Laboratorio #10

Extraccin y Anlisis de DNA

Ganchozo Basurto Richard
1er Semestre / Grupo # 1

Introduccin:
Por muchos aos se haba tratado de entender la estructura molecular del ADN el cual
posee la informacin gentica de cada clula, no fue hasta que una mujer fsico-qumica
llamada Rosalind Franklin realiza un estudio exhaustivo, y logra obtener la fotografa
51 en la cual se poda apreciar de una manera muy clara la estructura. Ella no logra
obtener reconocimiento por este logro debido a que Watson y Crick tomaron ventaja y
presentaron estas fotografas con argumentos vlidos y concretos.

El cido desoxirribonucleico,

Materiales:
Actividad #1: Extraccin de DNA.

Arvejas.
Frutillas.
Agua destilada.
Sal comn.
Detergente lquido.
Alcohol etlico 96% fro.
Vasos de precipitacin.
Tubos de ensayo.
Hielo.
Licuadora.
Balanza.
Cedazos

Actividad #2: Anlisis de DNA por medio de la electroforesis.

Buffer.

Micropipeta de 10 microL.
Puntas de pipetas estriles.
Cinta adhesiva.
Agarosa en polvo.
Equipo de electroferosis (cubeta horizontal, molde, peine, fuente de
alimentacin)

Procedimiento experimental:
Actividad#1: Destruccin celular:
1. Se obtuvieron las frutillas y se pelaron las arvejas,
2. Se coloc 100 ml de cada una de las muestras en dos vasos de precipitacin
diferentes junto con 200 ml de agua destilada fra.
3. Se aadi sal.
4. Se aadi a la licuadora y al mximo de su capacidad se licu durante 15
segundos.
5. Con ayuda del cedazo se agreg la mezcla a un vaso de precipitacin.
Actividad#2: Digestin enzimtica:
1. Se aadi una pizca de suavizante de carne, procurando no ser muy bruscos.
2. Se dej reposar el tubo durante 10 minutos.

Actividad#3: Precipitacin alcohlica:

1. Se aadi al tubo de ensayo 1/3 de nuestra mezcla, se aadi la misma cantidad
de alcohol frio.
2. Se dej reposar durante 30 minutos y se observ la formacin de fibras
blanquecinas delgadas en la unin de dos capas.
3. Con ayuda de una pipeta se recogi fibras blanquecinas y se las agregaron a un
recipiente pequeo, al que posterior se le hecho buffer y a el otro alcohol etlico
al 70%.
Actividad #4: Electroforesis de DNA en gel de agarosa:
1. Se prepar la mezcla de la agarosa en polvo con el reactivo de buffer.
2. Se cerr el molde con cinta adhesiva

3. Se agreg el peine para formar los pocillos, estos se deben encontrar en la parte
ms cercana al ctodo (negativo), junto con la mezcla, se dej reposar y
gelificar.
4. Se utiliz la muestra de la arveja con el reactivo de buffer, de esta se extrajo, con
ayuda de la micro pipeta, 10 microL y se lo agreg a un recipiente limpio,
procurando dejar toda la muestra en el fondo y no en la pared.
5. Con el micro pipeta se tom 2 microL de colorante azul, el cual fue agregado al
nuevo recipiente con la mezcla.
6. Luego de que estas dos se mezclaran, se recogieron 10 microL de la solucin y
se agregaron a los pocillos del gel ya formado, se coloc la cubierta de la cubeta
en los terminales de los electrodos, se coloc la clavija del cable negro en la
entrada de color negro y la clavija de color rojo en la entrada de color rojo de la
fuente de alimentacin, se conect a la fuente de red y se gener una corriente
elctrica; se dej reposar durante media hora.
7. Con cuidado se tom el gel y se lo coloc a bao en agua destilada para poder
eliminar el exceso de colorante que exista.
8. Se dej reposar y se observ resultados.

Resultados:
Actividad#1:
Discusin de resultados:
Por qu se aadi sal (cloruro de sodio)? Qu papel desempea en el proceso de
extraccin? Explica tus respuestas en funcin de la polaridad de las molculas.
Debido a que Los grupos fosfato estn cargados negativamente y son polares, lo que le
confiere al ADN una carga neta negativa y lo hace altamente polar, caractersticas que
son aprovechadas para su extraccin. Los grupos fosfato tienen una fuerte tendencia a
repelerse, debido a su carga negativa, lo que permite disolver al ADN en soluciones
acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la molcula. Pero, en presencia de
alcohol, se rompe la capa hidratante y quedan expuestos los grupos fosfato. Bajo estas
condiciones, al colocar la sal, se favorece la unin con cationes como Na+ que reducen
las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucletidos y permiten que el ADN precipite
lo que ayuda en su proceso de extraccin (Sambrook et al. 1989).
Adems, gracias a la fuerte tendencia hidroflica de los grupos fosfato para separarlos en
medios acuosos, mientras que las protenas y los lpidos se separan en solventes

orgnicos (Sambrook et al. 1989). En este caso, la protena y la grasa irn al fondo, que es
la capa acuosa, mientras que el ADN prefiere la capa superior, el alcohol.

Por qu se aade el detergente? Qu papel desempea en el proceso de

extraccin?
Esto confirma que el detergente aadido ayudo a que las membranas celulares se
rompiesen permitiendo la salida del ADN al exterior. Debido a que contiene lauril
sulfato de sodio, el cual acta, separando las grasas (lpidos) y las protenas que
constituyen las membranas que rodean la clula y el ncleo.
Una vez logrado su salida, Se matuvo puro al adnd utilizando suavizante de carne y
trabajando a bajas temperaturas.
Qu contiene el suavizante de carne? Qu clase de enzimas contiene y para qu
se utilizan durante la extraccin?
la solucin ablandadora de carne tambin acto como una enzima, que contribuye a eliminar las protenas
que puedan contaminar el ADN. Las enzimas son unas sustancias que atacan a las

protenas de las clulas, lo que permite romperlas y separarlas del ADN, que
es el material que buscamos
Por qu es mejor realizar la extraccin a bajas temperaturas?
Ademas tambin el trabajar a bajas temperaturasLas bajas temperaturas ayudo a
mantener el DNA intacto durante el proceso de extraccin. El enfriamiento de la
solucin ayuda a prevenir la desnaturalizacin que podra destruir el DNA si se
expusiera al calor de manera prolongada (protege el DNA de enzimas que pueden
destruirlo como las DNAasas ya que la refrigeracin ralentiza las reacciones
enzimticas).
Qu clases de enzimas podran degradar DNA? dnde se encontraran estas
enzimas dentro de la clula?
Finalmente, al realizar la Comprobacin de la integridad del ADN por electroforesis en
gel de agarosa Si el ADN est integro, se debe observar una banda estrecha cercana al
pozo en que se coloc la mezcla de ADN. Si est fragmentado, se observar una banda
de ms de un cm de ancho o un sendero luminoso en el carril de la muestra.
Determinando as que El ADN fragmentado dificulta la amplificacin de productos de
PCR de alto peso molecular y afecta la reproducibilidad de las tcnicas.

Conclusiones:
Cuestionario:
Por qu sera complicado extraer DNA de clulas del tejido adiposo?
Porque las clulas en su gran parte tienen lpidos y grasas al aplicar el detergente no
logra romper todos estos lpidos y grasas
La masa blanca que obtuviste es DNA puro o ser una mezcla entre DNA y RNA?