Identificacin y anlisis funcional de nuevos

oncogenes amplificados en cncer de pulmn

Sandra Castillo Dez

ADVERTIMENT. La consulta daquesta tesi queda condicionada a lacceptaci de les segents condicions d's: La difusi
daquesta tesi per mitj del servei TDX (www.tdx.cat) ha estat autoritzada pels titulars dels drets de propietat intellectual
nicament per a usos privats emmarcats en activitats dinvestigaci i docncia. No sautoritza la seva reproducci amb
finalitats de lucre ni la seva difusi i posada a disposici des dun lloc ali al servei TDX. No sautoritza la presentaci del
seu contingut en una finestra o marc ali a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant al resum de presentaci
de la tesi com als seus continguts. En la utilitzaci o cita de parts de la tesi s obligat indicar el nom de la persona autora.

ADVERTENCIA. La consulta de esta tesis queda condicionada a la aceptacin de las siguientes condiciones de uso: La
difusin de esta tesis por medio del servicio TDR (www.tdx.cat) ha sido autorizada por los titulares de los derechos de
propiedad intelectual nicamente para usos privados enmarcados en actividades de investigacin y docencia. No se
autoriza su reproduccin con finalidades de lucro ni su difusin y puesta a disposicin desde un sitio ajeno al servicio
TDR. No se autoriza la presentacin de su contenido en una ventana o marco ajeno a TDR (framing). Esta reserva de
derechos afecta tanto al resumen de presentacin de la tesis como a sus contenidos. En la utilizacin o cita de partes de
la tesis es obligado indicar el nombre de la persona autora.

WARNING. On having consulted this thesis youre accepting the following use conditions: Spreading this thesis by the
TDX (www.tdx.cat) service has been authorized by the titular of the intellectual property rights only for private uses placed
in investigation and teaching activities. Reproduction with lucrative aims is not authorized neither its spreading and
availability from a site foreign to the TDX service. Introducing its content in a window or frame foreign to the TDX service is
not authorized (framing). This rights affect to the presentation summary of the thesis as well as to its contents. In the using
or citation of parts of the thesis its obliged to indicate the name of the author.

Tesisdoctoral
2011
UniversidaddeBarcelona

FacultaddeBiologa
ProgramadeDoctoradoenBiomedicina
InstitutodeInvestigacinBiomdicadeBellvitge(IDIBELL)

Identificacinyanlisisfuncionaldenuevos
oncogenesamplificadosencncerdepulmn

SandraCastilloDez

Doctoranda:

Directora:

SandraCastilloDez

MontseSanchezCespedes

MemoriapresentadaporSandraCastilloDez,licenciadaenBiologa,paraoptaralgradode
DoctoraporlaUniversidaddeBarcelona.
LapresentetesisdoctoralhaestadorealizadabajoladireccindelaDra.MontseSanchez
Cespedes en el Grupo de Cncer de Pulmn del Centro Nacional de Investigaciones
Oncolgicas (CNIO, Madrid) y en el Grupo de Genes y Cncer dentro del Programa de
EpigenticayBiologadelCncer(PEBC)delInstitutodeInvestigacinBiomdicadeBellvitge
(IDIBELL,Barcelona).

Amispadres,JuanFyPili,
amihermana,Edurne

ndice

10

ndice

11

Introduccin

13

1. Cncerdepulmn

1.1. Epidemiologadelcncerdepulmn

1.1.1. Tabaquismo

1.2. Tiposhistolgicos

1.2.1. Lesionespreneoplsicasdelcncerdepulmn

2. BiologaMoleculardelCncerdePulmn

2.1. Descripcindelasalteracionesgenticasencncerdepulmn
2.2. Vasbiolgicasalteradasencncerdepulmn

2.2.1. Receptoresdemembranayvasdetransduccindeseales
2.2.2. Regulacindelatranscripcinyremodelacindecromatina
2.2.3. Ciclocelular

2.2.4. ReparacindelDNAyapoptosis

2.3. Distribucindelasalteracionesgenticasenlosdistintostipos
histopatolgicos

3. Losoncogenescomodianasteraputicasencncerdepulmn

3.1. Adiccinoncognica

3.2. Terapiamolecularencncerdepulmn

3.2.1. Terapiamolecularcontrareceptorestirosinaquinasa

3.2.2. Otrasterapiasmolecularesencncerdepulmn

4. Identificacindenuevosoncogenesencncerdepulmn

4.1. Identificacinderegionesamplificadas

4.2. Identificacindemutacionessomticas

15
15
16
18
20
21
23
24
25
26
28
28
30
31
31
32
32
33
34
34
35

Objetivos

37

ArtculoI

41

ArtculoII

45

ArtculoIII

49

Resumen

53

Discusin

57

Conclusiones

73

Bibliografa

77

InformedelaDirectora

99

11

12

Introduccin

13

14

INTRODUCCIN

Introduccin

1. Cncerdepulmn

El cncer de pulmn est provocado por un crecimiento anormal e incontrolado de las

clulas del pulmn que en su progresin produce disfunciones respiratorias y puede invadir
otrosrganoscomoganglioslinfticos,hueso,cerebro,glndulassuprarrenalesehgado.

1.1. Epidemiologadelcncerdepulmn

A nivel mundial, el cncer de pulmn es el tipo de cncer ms comn en hombres y el

cuartoenmujeres,conmsdeunmillnymediomillndecasosrespectivamente,enunao
entodoelmundo.Elcncerdepulmneslaprincipalcausademuerteporcncerenhombres
ylasegundacausademuerteporcncerenmujeres,detrsdelcncerdemama(figura1).

Figura 1. Estimacin de casos nuevos y muertes por cncer en el mundo en 2008, dividido por
sexos.(GlobalCancer,Facts&Figures,AmericanCancerSociety,www.cancer.org)

A pesar de algunas mejoras en las tcnicas quirrgicas y terapias combinadas en las

ltimas dcadas, el cncer de pulmn es uno de los cnceres ms letales. La tasa de
supervivenciarelativaacincoaoseslasegundamsbaja,pordetrsdelcncerdepncreas,
siendo de 16% para todos los estadios combinados en los Estados Unidos y del 53% en los
casos detectados cuando la enfermedad est todava localizada, aunque slo el 15% de los
cnceres de pulmn se diagnostican en esta etapa temprana. En Europa, las tasas de
supervivenciaacincoaossongeneralmentesimilaresaestas,quevandesdeel7,9%a16,5%
(GlobalCancer,Facts&Figures,2008;AmericanCancerSociety,www.cancer.org).

15

INTRODUCCIN

1.1.1. Tabaquismo

Elcncerdepulmnesunodeloscnceresmspreveniblesyaquealrededordel80%de
loscasosenhombresy50%enlasmujeresentodoelmundosondebidosalhbitodefumar,
adems,estehbitoeselresponsabledel30%delasmuertesporcnceryelriesgoaumenta
con la cantidad y la duracin del consumo de cigarrillos. Entre los aos 1940 y 1950, tanto
clnicos como investigadores, observaron un aumento alarmante de los casos de cncer de
pulmn y encontraron una relacin clara entre estos casos y elhbito de fumar ya que este
tipodecncereramuyraroantesdelconsumogeneralizadodetabaco(Auerbachetal.,1957;
Burney,1959;Cornfieldetal.,1959).
Entre los 4000 productos qumicos identificados en el humo del tabaco, ms de 60 son
carcingenosydentrodeestos,losmspotentessonloshidrocarburospolicclicosaromticos
(HPAs), las Nnitrosaminas y las aminas aromticas. Podra decirse que los carcingenos ms
importantesencncerdepulmnsonlosHPAscomoelbenzo(a)pireno(BaP)ylanitrosamina
especfica del tabaco 4(metilnitrosamina)1(3piridil)1butanona, tambin conocida como
nitrosamincetona derivada de la nicotina (NNK) (Hecht, 1999; Hoffmann et al., 2001). La
respuestadelorganismoalaexposicinaestoscarcingenosessimilaraladecualquierotra
sustanciaextraa,lasenzimasdelcitocromoP450aadenuntomodeoxgenoalcarcingeno
para aumentar su solubilidad en agua y as excretarlo ms fcilmente. Estas reacciones
metablicas de detoxificacin pueden generar productos intermedios electroflicos que
reaccionanconelDNAformandoproductosunidoscovalentementeconocidoscomoaductos
de DNA (figura 2). Este proceso por el cual un carcingeno no reactivo se convierte en un
productoqueseunealDNAesconocidocomoactivacinmetablica(Hecht,1999;Tangetal.,
2001). Las clulas tienen sistemas de reparacin de DNA que eliminan estos aductos
(Hanawalt, 2001; Memisoglu and Samson, 2000; Norbury and Hickson, 2001; Pegg, 2000),
aunque este sistema no es completamente eficiente y algunos escapan de la reparacin,
persistenenelDNAypuedengenerarvariacionesenelDNAdurantelareplicacin.Estedao
irreversible puede afectar a genes esenciales para la regulacin de la homeostasis celular y
conduciraunprocesooncognico(figura3).Porejemplo,traslaactivacinmetablicadela
NNK se forma un aducto de DNA que es malinterpretado por las polimerasas de DNA y
produce una conversin permanente de guaninacitosina por adeninatimina, esta mutacin
puedeactivareloncognKRASoinactivarelgensupresordetumoresp53(Hecht,1999).

