Facultad de ciencias biolgicas

Cuestionarios practica 10 y 11:

Escuela profesional de biologa

IHA y neutralizacin viral

Alumno
Suclupe Campos Danny

Docente:
Albino Cornejo Graciela.

Lambayeque, julio del 2016

Cuestionario de la prctica N10. Inhibicin de la hemaglutinacin

(IHA)
1. Qu factores intervienen en el resultado para dar un falso positivo?
Inhibidores especficos e inespecficos:El suero de muchas especies contienen inhibidores
inespecficos o aglutininas inespecficas que pueden conducir a errores en los resultados, por los que
deben ser destruidos antes de realizar una prueba de IHA, para permitir la determinacin del nivel de
anticuerpos especficos en un suero o para la correcta identificacin de un virus aislado.
De acuerdo a la naturaleza del receptor de virus el suero puede inactivarse con los siguientes
tratamientos: caoln, peryodato, tripsina, enzima destructora de los receptores (EDR), calor a 56 por
30 min.
La adsorcin del suero para eliminar aglutininas inespecficas en las pruebas de IHA en la cual se
emplean glbulos rojos de la misma especie del suero a probar, generalmente no es necesaria.[1]

Esta prueba puede dar resultados falsos positivos por reaccin cruzada de los anticuerpos
con virus antignicamente relacionados con el agente de inters, pero se sigue usando por ser
tcnicamente ms sencilla.
En la prueba de la HI, puede observarse cierto nivel de reactividad cruzada entre los distintos
serotipos de Paramixovirus aviares. Puede observarse reactividad cruzada entre virus PMVA-1 y
PMVA-3 (en concreto con la variante de las psitcidas PMVA-3, frecuentemente aislada de aves
mascota o exticas) o PMVA-7. El riesgo de tipificar errneamente una cepa puede reducirse
mucho empleando valores de sueros de referencia o anticuerpos monoclonales (MAbs)
especficos de PMVA-1, PMVA-3 and PMVA-7.[2]

2. qu es elusin de virus?
Elusin es la liberacin del virus. El virus produce elusin sobre el glbulo rojo a 37 C debido a la
destruccin del cido neuramnico en sus receptores por la neurominidasa del virin, El virus eluido
puede aglutinar un glbulo rojo fresco, pero ste, una vez eluido ya no puede ser aglutinado por la
misma especie de virus, debido a la prdida de sus receptores. Sin embargo el glbulo rojo eludido
puede ser aglutinado por el virus de la influenza y algunos Paramixovirus. Sobre esta base, estos
virus han sido dispuestos o incluidos en una serie llamada el gradiente de receptor. Las enzimas
destructoras de receptor producidas por Vibrio cholerae y otras bacterias impiden la aglutinacin de
glbulos rojos susceptibles por Mixovirus.[1]
3. Qu diferencia macroscpica hay entre una sedimentacin eritrocitaria y una
hemaglutinacin?
sedimentacin eritrocitaria
los globulos rojos en sangre no coagulada se
dirigen hacia el fondo del tubo , precipitan a una
velocidad constante, en un tiempo determinado

Hemaglutinacin
Los globulos rojos forman una malla una capa
fina y bien distribuida en el recipiente., esto
debido a la exposicin con un antgeno (un virus)

