Virus de l'hpatite A et E

Virus et marqueurs diagnostiques

Vincent THIBAULT
Laboratoire de Virologie
Groupe Hospitalier
Piti-Salptrire
Assistance Publique Hpitaux de Paris
V.Thibault DU_janv.-11 1

Hpatites virales
mode de transmission prfrentiel

parentral

1965
Vaccin

1977

fco-oral

non A, non B

1972

1991

1990

(Vaccin)

F, G, TTV, autres
V.Thibault DU_janv.-11 2

Vaccin

V.Thibault DU_janv.-11 3

Historique VHA
Avant J.C.: La Jaunisse (Ikterus / kirrhos)
1745 : Cockayne, hpatites pidmiques
1908 : McDonald, "notion de virus"
Reproduction de la maladie 1942 :
Volontaires (Voegt, Havens), Paul 1943 ingestion feces/serum
Entit clinique :
17-18me sicle - 1923 Blumer - 1947 McCallum (VHA

1995 : Vaccin
"infectious"1996
-VHB: recommandations
"serum")

Transmission nosocomiale (prparation vaccinale : variole, fivre jaune)

Visualisation : 1973 (Feinstone)

Dveloppement de la srologie : pidmiologie
1979 : culture (Provost et Hilleman)
1981... : Clonage, Squences nuclotidiques
1991 : Vaccination
2006 : Dclaration obligatoire
V.Thibault DU_janv.-11 4

1999 : recommandations

Virus de l'hpatite A

V.Thibault DU_janv.-11 5

Virus de lHpatite A

(entrovirus type 72)

Capside
27-32nm
ARN (+)
Vpg

V.Thibault DU_janv.-11 6

Famille : Picornaviridae

Genre : hpatovirus

Taille 27-32 nm

Non envelopp

Structure icosadrique

ARN simple brin,

polarit positive

li de faon covalente
une protine Vpg

P1 prot. Capside

P3

Structurales

Vpg
2.5kDa

P2

1B

1C

Non structurales

1D

2A

2B

2C

1A

IRES
Traduction

(eIF-4G)

2A
VP2

VP3

VP1

2B

2C

3 3C (PRO)
A-B
3
A-B
3C (PRO)

7478
3D (POL)

3D (POL)

VP4
?
Liaison NTP
Hlicase

VP0
VP2

VP3

VP1

VP4

2A
VP2

VP4

Vpg

VP3

V.Thibault DU_janv.-11 7

Rplication
X5 X12

VP1

Protines de surface
immunognicit

Protase

2A

Maturation finale

ARN
Polymrase

AAA

polyprotine
2 227 AA

Cycle de multiplication du VHA en culture de cellules

Attachement
Libration
du gnome

cellula
ir e

+
Traduction
Synthse
de la polyprotine

rane

Espace
de Disse

Rplication

Memb

P3
P2
P1

+
-

Maturation

Rticulum
endoplasmique
Empaquetage

Canalicule
Relargage
biliaire
V.Thibault DU_janv.-11 8

Hepatitis A Virus Suppresses RIG-I Mediated IRF-3 Activation To

Block Induction of Beta Interferon

*
*

Seth et al. Cell Research (2006)16: 141-147

Fensterl et al. JOURNAL OF VIROLOGY, Sept. 2005, p. 1096810977
Yang et al. (2007) PNAS 104 :7253-7258
V.Thibault DU_janv.-11 9

VHA : physiopathologie
Absence d'effet cytopathique direct :
cytolyse rsultant du processus immun de
dfense de l'hte,
mdiation cellulaire
mdiation humorale

V.Thibault DU_janv.-11 10

Proprits Physiques du VHA

Agents

Stabilit

Chaleur
Autoclavage (121C, 20')
100C
60C
temprature ambiante

4C
Congel

Acide-base
U.V.

