Contents lists available at ScienceDirect

Fuel
journal homepage: www . elsevier . com/locate/fuel

La fermentacin del etanol a partir de residuos de pan mediante la

enzima almidn granular de hidrlisis: Efecto del pretratamiento de
materias primas
Witold Pietrzak, Joanna Kawa-Rygielska

Departamento de Almacenamiento y Tecnologa de Alimentos, Wroclaw Universidad de Ciencias Ambientales y de la vida,

Chemon'skiego 37/41, 51-630 Wroclaw, Polonia

Aplicacin de pretratamiento materia prima mejora an ms el rendimiento de etanol.

Informacin del artculo

La historia del artculo:
Recibido 07 de marzo 2014
Recibido en forma revisada 20 de mayo 2014 Aceptado 27 de mayo 2014
Disponible en lnea 12 de junio 2014
Palabras clave:
Etanol pan residuos de combustible
La fermentacin del etanol
Enzima que hidroliza el almidn granular (GSHE)
Saccharomyces cerevisiae

Resumen
El objeto de este proyecto de investigacin fue la evaluacin del almidn directo a etanol supuesto proceso de conversin de residuos de pan
de trigo-centeno utilizando granular enzima almidn de hidrlisis (GSHE). Varios mtodos de pretratamiento (prehidrlisis enzimtica,
irradiacin de microondas, sonificacin) fueron utilizados para mejorar el curso de la fermentacin y se compararon con la hidrlisis y la
fermentacin independiente (SHF).Debido a la capacidad de unin de agua de alta de fermentaciones de las materias primas se llevaron a
1.

cabo con una carga de sustrato de 150 g kg Slo durante el pretratamiento enzimtico y el proceso SHF la materia prima se licu preliminar
por lo que sus mayores concentraciones se podran aplicar. La dinmica de la fermentacin fue similar en todas las variantes estudiadas. La
fermentacin del pan de residuos unpretreated termin con 80,00% de rendimiento de etanol (354,36 g kg
pretratamiento de material mejorado rendimiento de etanol en bruto por ca. 3-8%.

de la materia prima).El

2014 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

1. Introduccin
El etanol es considerado como uno de los combustible renovable ms prometedora que puede sustituir a los
combustibles de transporte basados en combustibles fsiles. Es ms comnmente se produce por microbiana (lo ms a
menudo levadura) fermentaciones Cata-lisaron utilizando la biomasa vegetal como materia prima.Materias primas con
almidn (es decir, maz, trigo, sorgo) siguen siendo las materias primas ms comunes para la produccin de etanol
combustible en las regiones de clima templado del mundo (Europa, Amrica del Norte, Asia Central).Sin embargo su uso
como recursos para la produccin de combustible puede afectar a los precios de los productos de alimentos elaborados a
partir de ellos [1].El uso de partes no comestibles de la planta (paja, tallos), conocida como la biomasa lignocelulsica, como
la materia prima en la destilera es hoy en da considerado como la oportunidad ms-prom ising para la produccin de
etanol que no afecta a los precios de los productos alimenticios [ 2].Sin embargo, la conversin de biomasa en azcares
fermentables lignocellusosic y, posteriormente en etanol requiere alta temperatura de pretratamiento que es a menudo
catalizada utilizando agentes corrosivos, no ecolgicos o costosos como cidos, alcalinos, lquidos inicos y otros
[3].Adems, la eficiencia de saccharifica-cin y la fermentacin de lignocelulosa es todava mucho menos eficiente en
comparacin con almidones [4], pero las materias primas con almidn son muy costosos y el costo de la materia prima
puede superar el 65% del precio del producto final [5] .La solucin a los problemas de los que afectan a los precios de los
alimentos mediante el uso de cultivos agrcolas para la produccin de combustible y las dificultades tecnolgicas tcnicas
con la conversin de biomasa lignocelulsica es la utilizacin de los residuos de la industria alimentaria para la produccin
de biocombustibles.Uno de los residuos de comida ms prometedor que puede ser procesada en etha-nol es pan de
residuos.Contiene cantidad significativa de almidn que se hidroliza fcilmente a los azcares monomricos utilizando
amilasas, la cantidad de almidn y azcares simples en el pan oscila 500-750 y 3- 50 g kg

respectivamente [6].Adems

pan contiene 100-150 g kg de protena que, despus de la hidrlisis a pptidos y aminocidos, es esencial para el
crecimiento de la levadura y la fermentacin acelerada [7].Pan de residuos es tambin materia prima muy accesible para el
procesamiento de etanol. El desperdicio estimado para productos de panadera oscila 7.10% del total produccin [8],
teniendo en cuenta la produccin anual estimada mundo del pan, que es alrededor de 100 millones de toneladas [9] la
cantidad de residuos generados pueden alcanzar incluso los 10 millones de toneladas por ao en todo el mundo.El factor
importante para la formacin de residuos de pan es que parte del producto producido se deja sin vender y se devuelve a la
panadera debido a un nivel significativo de endurecimiento y gran cantidad de vano capaz surtido de productos de
panadera que se produce en exceso para cumplir con las demandas de los consumidores [10].Hay pocas posibilidades
para el reprocesamiento de residuos pan en las panaderas. Algunos residuos pueden ser procesados en las migas de pan,
como un reemplazo de una parte de la harina en la preparacin de masa fermentada o como alimento para animales. Sin
embargo, debido a la descomposicin microbiana menudo su uso para la nutricin humana y animal podra ser riesgoso
para la salud de los consumidores. Estos problemas son la razn por la cual el pan de residuos es ms a menudo a la
izquierda en vertederos o se utiliza como combustible para la combustin. La solucin ms prometedora para la utilizacincin

pan residuos

es utilizarlo como materia prima para la produccin de combustible de etanol.Estudios anteriores

muestran que el pan de residuos es un material de alto rendimiento para la fermentacin anol et- [11,12].La cantidad de
etanol producido a partir de residuos de pan que muestra signos de contaminacin por moho, dependiendo de la tecnologa
1

de procesamiento, a distancia como se ha mencionado por el ca. autores 350-370 g kg

de materia seca materia
prima.Kawa-Rygielska y Pietrzak [13] estudiaron la posibilidad de utilizar el pan de residuos que muestra el alto nivel de
contaminacin por moho de superficie para la produccin de etanol, esto dio lugar a una disminucin del rendimiento de
1