Figura 2. Rutas metablicas de los carcingenos del tabaco benzo(a)pireno y NKK. EH, epxido
hidrolasa; BaP, benzo(a)pireno; GST, glutatin Stransferasa; NNAL, 4(metilnitrosamina)1(3
piridil)1butanol;UGT,UDPglucuronosiltransferasa;P450,citocromoP450.(Hecht,2002)

16

INTRODUCCIN

Menosdel20%delosfumadoresdesarrollacncerdepulmn,aspues,laepidemiologa
molecularhademostradoqueexisteunasusceptibilidadgenticaquecontribuyealriesgode
padecer cncer de pulmn, especialmente en aquellos que desarrollan la enfermedad a una
edad temprana. Se ha sugerido que esta susceptibilidad se basa en la combinacin entre
polimorfismos genticos de los componentes de los sistemas de activacin metablica y
detoxificacindecarcingenos(Amosetal.,1999).Adems,recientementesehanidentificado
regionescromosmicasypolimorfismosqueconfierenpredisposicinadesarrollarcncerde
pulmn.Unadeestasregionesesellocus15q25quecontienegenescomoPSMA4yCHRNA5,
CHRNA3 y CHRNA4 que codifican subunidades de receptores nicotnicos (Amos et al., 2008;
Hungetal.,2008).Laidentificacindeestelocusgeneradudassobresiestasvariantestienen
unefectocarcinognicodirectoo,indirectamente,aumentanlapredisposicinafumar.Otros
locirelacionadosconlasusceptibilidadapadecercncerdepulmnson5p15.33quecontiene
losgenesTERTyCLPTM1Ly6p21.33(McKayetal.,2008;Wangetal.,2008).

Figura 3. Esquema de la relacin entre los carcingenos del tabaco con los mltiples cambios
genticoseneltejidopulmonaryeldesarrollodecncerdepulmn(Minnaetal.,2002).

Lasvariacionesinternacionalesytemporalesenlastasasdecncerdepulmnreflejanen
granmedidalaepidemiadeltabaquismo.Envariospasesoccidentalesdondelaepidemiadel
tabaquismoalcanzsupuntomximoamediadosdelsiglopasadolatasadecncerdepulmn
han estado disminuyendo en los hombres. En cambio, en pases donde la epidemia se ha
establecidomsrecientementeestatasasigueaumentando.Ladiferenciaenlastendenciasde
los casos entre hombres y mujeres tambin refleja la importancia de esta epidemia en la
aparicindenuevoscasos,yaquelatasadehombresdisminuyemientrasquelademujeresva
en aumento, reflejando la incorporacin tarda de la mujer al hbito de fumar. As pues, la
mayora de los casos de cncer de pulmn podra prevenirse mediante la no iniciacin del
tabaquismoentrelosadolescentesyelabandonoentrelosadultos.
Otros factores de riesgo para el cncer de pulmn incluyen el tabaquismo pasivo,
exposicinocupacionaloambientalalradnyelasbesto(especialmenteentrelosfumadores),
ciertosmetales(cromo,cadmio,arsnico),algunosproductosqumicosorgnicos,laradiacin,
lacontaminacinatmosfrica,elhumodelcarbnylasemisionesdeinteriordelaquemade

17

INTRODUCCIN

otros combustibles (Global Cancer, Facts & Figures, 2008; American Cancer Society,
www.cancer.org).

1.2. Tiposhistolgicos

Clsicamente,elcncerdepulmnsedivideendostiposhistolgicosprincipales:elcncer
depulmndeclulapequea(microctico)(SCLC,delinglssmallcelllungcancer)yelcncer
depulmndeclulanopequea(nomicroctico)(NSCLC,delinglsnonsmallcelllungcancer).
El NSCLC se subdivide a su vez en carcinoma escamoso (SCC, del ingls squamous cell
carcinoma), adenocarcinoma (AC) y carcinoma de clula grande (LCC, del ingls large cell
carcinoma)queeselmenosdiferenciadodentrodelosNSCLC(figura4).Adems,dentrodel
grupo de los AC cabe diferenciar varios subtipos de entre los que destacan el carcinoma
bronquioalveolar (BAC) no invasivo, por su relacin con el cncer de pulmn no asociado al
hbitotabquico.

Figura 4. Tipos histolgicos de cncer de pulmn. 1) Carcinoma escamoso, H&E x200. 2)

Adenocarcinoma,H&Ex200.3)Carcinomadeclulagrande,H&Ex100.4)Tejidopulmonarnormal,
H&E x40. 5) Carcinoma microctico, x200. 13 Imgenes cedidas por la Dra. Esther Conde. 4, 5
ImgenesdelAtlasdeHistologaFuncional(YoungB,HeathJW).

Una clasificacin histolgica ms completa de los tipos de tumores pulmonares es la

establecidaporlaOrganizacinMundialdelaSaluden2004(tabla1).

18

INTRODUCCIN

MALIGNANTEPITHELIALTUMOURS
Preinvasivelesions
Squamouscarcinomainsitu
Atypicaladenomotoushyperplasia
Diffuseidiopathicneuroendocrinecell
hyperplasia
Squamouscellcarcinoma(SCC)
Papillary
Clearcell
Smallcell
Basaloid
Adenocarcinoma(AD)
Adenocarcinoma,mixedsubtype
Acinaradenocarcinoma
Papillaryadenocarcinoma
Bronchiloalveolarcarcinoma

Nonmucinous

Mucinous

Mixednonmucionousand
mucinous
Solidadenocarcinomawithmucin
production
Fetaladenocarcinoma
Mucionous(colloid)carcinoma
Mucinouscystadenocarcinoma
Signetringadenocarcinoma
Clearcelladenocarcinoma
Largecellcarcinoma(LCC)
Largecellneuroendocrinecarcinoma/
Combined
Basaloidcarcinoma
Lymphoepitheliomalikecarcinoma
Clearcellcarcinoma
Largecellcarcinomawithrhabdoid
phenotype

Adenosquamouscarcinoma
Sarcomatoidcarcinoma
Pleomorphiccarcinoma
Spindlecellcarcinoma
Giantcellcarcinoma
Carcinosarcoma
Pulmonaryblastoma
Smallcellcarcinoma(SCLC)
Combinedsmallcell
carcinoma
Carcinoidtumour
Typicalcarcinoid
Atypicalcarcinoid
Salivaryglandtumour
Mucoepidermoid
carcinoma
Adenoidcysticcarcinoma
Epithelialmyoepithelial
carcinoma

BENIGNEPITHELIAL
TUMOURS
Papillomas
Squamouscellpapilloma
Glandularpapilloma
Mixedsquamouscelland
glandularpapilloma
Adenomas
Alveolaradenoma
Papillaryadenoma
Adenomasofthesalivary
glandtype
Mucinouscystadenoma

MESENCHYMALTUMOURS
Epithelioidhaemangioendothelima
Angiosarcoma
Pleuropulmonaryblastoma
Chondroma
Congenitalperibronchial
myofibroblastictm
Diffusepulmonary
lymphangiomatosis
Inflammatorymyofibroblastic
tumour
Lymphangioleiomyomatosis
Synovialsarcoma
Monophasic
Biphasis
Pulmonaryarterysarcoma
Pulmonaryveinsarcoma

LYMPHOPROLIFERATIVE
TUMOURS
MarginalzoneBcelllymphoma
(MALT)
DiffuselargeBcellLymphoma
Lymphomatoidgranulomatosis
Langerhanscellhistioytosis

MISCELLANEOUSTUMOURS
Hamartoma/Sclerosing
hemangioma
Clearcelltumour/Germcell
tumour
Intrapulmonarythymoma/
Melanoma

METASTATICTUMOURS

Tabla1.Clasificacinhistolgicadelostumoresdepulmn.Modificadode(Travisetal.,2004).

El cncer de pulmn puede surgir de los bronquios principales (tumores centrales) o de

bronquiospequeos,bronquiolosoalveolos(tumoresperifricos).Loscarcinomasmicrocticos
yescamosossuelenaparecercomotumorescentralesmientrasquelosadenocarcinomasylos
carcinomasdeclulagrandeselocalizanperifricamente.

19

INTRODUCCIN

1.2.1. Lesionespreneoplsicasdelcncerdepulmn

El cncer de pulmn aparece tras una serie de cambios progresivos moleculares y

morfolgicos en la mucosa respiratoria, las llamadas lesiones preneoplsicas o premalignas.
Esta secuencia de cambios preneoplsicos est bien definida para los carcinomas escamosos
peronotantoparalosotrostiposhistolgicos.
Loscambiosenlamucosadelasvasrespiratoriasqueprecedenalcarcinomainvasivode
clulaescamosaincluyenhiperplasia,metaplasiaescamosa,displasiaescamosaycarcinomain
situ(CIS)(figura5)(Colbyetal.,1998;Kerr,2001).Alnohaberclulasescamosasenlasvas
respiratorias normales no se conocen con exactitud las clulas progenitoras del epitelio
metaplsico escamoso, aunque la metaplasia escamosa suele preceder y acompaar la
hiperplasiadeclulasbasales(Hirschetal.,2001;Leeetal.,2001).