Inactivation
Inactivation
Stable 1 heure
Stable 1 mois (selles, eaux, sols)
Plusieurs jours sur surface sche
4 h. Sur les mains
Stable plusieurs mois
Stable des mois ou annes
pH 1 : stable 5 h.
PH 3-11 : stable au moins 30'
Inactivation

Chimiques
Chlore, ozone,
glutaraldhyde, iode
Alcool 70
V.Thibault DU_janv.-11 11

Inactivation
3' : inactivation partielle

VHA et agents physiques ou chimiques

http://www.invs.sante.fr/publications/2009/guide_hepatite_a

V.Thibault DU_janv.-11 12

Variabilit gntique
P1 prot. Capside

P3

Structurales

Vpg
2.5kDa

P2

1B

1C

1D

Non structurales
2A

2B

2C

1A

3 3C (PRO)
A-B

7478
3D (POL)

Comparaison nuclotidique
7 Gnotypes : IA,B ; II; IIIA,B ; IV-VII
Homme : gnotype I (90%), (III, II=VII)
Singes : IV, V, VI

Srotype unique
Nombre limit d'pitopes antigniques VP1, VP3
Tests immunologiques
Vaccination (HM175, CR326)
virus inactiv cultiv sur MRC-5
V.Thibault DU_janv.-11 13

AAA

Gnotypes et
phylognie
VP1/P2A
Gnotypes : >15% variations
Sous types : 7.5% variations

D'aprs Nainan et al. 2006

Clin. Microb. Rev. ; 19:63-79

IV Nonhuman primate, Philippines

V Nonhuman primate, Kenya
VI Nonhuman primate, Indonesia

Phylogenetic analysis of 3,582 HAV isolates

in the VP1/P2B region (315-bp fragment).
V.Thibault DU_janv.-11 14

Rpartition mondiale des gnotypes

Gnotypes infectant l'homme en noir , les singes en rouge.

Souche PA21 (gnotype IIIA), isole d'un singe Panamanian Owl en vert.
Cristina J, Costa-Mattioli M. Virus Res. 2007 Aug;127(2):151-7.
V.Thibault DU_janv.-11 15

Application l'tude
de diffusion de
certaines souches

Diffusion du gnotype IIA en

France partir d'une origine
Africaine
II

Diversit gntique dun gnotype rare

du virus de lhpatite A
Pathologie Biologie, In Press, Available
online 6 September 2010
D. Desbois et al.
V.Thibault DU_janv.-11 16

III

VHA : Paramtres Biologiques

Ac anti-VHA = hpatite A ancienne ou vaccination
IgM anti-VHA = hpatite aigu A (clinique)
protection contre rinfection

IgG

Ag foie
Symptomes
Ictre

VHA Selles

IgM

VHA Sang

V.Thibault DU_janv.-11 17

10
24
Semaines

IgM HAV uniquement bon escient !

1%
11 %
82 %

Faux positifs
Roque Afonso et al. CID 2006:42 -887

Alaska : test "rflexe" si Ig-VHA totales +

32 % de faux + (Castrodale CID 2005:41;e86)

Ig M HAV

Vaccination : 8 20 % d'IgM VHA + dans les 2 3 semaines suivant

l'injection
NE RECHERCHER L'IgM anti-VHA QU'EN CAS D'HEPATITE AIGU
V.Thibault DU_janv.-11 18

Marqueurs biochimiques

Diagnostic

Transaminases (ALAT, ASAT)

Bilirubine
Phosphatase alcaline
Facteurs de coagulation

Srologie +++
IgM anti VHA : infection rcente
IgG anti VHA : infection passe ou vaccination
IgM et IgG anti VHA
Diagnostic direct (-) [uniquement dans le cadre d'tudes]
Virmie : techniques sensibles (105 v./mL)
Recherche de virus dans les selles, prolonge, importante
(109v./mL), pidmiologie
Salive :
IgG (ELISA)
V.Thibault DU_janv.-11 19

Gnome viral (RT-PCR)

Quantification de la virmie ?

Limite de
quantification

11 Hpatites A
Normann et al.,

Journal of Medical Virology 72:1016 (2004)

Hpatite fulminante

Evolution bnigne

50 Hpatites A dont 19 fulminantes (10 OLT)

Hpatite fulminante :
-virmie (p=0.03) *
-bilirubine -(p=0.04) *
-age (p=0.09)
-gnotype non IA (p=0.09)
Rezende et al., Hepatology 38:613-618 (2003)
V.Thibault DU_janv.-11 20

Fujiwara K et al.
J. Med Virol. 2011 Feb;83(2):201-7.

