Mtodos de determinao de susceptibilidade

de bactrias aos agentes antimicrobianos Antibiograma

Contedo

Objetivos
Introduo
Material
Execuo
Leitura e interpretao
Resultados

OBJETIVOS
Aps a realizao desta prtica, voc dever estar apto a determinar o perfil de susceptibilidade de
cocos Gram-positivos (Staphylococcus) a diferentes antibiticos em meio slido, alm de detectar a
presena de mutantes naturalmente resistentes ao dos antibiticos.

INTRODUO
O conceito de que grande parte das bactrias relevantes do ponto de vista clnico resistente a
agentes antimicrobianos de extrema importncia para a abordagem do quadro clnico que causam.
Faz-se necessrio, portanto, a avaliao do perfil de susceptibilidade das bactrias isoladas a drogas
antimicrobianas (antibiograma), mesmo que se realize uma escolha emprica em um primeiro
momento. Caso no seja possvel colher a amostra previamente ao incio do tratamento com, devese suspender o (s) antibitico(s) por pelo menos uma semana para se proceder ao antibiograma.
Dispe-se, hoje, de uma gama de mtodos que objetivam a avaliao do perfil bacteriano de
susceptibilidade a drogas. O mtodo da difuso em Agar (Kirby-Bawer) avalia diretamente a
atividade antimicrobiana sobre determinada amostra. Trata-se de um mtodo clssico, bastante
empregado, que se baseia no fato de que antimicrobianos impregnados em discos de papel de filtro
difundem-se no gar, criando, em torno do disco, um gradiente decrescente de concentrao da
droga. O teste permite classificar as bactrias como sensveis, com sensibilidade intermediria ou
resistentes aos antimicrobianos. Na aplicao desse mtodo usam-se critrios bacteriolgicos
precisos para o isolamento, obteno do inculo e semadura dos microrganismos, bem como um
nmero varivel de discos estabelecidos em funo da espcie microbiana e da infeco ou doena
que provoca. Assim, visando a confiabilidade do mtodo, deve-se atentar para os seguintes fatores
interferentes: tipo de meio de cultura, inculo, conservao dos discos de antibitico, condies de
incubao (atmosfera de O2, temperatura e tempo), observao examinador dependente (deve-se ser
detalhista na procura de mutantes).
Apesar de os resultados laboratoriais apenas indicarem qual ser a atividade clnica da droga, seu
efeito in vivo depende de sua capacidade de atingir o local de infeco em uma dose alta o
suficiente para inibir o patgeno, da natureza do processo patolgico e da resposta imune do
hospedeiro. O antibiograma informa que a bactria em questo sensvel ou no ao antibitico que
foi escolhido, norteando sua manuteno ou a mudana de estratgia teraputica. Essa informao,
portanto, no garante, mas aumenta consideravelmente as chances de sucesso do tratamento. Em

ltima anlise, cabe ao clnico realizar a escolha baseando-se em seu conhecimento dos fatos
pertinentes ao caso em particular, o qual ser complementado pela informao do exame em
questo.

MATERIAL
Culturas de S. aureus, em caldo simples, previamente incubadas a 37C por 2 horas
Discos de antimicrobianos

Placas de gar Mueller-Hinton

Zaragatoas estreis
Pina

EXECUO
Marcar no fundo da placa de Mueller-Hinton o local onde sero colocados os discos de
antibiticos, de forma a ficarem 1 cm da borda e equidistantes 2 cm aproximadamente;
Com os devidos cuidados tcnicos embeber a zaragatoa nas culturas, eliminando o excesso
de lquido por compresso nas paredes do tubo;
Espalhar os inculos uniformemente na superfcie de gar, de maneira a cobrir toda
superfcie do meio;

Com uma pina flambada e resfriada, retirar um disco de antimicrobiano do frasco, abrir a
placa perto do bico de Bunsen e colocar o disco no local previamente marcado,
comprimindo-o ligeiramente para que fique aderido superfcie do meio;
Fechar a placa;
Repetir o procedimento para a colocao dos demais discos de antimicrobianos;

 Incubar a placa a 37 C por 24 horas.

LEITURA E INTERPRETAO
O antibitico presente nos discos se difunde no meio de cultura slido, atingindo concentraes
decrescentes em torno do disco. A presena ou ausncia de crescimento em torno dos discos
interpretada, respectivamente, como resistncia ou susceptibilidade do microrganismo ao
antibitico. As colnias no halo de inibio de crescimento so de bactrias mutantes resistentes
ao do antibitico. Esses mutantes existem normalmente na populao bacteriana devido a
mutaes espontneas e o seu aparecimento no induzido, e sim favorecido, pela presso seletiva.
Tendo tais informaes em vista, deve-se observar o crescimento bacteriano, principalmente nas
reas ao redor dos discos de antimicrobianos, e medir o dimetro dos halos de inibio do
crescimento bacteriano, anotando os resultados no quadro que se segue. A interpretao dos dados
feita com o auxlio do quadro fornecido no final do roteiro desta prtica, o qual expressa a zona de
inibio em mm, levando em considerao a carga antibitica dos discos, sua difusibilidade e peso
molecular.