Figura 5. Cambios histopatolgicos durante el desarrollo del carcinoma escamoso de pulmn

(WistubaandGazdar,2006).

El adenocarcinoma es el tipo histolgico de cncer de pulmn ms frecuente, sobretodo

en mujeres, no fumadores y jvenes. Los adenocarcinomas pueden ser precedidos por
cambios morfolgicos que incluyen hiperplasia adenomatosa atpica (AAH) en clulas de las
vas areas perifricas y carcinoma bronquioalveolar (BAC) (figura 6) (Colby et al., 1998;
Westra, 2000). En la zona de unin bronquioalveolar se localizan las clulas madre
bronquioalveolares(BASCs,bronchioalveolarstemcells)quemantienenlapoblacindeclulas
deClarayneumocitostipoIIylatransformacindeestasclulasoriginareladenocarcinoma
depulmn(Kimetal.,2005).

20

INTRODUCCIN

Figura 6. Cambios histopatolgicos durante el desarrollo del adenocarcinoma de pulmn. AAH,

hiperplasia adenomatosa atpica; BAC, carcinoma bronquioalveolar. Modificado de (Wistuba and
Gazdar,2006).

Loscarcinomasmicrocticostienencaractersticasneuroendocrinas,porloqueprovienen
de clulas programadas para diferenciarse a este tipo celular. No se conocen las lesiones
precursorasdeestetipohistolgico,queprobablementeaparezcadirectamentedeunepitelio
normalolevementeanormalsinpasarporunasecuenciadecambioshistolgicos.Aunquees
sabido que una lesin rara, la hiperplasia idioptica difusa de clulas neuroendocrinas
pulmonares(DIPNECH),estasociadaaldesarrollodeotrostiposdetumoresneuroendocrinos
depulmn(Aguayoetal.,1992;Armasetal.,1995;Colbyetal.,1998).

Las lesiones preneoplsicas de cncer de pulmn suelen ser amplias y multifocales, la

llamada cancerizacin de campo, lo que indica que gran parte del epitelio pulmonar ha
sufrido mutagnesis, probablemente por la exposicin a carcingenos relacionados con el
tabaco(Wistubaetal.,2002).

2. Biologamoleculardelcncerdepulmn

Elcnceresunheterogneoycomplejogrupodeestadospatolgicosenelquelasclulas
se dividen anormalmente debido al mantenimiento de seales proliferativas y eludiendo las
antiproliferativas, evadiendo la muerte celular y el sistema inmune, reprogramando el
metabolismoenergticocelularypermitiendounainmortalidadreplicativa.Loqueconfierela
caracterstica de malignidad a esta proliferacin es la capacidad angiognica, la invasin y la
metstasis provocando disfuncionalidades graves en el organismo. La inestabilidad gentica
genera la diversidad gentica que precipita la adquisicin de estas caractersticas y la
inflamacintambinlasfomenta(figura7)(HanahanandWeinberg,2011).

21

INTRODUCCIN

Figura7.HallmarksofCancer(HanahanandWeinberg,2011).

Elestudiodelabiologamolecularencncerdepulmntieneunaimplicacindirectacon
su clnica ya que permite conocer ms la biologa de este tipo de cncer de tal forma que
proporciona informacin til para la prevencin, deteccin temprana, el diagnstico y
pronstico y las posibles respuestas al tratamiento (tabla 2). Gracias a ella es posible, por
ejemplo, encontrar anormalidades ya descritas en clulas bronquiales expuestas a
carcingenos e intervenir con un tratamiento temprano o preventivo. Por otro lado, la
identificacin de cambios moleculares comunes en la heterogeneidad del cncer de pulmn
tambintieneimplicacioneseneldesarrollodebiomarcadoresparaeldiagnsticoylaterapia
(Fongetal.,2003).

Tabla2.Usoclnicodelainformacinmolecularencncerdepulmn(Fongetal.,2003).

22

INTRODUCCIN

Elcncereslaenfermadgenticamscomn.Alolargodelavida,elDNAestexpuestoa
mutgenosquegeneranerroresenlareplicacin,resultandocambiossutilesyprogresivosen
la secuencia de DNA de cada clula. A veces, una de estas mutaciones somticas altera la
funcindeungencrticoproporcionandounaventajaenelcrecimientodelacluladondese
daelcambioloquepromuevelaexpansinclonaldedichaclula.Mutacionesadicionalesen
genes relevantes y olas consecutivas de expansin clonal generan clulas que invaden los
tejidoscircundantesymetastatizan.
Desdeunpuntodevistagentico,losgenesdelcncersonaquellosqueestnalterados
genticamente en los tumores (Futreal et al., 2001; Haber and Harlow, 1997). Estas
alteraciones genticas derivarn en una ganancia de funcin o inactivacin de la protena
codificada en oncogenes o genes supresores de tumores (TSGs, del ingls tumor suppressor
genes)respectivamente. Generalmente,losoncogenessonactivadosatravsdemutaciones
puntuales, amplificacin gnica o translocaciones cromosmicas, mientras que los TSGs son
inactivados por alteraciones biallicas (Knudson, 1971) que pueden ser combinaciones de
mutacionespuntuales,delecionesohipermetilacindelpromotor.
LosoncogenesylosTSGstambinsehandefinidodesdeunaperspectivafuncionalcomo
lahabilidaddeungendeterminadodetransformarunaclulanormal(oncogn)odeinhibirel
crecimientodeunaclulatumoral(TSG).

2.1. Descripcindelasalteracionesgenticasencncerdepulmn

La carcinognesis pulmonar es debida a la activacin e inactivacin de genes que son

esenciales en el control de vas moleculares reguladoras de la transduccin de seales, ciclo
celular,reparacindeDNAyapoptosis,entreotras.
Es sabido que diversas alteraciones genticas contribuyen al desarrollo del cncer de
pulmn (figura 8). Estas alteraciones incluyen la amplificacin de genes de la familia MYC,
mutaciones activadoras en EGFR, KRAS, BRAF o betacatenina, tanto amplificaciones como
mutacionesenlosgenesCMEToPIK3CAytranslocacionescromosmicasqueafectanelgen
ALK(SanchezCespedes,2009).Lainactivacindegenessupresoresdetumoresencncerde
pulmnsedamedianteprdidadeheterocigosidad(LOH,delinglslossofheterocygosity)y
mutaciones que ocurren en los genes APC y ATM, este tipo de alteraciones junto con
deleciones homocigotas se dan en los genes RB, PTEN, TP53, SMAD4, LKB1 y BRG1. La
hipermetilacin de promotor es otro mecanismo de inactivacin que, junto con otros
genticos, en cncer de pulmn puede afectar a P16 y LRP1B (Liu et al., 2000; Sanchez
Cespedes,2009;Sonodaetal.,2004).

23

INTRODUCCIN

Figura 8. Localizacin cromosmica y tipo de alteracin en genes supresores de tumores (rojo) y

oncogenes (verde) en cncer de pulmn. 1Amplificacin gnica. 2Mutaciones activadoras.
3
Translocaciones cromosmicas. 4LOH. 5Mutaciones inactivadoras. 6Deleciones homocigotas.
7
Hipermetilacindepromotor.(SanchezCespedes,2009)

Los genes alterados en cncer se pueden adscribir a vas biolgicas determinadas, tal y
comosedetallaacontinuacin.

2.2. Vasbiolgicasalteradasencncerdepulmn

Losgenesalteradosencncerdepulmnestninvolucradosenlasvasmolecularesque
regulanlasealizacinmitognica,laapoptosis,elciclocelularyelmetabolismocelular,entre
otras. Es comn encontrar en el mismo tumor alteraciones en genes que pertenecen a
diferentesvasmoleculares,loquesugierelaexistenciadeunacooperacinentrediferentes
circuitosmolecularesqueconllevaaldesarrollotumoral.Sinembargo,alteracionesenciertos
genesnuncaocurrensimultneamente,loquesignificaquesonfuncionalmenteequivalentesy
presumiblemente pertenezcan a la misma va molecular, por lo que la alteracin de uno de
ellos es suficiente para mantener una activacin constante de la va molecular a la que
pertenecen.Laaparicindealteracionessecundariasenlamismavamoleculareslabasedela
aparicindeunaresistenciasecundariaaterapiasinicialmenteefectivas.