Hepatitis A viral load in relation to

severity of the infection.
11 patients with fulminant hepatitis
10 with severe acute hepatitis
70 with self-limited acute hepatitis

Dure de la virmie: consquences cliniques et biologiques

6-7

5-6

2-5 Log particules/mL

Suivi de 13 patients : dure moyenne 95 jours

dont 2 avec rechute (1-2 mois)
Duration of viremia in hepatitis A virus
infection
Bower et al. Journal of Infectious Diseases

2000;182:127

V.Thibault DU_janv.-11 21

Suivi de 27 patients
High and Persistent Excretion of Hepatitis A
Virus in Immunocompetent Patients

Tjon et al.
Journal of Medical Virology 78:13981405 (2006)

Hpatite A : le vaccin
virus inactiv

AVAXIM 160U suspension injectable seringue prremplie

Virus de l'hpatite A souche GBM cultive sur cellules diplodes humaines MRC5 , inactiv

HAVRIX 1 440 U Elisa/ml susp inj IM Ad en seringue

HAVRIX 720 U Elisa/0,5 ml susp inj IM Enf/Nour en seringue
Souche HM 175 du virus de l'hpatite A cultive sur cellules humaines
diplodes MRC5

Le schma vaccinal habituel comprend 1 dose suivie d'un rappel (1 dose) 6

12 mois plus tard.
La

persistance

des

anticorps

anti-VHA

aprs

vaccination

n'est

actuellement pas connue . Les donnes disponibles suggrent la persistance

des anticorps anti-VHA un niveau protecteur au moins jusqu' 20 ans
aprs primo-immunisation.
Hepatitis A Vaccine versus Immune Globulin for Post-exposure Prophylaxis

Victor et al. 2007 N Engl J Med 357;17

V.Thibault DU_janv.-11 22

Difficults diagnostiques
En routine
Adresser prlvements
au
Centre national de rfrence du VHA
Pr E Dussaix
Laboratoire de virologie
Hpital Paul Brousse
12-14 av Paul Vaillant Couturier
94804 Villejuif cedex
Tel : 01 45 59 37 21

http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste
V.Thibault DU_janv.-11 23

SRAS ?

Hpatite E ?

V.Thibault DU_janv.-11 24

Grippe

Historique VHE
Dcouverte dpendante de la connaissance des virus des hpatites
1955 : Inde, hpatite chez des personnes immunises contre le
VHA, pidmie particulire. "NANBH"
Entit clinique 1980 - similitude avec lhpatite A :
Inde : prvalence de lhpatite A importante
Epidmie : autre virus des hpatites, contamination par leau
1983 : reproduction de lhpatite non A-non B chez un volontaire
immunis contre VHA (Balayan)
Hpatite J36
J28-45, visualisation de particules virales > VHA (27-30nm)
Reproduction de linfection chez le singe (cynomolgus)
Hpatite "non A - non B" transmission entrique (ENANB)
1990 : Reyes et al. clonage et squenage "VHE"
1991 : Tam et al. VHE
2000 : Panda et al. cDNA infectieux
V.Thibault DU_janv.-11 25

Coloured transmission electron micrograph of hepatitis E virus particles (purple)

Holmberg, Lancet Vol 376 September 11, 2010

V.Thibault DU_janv.-11 26

VHE
Famille : Hepeviridae
Genre : Hepevirus

Virus non envelopp

Sphrique (SRV)
Surface irrgulire
Capside 27-34 nm
Symtrie icosadrique

ARN simple brin

hlice droite
polarit +
7,5kb
poly-A extrmit 3

Stabilit
Au laboratoire : instable(-70 +8C)
Dconglation/conglation
Tractus GI : stable (pH)
V.Thibault DU_janv.-11 27

