Mtodos rpidos para identificacin de microorganismos

Mtodos fsicos para la deteccin de microorganismos.

A) Impedancia: Es la resistencia aparente presentada a la corriente
alterna. En un cultivo los microorganismos alteran los substratos
cambiando su conductividad elctrica y esto vara la impedancia. El
mtodo se basa en detectar estos cambios y la cantidad de
microorganismos se expresa como funcin del tiempo que tarda el
cultivo en alcanzar unos valores de impedancia correspondientes a
106 - 107 clulas por ml-1. (IDT: Imdepedance Detection Time). Es
necesario que el medio de cultivo permite un crecimiento homogneo
sin escalones.
B) Microcalorimetria: Estudio de los pequeos cambios de calor
producidos como consecuencia del anabolismo de nutrientes. Los
diferentes tipos de microorganismos metabolizan los substratos de
forma diferente y, por ello, se ha usado la microcalorimetra para poder
identificar las especies presentes en un alimento: usando un medio de
cultivo con una composicin definida de azcares pueden llegar a
identificarse diferentes tipos de bacterias lcticas mediante los
termogramas de su metabolizacin de los azcares presentes en el
medio.
C) Citometria de flujo: Mtodo basado en hacer pasar una a una las
clulas de una suspensin por un sistema de deteccin; este sistema
puede contener un detector capaz de medir diferentes parmetros
(diferentes tipos de fluorescencia, absorbancia, dispersin de luz, etc.)
lo que permite identificar las bacterias durante su paso por el detector.

Mtodos qumicos de deteccin de microorganismos.

A) Nucleasa Termoestable: S. aureus produce una nucleasa
termoestable con mayor rapidez y en mayor cantidad que la
enterotoxina responsable de la intoxicacin. La endonucleasa puede
detectarse experimentalmente como un ndice de la presencia de S.

aureus incluso en concentraciones demasiado bajas para que hayan

producido unas cantidades detectables de enterotoxina.
B) Lisado de Limulus: Usado para deteccin de endotoxinas
(derivadas del lipopolisacrido LPS de las bacterias Gram negativas).
Se basa en la aglutinacin de extractos de amebocito de sangre
de Limulus (cangrejo de mar) producido por cantidades del orden de
picogramos de LPS. Puede detectar 300 clulas de E. coli. El mtodo
detecta clulas viables y no-viables. Es muy rpido.
C) Sondas de cidos nucleicos: Sirven para identificar microorganismo
desconocidos por medio de Southern.
D) PCR: Mtodo para detectar nmero extremadamente bajos de
microorganismos con una cierta rapidez basado de la produccin de
copias de genes especficos de un microorganismo en cuestin.
E) Medida de ATP-: Se detecta la presencia de ATP usando luciferasa,
aunque hay algunos problemas experimentales que hacen que la
tcnica sea controvertida.
F) Radiometria: Medida de la transformacin de un substrato con 14C
en 14CO2: el tiempo necesario para detectar el 14CO2 es inversamente
proporcional a la cantidad de microorganismos presente.
G) Substratos Fluoro y Cromognicos: Se aaden como aditivos a los
medios de cultivos para facilitar y acelerar la deteccin de los
microorganismos.

Mtodos inmunolgicos.
Normalmente se usan antisueros que detectan flagelos (responsables
de las formas mviles de Salmonella y otras bacterias)
A) Anticuerpos fluorescentes: Se utiliza anticuerpo marcado con una
molcula fluorescente o un segundo anticuerpo que reconozca el
primero. Se pueden usar antisueros complejos en el primer anticuerpo
y de esta forma detectar cualquier tipo de Salmonella sin necesidad de
aislarlas. El mtodo tambin se ha usado para Clostridios aunque su

mayor aplicacin ha sido en Salmonella donde es muy conveniente

por la sensibilidad y rapidez.
B) Serologa de enriquecimiento: En este procedimiento
especialmente desarrollado para la deteccin de Salmonella, el
antisuero no se aade al alimento sino que se efecta un paso previo
de enriquecimiento del cultivo y de seleccin para evitar falsos
positivos.
C) Test 1 - 2 de Salmonella: Sistema con dos cmaras de agar blando.
Una de las cmaras (la de siembra) contiene un medio selectivo
paraSalmonella, las bacterias mviles de este gnero atraviesan la
cmara selectiva y pasan a la no selectiva pero portadora de un
anticuerpo especfico por lo que se forma una banda de aglutinacin
cuando entre Salmonella.
D) Radioinmunoensayo: se basa en el marcaje con un radioistopo de
un antgeno determinado (toxina producida por una bacteria patgena)
y su posterior deteccin por anticuerpos especficos fijados sobre un
soporte slido.
E) ELISA: El mtodo es similar al radioinmunoensayo: el antgeno se
fija en un soporte slido, se trata con el antisuero correspondiente y la
interaccin se detecta mediante una actividad marcadora (peroxidasa)
unida al anticuerpo en cuestin o a un segundo anticuerpo de
revelado.
El mtodo se ha usado para deteccin de Salmonellas. Toxinas de S
aureus, micotoxinas, toxinas de C. botulinum, enterotoxinas de E. coli.
F) Difusin en gel: Mtodo de Ouchterlony para deteccin de
antgenos.

Examen de superficies.
- Mtodos dirigidos a detectar y medir los nmeros de
microorganismos presentes en superficies contaminadas.

- Algunas veces es necesario aadir agentes neutralizantes para

eliminar el efecto de detergentes que han sido utilizados para limpiar
la superficie.
- El mtodo ms clsico de obtencin de muestra es el uso de
torundas de algodn o de alginato clcico. Las muestras se recogen
en seco o en hmedo y se depositan sobre medios de cultivo lquido
(generales o de enriquecimiento).
- En algunos casos se usan otros mtodos como el contacto con placa
o la jeringa de agar.