etanol en comparacin con material no contaminado (ca. 230-250 g kg dependiendo de la carga de materia prima en la
alimentacin de la fermentacin).Las otras posibilidades de utilizacin de pan de residuos a travs de procesos
biotecnolgicos son en el ejemplo: fermentacin en estado slido por Aspergillus awamori de pro-duccin de amilasas y
proteasas [14], la produccin de biohidrgeno usando rizosfera microflora [15], la produccin de cido succnico por
succinogenes Acti-nobacillus [ 16] o la produccin de compuestos aromticos por
El mtodo de pretratamiento tpico para la hidrlisis enzimtica de almidones en azcares fermentables se basa en un
mtodo de dos pasos. En la primera etapa de almidn se lica por-amilasa estable al calor un (EC 3.2.1.1) con el fin de
disminuir la viscosidad de solu-cin de almidn gelatinizado y para producir dextrinas de cadena corta, por romper la una
-1,4- enlaces glicosdicos en el medio de amilosa y amilopectina cadenas.Durante la segunda etapa de la hidrlisis de almidn
(saccharifica-cin) las dextrinas se sacarificadas por glucoamilasa (amyloglucosi-dase, EC 3.2.1.3) para obtener azcares
monomricos (glucosa).A menudo las enzimas de apoyo, como proteasas, celulasas, pullulnases y OTH-ers, se utilizan para
aumentar la cantidad de azcares fermentables, disminuir la viscosidad del pur y producir amino libre nitro-gen que se utiliza como
un nutriente para la levadura [18,19 ].Despus de la hidrlisis, el pur se inocula con levadura y se someti a etanol Fermentacin.Este tipo de proceso se denomina hidrlisis separada y fer-mentacin (SHF).El pretratamiento enzimtico es un proceso
costoso debido a que el paso de licuacin se lleva a cabo en temperatura alta (80-100 LC) lo que exige gran cantidad de energa,
tambin la etapa de sacarificacin es costoso porque glucoamilasa acta lentamente y la temperatura ptima para su actividad es
ca.50-60 LC. El Optimiza-cin para la demanda de energa para la hidrlisis de almidn para produc-cin etanol llev al desarrollo
de la sacarificacin simultnea y fermentacin (SSF), en la que licuado suspensin de almidn se enfri a temperatura donde la

levadura es capaz de fermentar y gluco-amilasa se aade por lo la sacchrification de dextrinas y utilizacin de los azcares
monomricos resultante se produce al mismo tiempo [20].El desarrollo ms reciente en el campo de la transformacin de materias
primas en almidn para el etanol es el almidn directa a la conversin de etanol utilizando la enzima almidn granular de hidrlisis
(GSHE). GSHE se obtiene de Trichoderma reesei modificada genticamente y que muestra la actividad de una amilasa y
glucoamilasa se presentan en el sur -Face de grnulos de almidn.Estudios anteriores muestran que la eficiencia de almidn directo
a proceso de conversin de etanol es comparable a las tecnologas "tradicionales" [21] y su ventaja es menor energa

la demanda por falta de los pasos de gelatinizacin del almidn y-cin liquefac.Tambin se realizaron algunas mejoras para
la conversin directa de almidn a la tecnologa de etanol. Balcerek y Pielech-Przybylska [22] estudiaron, entre otros, el
efecto de prehidrlisis trmica de harina de triticale utilizando una amilasa y la aplicacin de la proteasa en el proceso de
hidrlisis de almidn crudo y la fermentacin.Ellos-Ered DISCOV que una mejor eficiencia de la fermentacin se obtuvo sin
activacin trmica, pero con el aadido de la enzima proteoltica. Mont- albo-Lomboy et al. [23] estudiaron el efecto de la
sonicacin de harina de maz suspensin antes de la conversin directa en etanol.Los resultados de esta investigacin
demostraron que sonificacin de la materia prima mejor el rendimiento de etanol por ca. 20% en comparacin con las
muestras de control, por otra parte el rendimiento de etanol en muestras sonificated fue similar a la harina de maz jetcocido.Los autores tambin realizaron la evaluacin y el uso de energa econmica para jet-cocinar y ultrasonidos Instalciones en entornos industriales.Afirmaron que el costo total para la instalacin y mantenimiento de aparatos de ultrasonidos
es menor en comparacin con hydrocooking, tambin el anlisis energtico demostr que se necesita mucha menos
energa para la sonificacin de la materia prima que para cocinar chorro.Tambin el tratamiento con microondas mejora la
hidrlisis Enzy-matic de almidn [24].El uso de materia prima barata, residuos como las sobras de pan en el proceso
rentable de la hidrlisis del almidn y la fermentacin directa podra ser muy atractivo para la produccin de combustible etanol.Hasta ahora no se ha estudiado el uso de GSHE para el procesamiento de pan de residuos en etanol. Esto podra ser
una solucin muy eficaz que incluye un alto rendimiento etanol y gran reduccin de los costos de procesamiento en
comparacin con los procesos tradicionales.
El objetivo de este estudio fue evaluar el curso de la fermentacin de etanol y la eficiencia de pan de residuos utilizando
almidn granular enzima hidro-lizarla, en comparacin con separar proceso de hidrlisis y la Fermenta.Tambin los
diferentes mtodos de tratamiento previo de materias primas (enzimtica, ultrasonidos y microondas) se llev a cabo para
mejorar la hidrlisis del almidn crudo y fermentacin.
2. Materiales y mtodos
2.1. Materia prima
Residuos pan de trigo-centeno (despus de la vida til, los retornos de las tiendas) se obtuvo de la panadera local.
Panes enteros fueron cortados manualmente en dados de ca. 2-4 cm de tamao. Dados obtenidos se secaron en un horno
de aire forzado a 40 LC para 12 h y se muele en un molino de cuchillas (Rotary Mill, Brabender, Alemania) con 1,5 mm
tamiz de malla interna.Materia prima se almacen en un frasco hermtico al aire a temperatura ambiente hasta su uso.El
contenido de almidn en el pan de residuos se determin utilizando Evers-polari mtrico mtodo [25] y se vari 689.13
4.52 g kg

de materia seca materia prima.La cantidad de azcares totales (como la glucosa) se midi utilizando el mtodo

DNS [26] despus de la hidrlisis cida suave (70 LC, 10 min) con una solucin de HCl
prima a la proporcin de solucin de HCl) y vari 866.87 2.85 g kg

80 g L (1: 7,5 m / v de materia

de materia seca materia prima.Raw contenido de

humedad del material se midi utilizando WPS 50P secador de pesaje (Radwag, Polonia) y vari 41.43 1.38 g kg

1.