24

INTRODUCCIN

2.2.1. Receptoresdemembranayvasdetransduccindeseales

LafamiliaERBBesungrupodereceptorestransmembranaconactividadtirosinaquinasa
quejuntoconsusligandosconstituyenunbucledeestimulacindecrecimientoyproliferacin
en cncer de pulmn no microctico. Los dos miembros ms importantes de esta familia en
cncer de pulmn son el receptor del factor de crecimiento epidrmico (EGFR, ERBB1) y
HER2/neu (ERBB2). EGFR regula la proliferacin y diferenciacin epitelial y est mutado y
amplificado en un alto porcentaje de adenocarcinomas de pulmn, principalmente de no
fumadores (Conde et al., 2006; Lynch et al., 2004; Paez et al., 2004; Scagliotti et al., 2004).
Cuando EGFR se une a su ligando homodimeriza o heterodimeriza induciendo la actividad
quinasaqueiniciaunacascadadesealizacinquedivergeenotrasvasmolecularesasuvez
interconectadaspromoviendolaproliferacinycrecimientocelular.Aspues,laalteracinde
los componentes de esta transduccin de seales tambin puede iniciar y mantener la
carcinognesispulmonar.
Otros receptores de membrana activados en cncer de pulmn, aunque con menor
frecuenciaypreferencialmenteenadenocarcinomas,sonCMETyALKquesonnuevasdianas
paraeldesarrollodeagentesteraputicosdirigidos.ElreceptorALKestactivadodebidoasu
fusinconEML4mediantetranslocacionescromosmicas(Sodaetal.,2007).Laamplificacin
deCMETestrelacionadaconlaadquisicinderesistenciasecundariaainhibidoresdeEGFR
(Engelmanetal.,2007).
Deentrelasmolculasqueparticipanenlatransduccindelasealizacinproducidapor
la unin ligandoreceptor cabe destacar las protenas RAS. La familia RAS incluye los genes
KRAS, HRAS y NRAS (Barbacid, 1987) y estn mutados en alrededor de un tercio de los
adenocarcinomasdepulmndefumadoresyenmsdel90%deestoscasosestmutadoKRAS
(Westraetal.,1993).Lamayoradeestasmutacionessontransversionesdeguaninaatimina
que reflejan la influencia de los carcingenos del tabaco (Slebos et al., 1991). La familia RAS
codifica protenas que se unen a nucletidos de guanina (GTP y GDP) y estn implicados en
procesos de transduccin de seales, incluyendo procesos mitognicos (Wittinghofer et al.,
1997). El gen NF1, que inhibe la actividad de RAS mediante la activacin de su actividad
GTPasa,esunbonafidegensupresordetumoresencncerdepulmn(Dingetal.,2008).

LasalteracionesenEGFRyKRASpredominanenadenocarcinomasconetiologadiferente,
aparecen en no fumadores y fumadores respectivamente, por lo que la existencia de estas
mutacionesenelmismotumoresraraeindicaqueambasprotenasestninvolucradasenla
misma va molecular (Conde et al., 2006; Scagliotti et al., 2004). De la misma forma se sabe
que alteraciones en NRAS y ERBB2, tambin presentes en tumores de pulmn, tampoco
coexisten entre ellas y con las anteriores, indicando tambin que son funcionalmente
equivalentes(Blancoetal.,2009;Condeetal.,2006;Dingetal.,2008).

Otros componentes de esta cascada de sealizacin alterados en cncer de pulmn son

PIK3CA y PTEN. El gen PIK3CA codifica la protena p110 que es la subunidad cataltica de la
fosfatidilinositol3quinasa (PI3K). La PI3K fosforila el fosfoinostido3,4difosfato (PIP2) a
fosfoinostido3,4,5trifosfato (PIP3), ambas son molculas mensajeras que regulan la
localizacinyfuncindemltiplesefectores.ElgenPIK3CAseencuentraactivadoencncerde
pulmnpreferentementemedianteamplificacin gnicayen menormedidapormutaciones

25

INTRODUCCIN

puntuales,especialmenteencarcinomasescamosos(Anguloetal.,2008;Samuelsetal.,2004).
Por otro lado, el gen PTEN codifica una fosfatasa que desfosforila el PIP3. Las alteraciones
genticasenPTENsonfrecuentesencncerdepulmnysedanespecialmenteencarcinomas
microcticosyescamosos(Forgacsetal.,1998;Yokomizoetal.,1998).

Esta va molecular converge aguas abajo con otra va implicada en la regulacin del
metabolismo energtico celular en la que uno de sus componentes, el gen STK11 est
altamentealteradoencncerdepulmn.ElgenSTK11codificalaprotenaLKB1,unaserina
treonina quinasa cuyo sustrato mejor conocido es la quinasa AMPK, un sensor del estado
energticocelular.ElaumentodelarelacinAMP/ATPpromuevelafosforilacinyactivacin
delaAMPKquemodulalaactividaddeotrasprotenascomoTSC2(tuberoussclerosiscomplex
2) (Corradetti et al., 2004; Hardie, 2003; Hawley et al., 2003; Woods et al., 2003). La
inactivacin congnita de este gen es la causa del sndrome de PeutzJeghers, caracterizado
por la aparicin de hamartomas intestinales, hiperpigmentacin mucocutnea y un riesgo
elevado de padecer neoplasias gastrointestinales y otras no intestinales incluyendo
adenocarcinomas de pulmn (Hemminki et al., 1998; Jenne et al., 1998). El gen STK11 est
mutado en un alto porcentaje de adenocarcinomas de pulmn, preferentemente de
fumadores; estas mutaciones se dan junto con alteraciones en KRAS pero no en EGFR
(Carretero et al., 2004; Matsumoto et al., 2007; SanchezCespedes et al., 2002). STK11 se
encuentraenlamismaregincromosmicaqueelTSGBRG1(19p)yesfrecuenteencontrar
mutaciones inactivadoras en ambos genes en las mismas clulas tumorales indicando una
cooperacin en la carcinognesis pulmonar (Medina and SanchezCespedes, 2008; Sanchez
Cespedes,2007).

Los genes CTNNB1 y CTNND1 que codifican las protenas catenina y p120ctn
respectivamente,estnalteradosencncerdepulmn.Elprimero,CTNNB1,estalteradoen
distintos tipos de cncer, incluyendo el cncer de pulmn, mediante mutaciones somticas
activadoras(Dingetal.,2008).Ambasprotenasestninvolucradastantoenlatransduccinde
sealescomoenlaregulacintranscripcional.Selocalizanmayoritariamenteenlamembrana
celular estabilizando los complejos de unin clulaclula cadherinacatenina, mientras que
una pequea proporcin se encarga de la transduccin de seales y regulacin de la
transcripcin.LacateninaformapartedelavamolecularcannicadeWnt.Cuandoestava
se activa, la catenina transloca al ncleo e interacciona con los factores de transcripcin
TCF/LEFparaactivarlatranscripcin(LoganandNusse,2004).Lap120ctnregulatambinlas
sealesdelavadeWntmodulandolaactividaddeGTPasasdelafamiliaRhoeinhibiendoel
factordetranscripcinKaisoenelncleo(DanielandReynolds,1999;Groshevaetal.,2001;
Kimetal.,2004).

2.2.2. Regulacindelatranscripcinyremodelacindecromatina

Las cascadas de sealizacin confluyen en efectores nucleares, como factores de

transcripcinyremodeladoresdecromatina,quemodulanlaexpresingnicaparapromover
elcrecimientoylaproliferacincelular,angiognesisy/oinvasindelasclulastumorales.

26

INTRODUCCIN

LafamiliaMYCsonfactoresdetranscripcinylosltimosefectoresdelatransduccinde
sealesiniciadaporRAS.CMYCeselmiembrodeestafamiliamsfrecuentementealteradoen
cncer de pulmn ya que est sobreexpresado tanto en carcinomas microcticos como no
microcticos,aunquepreferentementeloestennomicrocticos,mientrasqueMYCNyMYCL
loestnpreferencialmenteenmicrocticos(Blancoetal.,2009).Laactivacindeestafamilia
deoncogenesesdebidaalasobreexpresindelaprotenacausadaporamplificacingnica,
desregulacin transcripcional e incluso por aumento en la estabilidad de su RNA mensajero
(Bernasconi et al., 2000; Grandori and Eisenman, 1997). La amplificacin de MYC se da ms
frecuentemente en pacientes tratados con quimioterapia y se ha relacionado con un peor
pronstico(Kubokuraetal.,2001;VolmandKoomagi,2000).
El gen BRG1 (BRMBrahma/SWI2related gene 1) es un componente del complejo
remodeladordecromatinaSWI/SNF.Dependiendodelcontextocelular,estecomplejoregula
latransactivacinorepresintranscripcionalremodelandolacromatina.BRG1estinactivado
encarcinomasdepulmnnomicrocticos,especialmenteenadenocarcinomas(Medinaetal.,
2008;MedinaandSanchezCespedes,2008).
LaamplificacindeMYCnoocurreenlasmismasclulasdecncerdepulmnenlasque
BRG1 est mutado, sugiriendo que la funcin de ambas protenas est conectada en el
desarrollo de cncer de pulmn. De hecho, es necesaria la actividad del complejo SWI/SNF
paralacorrectaactividadtransactivadoradeCMYCyaquecuandoBRG1estmutadoseinhibe
la habilidad de CMYC para transactivar sus genes diana (Cheng et al., 1999). Ambos genes
estn implicados en la regulacin de la diferenciacin celular y reprogramacin de clulas
somticas,portanto,esposiblequelasalteracionesenMYCoBRG1promuevanymantengan
ladesdiferenciacincaractersticadelasclulastumorales.

