Trabajo Prctico N4:

Extraccin simple de DNA

Integrantes: Nicols Arenas

Fransheska Claure
Ramn Parraguez
Profesor: Dr. Ricardo Cabrera
Curso:
Biologa General I

21 Abril 2016

Resumen

Este trabajo prctico consisti en realizar una extraccin simple de DNA de una frutilla
mediante un proceso en el cual se utilizan materiales bsicos de laboratorio, adems de ver
cul es la concentracin mnima de etanol con la cual precipita el DNA, Se llev a cabo con la
cuidadosa trituracin de una frutilla -cuya masa inicial fue 26.43g- con el objetivo de destruir su
estructura celular y facilitar el siguiente paso, el cual consiste en mezclarlo durante 10 minutos
con una sustancia que contena una cucharada de sal, 1 ml de lavalozas y 9 ml de agua
destilada, en la cual tanto el detergente como la sal cumplian la funcin de romper las
membranas celulares y desarmar el ncleo para dejar la cromatina que contiene al DNA libre.
Luego de la espera se trasvasij a un tubo tipo falcon, se mas el producto y compar
con un grupo que cuya masa de producto fuera similar a la nuestra con el fin de balancear a
ambas, tambin para que el centrifugado no tuviese demasiadas alteraciones. Durante cinco
minutos fue centrifugada a 6000 rpm, ya que era la frecuencia ideal para separar la materia
maciza de la mezcla y tambin para que no se daara el ADN.
Despus que se realiz el filtrado, el producto dej un sobresaliente o pellet en el contenedor
falcon y el lquido centrifugado posteriormente fue vertido en una probeta para su medicin. El
volumen total de ste se dividi en cinco tubos de ensayo de manera similar que rondaba los 3
ml en cada uno, luego fueron rotulados de acuerdo al grado de etanol que posea cada uno de
alcoholes (60%, 70%, 80%, 90% y 95%). Se dejaron enfriar simultaneamente durante 4
minutos los cinco tubos de ensayo y en una final observacin se pudo divisar cmo
gradualmente iba apareciendo el DNA en cada uno de ellos, volviendo menos notoria la
muestra de DNA a medida que descenda el porcentaje de etanol.

Introduccin

DNA, cuyo significado es cido desoxirribonucleico, es un biopolmero que

corresponde a la informacin gentica de cada clula, la cual se codifica en los procesos de
divisin celular mitosis y meiosis otorgando las caractersticas tanto genotpicas como
fenotpicas de los organismos.
El DNA adems de ser una macromolcula es un polmero compuesto por varios
nucletidos, los cuales se encuentran conformados por un grupo fosfato, la desoxiribosa y una
base nitrogenada (Adenina, Timina, Guanina, Citocina), formando dos cadenas distintas en
cuanto al ordenamiento de sus bases nitrogenadas, las cuales se unen mediante puentes de
hidrgeno entre las bases nitrogenadas- A==T con doble enlace; GC triple enlaceformando lo que se conoce como Doble hlice de DNA.
El DNA se encuentra en clulas eucariotas dentro de un ncleo en un
superenrollamiento, pero no lo hace por s solo, es decir como una doble hlice a secas ya que
existe un conjunto de protenas denominadas histonas, la cual mantienen compacto al DNA en
una estructura denominada cromatina.

Materiales y mtodos
En este prctico utilizamos un mortero en el cual fue molida una muestra que fue
previamente pesada (en nuestro caso la muestra fue frutilla), cuando ya estaba lo ms molida
posible se le adiciono la mezcla de agua lavalozas y sal la cual posea un volumen de 10ml,
luego de dejar reposar la muestra se trasvasijo en un tubo tipo falcn y se llev a centrfuga,
posterior a esto se filtr para solo trabajar con el sobrenadante el cual se separ en cinco tubos
de ensayo procurando que estos tuvieran el mismo volumen y finalmente se le agreg a cada
tubo unas gotas de alcohol de distinto porcentaje, se dej enfriar en hielo y luego de unos
minutos se observ la aparicin de DNA en los tubos.
A diferencia del mtodo original en el cual se usaba pisco, aqu se us distintos
porcentajes de alcohol los cuales fueron 95, 90, 80, 70 y 60 con el fin de demostrar que el
grado de etanol afecta en la aparicin de DNA. Tambin se utiliz pltano en algunos grupos
con el fin de comparar si en ambas muestras (frutilla y pltano) haba la misma cantidad de
DNA.

Resultados
DNA de frutilla en alcohol al 95%.

DNA de frutilla en alcohol al 90%.

DNA de frutilla en alcohol al 80%.

DNA de frutilla en alcohol al 70%.

DNA de frutilla en alcohol al 60%.

Tubos de ensayo tabulados segn el porcentaje de alcohol de la muestra.

Discusin y Conclusin

Si bien los resultados fueron los esperados en la frutilla, no se esperaba que en el

pltano hubiese ms abundancia de DNA se esperaba que ambos resultados fuesen muy
parecidos entre s. Los factores que puede que hayan determinado estos resultados son, la sal
la cual neutraliza los grupos fosfatos y vuelve insoluble el DNA en alcohol, este es un factor
debido a que la cantidad de sal que utiliz cada grupo de trabajo tuvo ligeras variaciones en su
masa. Tambin puede haber afectado el lavalozas el cual ayuda al rompimiento de las
membranas celulares por disolucin de los lpidos, la forma en que este puede haber afectado
es cuando se mezcl con la sal y agua donde se obtuvo un lquido espeso y no se disolvi
completamente la sal.
Otros factores que pueden haber generado la diferencia de las muestras son la
centrifugacin la cual puede haber dejado ms material pesado en la frutilla que en el pltano,
o el tiempo de incubacin en alcohol fro (el cual ayudaba a precipitar el DNA) haya sido muy
poco.
Para finalizar cabe destacar que de haber usado pisco (el cual tiene un porcentaje de
alcohol entre 30 a 43) al menos en la frutilla no hubiese aparecido material gentico ya que al
usar alcohol con un porcentaje de 60 ya era prcticamente nada lo que haba de DNA.

Bibliografa y referencias

www.bteduc.bio.br/guias_es/69_Extraccion_de_ADN_(procedimiento_basico).pdf Febrero 2016

Herrera D. Estructura y Composicin de ADN. Gentica Moderna por: Daniel Alejandro
Herrera. Sitio web: biologiaytuadn.blogspot.cl. Chile, 2011.
Coirini H. ADN - EL CDIGO DE LA VIDA. Enciclopedia de Bitico, disponible en internet:
enciclopediadebioetica.com/index.php/todas-las-voces/225-adn--el-codigo-de-la-vida. Editora:
Lic. Ursula Bremer de la Ossa. Argentina, 2011
Autor desconocido. La extraccin y purificacin de ADN para el anlisis de PCR. Mitos y
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Puerta y Urea. Prcticas de biologa molecular pgs 15-16. Editorial Pontificia Universidad
Javeriana, ao 2005.
www.sag.cl/sites/default/files/MANUAL_BEBIDAS_ALCOHOLICAS.pdf pg 36. Noviembre
1999.