Organisation gnomique
Non structurales

Structurales
ARN polarit +

7 200 nt
5 NC

28

5109

7124

3NC
Poly-A

ORF3
MeT

Pro

Gnotypes 1-3

Hel

RdRp

ORF2
Protines
immunognes

DIAGNOSTIC

Htrognit gntique
Au moins 4 groupes majeurs (<20% htrognit ORF2) subdiviss
en 24 sous groupes dont homologues animaux
Epitopes majeurs : parties C-ter de lORF3 et ORF2
Protection croise entre diffrentes souches : un seul srotype

Dveloppement de tests srologiques (performances quivalentes entre

les diffrents types ?)
Vaccin : ORF 2 recombinante

V.Thibault DU_janv.-11 28

Similarits des souches humaines et animales

Bilic et al. Journal of General Virology
(2009), 90, 863873

Sporadique

Epidmique
humaines

aviaires
Unrooted phylogenetic tree of four avian HEV
and nine mammalian HEV isolates, based on
the complete genome region

V.Thibault DU_janv.-11 32

Anthropotropic

Evolution VHE

enzootic

536 to 1344 years ago

V.Thibault DU_janv.-11 33

Purdy MA, Khudyakov YE. Evolutionary history and population

dynamics of hepatitis e virus. PLoS One. 2010 Dec 17;5(12):e14376.

V.Thibault DU_janv.-11 35

Culture et Modles animaux

Culture
Difficile
Culture primaire dhpatocytes de macaques (cynomolgus)
Cellules PLC/PRF/5 hpatocarcinome (Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007)
Cellule embryonnaire

Modles animaux
Primates : reproduction de la pathologie humaine
Volontaires...
VHE du porc, du poulet
Prsence dAc chez poulet, porc, rat, souris, mouton...
Lapin Ma H et al.

Experimental infection of rabbits with rabbit and genotypes 1

and 4 hepatitis E viruses. PLoS One. 2010 Feb 11;5(2):e9160

V.Thibault DU_janv.-11 36

Rsistance thermique du VHE

VHE dans des suspensions fcales :

Inactivation : 70C 10' ou 95C 1 min;
56 C 30 min maintien de l'infectiosit
Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007

Colson et al. JID 2010:202

V.Thibault DU_janv.-11 37

VHE et contamination des eaux

Presence of hepatitis A virus (HAV) and hepatitis E virus (HEV) in
urban wastewater

Prdominance du gnotype 3

J. Rodriguez-Manzano et al. Excretion patterns of HAV and HEV infections

in Eastern Spain Journal of Water and Health 08.2 2010
V.Thibault DU_janv.-11 38

VHE : Paramtres Biologiques

Khuroo MS, Khuroo MS.
Seroepidemiology of a second epidemic of hepatitis
E in a population that had recorded first epidemic
30 years before and has been under surveillance
since then.
Hepatol Int. 2010 Feb 3;4(2):494-9

Titre peu lev

protection contre rinfection ?

IgG

Symptomes

Ictre

VHE Selles
VHE Sang

IgM

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Jours

V.Thibault DU_janv.-11 39

200

Virmie et excrtion fcale

Selles

Virmie

Dtection du RNA-VHE chez 20 patients ayant une hpatite E aigu

Aggarwal et al. THE LANCET Vol 356 September 23, 2000, p1081-1082

V.Thibault DU_janv.-11 40

Chandra NS et al. Dynamics of HEV viremia, fecal shedding

and its relationship with transaminases and antibody
response in patients with sporadic acute hepatitis E.
Virol J. 2010 Sep 6;7:213

HEV virmietransmission

selle

serum
salive

Concentr de plaquettes J0
Transfus un homme de
64 ans trait pour Lymphome
non-Hodgkinien
par
GM
autologue

IgG

IgM

Matsubayashi K, et al. Transfusion.