El factor de transcripcin SOX4 (SRYHMG box gene 4) est amplificado y

concomitantemente sobreexpresado en cncer de pulmn. Algunos tumores, generalmente
detipomicroctico,expresanaltosnivelesdeltranscritodeSOX4enausenciadeamplificacin
sugiriendo otro mecanismo de sobreexpresin particularmente en este tipo histolgico
(Medina et al., 2009). El gen SOX4 es un miembro de la familia de factores de transcripcin
SOX, los cuales tienen en comn la homologa en su dominio de unin al DNA, el dominio
HMGbox (high mobility group box). El gen SOX4 se expresa principalmente durante el
desarrollo embrionario en el sistema nervioso central, corazn, timo, pulmn, colon y
pncreasyenadultosolosehaencontradoexpresindeSOX4enpncreas,gnadasytimo
(Farretal.,1993;Lioubinskietal.,2003;vandeWeteringetal.,1993;Wegner,1999).Estudios
sobre SOX4 demuestran que este gen tiene un papel fundamental en la diferenciacin y
destinocelulardurantelasprimerasetapasdeldesarrolloembrionarioyqueunaumentode
suexpresinpuedeserdeterminanteparalaprogresincancergenayaquesehaobservado
sobreexpresindeestegenendiferentestiposdecncerademsdeldepulmn,talescomo
de vejiga, prstata y colon (Aaboe et al., 2006; Andersen et al., 2009; Liu et al., 2006).
Asimismo, a SOX4 se le han adjudicado propiedades pluripotentes principalmente en clulas
hematopoiticas,folculopilosoysistemanerviosocentral(Bhattarametal.,2010;Kobielaket
al., 2007; Lee et al., 2010). Recientemente se ha identificado SOX4 como responsable del
mantenimientodeclulasiniciadorasdegliomamediantesu capacidadde transactivarSOX2
(Ikushimaetal.,2009).

27

INTRODUCCIN

Noobstante,aunqueessabidoqueSOX4esunfactordetranscripcinqueseunealDNA
mediante su dominio HMGbox preferentemente al motivo AACAA (Scharer et al., 2009; van
de Wetering et al., 1993), hasta el momento no se conoce en profundidad los genes que
regula.

2.2.3. Ciclocelular

El gen CDKN2A codifica la protena p16 que pertenece a la familia de quinasas

dependientes de ciclinas (CDKs) que inhibe la fosforilacin de la protena de retinoblastoma
(RB) provocando el secuestro del factor de transcripcin E2F de tal forma que se inhibe la
transicin G1/S del ciclo celular y por tanto se detiene la proliferacin celular (Chin et al.,
1998).LainactivacindeCDKN2Asedaenel4060%delostumoresdepulmn,generalmente
nomicrocticos,mientrasquelainactivacindeRBescaractersticadelosmicrocticos(Gazzeri
etal.,1998;Morietal.,1990).Ambosgenesestnalteradosendiferentestiposhistolgicosy
pertenecen a la misma va molecular por lo tanto sus alteraciones son mutuamente
excluyentes.

Otrosgenesinvolucradosenestecontroldelciclocelulartambinseencuentranalterados
encncerdepulmn.LaciclinaD1inhibelaactividaddeRBpromoviendosufosforilacinpor
laquinasadependientedeciclina4(CDK4).Porlotanto,lasobreexpresindelaciclinaD1es
unmecanismoalternativoparapromoverlatransicinG1/Syocurreenunaltoporcentajede
carcinomasdepulmnnomicrocticossiendounmarcadordemalpronstico(Betticheretal.,
1996; Caputi et al., 1997). Tambin CDK4 se encuentra alterado en algunos carcinomas de
pulmnnomicrocticos(ZochbauerMullerandMinna,2000).

ElgenTFDP1,quecodificalaprotenaDP1,estamplificadoysobreexpresadoencncer
de pulmn, especialmente en carcinomas escamosos (Castillo et al., 2010). DP1 pertenece a
unafamiliadefactoresdetranscripcinqueheterodimerizanconprotenasE2Fparapotenciar
sucapacidaddeuninalDNAypromoverlatranscripcindelosgenesdianadeE2F(Girlinget
al.,1993),asimismo,estacooperacinesnecesariaparaunainteraccinestableconRB(Helin
etal.,1993).

2.2.4. ReparacindelDNAyapoptosis

LaprotenaTP53esunfactordetranscripcinqueactaenrespuestaaldaoenelDNA
provocado por radiacin gamma, luz ultravioleta o carcingenos (Levine, 1997). El gen
supresordetumoresTP53puedeserconsideradocomoelgenmscomnmentemutadoen
cncer, adems, el cncer de pulmn es uno de los tipos tumorales con mayores tasas de
mutacinenestegen(Hollsteinetal.,1991).LasmutacionesdeTP53encarcinomadepulmn
microcticosonextremadamentefrecuentes (entre 75100%)mientrasqueennomicroctico
varan segn los tipos histolgicos (75% en SCC y 50% en AC) (Tammemagi et al., 1999). El
daodelDNAeslaprincipalsealparalafosforilacindeTP53queescatalizadaporlaquinasa
codificadaporelgenATM,activandoaslatranscripcindelosgenesp21/WAF1/CIP1,HDM2,

28

INTRODUCCIN

GADD45,BAXyciclinaGentreotros,involucradosenlareparacindelDNA,laregulacindel
ciclocelularylaapoptosis(Sekidoetal.,1998).p19ARFeslaprotenacodificadaporunapauta
delecturaalternativadellocusdep16INK4A.EstaprotenabloquealaubiquitinacindeTP53
por HDM2 para su posterior degradacin (Pomerantz et al., 1998; Shieh et al., 1997). El gen
HDM2 est sobreexpresado en el 25% de carcinomas de pulmn no microctico y p19ARF y
ATMestncomnmenteinactivadostantogenticacomoepigenticamente(Dingetal.,2008;
Higashiyama et al., 1997). En este caso, las alteraciones inactivadoras en los genes TP53 y
p19ARF no son mutuamente excluyentes aunque pertenezcan a la misma ruta bioqumica
(Estelleretal.,2000;SanchezCespedesetal.,1999).

Como se ha dicho anteriormente, es frecuente encontrar alteraciones en diferentes vas

moleculares que cooperaneneldesarrollodela carcinognesispulmonar.Encarcinomas de
pulmn no microcticos las mutaciones en KRAS, TP53 y STK11 o p16INK4A coexisten en el
mismotumormientrasquelasalteracionesenRB,TP53yMYClohacenentumoresdepulmn
microcticos. Tambin se dan casos en que alteraciones en diferentes vas moleculares
convergenenunmismoefectorcelular.EsteeselcasodelaactivacinconstitutivademTOR
(mammalian target of rapamycin) que es la consecuencia de la deregulacin de las vas de
estimulacindeproliferacinycrecimientoEGFR/KRAS,PIK3CA/PTENySTK11,indicandoque
estaprotenaesmuyimportanteparalacarcinognesispulmonar.

Figura9.Resumendelasvasmolecularesalteradasenadenocarcinomadepulmn.Losoncogenes
implicadosestnmarcadosenrojoylosTSGsenazul.Laoscuridaddeloscoloresestrelacionada
conelporcentajedetumoresconcadaalteracin.(Dingetal.,2008)

29

INTRODUCCIN

2.3. Distribucin de las alteraciones genticas en los distintos tipos

histopatolgicos

Es sabido que algunas alteraciones genticas son especficas de uno o varios tipos
histolgicosloqueindicadiferenciasenlacarcinognesisyeneltipocelulardeorigen(figura
10).Porejemplo,RBestinactivadoencarcinomamicroctico,EGFR,RAS,LKB1,BRG1,ERRB2,
ALK y CMET se encuentran alterados en adenocarcinomas, PTEN est inactivado tanto en
carcinoma escamoso como microctico, las alteraciones en PIK3CA y P16 son especficas de
carcinomasnomicrocticosylainactivacindeTP53,queocurreenlamayoradelostumores
pulmonares,juntoconlaamplificacindeMYCsonencontradasentodoslostiposhistolgicos
(SanchezCespedes,2009).

Asimismo, dentro de los adenocarcinomas cabra diferenciar los provenientes de

fumadoresdelosdenofumadoresdebidoasusdiferenciasmolecularesqueafectanengran
medidaalarespuestaaltratamiento.LasmutacionesenKRASaparecenenadenocarcinomas
de fumadores mientras que EGFR est mutado en adenocarcinomas de no fumadores
(Scagliottietal.,2004;Slebosetal.,1991).LainactivacindeLKB1ocurrepreferencialmente
enadenocarcinomasdefumadoresconcomitantementeconmutacionesenKRASperonoen
EGFR(Matsumotoetal.,2007)ylaactivacindeALKesmsfrecuenteennofumadorescon
EGFRsalvaje(HornandPao,2009).