(1-2 horas), que se relaciona directamente con la que posee capacidad hemaglutinante.
tendencia de los glbulos rojos hacia la
formacin de acmulos (pilas de monedas) y el
plasma se observa en la parte superior por
diferencia de densidades.
No se forma botn en el fondo.
No existe exposicin a un antgeno.
4. Describa la inmunopatologia del virus de New Castle y a que se debe la denominacin de
las cepas.
Se ha demostrado que tanto la inmunidad celular como la humoral juegan un papel predominante en
la respuesta del ave a la infeccin con el virus de la enfermedad de Newcastle (Al Garib y col. 2003).
La mayor parte de las vacunas lentognicas son capaces de inducir anticuerpos que se correlacionan
positivamente con proteccin (Kapczynski & King 2005). Sin embargo, la respuesta inmune humoral
sistmica no es suficiente para una completa proteccin (Reynolds & Maraqa 2000). La inmunidad
mucosal representada por la produccin local de inmunoglobulina A (IgA) en el epitelio respiratorio y
digestivo, as como la estimulacin de la inmunidad mediada por clulas (que slo se genera luego
de la replicacin tisular del virus), son indispensables y sin duda el objetivo de la vacunacin con
virus vivo en aves jvenes en presencia de anticuerpos maternales. (Perozo y col., 2008; Seal, y col.,
2000b). [4]
Inmunopatologia:
En el sistema linfoide: cambios regresivos que se encuentran en el sistema linfopoytico consisten
en la desaparicin de tejido linfoide. Hiperplasia de las clulas fagociticas mononucleares en varios
rganos, especialmente en el hgado, puede tener lugar en las infecciones subagudas. Lesiones
necrticas encontradas en todo el bazo. Vocalizacin focal, se pueden ver destruccin de los
linfocitos en las reas corticales y centros germinales del bazo y el timo. Se pueden ver degeneracin
marcada de linfocitos en la regin medular en la bolsa de Fabrico.[3]
Denominacin de las cepas: para dar nombre a las cepas se han tomado diferentes aspectos
como:
El descubridor, (Roakin, Hertz), la zona donde se aisl, (Texas GB, Milano), cepas
mexicanas como (Queretaro e Iztapalapa).
Su relacin gentica entre los virus.
Variaciones antignicas menores entre diferentes cepas, el uso de anticuerpos
monoclonales permite detectar pequeas variaciones en la antigenicidad, (cambios de un
solo aminocido en el eptopo al que est dirigido el anticuerpo) por ejemplo el uso de dos
anticuerpos monoclonales a permitido diferenciar entre las cepas Hitchner BI y La Sota. [3]
Tomando en cuenta estas consideraciones tenemos las siguientes cepas.
Cepas lentogenicas: La Sota, Hitchner BI, Clona 30, F, Ulster 2C, MCIIO y V4.
Cepas mesogenicas: Roakin, Komarov, Meekteswar y H.

Cepas velogenicas: viscerotropicas: Milano, Hertz 33, N.Y, Parrot 70181, Essex 70, Ca 1083 y Largo
Las cepas mexicanas Queretaro e Iztapalapa. Neurotrpica: Texas GB

Referencias bibliogrficas
[1]HEMOAGLUTINACIN VIRAL(En linea) google docs. 2016. [fecha de consulta: 29 de junio del
2016].
Disponible
en
https://docs.google.com/document/edit?id=1DiQxBOQBgsAOaAhEfg9h65K8aZsqUhn2olEeGZYKv8&hl=es
[2]Organizacin mundial de sanidad animal: enfermedad de New Castle. [en linea]. Mayo del 2012.
[citado
06
de
julio
de
2016].
Disponible
en:
[http://www.oie.int/fileadmin/Home/esp/Health_standards/tahm/2.03.14_Enfermedad_Newcastle.pdf]
[3] Y. M. Saif, Aly M. Fadly, John R. Glisson, Larry R. McDougald, Lisa K. Nolan, David E. Swayne.
Diseases of Poultry.12 edicin. Australia. John Wiley & Sons, 2009 disponible en
[https://books.google.com.pe/books?id=ZVZ4whXoJa4C&pg=PA87&dq=Parrot+70181&hl=es419&sa=X&ved=0ahUKEwjWgPnwwDNAhVGpx4KHQtpBu4Q6wEIRDAD#v=onepage&q=Parrot%2070181&f=false]
[4] asociacin espaola de ciencia avcola. Experiencias prcticas en el control del virus de New
Castle. [en linea]. Zaragoza. 1998. [citado 06 de julio de 2016]. Disponible en: [http://www.wpsaaeca.es/aeca_imgs_docs/experiencias_practicas_control_newcastle_villegas.pdf]

Cuestionario de la prctica N11. Neutralizacin

1. Fundamente e interprete otros mtodos para evaluar seroneutralizacin.
La tcnica de seroneutralizacin (SN), consiste en una prueba punto final seroneutralizante, que
permite identificar y cuantificar la capacidad de los anticuerpos sricos para inhibir o neutralizar el
efecto citoptico de una cepa dada. Los anticuerpos neutralizantes son responsables del efecto
protector del suero y estn dirigidos contra determinantes antignicos especficos de la superficie del
virus. Esta prueba diagnstica presenta la limitante de no detectar bajas tasas de anticuerpos como
en el caso de animales virmicos inmunocompetentes.
Para implementacin de la prueba de seroneutralizacin se emplean dos mtodos principales:

i.
Suero variable-virus fijo: donde una cantidad medida de virus (por titulaciones previas) se
mezcla con diluciones variables de un suero problema y se inocula en un sistema husped

susceptible. La ms alta dilucin (o menor cantidad de suero) que protege de la infeccin se

denomina ttulo seroneutralizante.

ii. Suero constante-virus variable: donde diferentes concentraciones de virus se enfrentan a una
concentracin srica uniforme. Los resultados se expresan como ndice seroneutralizante (IN) y
representan la diferencia entre ttulo del virus en presencia de suero control negativo y el ttulo del
virus en presencia del suero problema.