2008 Jul;48(7):1368-75.
V.Thibault DU_janv.-11 41

Immunodpression, hpatite chronique et

stratgie diagnostique

Dans le cadre d'une investigation chez un patient immuno dprim,

La dtection du gnome viral (RT-PCR) sera privilgie !
(ceci s'applique pour de nombreux diagnostics viraux - PCR)
Kamar et al. American Journal of Transplantation 2008; 8: 17441748
V.Thibault DU_janv.-11 42

Stratgie Diagnostique
Marqueurs non biologiques
circonstances de la maladie (voyage, autres causes, pidmie)
A adapter en fonction de la zone gographique ? (Sud versus Nord ?)

clinique : hpatite classique, absence de chronicit (chez

l'immunocomptent ! ) Portage prolong en cas d'immunodpression

Absence de marqueurs biologiques : diagnostic d'exclusion

Absence des marqueurs des virus des autres hpatites (A, B, C, D)
Notions srologiques pour dautres virus (EBV, CMV, herps)

Marqueurs srologiques spcifiques

IgM anti-HEV
IgG anti-HEV (+++)
RT-PCR : dtection du gnome viral (sang, selles)
ATTENTION : spcificit - performances
V.Thibault DU_janv.-11 43

Incidence des cas d'hpatite E en France :

un gradient Nord-Sud

Renou et al. 2008 Aliment Pharmacol Ther 27, 10861093

Nicand et al. Pathol Biol. 2009 Mar;57(2):203-11

V.Thibault DU_janv.-11 44

Performance des tests

Panels
50 srums ARN HEV (+), G3
406 srums IgG ARN HEV (-)
IgM anti-HEV

anti-HEV IgG

Microplaque
Adaltis

Microplaque
MP Diagnostics

Test rapide
MP Diagnostics

positif

ngatif

positif

ngatif

positif

ngatif

Positif (n=41)

40

39

37

Negatif (n=9)

Total (n=50)

45

44

41

Sensibilit

90

88

82

Spcificit

100

99.5

100

VPP

100

95.7

100

VPN

98.8

98.5

97.8

Legrand-Abravanel CLINICAL AND VACCINE IMMUNOLOGY, May 2009, p. 772774

V.Thibault DU_janv.-11 46

Stratgie Diagnostique

Se donner les moyens de faire le diagnostic

Diagnostic Indirect
Diagnostic Direct
Recherche de l'immunit antivirale Recherche du gnome sur
IgM anti VHE
prlvements sang et selles
IgG anti VHE
Diagnostic

IgG

IgM RT-PCR

Certain

++

++

Probable

- ou +

Douteux

+++

Immunit
ancienne

Huang S et al. 2010 Profile of Acute Infectious Markers

in Sporadic Hepatitis E. PLoS ONE 5(10): e13560

V.Thibault DU_janv.-11 47

VHE et traitement

Efficacit du PEG-IFN
Efficacit de la ribavirine chez les patients
Pas de mcanisme virologique prcis dcrit
Haagsma EB et al Liver Transpl. 2010 Apr;16(4):474-7
Mallet V et al. Ann Intern Med. 2010 Jul 20;153(2):85-9.
Kamar N et al. Nephrol Dial Transplant. 2010 Aug;25(8):2792-5.
Kamar N et al. Gastroenterology. 2010 Nov;139(5):1612-8.

V.Thibault DU_janv.-11 48

VHE et vaccination
20 g d'antigne rHEV (capside exprime
dans baculovirus) dans 0.5 ml de PBS sur
0.5 mg d'hydroxyde d'aluminium.
3 injections
Moyenne gomtrique du taux
d'anticorps anti-VHE

Efficacit : 95,5% aprs 3 doses

Risque cumul d'un premier pisode

d'hpatite E
Shrestha,et al 2007 N Engl J Med 356;9
V.Thibault DU_janv.-11 49

VHE et vaccination

HEV 239 (Hecolin; Xiamen Innovax Biotech,

Xiamen, China),
produced in bacterial cells : safe and
efficacious against infection with hepatitis E
virus in seronegative participants in a phase 2
trial

Zhu et al Lancet. 2010 Sep 11;376(9744):895-902

V.Thibault DU_janv.-11 50

Difficults diagnostiques
En routine
Adresser les prlvements
au
Centre national de rfrence du VHA/VHE
Pr E Dussaix
Laboratoire de virologie
Hpital Paul Brousse
12-14 av Paul Vaillant Couturier
94804 Villejuif cedex
Tel : 01 45 59 37 21

http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste
V.Thibault DU_janv.-11 51