Figura10.Distribucindelasalteracionesgenticasenlostiposhistolgicosdecncerdepulmn.
*Debido a la baja frecuencia de alteraciones, no es posible determinar el tipo histolgico
predominante.Modificadode(SanchezCespedes,2009).

30

INTRODUCCIN

3. Losoncogenescomodianasteraputicasencncerdepulmn

3.1. Adiccinoncognica

Lasclulastumoralescontienenmltiplesanormalidadesgenticasyepigneticas,peroa
pesar de esta complejidad, su crecimiento y supervivencia puede verse afectada por la
inactivacindeunsolooncogn.Aestefenmenoselehallamadoadiccinoncognicayes
la base de la terapia molecular dirigida (Weinstein, 2002; Weinstein and Joe, 2006). Las
evidenciasqueapoyanesteconceptodedependenciaoncognicasehanobtenidodeestudios
hechos con modelos de ratn modificados genticamente (Chin et al., 1999; Felsher and
Bishop,1999;Jacksonetal.,2001;Jainetal.,2002),lneascelularesdecncer(Brummelkamp
et al., 2002; Colomer et al., 1994; Sauter et al., 1999) y ensayos clnicos con agentes
teraputicosespecficos(Lynchetal.,2004;Shepherdetal.,2005;Taronetal.,2005).

La adiccin oncognica se basa en que la clula cancerosa tiende a mantener una cierta
homeostasisentrelosfactorespromotoreseinhibidoresdelaproliferacinmuydiferenteala
delasclulasnormales.Enlasclulastumorales,unoncogntieneunpapelmsimportantey
cualitativamentediferenteenunadeterminadavamolecularqueelquetieneelmismogen
enclulasnormales.Sehanpropuestodiferentesmecanismosporloscualeslainactivacinde
un oncogn puede conducir a la inhibicin de crecimiento, diferenciacin y/o apoptosis en
clulas cancerosas pero no en clulas normales. Uno de ellos se basa en que con el fin de
mantener la homeostasis, los efectos promotores de la proliferacin de un determinado
oncognpuedenserparcialmenteamortiguadosatravsdemecanismosderetroalimentacin
negativa mediante un aumento de la expresin de inhibidores de la proliferacin. Si este
oncogn es inactivado, las clulas tumorales pueden sufrir un exceso relativo de las seales
inhibitorias y sufrir apoptosis antes de que pueda alcanzarse un nuevo mecanismo de
homeostasis (Weinstein, 2000). Otro mecanismo se basa en el concepto de letalidad
sinttica en el que dos genes son letales sintticos si la inactivacin en uno de ellos es
compatibleconlasupervivenciacelularperolainhibicindelosdosprovocalamuertecelular.
Porejemplo,lasclulastumoralespuedensermuydependientesdeunciertooncognporque
se haya perdido la funcin de otro gen que realizaba la misma funcin; por lo tanto, la
inactivacin de este oncogn provocar la muerte de las clulas tumorales y no de las
normales(Kaelin,2005).

La terapia molecular esta basada en este concepto de adiccin oncognica ya que las
drogasutilizadassonmolculasdirigidascontraestosoncogenes,tantopequeosinhibidores
yanticuerposqueinactivanlaprotenacomoRNAsinterferentesqueinactivananiveldeRNA.
Por lo tanto, el primer paso en el desarrollo de terapias moleculares es identificar dianas
potenciales, es decir, oncogenes activados constitutivamente y que su inhibicin conlleve la
muerteselectivadeclulastumorales.

31

INTRODUCCIN

3.2. Terapiamolecularencncerdepulmn

Tradicionalmente, las estrategias de tratamiento del cncer de pulmn se basaban

nicamenteenaspectoshistolgicosylasterapiasconsistanentratamientoscitotxicosmuy
generalizados.Enlaltimadcada,losgrandesavancesenlosanlisismasivosdeexpresiny
mutacionales del cncer de pulmn han permitido un desarrollo paralelo de las terapias
molecularesyaqueconformeseidentificannuevosoncogenesalteradosencncerdepulmn
sediseannuevosagentesteraputicoscontralosmismos.
Las terapias moleculares ms desarrolladas hasta el momento son las dirigidas contra
receptorestirosinaquinasaymolculasdetransduccindeseales(figura11).

3.2.1. Terapiamolecularcontrareceptorestirosinaquinasa

Losagentesteraputicosdiseadosparainhibirlosreceptorestirosinaquinasa(TKRs)son
pequeas molculas inhibidoras de la actividad tirosinaquinasa (TKIs) y anticuerpos
monoclonales.

Laterapiamolecularmsampliamenteusadaencncerdepulmneselusodeinhibidores
de EGFR. Los agentes teraputicos contra EGFR incluyen los TKIs gefitinib y erlotinib, y los
anticuerposmonoclonalescetuximabypanitumumab.Esfrecuentequesedunaresistencia
secundaria a estos tratamientos debida a la aparicin de mutaciones secundarias en EGFR y
amplificacindelreceptorMETqueactivanlavamoleculardemaneradependientedeHER3
(Balak et al., 2006; Engelman and Janne, 2008; Engelman et al., 2007) por lo que se han
desarrollado nuevas terapias contra estos mecanismos de resistencia como inhibidores Pan
HER,queinactivanvariosmiembrosdelafamiliadereceptoresERBB(Rabindranetal.,2004;
Rosell et al., 2008), inhibidores de la forma mutada EGFR T790M (Zhou et al., 2009) e
inhibidoresdeloncognMETysuligandoHGF(Ederetal.,2009).

El receptor tirosinaquinasa codificado por la fusin de los genes EML4ALK, no presente

entejidonormal(Sodaetal.,2007),esunadianaprometedoraenlaterapiacontraelcncer
de pulmn ya que los tumores que expresan esta protena de fusin son resistentes al
tratamiento con inhibidores de EGFR (Horn and Pao, 2009). La molcula PF0234106
inicialmente diseada para la inhibicin de CMET (Timofeevski et al., 2009) es tambin un
inhibidordeestaprotenadefusin(EngelmanandJanne,2008;Roselletal.,2009).

ElVEGFeselfactordecrecimientomsimportanteenelcontroldelaangiognesisyesta
vareguladaporVEGFysureceptorVEGFRestfrecuentementeactivadaencncerdepulmn
(Fontanini et al., 1999). Los agentes teraputicos dirigidos a la inactivacin de esta va
molecularsonlosanticuerposmonoclonalescontraVEGFbevacizumabyaflibercept(Rielyand
Miller, 2007) y los VEGFR TKIs sunitinib (Mendel et al., 2003), sorafenib (Adjei et al., 2007),
vandetanib(Matsumorietal.,2006)ypazopanib(SonpavdeandHutson,2007).

La sobreexpresin del receptor tirosinaquinasa IGFR1 aparece en un alto nmero de

tumoresdepulmnnomicrocticos.AlgunasdrogasdirigidascontraIGFR1seencuentranen

32

INTRODUCCIN

diferentes fases de ensayos clnicos, estas incluyen anticuerpos monoclonales como CP

751,871 (Karp et al., 2009) e IMCA12 (Rowinsky et al., 2007) y pequeos inhibidores del
dominioquinasa.

3.2.2. Otrasterapiasmolecularesencncerdepulmn

La bsqueda de nuevas terapias moleculares se ha centrado principalmente en la

inactivacindereceptorestirosinaquinasaperolaaparicinderesistenciasecundariaaestas
terapias ha fomentado el desarrollo de terapias dirigidas a la inactivacin de protenas
transductorasdelassealesdelasvasmolecularesalteradasencncerdepulmn.
BRAFesunaserinatreoninaquinasaqueunelasealizacinentreRASylafamiliadeMAP
quinasasatravsdeMEK1.EncncerdepulmnnomicrocticoBRAFyMEK1estnmutados
deformamutuamenteexcluyenteaEGFRyKRASyentreellos(Marksetal.,2008;Naokietal.,
2002).Sehanestudiadoalgunosinhibidoresdeestasmolculasendiferentesensayosclnicos,
comoGSK2118436contraBRAFyCI1040contraMEK1(Solitetal.,2006).
LaserinatreoninaquinasamTORtieneunpapelcrticoencncerdepulmnyaqueesla
quinasa donde convergen varias vas moleculares alteradas en cncer de pulmn (Pal et al.,
2008). Varios derivados de la rapamicina como everolimus, temsirolimus y deforolimus,
inicialmente usados como inmunosupresores, estn siendo testados como agentes
teraputicos en cncer de pulmn (Mita et al., 2008; O'Donnell et al., 2008; Pandya et al.,
2007). Otros inhibidores de la activacin de mTOR incluyen molculas inhibidoras de PI3K
(Engelmanetal.,2008)yAKT(Liuetal.,2011).