2.2. Las enzimas y levadura

Preparacin GSHE Stargen 002 se obtuvo de Genencor International (EE.UU.).Stargen 002 contiene Aspergillus
kawachii una amilasa expresada en T. reesei y glucoamilasa de T. reesei. Como declarado por el fabricante, la actividad de
preparacin es 610 unidades glucoamilasa por gramo y tiene un rango ptimo de 35 a 45 LC temperatura. Neutrase 0.8 L
(Novozymes, Dinamarca) es una forma de la proteasa de Bacillus amyloliquefaciensis-bac terial, su activ-dad declarada fue de 0,8
unidades proteolticas por gramo. Ceremix 6X MG (Novozymes) es una preparacin presentan sustrato multidireccional

especificidad (a-amilasa, b -glucanasa, pentosanasa, celulasa, prote-asa).En la hidrlisis separada y experimentar la

fermentacin se utilizan enzimas siguientes (todas producidas por Novozymes): Termamyl SC DS (termoestable una
amilasa de Bacillus licheniformis con la actividad declarada de 240 unidades kilo novo por gramo) y SAN L Extra (glucoam-

ylase de Aspergillus niger con actividad declarada de 400 unidades glucoam-ylase por gramo) y, anteriormente
mencionados, vivo levadura Saccharomyces secos Neutrase 0,8 L. comerciales cerevisiae Etanol Red (Fermentis, Francia)
9

se utiliz como inculo de produccin, CON-contenida sobre 20 10 de vida clulas por gramo segn lo declarado por el
fabricante.Antes de la inoculacin de la levadura se rehidrataron en agua destilada estril (1 g de la preparacin de la
levadura en 10 ml de agua) a 30 LC durante 0,5 h con agitacin regular.
2.3. Variantes experimentales Fermentacin
2.3.1. La conversin directa de la materia prima a etanol sin pretratamiento (Variante I)
Muestras de pan de desperdicios (30 g de materia seca) se arrastraban en ca 150 ml de agua destilada precalentada a
35 LC en unos matraces cnicos de 300 ml.El pH de la suspensin se ajust a 4,5 utilizando 1 mol L

SO

solucin.GSHE (2 ml por 1 kg de materia prima de materia seca) y proteoltica (Neutrase 0,8 L, 0,875 ml kg de materia
seca de materia prima) se aadieron preparaciones y el peso total de la suspensin se ajust a 200 g con agua destilada
resultante en una carga de materia prima de 150 g de materia seca por kilogramo de medio fer-mentacin (los experimentos
se llevaron a cabo en la relativamente baja carga de materia prima debido a la materia prima utilizada mostr el agua alta
capacidad y la aplicacin de la mayor carga de la unin del sustrato dio lugar a la obtencin de slidos como la consistencia
del medio Fermen-tacin lo observado anteriormente [11,27]).Entonces la suspensin de pan residuos se inocul con 2 ml
1.

de suspensin de levadura dando concentracin inicial de levadura 1 g kg Los matraces se sellaron con tapones de goma
con el tubo de llenado de la fermentacin de glicerol y un puerto de muestreo como se describe por Kim et al. [28] y se
colocaron en un bao de agua agitador WNB7-45 (Memmert, Alemania) a 35 LC con velocidad de agitacin de 150 rpm (2,5
Hz) durante 72 h.

2.3.2. Pretratamiento enzimtico (Variante II)

Muestras de materia prima (30 g de materia seca) se arrastraban en ca. 150 ml de agua destilada en un matraces de
1

300 ml cnicos y pH de la suspensin se ajust a 4,5 utilizando 1 mol L H 2 SO 4 solucin.A continuacin, se aadi la
preparacin Ceremix 6X MG (1,25 g de enzima por kilogramo de materia seca de materia prima) y el peso total del
contenido de matraz se ajust a 200 g con agua destilada.Los matraces se sellaron con tapones de goma para evitar la
evaporacin de agua y se colocaron en un bao de agua caliente a 45 LC durante 20 min con agitacin constante
[12].Despus las suspensiones se enfriaron a 35 LC, inoculados con levaduras, GSHE y proteasa (Neutrase 0,8 L) y se
aadieron adems procedimiento fue el mismo que el descrito en la Sec-cin 2.3.1.

2.3.3. Pretratamiento Microondas (Variante III)

Muestras de materia prima (30 g de materia seca) se extendieron en una capa fina sobre una placa de Petri y se
irradiaron en un horno microondas KOR-63X5 (Daewoo, China) durante 2 min con 400 W de salida de potencia de
microondas y la frecuencia de 2450 MHz. Despus de que las muestras de pretratamiento se enfriaron a temperatura
ambiente en un desecador. Adems procedi-miento fue el mismo que en la Seccin 2.3.1.
2.3.4. Pretratamiento ultrasnico (Variant IV)
Muestras de pan de residuos de tierra (30 g de materia seca) se arrastraban en ca. 150 ml de agua destilada
precalentadas a 35 LC en unos matraces cnicos de 300 ml.Los matraces se colocaron en un bao de ultrasonidos SONIC0,5 (POLSONIC, Polonia) durante 5 min, tal como se describe por el fabricante el poder de la baera era 250 W cuencia y
ultrasnica
cuencia fue de 40 kHz. Despus de este tiempo el procedimiento experimental fue el mismo que en la Seccin 2.3.1.