En ambos mtodos debe definirse el punto final de infectividad, que consiste en la ms alta dilucin
de suero o virus que protege o infecta una unidad de sistema susceptible. Los puntos finales 100%
no son convenientes debido a que por encontrarse en los extremos, permiten detectar diferencias
mayores al 100%. El tipo de punto final deseable para la estimacin de una respuesta en la mitad de
las unidades prueba, o sea, el denominada punto final 50%. La precisin en la estimacin del valor
50% depender del nmero de unidades de prueba utilizadas por dilucin. El mtodo de Reed y
Muench es el ms empleado y se expresar de acuerdo al sistema indicador utilizado, infectividad
(DI50), muerte (DL50), parlisis (DP50), citoptico (DICT50), etc.

El mtodo inmunoenzimtico (ELISA) para la deteccin de anticuerpos, se utiliza para la

cuantificacin de muy pequeas cantidades de stos, que habitualmente no son detectables por los
mtodos convencionales; adems esta tcnica presenta la caracterstica de una alta especificidad y
sensibilidad, as como rapidez, lo que posibilita el estudio de grandes poblaciones en corto tiempo,
en forma rutinaria y sencilla . Por otra parte, su cuantificacin se basa en la reaccin enzima-sustrato
que produce un cambio de coloracin que se evala mediante un espectrofotmetro lo que evita
resultados subjetivos, adems resultan ser pocos los errores que esta tcnica presenta en caso del
uso de "kits" comerciales, puesto que las variables han sido estandarizadas de modo que los
parmetros medidos no sean alterados . [1]
2. Es posible que a todos los virus se pueda aplicar la prueba de neutralizacin.
Fundamente?
No es posible por distintas razones:
Evasin de la Respuesta Inmunolgica por:
Modificacin de la antigenicidad.
Variacin Antignica. Virus de la gripe, VIH, Rinovirus.
Desprendimiento de antgenos
Anticuerpos o inmunocomplejos
Localizacin intracelular. Virus del VIH
Enmascaramiento antignico.

Modificacion De La Respuesta Inmune

Activacin policlonal
Inmunosupresin
Supresin y bloqueo de B y T
Supresin de M y N
Induciendo Tolerancia. [2]
Los virus tambin evaden los sistemas de defensa del husped (neutralizacin) mediante un
cambio estructural de protenas de sus capsides por mutaciones, por ejemplo Las
mutaciones en el aminocido 120a en la protena de la cpside del VIH-2 juegan un papel
clave en la evasin. [3]
Mecanismos de evasin inmunitaria del Virus de Hepatitis C
As mismo, recientemente se encontr que la protena E2 de la envoltura viral es capaz de unirse a
varios receptores presentes en la superficie del hepatocito como el CD 81, el receptor humano para
detritos clase B tipo 1 y el heparan sulfato, de una manera no competitiva, utilizando diferentes
dominios de su estructura para asegurar la interaccin con la clula. As pues, la neutralizacin de
uno o incluso varios dominios de la E2, no impedira que sta logre unirse a otro receptor en el
hepatocito e iniciar la infeccin [4]
Referencias bibliogrficas
[1] Instituto de Virologa Seroneutralizacin [en linea]- Curso de Tcnicas de Diagnstico en Virologa
Animal.

INTA.
[citado
06
de
julio
de
2016].
Disponible
en:
[http://www.veterinaria.org/revistas/vetenfinf/vet_enf_inf_tripod/vetenfinftripodcomar/9SERON.htm]
[2] instituto de inmunologia clinica. Inmunopatologia: inmunidad innata y especifica frente a los
microorganismos [en linea] Mayo del 2012. [citado 06 de julio de 2016]. Disponible en:
[http://www.medic.ula.ve/idic/docs/clases/iahula/curso_2009/tema14.pdf]
[3] Hironori S. Genomics and computational science for virus research.Tokio. Frontiers in
microbiology. 2013
[4] ] Heo TH, Chang JH, Lee JW, Foung SK, Dubuisson J, Kang CY. Incomplete humoral immunity
against hepatitis C virus is linked with distinct recognition of putative multiple receptors by E2
envelope glycoprotein. J Immunol 2004; 173(1): 446-455.