RESULTADOS
Antibitico
utilizado

Zona de inibio Susceptibilidade

(mm)
(S, I ou R)

Ampicilina
Cloranfenicol
Norfloxacina
Gentamicina
Penicilina
S: microrganismos sensveis
I: microrganismos com sensibilidade intermediria
R: microrganismos resistentes

Anexo: TABELA PADRO PARA INTERPRETAO DE HALOS DE INIBIO (*).

ANTIBACTERIANOS PARA ORGANISMOS GRAM-POSITIVOS E NEGATIVOS.
ZONA DE INIBIO EM mm
ANTIBACTERIANO

Smbolo

Concentrao

Resistente

Intermedirio

Sensvel

Amicacina

AM

30 mcg

14 ou menos

15 - 16

17 ou mais

Ampicilina ao testar
microrganismos Gramnegativos e
Enterococos

AP

10 mcg

11 ou menos

12 - 13

14 ou mais

Ampicilina ao testar
estafilococos e
microrganismos
sensveis a penicilina

AP

10 mcg

20 ou menos

21 - 28

29 ou mais

Ampicilina ao testar
Haemophilus sp

AP

10 mcg

19 ou menos

20 ou mais

Bacitracina

BC

10 unid.

8 ou menos

9 - 12

13 ou mais

Carbenicilina ao testar
Proteus sp e E. coli

CR

100 mcg

17 ou menos

18 - 22

23 ou mais

Carbenicilina ao testar
P. aeruginosa

CR

100 mcg

13 ou menos

14 - 16

17 ou mais

Cefoxitina

CT

30 mcg

14 ou menos

15 - 17

18 ou mais

Cefalotina

CF

30 mcg

14 ou menos

15 - 17

18 ou mais

Cloranfenicol

CO

30 mcg

12 ou menos

13 - 17

18 ou mais

ZONA DE INIBIO EM mm
ANTIBACTERIANO

Smbolo

Concentrao

Resistente

Intermedirio

Sensvel

Clindamicina

CI

20 mcg

14 ou menos

15 - 16

17 ou mais

Colistina

CL

10 mcg

8 ou menos

9 - 10

11 ou mais

Eritromicina

EI

15 mcg

18 ou menos

14 - 17

18 ou mais

Estreptomicina

ET

10 mcg

11 ou menos

12 - 14

15 ou mais

Gentamicina

GN

10 mcg

12 ou menos

13 - 14

15 ou mais

Kanamicina

KN

80 mcg

13 ou menos

14 - 17

18 ou mais

Nalidixico, cido

NA

30 mcg

13 ou menos

14 - 18

19 ou mais

Neomicina

NO

30 mcg

12 ou menos

13 - 16

17 ou mais

Nitrofurantoina

NT

300 mcg

14 ou menos

15 - 16

17 ou mais

Novobiocina

NV

30 mcg

17 ou menos

18 - 21

22 ou mais

Oxacilina ao testar
estafilococos

OX

5 mcg

19 ou menos

20 - 22

23 ou mais

Penicilina G ao testar
estafilococos

PN

10 unid.

20 ou menos

21 - 28

29 ou mais

Penicilina G ao testar
outros microrganismos

PN

10 unid.

11 ou menos

12 - 21

22 ou mais

Polimixina

PL

300 unid.

8 ou menos

9 - 11

12 ou mais

Sisomicina

SS

10 mcg

14 ou menos

15 - 17

18 ou mais

Sulfonamidas

SF

300 mcg

12 ou menos

13 - 16

17 ou mais

Sulfatrim(sulfametoxaz
ol Trimetoprim)

ST

25 mcg

10 ou menos

11 - 15

16 ou mais

Tetraciclina

TT

30 mcg

14 ou menos

15 - 18

19 ou mais

ZONA DE INIBIO EM mm
ANTIBACTERIANO

Smbolo

Concentrao

Resistente

Intermedirio

Sensvel

Tobramicina

TB

10 mcg

12 ou menos

13 - 14

15 ou mais

Vancomicina

VC

30 mcg

9 ou menos

10 - 11

12 ou mais

(*) ADAPTADO DO NCCLS.