2.3.5. Hidrlisis y fermentacin separada (SHF) (Variante V)

Muestras de pan de residuos (37,5 g de materia seca) se ponderaron en las tazas de maceracin y mal articuladas con
1
ca. 180 ml de agua destilada. pH de la suspensin se ajust a 6,0 utilizando 1 mol L H 2 SO 4 o NaOH soluciones.Las
copas se colocan en un 12 LB-labora torio dispositivo de maceracin (Lochner Trabajo + Technik, Alemania) precalentado a
1
45 LC. La maceracin se llev a cabo con 150 rpm (2,5 Hz) Velocidad de agitacin y 2 LC min velocidad de calentamiento
y enfriamiento.Cuando la temperatura de la suspensin alcanz 60 LC termoestables una amilasa (Termamyl SC DS, 2 mL kg
1

de la materia prima seca estera-ter fue agregado) y el bao del dispositivo de maceracin se calent adicionalmente a 85 LC. La
licuefaccin de almidn se llev a cabo durante 60 min.A continuacin, las muestras se enfriaron a 55 LC, su pH se ajust a 5,8 con
7,11 mol L
0,875 ml

H 2 SO 4, glucoamilasa (SAN L extra, 1,25 ml kg

de materia prima de materia seca) y la proteasa (Neutrase 0,8 L,

kg de materia prima de materia seca) se aadieron y la hidrlisis se llev a cabo durante 90 min.Despus de este tiempo

la sam-ples se enfriaron a 20 LC, el pH de las muestras se ajust a 4,5 utilizando 1 mol L

H 2 SO 4 solucin, y el peso total de los

1

purs se ajust a 250 g con agua destilada que resulta en una ltima carga de materia prima a 150 g kg de pur. 200 g alcuotas
de los purs se transfirieron a 300 ml matraces cnicos, inoculado con 2 ml de suspensin de levadura (levadura concentracin de 1
1)

g kg de pur y sellado con tapn de goma con tubo de fermentacin y el puerto de muestreo.Adems procedimiento fue el mismo
que el descrito en la Seccin 2.3.1.

2.4. Mtodos analticos

Dinmica de fermentacin se evaluaron gravimtricamente midiendo la prdida de peso de medio de fermentacin
debido a la liberacin de CO 2 como se describi anteriormente [12].Las muestras para anlisis fsico-qumico (ca. 20 ml de
alcuotas) se tomaron cada 24 h de fermentacin.La concentracin de slidos no disuelto se determin como sigue: ca. 10 g
de medios de fermentacin (con una precisin de 0,001 g) se cados fil-a travs de pre-secado (105 LC, 4 h) y preponderado papel de filtro, los slidos disueltos residuales se lavaron con ca. 250 ml de agua dis -tilled.Los filtros con slidos
restantes no disueltos se secaron en un horno a 60 LC para 12 h prximo a 105 LC durante 4 h. Despus los filtros se
enfriaron a temperatura ambiente en un desecador y se ponderan con una precisin de 0,001 g.La diferencia en el peso del
filtro con y sin de partculas no disuelto dio la concentracin de ellos en el medio de fermentacin que se expres como
gramos de slidos no disueltos por kilogramo. Por HPLC, lo que reduce el azcar y el anlisis de slidos disueltos las
muestras de medios Fermen-tacin se centrifugaron a 6.000 rpm (5243g) a 4 LC utilizando MPW-351R centrfuga (MOP
Med. Instrumentos, Polonia) y sobrenadantes claros fueron tomadas para los anlisis.Los azcares reductores-concen
tracin (como la glucosa) se determin utilizando el mtodo de DNS [26].El contenido de slidos disueltos (extracto
aparente) se determin mediante la medicin de la densidad del medio de fermentacin clarificado tal como se describe
anteriormente [29].La concentracin de azcares (glucosa, maltotriosa y dextrinas (DP4 +)), subproductos de fermentacin
(Glyc-erol, cido lctico) y el etanol se determin usando cromatografa de lquidos de PERFOR-Mance alta resolucin
(HPLC).Antes del anlisis claro sobrenadante despus de la centrifugacin de medios de fermentacin se diluy con agua
bidestilada en un 1: v / v proporcin 3 y se filtr a travs de filtro de jeringa de nylon (0,2 l m).El anlisis se realiz mediante
cromatografa de Promi-nencia (Shimadzu, Japn) equipado con una columna Rezex ROA-Organic Acid H + (300 7,8 mm)
(Phenomenex, EE.UU.).Se aplicaron los siguientes parmetros de anlisis HPLC:-cin injec volumen 20 l L, elucin
1

temperatura-60 LC, mviles fase 0,005 mol L H 2 SO 4, el flujo de fase mvil tasa de 0,6 ml
utilizando detector de ndice de refraccin (RID-10A,

min-1.

Los analitos se detectaron

Sobre la base de los resultados obtenidos siguientes parmetros del proceso se calcularon a intervalos de tiempo 24 h:
1
1])
1
1
tasa de produccin de etanol (r p [g L h
y el rendimiento de etanol prctico (Y p [%; g kg de azcares; g kg de la
materia prima de materia seca] sobre la base de la reaccin estequiomtrica donde 1 kg de azcares (como la glucosa) se
convierte en 511,1 g de etanol [30].
2.5. El anlisis estadstico
Todos los experimentos y las determinaciones se realizaron en tripli-Cates.Resultados que se presentan son valores
medios con desviaciones estndar (n = 3). Los resultados tambin fueron sometidos a anlisis de una va de var-iance
(ANOVA) a nivel de significacin a = 0,05 utilizando Statistica 10,0 paquete (Statsoft, Inc., EE.UU.).Se utiliz la prueba de
Duncan para determinar los grupos estadsticamente homogneos (denota como cartas posteriores del alfabeto) y ms
diferencias significativas (LSD).
3. Resultados y discusin
3.1. Efecto del mtodo de pretratamiento sobre las propiedades fsico-qumicas de los medios de fermentacin
La concentracin inicial de azcares reductores y los slidos disueltos en el medio de fermentacin fue el ms alto en las
muestras despus de la hidrlisis de tasa SEPA y la fermentacin (SHF) pretratamiento (Fig. 1 A y B,

respectivamente).Pretratamiento enzimtico utilizando preparacin Ceremix 6X MG dio lugar a la hidrlisis preliminar y

1

licuefaccin de pan de residuos dando contenido inicial de azcares y slidos disueltos de ca. 25 y 30 g L
respectivamente.Otros mtodos de tratamiento previo aplicado (microondas y ultrasonidos) no afectados concen-tracin

inicial de azcares y slidos disueltos en el comienzo de la fer-mentacin en comparacin con

la variante unpretreated.El
1

microondas y pretratamiento ultrasnico no influyeron en el contenido de slidos no disueltos (ca. 131 g kg de medios de
comunicacin) en comparacin con muestras sin pretratamiento (Fig. 1 c).Hidrlisis preliminar de pan de residuos con
Ceremix 6X MG caus partculas reduccin en los no dis-resueltos por ca. 80 g kg

en comparacin con muestras de

control, micro-ondulados y sonificated, mientras que las muestras despus de separada la hidrlisis de dos etapas con una
amilasa, glucoamilasa y la proteasa (SHF) contenan la cantidad ms baja de slidos no disueltos entre otros (ca. 30 g kg

1).

