
0.95
0.01
0.05
0.99

IV
0.01
0.05
0.20
0.30
0.99

V
0.99
0.01
0.60
0.78
0.01

a) Se aisla un microorganismo que tiene las siguientes caractersticas: citrato (-), movilidad
(+), Voges Proskauer (-), oxidasa (-) e indol (+). Calcule la probabilidad de que sea cada
uno de los microorganismos de la tabla. Cul es la probabilidad de identificacin?
b) Explique cmo se lleva a cabo la prueba de citrato, cul es el fundamento de la misma y
cmo debera darle dicha prueba a su aislado.
c) Explique cmo se lleva a cabo la prueba de Voges Proskauer, cul es el fundamento de
la misma y la interpretacin de la misma teniendo en cuenta el resultado de su aislado.
Para concluir que tipo de fermentacin realiza su aislado, debera hacer alguna otra
prueba? Fundamente.
5- La leche vacuna es susceptible a la accin de microorganismos. Los equipos utilizados
para ordear, transportar, almacenar y procesar la leche parecen ser la fuente principal de
contaminacin. Ciertas especies de Pseudomonas son la principal causa de
enranciamiento, tambin Alcaligenes y Staphylococcus. La viscosidad se atribuye a la
proliferacin de microorganismos coliformes (Escherichia coli y Enterobacter aerogenes,
ambos Gram (-)), Alcaligenes, Micrococcus y Bacillus spp.
Las bacterias del cido lctico (Streptococcus, Pediococcus, Leuconostoc y Lactobacillus),
todas Gram (+), son bacilos cortos o largos o cocos, no forman esporas, excepto
Sporolactobacillus inulinus. Para la obtencin de energa dependen exclusivamente de la
fermentacin de hidratos de carbono y excretan cido lctico produciendo el agriamiento de
la leche. Son bacterias anaerbicas pero aerotolerantes, pueden crecer con oxgeno
atmosfrico. No son capaces de reproducirse en medio mineral con glucosa y sales
amnicas. Requieren para su desarrollo una serie de vitaminas (lactoflavina, tiamina, cido
pantotnico, cido nicotnico, cido flico, biotina) y aminocidos, purinas y pirimidinas. Por
esta razn se cultivan sobre medios complejos, que contienen cantidades relativamente
altas de extracto de levadura, jugo de tomate, suero y sangre. Son capaces de utilizar
lactosa al igual que E. coli. Son catalasa (-). El gnero Streptococcus, Gram (+), no
formador de esporas, no mvil, es anaerobio facultativo. Las clulas son de forma esfrica u
ovoide y se ordenan en cadenas o pares. La formacin de cadenas se aprecia mejor a
partir de cultivos en medios lquidos. Fermenta los carbohidratos principalmente con
produccin de cido lctico, sin gas. Algunas especies fermentan cido mlico y ctrico y los
aminocidos serina y arginina. Es catalasa negativo. Su temperatura ptima de crecimiento
es de 37 C. El colorante cristal violeta, en concentracin del orden de 0,0002 g/litro, resulta
inhibitorio para la flora Gram (+) pero no perjudica el desarrollo de Streptococcus y puede

usarse como factor selectivo. Los Streptococcus hemolticos son estimulados

intensamente por los cidos nucleicos presentes en el extracto de levadura y por el
aminocido lisina.
Una cepa aislada a partir de una muestra de leche cruda muestra al microscopio cocos en
cadena, fermenta glucosa, maltosa, sacarosa y trehalosa generando cido. Fermenta
glicerol slo aerbicamente. En una placa de gar sangre crece rpidamente, dando
hemlisis . Puede desarrollar en medios conteniendo 40% de bilis. En placas con DNA
muestra, luego del revelado, un halo traslcido alrededor de la estra.
a) Basndose en la descripcin proponga un protocolo para aislar Streptococcus spp a
partir de una muestra de leche cruda indicando medios y cantidades necesarios, tiempos y
temperatura de incubacin. Indique si considera necesario realizar algn tipo de coloracin
en alguna etapa del aislamiento.
b) Suponga ahora que ha logrado aislar la cepa mencionada y tiene un cultivo puro
conservado a 4C en gar inclinado. Enumere las pruebas bioqumicas que podra emplear
para su identificacin e indique cmo procedera para inocular las mismas a partir de ese
cultivo. Especifique medios, tiempos y temperaturas de incubacin, as como los resultados
que arrojar cada prueba. D el gnero y la especie del microorganismo aislado.
Caractersticas
cido a partir
de lactosa
manitol
rafinosa
ribosa
trehalosa
-hemlisis
-hemlisis
DNAsa
Voges-Proskauer
*Algunas cepas.

Streptococcus
agalactiae dysgalactiae
+

pneumoniae
+

+
+
+*
-

+
+
+
+*
+

+
+
+
NT
-

+
NT
-

pyogenes

+
+
+
NT
-

equi

NT No testeado.

c) Cmo procedera para aislar Pseudomonas de esta misma muestra? De acuerdo a la

informacin que maneja qu pruebas sugerira para identificarla?