Figura 11. Esquema de las vas moleculares alteradas en cncer de pulmn no microctico y los
agentesteraputicosdirigidoscontrasuscomponentes.(Paletal.,2010)

33

INTRODUCCIN

4. Identificacindenuevosoncogenesencncerdepulmn

Comosehademostradoanteriormente,laidentificacindenuevosoncogenesesesencial
paraeldesarrollodenuevasterapiasmolecularesdebidoasupotencialteraputico.Almismo
tiempo, esta identificacin tambin suministra herramientas moleculares predictivas, tiles
parapredecirelpronsticoclnicoylarespuestaauntratamientodeterminado,portanto,es
muy importante aunar esfuerzos para identificar nuevos oncogenes implicados en cncer de
pulmn.
En los ltimos aos ha habido un crecimiento exponencial en el desarrollo y mejora de
tcnicas de anlisis genmico masivo. Estos anlisis permiten un estudio mutacional del
genoma completo, tanto de mutaciones somticas puntuales como de amplificaciones y
prdidasdeDNAentumoresprimariosylneascelularesdecncer.
Labsquedadenuevosoncogenesalteradosencncercomienzageneralmentemediante
elanlisismasivoderegionesamplificadas(amplicones)ysobreexpresadasodemutaciones
somticas.

4.1. Identificacinderegionesamplificadas

Las primeras herramientas para la identificacin de regiones cromosmicas amplificadas

incluan el cariotipo convencional, el pintado cromosmico y la hibridacin genmica
comparda(CGH,delinglscomparativegenomichybridization)(Kallioniemietal.,1992)pero
tienenmuybajaresolucin,aniveldecitobanda.

Eldesarrollodemicroarraysdeexpresininicielusodetcnicasdeanlisismasivodeun
alto nmero de muestras. Actualmente, las plataformas de microarrays de expresin ms
usadascontienenoligonucletidossintticosqueabarcantodoslosgenescodificantesyRNAs
nocodificantes.Elusodeestosmicroarraysdeexpresinhapropulsadounavancetecnolgico
que se ha aplicado al estudio de otros aspectos del genoma del cncer como la medida del
nmerodecopiasdeDNAmediantearraysdeCGH(aCGH)yarraysdeSNPs(delinglssingle
nucleotidepolymorphisms).

LosaCGHcombinanlaCGHconvencional,elDNAtotaldeclulastumoralesynormaleses
marcadocondiferentesfluorocromos,conlosarraysdeDNA,dondeesteDNAmarcadonose
hibrida en cromosomas metafsicos como en la CGH convencional, sino en plataformas
similaresalasusadasparalosmicroarraysdeexpresinoenplataformasdondesehibridacon
fragmentosgenmicosgrandescomocromosomasbacterianosartificiales(BACs)(Lucitoetal.,
2000;Pinkeletal.,1998;Pollacketal.,1999).Elratiodelaintensidaddefluorescenciaencada
punto del array es proporcional al nmero de copias de la secuencia correspondiente. La
comparacinderatiosdesecuenciassolapantespermitenmapearamplificacionesydeleciones
delDNAenelgenoma.Porlotanto,elaCGHesunatcnicaqueanalizalavariacinrelativadel
nmerodecopiasentredosgenomasmediantehibridacincompetitiva.

Enelgenomahumano,lospolimorfismosdeunnucletido(SNPs)sonlosmscomunesy
estehechosehaaplicadoaldesarrollodearraysparaelestudiomasivodelgenoma(Wanget

34

INTRODUCCIN

al.,1998).Debidoaqueestospolimorfismossonmuyfrecuentesenelgenomapermitenuna
alta resolucin. Otra caracterstica de estos polimorfismos es su alta heterocigosidad, que
permitedistinguirlosdiferentesalelosy,porlotanto,determinarsiunareginespecficadel
DNAhasufridotantocambiosenelnmerodecopiascomoprdidadeheterocigosidad(Linet
al.,2004).

La bsqueda de oncogenes mediante identificacin de regiones amplificadas puede

iniciarsemediantearraysdeexpresin,detalformaquealalinearlosdatosdeexpresinde
lostranscritossegnsuposicinenloscromosomasseidentifiquenregionessobreexpresadas
probablementedebidoaunaamplificacinsubyacente.Aspues,elanlisisdeexpresinyde
nmero de copias de DNA se puede hacer hibridando tanto el cDNA como el DNA
respectivamente,deunamismamuestraenlamismaplataformadeoligonucletidos(Pollack
etal.,1999;Pollacketal.,2002).

Estosanlisismasivosdelgenomarevelanregionesamplificadasy/osobreexpresadasque
contienen,segnsuresolucin,unconjuntodegenes.Paradeterminarcualocualesdeestos
genestienenunpapeleneldesarrollotumoralsedebeverificarlaamplificacinyexpresin
individualdelosgenesdentrodeestasregionesmedianteFISHyPCRscuantitativastantode
DNA como de cDNA y confirmar el papel de los genes seleccionados mediante estudios
funcionales.

4.2. Identificacindemutacionessomticas

Lasecuenciacinmasivadeltimageneracinestadquiriendoenlosltimosaosgran
importanciaenlaidentificacindenuevosoncogenes.Lasecuenciacinagranescalacomenz
conelanlisisdedeterminadasfamiliasdegenes(Daviesetal.,2002)perolasgrandesmejoras
en esta tecnologa han permitido que la secuenciacin se extienda a todos los genes
codificantesconocidos(Leeetal.,2010).Ademsdelavancequesuponeestatecnologaenla
secuenciacin del genoma completo de muestras tumorales se debe aadir la capacidad de
este mtodo de secuenciacin de identificar mutaciones somticas presentes en clulas
tumorales que mediante la secuenciacin automtica convencional quedaban enmascaradas
porlacontaminacindeDNAdetejidonormal.

35

36

Objetivos

37

38

OBJETIVOS

Objetivos

Laaltatasademorbilidadymortalidadcausadaporelcncerpulmnesdebidaalafalta
tantodeherramientasparaundiagnsticotempranocomodeterapiasefectivas.Elprogreso
enelconocimientodelabiologamoleculardelcncerdepulmnhapermitidoavancesenel
diagnstico y en la terapia molecular contra este tipo de cncer y, por consiguiente, cierto
incremento en la supervivencia. En especial, la identificacin de oncogenes activados en
cncer ha permitido el desarrollo de nuevos agentes teraputicos que representan un gran
avanceeneltratamientocontraelcncer.Anas,lafrecuenciadealteracionesgenticasen
oncogenesqueconstituyendianasteraputicasparafrmacosespecficosesrealmentebaja.
Esporelloquetanslounospocospacientespuedenbeneficiarsedeestosnuevosfrmacosy
portantoesnecesariocontinuarprofundizandoenelconocimientodelabiologadelcncer
depulmn.Conestosantecedentes,losobjetivosprincipalesdelapresentetesisdoctoralson
lossiguientes:

1. Identificacindenuevosgenesamplificadosencncerdepulmn.

Identificacindenuevosampliconesencncerdepulmnmedianteelanlisis
delaexpresingnicaglobalydelnmerodecopiadeDNA.

Verificacinydeterminacindelosnivelesdeamplificacin.

Anlisisdeexpresindelosgenescontenidosenlosampliconesidentificados.

2. Estudiodelarelevanciadelosgenesidentificadosencncerdepulmn.

Anlisisdesufrecuenciadeamplificacinysobreexpresin.

Anlisisdesurelacinconlosdistintostiposhistopatolgicos.

3. Anlisisfuncionaldelosgenesidentificados.

Exploracindesuscaractersticasoncognicasmediantesudeplecinenlneas
celularesdecncerquemuestrenamplificacinysobreexpresin.

Identificacinyestudiodelasvasmolecularesenlosqueestninvolucrados.

39

40

ArtculoI

41

42

ARTCULOI

Amplificacin gnica del factor de transcripcin DP1 y

CTNND1encncerdepulmn

Labsquedadenuevosoncogenesesimportanteyaquepuedenconstituirdianasparalas
terapias moleculares dirigidas contra el cncer. En este artculo se identifican nuevos genes
amplificadosencncerdepulmnmedianteelanlisisdeexpresingnicaglobaldetumores
primarios de pulmn. Para la bsqueda de amplicones se alinearon los datos de expresin
gnica segn la posicin de los transcritos en el genoma y se buscaron regiones con sobre
expresin de varios genes consecutivos, sugiriendo una amplificacin genmica subyacente.
MedianteanlisisdemicroarraysdeDNAyFISHdeloscromosomas11q12y13q34entumores
primariosdepulmnseconfirmlapresenciadeamplificacinqueabarcaba0.4Mby1Mb
respectivamente. Se identific la amplificacin de estas regiones con una frecuencia del 3%
cadauna.Adems,laexpresinindividualdelostranscritosdentrodelosampliconesverific
elaumentodelaexpresindevariosdeestosgenes.Lasprotenasp120ctnyDP1,codificadas
por los oncogenes candidatos CTNND1 y TFDP1, en los amplicones 11q12 y 13q34,
respectivamente, exhibieron una fuerte inmunotincin en los tumores de pulmn con
amplificacingnica.ParadeterminarlaspropiedadesoncognicasdeDP1sebuscaronlneas
celulares de cncer de pulmn con amplificacin de TFDP1. La deplecin de la expresin de
TFDP1 mediante RNA pequeo de interferencia en la lnea celular HCC33, que presenta
amplificacin de TFDP1 y sobreexpresin de su protena, redujo la viabilidad celular en un
50%. Como conclusin, se han identificado dos nuevos amplicones, en 11q12 y 13q34, cada
uno con una frecuencia de 3% en cncer de pulmn no microctico. TFDP1, que codifica el
factordetranscripcinDP1queheterodimerizaconE2F,esunoncogncandidatoencncer
depulmn.