Estudios anteriores muestran que los diferentes mtodos de pretratamiento influ-cia en las propiedades iniciales de
medios de fermentacin en las fermentaciones GSHE ayudados. Balcerek y Pielech-Przybylska [22] estudiaron el efecto de
prehidrlisis trmica (al 56-57 LC) de almidn triticale con una amilasa y no amilceos polisacrido enzima degradante en el
curso de la fermentacin con GSHE. El contenido inicial de azcares reductores en los medios pretratados fue mucho
1

mayor en compari-son para muestras sin prehidrlisis (ca. 11 y 4 g 100 ml respectivamente).Shavanas et al. [21] lleg a la
misma conclusin, mientras estudiaba el efecto de licuefaccin preliminar de yuca almidn antes de la fermentacin con
GSHE. Resultados similares se obtuvieron en este estudio en muestras sometidas a pretratamiento enzimtico donde los
polisacridos presentes en la materia prima eran premon-preli- hidrolizado por el complejo de enzimas en preparacin
Ceremix 6X mg (amilasas, proteasas, celulasas y otros).El advan-taje de la utilizacin de esta preparacin fue confirmado
previamente en el pro-ceso de hidrlisis y fermentacin de pan de residuos por separado al alto contenido de slidos de
cargar [12].Por otra parte el contenido de slidos no disueltos fue mucho menor en enzimticamente pretratados lechadas
de pan de residuos

Fig. 1. Los cambios en las propiedades fsico-qumicas de los medios de fermentacin de trigo-pan de centeno residuos durante la conversin del
almidn directo a etanol con GSHE (a) azcares reductores,
(B) slidos disueltos, (c) los slidos no disueltos (I - variante unpretreated, II - pretratamiento enzimtico, III - pretratamiento microondas, IV pretratamiento ultrasnico, V - proceso SHF).Resultados expresados como valores medios desviacin estndar (n = 3).
Tabla 1

Perfiles de carbohidratos durante la fermentacin de los medios preparados a partir de los residuos de pan de trigo-centeno (I - variante unpretreated, II pretratamiento enzimtico, III - pretratamiento microondas, IV - pretratamiento ultrasnico, V - proceso de SHF).Resultados expresados como valores
medios desviacin estndar (n = 3).

Variante

La glucosa (g
1)
L

Maltotriosa (g L

1)

Dextrina (DP4 +) (g L

24 h

48 h

72 h

24 h

48 h

72 h

YO

40,78 3,99

2,58 2,03

0.24 0.07

0,37 0,07

0,36 0,04

II

42,99 3,54

0.16 0.07

0,47 0,06

0.35 0.07

III

52,86 3,95

2.42 0.15

0.77 0.16

0.58 0.01

IV

49,33 0,66

4,75 0,90

0,37 0,04

40,10 3,47

0.06 0.04

0.09 0.05
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00
0,00

0,89 0,18

24 h

1)

48 h

72 h

8.46 0,72

7,40 0,98

7,71 0,56

0,26 0,03

11.23 0,48

8.28 0.26

8.02 0.38

0.39 0.02

13.90 0,66

9,75 0,39

8.43 0.11

0,84 0,33

0.11 0.09

9.95 0,17

8.46 0.26

6,90 0,61

0.30 0.02

0.23 0.01

12.57 0,71

7,93 0,13

7.86 0.16

en comparacin con microondas, ultrasonidos y variantes unpretreated del experimento, lo que sugiere que la aplicacin de
relativamente baja temperatura y la hidrlisis enzimtica corto perodo de tiempo (a diferencia de en el proceso de SHF) de
pan de residuos para la conversin directa en etanol utilizando GSHE podra ser utilizada en la fermentacin de medios de
1)

comunicacin en la carga de slidos ms altos que en este estudio (150 g kg evitando el problema de la capacidad de la
materia prima de unin a agua.Montalbo-Lamboy et al. [23] estudi el efecto de lote y de tratamiento previo-ment
ultrasnica continua de lechada de maz antes de la fermentacin GSHE asistida.Ellos DISCOV-Ered que tanto por lotes y
mtodo continuo aumento de la concentracin inicial de glucosa en lechadas de las materias primas, lo que era probablemente causado por gelatinizacin del almidn durante el pretratamiento. Sadeghi y Shawrang [24] estudiaron el efecto
de irradiacin de microondas en la degradabilidad ruminal de la harina de maz.Ellos encontraron que la irradiacin de la
materia prima durante 3 a 5 min a 800 W de potencia de entrada de tasa de aumento de la degradacin de almidn. En las
actuales condiciones experimentales se observ ningn efecto del pretratamiento ultrasnico y microondas sobre la
liberacin de azcar inicial y licuefaccin de pan de residuos. Esto probablemente fue causado por las alteraciones fsicoqumicas de los ingredientes del pan durante la coccin y el endurecimiento en la formacin de la retrogradacin de gluten
en lpidos de la red y el almidn se produce, que son difciles de revertir mediante tratamiento fsico [31].
3.2. Efecto del mtodo de pretratamiento en el curso de la fermentacin del pan de residuos con GSHE
La evaluacin dinmica de fermentacin se muestra que la liberacin de dixido de carbono a partir de medios de
fermentacin era ms-advanta ven- para el pan residuos enzimticamente pretratada y para el proceso de SHF en
comparacin con otras variantes del experimento (datos no mostrados).Los cambios en la reduccin de la concentracin de
azcares en las muestras de micro-ondulado, sonificated y unpretreated fue similar durante el proceso de fermentacin (Fig.
1 a).Su concentracin vari ca. 53, 10 y 0,2 g L

despus de 24, 48 y 72 h de fermentacin respec-tivamente.En

1

enzimticamente pretratados concentracin muestras azcares despus del primer da aument en ca. 12 g L
en
comparacin con el estado ini-cial.Despus de das posteriores de la fermentacin, el contenido de azcares reductores en
esta variante del experimento estaba por debajo

48 h

difference.

258.38 17.39a 333.31

290.20 2.39a 373.15
259.24 1.38a 375.51
217.53 2.80b 365.05
290.24 4.63a 378.71
29.99
30.75

24 h

15.12b
7.25a
5.78a
2.45a
6.00a
22.25

72 h
354.36
389.41
384.60
366.78
385.98

20.11b
4.47a
5.73a
19.70a
2.42a

(g L1 h 1 )

1.61 0.11a
1.81 0.01a
1.62 0.01a
1.36 0.02b
1.81 0.03a
0.19

24 h

0.47 0.11c
0.52 0.06bc
0.73 0.03ab
0.92 0.01a
0.55 0.02bc
0.21

48 h
0.13 0.04a
0.10 0.07a
0.06 0.03a
0.01 0.14a
0.05 0.03a
0.26

72 h

ethanol production rate) (I unpretreated variant, II enzymatic pretreatment, III

(g kg 1 of raw material)

practical ethanolyield, r

Fig. 2. Formacin de etanol (a), glicerol (b) y cido lctico (c) durante el almidn directo a proceso de conversin de etanol de trigo residuos medios de
centeno-pan con GSHE (I - variante unpretreated, II - pretratamiento enzimtico, III - pretratamiento microondas, IV - pretratamiento ultrasnico, V proceso de SHF).Resultados expresados como valores medios desviacin estndar (n = 3).

aThemeanvaluesgiveninlineswithdifferentletterindexaresignificantlydifferent( = 0.05). LSD lowestsignificant

72 h
48 h

298.06 20.06a 384.50 17.44b

334.77 2.76a 430.45 18.36a
299.06 1.59a 433.18 6.67a
250.94 3.23b 421.12 2.83a
334.81 5.34a 436.87 6.92a
35.46
27.40
80.00 4.54b
87.92 1.01a
86.83 1.29a
82.81 4.45a
87.14 0.55a
34.59

24 h
24 h

48 h

72 h

(g kg
(%)

Variant Y

I
58.33 3.93a 75.25 3.41b
II
65.52 0.54a 84.24 1.64a
III
58.53 0.31a 84.78 1.31a
IV
49.11 0.63b 82.42 0.55a
V
65.53 1.05a 85.50 1.35a
LSD
6.77
6.94
5.36

of sugars)

408.79 23.20b
449.21 5.15a
443.66 6.61a
423.11 22.72a
445.26 2.79a

Table 2Ethanol yield and production rate at specified time intervals of fermentation of waste wheat-rye bread with GSHE (Ymicrowavepretreatment,IVultrasonicpretreatment,VSHFprocess).

1.

0.5 g L
En la variante de SHF de levadura experimento hizo consumir medio de los azcares disponibles en la
alimentacin de fermentacin despus de 24 h del proceso y azcares casi todos disponibles despus de das posteriores.
El anlisis por HPLC de hidratos de carbono en los medios de comunicacin durante la fermentacin tambin se muestra
que casi toda la glucosa disponible fue utilizado por la levadura por el segundo da del proceso (Tabla 1). El contenido de
1

malto-triosa largo de la fermentacin estaba por debajo de 1 g L independientemente de la variante experimental.Las

dextrinas no fueron completamente hidrolizados y eventualmente utilizados por la levadura por el final de fer-mentacin, sin
embargo, su concentracin disminuy entre la hora 24a y 48a y no cambi significativamente por el final del proceso.Los
cambios en slidos disueltos en los medios de comunicacin-cin fermenta fueron similares a los cambios en la
concentracin de azcares ing REDUC-en variantes particulares de experimento (Fig. 1 B).El contenido de slidos no
disueltos despus de la primera da de la fermentacin fue similar en todas las variantes estudiadas de experimento (ca. 30
1)

g kg y no cambi significativamente por el final del proceso (Fig. 1 c).Los cambios en la formacin de etanol durante las
pruebas de fermentacin se muestran en la Fig. 2 a.Se observ que en las primeras 24 h de fermentacin de pan residuos
enzimticamente tratados previamente con GSHE y la hidrlisis separada y la variante de la fermentacin, la levadura
1).

1)

produce la mayor cantidad de etanol (ca.43,5 g L Baja concentracin de etanol (ca. Se encontr 38,8 g L despus del
mismo tiempo en el pan de residuos unpretreated y sonificated sam-ples, mientras que la menor cantidad de alcohol
1)

(ca.32,6 g L se determin en medios con microondas posteriormente irradiado pan residuos.La produccin de etanol por
la levadura en las pruebas de fer-mentacin estudiados dur por el segundo da del proceso y no cambi significativamente
por la tercera da.La concentracin-cin ms bajo de alcohol etlico se encontr en las muestras de unpretreated (51,58 g L
1),

diferentes mtodos de pretratamiento de materia prima y el proceso de SHF result en una mayor cantidad de etanol por
1

el final de la fermentacin (ca. 55-58 g L ).La concentracin de subproductos de fermentacin, glicerol y cido lctico se
muestra en la Fig. 2 b y c, respectivamente.Dentro de las primeras 24 h de la levadura de fermentacin hizo producir ca.
90% de glicerol total en todas las variantes estudiadas de experimento, se form sin embargo menos de glicerol en los
medios de comunicacin con pan de residuos unpretreated y calentados que en el caso de otros mtodos estudiados.La
concentracin de glicerol final fue sim ilar-en todos los medios de fermentacin estudiados (ca.6,0 a 6,5 g L

1).

El contenido

de cido-lac tic en medios de fermentacin fue similar en todas las variantes estudiadas de experimento durante todo el
proceso (ca. 1 g L

1)

de salida con cambios importantes.

La mejora en la dinmica de fermentacin, como se describe por las emisiones de CO2 a partir de medios de fermentacin,
por SHF y pan de residuos enzimticamente prehidrolizado probablemente fue causado por hidrlisis de protenas
presentes en la materia prima a los pptidos de cadena corta y aminocidos, que son esenciales para el metabolismo de la
levadura adecuada [7] y aumento de la cantidad de azcares fermentables en comparacin con otras variantes.Anterior
estudio sobre la utilizacin de pan de residuos para la produccin de etanol demostr que la aplicacin de la enzima mezcla
Ceremix 6X MG, antes de una amilasa asistido por licuefaccin, la mejora de la dinmica y etanol rendimiento del proceso
de hidrlisis y Fermen-tacin separada [12].Balcerek y Pielech-Przybylska [22] tambin demostraron que la adicin de
proteasas aumentar la tasa de formacin de etanol en el proceso de hidrlisis y fermentacin del almidn nativo, especialmente en sus primeras etapas.El incremento en la reduccin de azcares-cin concentracin en fermentaciones GSHE
a ayuda en las primeras etapas de la fermentacin era tpico para el proceso de sacarificacin y fermentacin
simultneas.Esto se observ anteriormente [23,32] y fue causado por una mayor velocidad de hidrlisis enzimtica de los
azcares que la utilizacin de ellos por la levadura.Se observ que no todas las dextrinas en los medios de fermentacin se
hidrolizaron y se fermentan por el final de la fermentacin.Esto podra ser causado por la inactivacin de la enzima por la
alta concentracin de etanol o disminucin en el pH de los medios.

3.3. Efectos finales y cintica de la fermentacin del pan de residuos utilizando GSHE como afectados por el
mtodo de pretratamiento
Se observ que la aplicacin de todos los mtodos de pretratamiento utilizados en este estudio aument el rendimiento
final de etanol en compar-Ison a la fermentacin de residuos pan unpretreated (Tabla 2).Para Enzy-ticamente y microondas
pretratados fermentacin del pan de residuos a los procesos GSHE y SHF el rendimiento del proceso fue la alta-est, en el
caso de otras variantes menores rendimientos de etanol se lograron, pero an as era muy alta (por encima del 80% del
valor terico ).Los valores ms altos de la productividad de etanol se lograron en todas las muestras estudiadas dentro de la
primera da de fermentaciones. Entre el segundo y el tercer da de la fermentacin de los cambios en los rendimientos y la
productividad para todas las variantes estudiadas del experimento no cambiaron significativamente lo que sugiere que estos
procesos podran acortarse a 48 h.
Estudios previos que se ocupan de la utilizacin de pan de residuos en etanol reportaron rendimientos similares o
incluso inferiores etanol. Ebrahimi et al. [11] estudi la hidrlisis y fermentacin de pan de trigo de residuos por separado a
una carga de materia prima de 350 g kg

1.

Obtuvieron rendimiento global de etanol de 350 g por kilogramo de materia seca

1.

pan y la concentracin de alcohol en el medio de fermentacin sobre 100 g L Kawa-Rygielska et al. [12] inform de que
prehydro-lisis de trigo-centeno pan de residuos con la preparacin Ceremix 6X MG aumentar el rendimiento de etanol a
1

partir de purs a 320 g kg de residuos de trigo-centeno pan carga 352,4 a 366,0 g kg en comparacin con el control.En
este estudio el rendimiento de etanol a partir de sustrato (SUG-ars en materia prima) unidad tambin era muy alta y sin
licuacin de alto temperamento-tura y sacarificacin separada, sin embargo, las cargas de materias primas eran
relativamente bajo por lo que el impacto de la inhibicin de sustrato y producto en la levadura clulas fue menor.En
aplicacin industrial cargas materiales superiores primas seran ms rentables porque si se logra la concentracin de etanol
superior se necesita menos energa para destilar ella [33].

4. Conclusiones
El presente estudio demostr que el pan de trigo-centeno de residuos es un alto eth-anol material elstico en la
1

conversin directa al proceso de etanol utilizando GSHE resultando en ca. 354 g kg de materia prima.Adems apli-cin de
varios mtodos de pretratamiento de las materias primas (prehidrlisis enzimtica, sonificacin y la irradiacin de
1.

microondas) aument an ms el rendimiento de etanol por ca. 12-35 g kg Sin embargo, los estudios se llevaron a cabo a
baja carga de materia prima debido al agua ing capacidad de retencin de pan lo que dio como resultado slido-como
consistencia de los medios de comunicacin con cargas altas.La solucin a este parece ser el prehidrlisis-matic Enzy que
provoca licuefaccin preliminar de materia prima.

Referencias

[1] Tyner WE. Biocombustibles y precios de los alimentos: separar el trigo de la paja.Seguridad Alimentaria Mundial de 2013; 2:
126-30.
[2] Valentine J, Clifton-Brown J, Hastings A, Robson P, Allison G, Smith P. Alimentos vs combustible: el uso de la tierra para los
cultivos lignocelulsicos prxima generacin de energa que reduzcan al mnimo la competencia con la produccin primaria de
alimentos.GCB Bioenerga 2012; 4: 1-19.
[3] Talebnia F, Karakashev D, Angelidaki I. La produccin de bioetanol a partir de paja de trigo: una visin general sobre el
pretratamiento, hidrlisis y fermentacin.Bioresour Technol 2010; 101: 4744-53.
[4]
Cardona CA, Snchez DO. La produccin de etanol combustible: las tendencias de diseo de procesos y oportunidades de integracin.Bioresour
Technol 2007; 98: 2415-57.

[5] Kwiatkowski JR, McAloon AJ, Taylor M, Johnston DB. Modelar el proceso y los costos de produccin de etanol combustible en el
proceso de molienda de maz seco.Prod Ind Crop 2006; 23: 288-96.
[6] Dewettinck K, Van Bockstaele F, Kchne B, Van de Walle D, Courtens TM, Gellynck X. Valor nutricional del pan: influencia de
la elaboracin, la interaccin de alimentos y la percepcin del consumidor.J Cereal Sci 2008; 48: 243-57.
[7] Thomas KC, Ingledew WM. Produccin de alcohol combustible: efectos del nitrgeno amino libre sobre la fermentacin de
mostos de trigo de muy alta gravedad.Appl Environ Microbiol 1990; 56: 2046-50.
[8] Mena C, Adenso Daz-B, Yurta O. Las causas de los residuos de alimentos en la interfaz de proveedor-minorista: evidencias
desde el Reino Unido y Espaa.Resour Conserv Recy 2011; 55: 648-58.
[9]
Melikoglu M, Webb C. El uso de pan de residuos para producir productos de fermentacin.En: Kosseva MR, Webb C,
editores.Alimentos desechos industriales. Evaluacin y Recuperacin de Materias Primas. Amsterdam: Elsevier Science Publishers;
2013. p. 63-74.
[10]
35.

Kihlberg I, L Johansson, Langsrud , Risvik E. Efectos de la informacin sobre el gusto del pan.Alimentos Qual Prefiero 2005; 16: 25-

[11]
7.

Ebrahimi F, Khanamadi M, Roodpeyma S, Taherzadeh MJ. La produccin de etanol a partir de residuos de pan.Biomasa Bioenerga 2008; 32: 333-

[12] Kawa-Rygielska J, Pietrzak W, Czubaszek A. Caracterizacin de fermentacin de trigo-pan de centeno residuos purs con la
adicin de preparaciones enzimticas complejas.Biomasa Bioenerga 2012; 44: 17-22.
[13]

Kawa-Rygielska J, Pietrzak W. Utilizacin de pan de residuos para la produccin de bioetanol.Food Sci Technol Qual 2011; 79: 105-18 (en polaco).

[14] Melikoglu M, Lin CSK, estudios Webb C. cinticos en la solucin multi-enzima producida mediante fermentacin en estado
slido de pan de residuos por Aspergillus awamori.Biochem Eng J 2013; 80: 76-82.
[15] Doi T, Matsumoto H, J Abe, S. Morita Estudio de viabilidad de la aplicacin de la microflora rizosfera de arroz para la
produccin de biohidrgeno de pan de residuos.Int J Hydrogen Energy 2009; 34: 1735-1743.
[16]
Leung CCJ, Cheung ASY, Zhang AY, Lam KF, Lin CSK. Utilizacin de pan de residuos para la produccin de cido succnico fermentativo.Biochem
Eng J 2012; 65: 10-5.

[17] Daigle P, Gleinas P, D Leblanc, Morin A. Produccin de compuestos aromticos por Geotrichum candidum en miga de pan
residuos.Microbiol alimentaria de 1999 ; 16: 517-22.
[18] Kosowski G, D Mikulski, Czupryn'ski B, Kotarska K. Caracterizacin de fermentacin de alta gravedad maz purs con la
aplicacin de pululanasa, enzimas proteolticas y enzimas degradantes de polisacridos no amilceos.J Biosci Bioeng 2010; 109:
466-71.
[19] Sapin'ska E, Balcerek M, Pielech-Przybylska K. La fermentacin alcohlica de maz de alta gravedad purs con la adicin de
enzimas de apoyo.J Chem Technol Biotechnol 2013; 88: 2152-8.
[20]

Bothast RJ, Schlicher MA. Procesos biotecnolgicos para la conversin de maz en etanol.Appl Microbiol Biotechnol 2005; 67: 19-25.

[21] Shavanas S, Padmaja G, Moorthy SN, Sajeev MS, Sheriff JT. Optimizacin de procesos para la produccin de bioetanol a
partir de almidn de yuca utilizando enzimas ecolgicas novedosas.Biomasa Bioenerga 2011; 35: 901-9.
[22] Balcerek M, Pielech-Przybylska K. Efecto de la sacarificacin y fermentacin simultneas condiciones de almidn nativo de
triticale en la dinmica y la eficiencia del proceso y la composicin de los destilados obtenidos.J Chem Technol Biotechnol 2012;
88: 615-22.
[23]
Montalbo-Lamboy M, Khanal SK, van Leeuven J, Raman DR, Grewell D. sacarificacin y fermentacin simultneas y
evaluacin econmica de ultrasonidos y chorro de pretratamiento de coccin de la pasta de maz.Biotechnol Prog 2011; 27: 15619.
[24] Sadeghi AA, Shawrang P. Efectos de la irradiacin de microondas en la protena ruminal y la degradacin del almidn del
grano de maz.Anim Sci Technol Alimentacin 2006; 127: 113-23.
[25]
ISO. Almidn nativo.Determinacin del contenido de almidn. Ewers mtodo polarimtrico.ISO 10520: 1997. Ginebra:
Organizacin Internacional de Normalizacin; 1997.
[26] Miller GL. El uso de reactivo de cido dinitrosaliclico para la determinacin de azcares reductores.Chem Anal 1959; 31:
426-8.
[27] Kawa-Rygielska J, Pietrzak W, Peksa A. Patata lnea de procesamiento de grnulos subproductos como materia prima para la
produccin de etanol.Pol J Environ Stud 2012; 21: 1249-1255.
[28] Kim JH, Lee JC, Pak D. Viabilidad de la produccin de etanol a partir de residuos de alimentos.Residuos Maneje 2011; 31:
2121-5.

[29] Kawa-Rygielska J, Pietrzak W, Regiec P, Stencel P. La utilizacin de concentrado despus de la filtracin de membrana de la
remolacha azucarera jugo fina para la produccin de etanol.Bioresour Technol 2013; 133: 134-41.
[30] Kawa-Rygielska J, Pietrzak W. etanol fermentacin de muy alta gravedad (VHG) maz purs de Saccharomyces cerevisiae con
suplementos de levadura de cerveza pasado.Biomasa Bioenerga 2014; 60: 50-7.
[31]

Ribotta PD, evaluacin Le Bail A. Thermo-fsica de pan durante el endurecimiento.LWT - Food Sci Technol 2007; 40: 879-84.

[32] Devantier R, S Pedersen, Olsson L. Caracterizacin de muy alta gravedad etanol fermentacin de pur de maz.Efecto de la
dosis de glucoamilasa, pre-sacarificacin y la cepa de levadura.Appl Microbiol Biotechnol 2005; 68: 622-9.
[33] Thomas KC, Hynes SH, Ingledew WM. Consideraciones prcticas y tericas en la produccin de altas concentraciones de
alcohol por fermentacin.Proceso Biochem 1996; 31: 321-31.