Sandra D. Castillo, Barbara Angulo, Ana SuarezGauthier, Lorenzo Melchor, Pedro P. Medina, Lydia
SanchezVerde, Juan TorresLanzas, Guillermo Pita, Javier Benitez, Montse SanchezCespedes. Gene
amplification of the transcription factor DP1 and the CTNND1 in human lung cancer. J Pathol. 2010
Sep;222(1):8998.

43

44

ArtculoII

45

46

ArtculoII

ElgenSOX4esunadianadeamplificacinenelcromosoma
6pencncerdepulmn

Laidentificacindenuevosoncogenesestsiendocadavezmsimportanteenelestudio
delagenticadelcncerporquesondianasapropiadasparalaterapiacontraelcncer.Para
identificarnuevosoncogenesactivadosporamplificacingnicaseanalizaronmicroarraysde
cDNAmediantehibridacingenmicacomparadadealtaresolucinyseestudielnmerode
copias de DNA y los niveles de expresin en lneas celulares de cncer de pulmn. Se
identificaron varios amplicones: 5p13, 6p2221, 11q13, 17q21 y 19q13, que presentaron
simultneamente un aumento de expresin gnica. Estas regiones tambin se vieron
amplificadasentumoresprimariosdepulmn.Seacotlareginamplificadaenelcromosoma
6p22ysemidieronlosnivelesdeexpresindelostranscritosdentrodelamplicn.ElgenSOX4
(sexdeterminingreginYbox4)quecodificaparaunfactordetranscripcininvolucradoenel
desarrollo embrionario estaba sobreexpresado en la lnea celular con amplificacin en 6p22
encomparacinconclulasnormales.ElgenSOX4tambinestsobreexpresadoenalgunos
tumores primarios y lneas celulares de cncer de pulmn. Por otro lado, se identificaron
variantesdeSOX4entumoresprimariosylneascelulares,incluyendounamutacinsomtica
que genera un codn de parada en el dominio rico en serinas localizado en el extremo
carboxilo de la protena. Aunque ninguna de las variantes incrementaba la capacidad de
transactivacindeSOX4,lasobreexpresindelaformasalvajeydelasvariantesnotruncadas
en clulas NIH3T3 incrementaban la habilidad transformante del oncogn RHOAQ63L en un
ensayodecooperacinoncognica.Enconclusin,estosresultadosmuestranque,encncer
de pulmn, SOX4 est sobreexpresado por amplificacin gnica y dan pruebas de las
propiedadesoncognicasdeSOX4.

PedroP.Medina, Sandra D.Castillo, Sandra Blanco, Marta SanzGarca, CristinaLargo, Sara Alvarez,
Jun Yokota, Anna GonzalezNeira, Javier Benitez, Hans C. Clevers, Juan C. Cigudosa, Pedro A. Lazo,
Montse SanchezCespedes. The SryHMG box gene, SOX4, a target of gene amplification at
chromosome6pinlungcancer.HumMolGenet.2009Apr1;18(7):134352.

47

48

ArtculoIII

49

50

ARTCULOIII

SOX4 y sus dianas transcripcionales estn implicados en el

desarrollodecncerdepulmnmicroctico.

El gen SOX4 pertenece a una familia de factores de transcripcin y est amplificado y

sobreexpresadoendiferentestiposdecncer,entrelosqueseencuentraeldepulmn.Para
conocermejorsurelevanciaencncerdepulmnsebuscaronsusdianastranscripcionalesyse
estudielpapeldeSOX4yeldesusdianaseneldesarrolloylacarcinognesispulmonar.Se
desarroll un sistema inducible para inhibir la expresin de SOX4 en la lnea de cncer de
pulmnNCIH522quesobreexpresaSOX4debidoaamplificacingnica.Posteriormente,se
llevacabounanlisisdeexpresingnicagloballoqueproporcionunafirmadeexpresin
de SOX4 que inclua alrededor de 90 genes, muchos de ellos relacionados con el desarrollo
neural.EntreestosgenessedemostrqueMYB,VASH2,TEAD2yTUBB3reclutanaSOX4en
sus promotores y suponen dianas transcripcionales directas de SOX4. Adems, se demostr
que SOX4 es reclutado en la regin de control del cluster de PCDHBs localizada a 320 Kb de
estecluster.
Laexpresindemuchosdeestostranscritosaumentatraslasobreexpresinectpicade
SOX4yentumorespulmonaresconaltosnivelesdeSOX4,mientrasquesuexpresinesmenor
en fibroblastos embrionarios de ratones Sox4/ en relacin con los wild type. Adems, la
expresindeSox4ydesusdianasenpulmndisminuyeduranteelenvejecimientoenratones.
TambinsecaracterizlaexpresindeotrosmiembrosdelafamiliaSOXenlosdiferentes
tiposhistopatolgicosdecncerdepulmnyseencontrquelaaltaexpresindeSOX2,4y
11 era caracterstica del cncer de pulmn microctico, un tipo de tumor pulmonar con
caractersticas neuroendocrinas. Finalmente, se observ que la firma de expresin gnica de
SOX4essignificativamentesimilaraladecncerdepulmnmicroctico.
En conclusin, este trabajo identifica nuevos genes diana de SOX4, muchos de ellos
relacionados con el desarrollo neural. Ello apoya la implicacin de la familia SOX, y en
particular la de SOX4, en el desarrollo del cncer de pulmn microctico, lo que est de
acuerdoconsuorigenneuroendocrino.

Sandra D. Castillo, Ander Matheu, Niccolo Mariani, Julian Carretero, Fernando LopezRios, Robin
LovellBadge, Montse SanchezCespedes. Novel transcriptional targets of the SRYHMG box
transcriptionfactorSOX4linkitsexpressiontothedevelopmentofsmallcelllungcancer.CancerRes.
Inpress.

51

52

Resumen

53

54

RESUMEN

Resumenglobal

Introduccin
El cncer de pulmn es la primera causa de muerte debida a cncer. La alta tasa de
mortalidadsedebealaausenciadeterapiasplenamenteefectivasyalafaltadeherramientas
paraundiagnsticotemprano.Lacaracterizacindenuevasalteracionesgenticasnosayuda
aconocermejorlabiologatumoraly,porlotanto,aidentificarbiomarcadorespredictivosque
nos indicarn una potencial respuesta a terapias especficas. A su vez, estos marcadores
podrn ser dianas moleculares para el desarrollo de nuevas drogas. As pues, el objetivo
principaldelapresentetesisdoctoraleslaidentificacindenuevosoncogenesamplificadosen
cncer de pulmn para incrementar el conocimiento de la biologa del cncer de pulmn y
ayudar en un futuro en el desarrollo de nuevas terapias moleculares contra este tipo de
cncer.

Resultados
El anlisis de la expresin global y de nmero de copias de DNA en tumores primarios y
lneas celulares de cncer de pulmn revel la presencia de amplificacin gnica en los
cromosomas11q12,13q34y6p22.Estudiamoslaexpresinindividualdelostranscritosdentro
de estos amplicones. En los cromosomas 11q12 y 13q34 se identificaron ocho y tres genes
sobreexpresados, respectivamente, en los tumores con amplificacin respecto a tejido
pulmonar normal; globalmente, la expresin de los transcritos del amplicn 13q34 era
bastantesuperioraladelamplicn11q12.Debidoasufuncinbiolgicayasurelevanciaen
otrostiposdecncerseseleccionaronlosgenesCTNND1yTFDP1,enloscromosomas11q12y
13q34 respectivamente, para estudios posteriores. Estudiamos los niveles de expresin de
CTNND1 y TFDP1 mediante inmunohistoqumica en tumores primarios de cncer de pulmn
nomicroctico.El1,4%y2,7%delostumores,todosdetipoescamoso,presentaronlosniveles
ms altos de expresin de p120ctn y DP1, codificadas por los genes CTNND1 y TFDP1
respectivamente. El 10% de los tumores tenan una localizacin citoslica aberrante de
p120ctn.Porotraparte,elgenCTNND1codificadiferentesisoformasdep120ctnporsplicing
alternativo.Seobservquelaexpresindeestasisoformassigueunpatrnsimilarentrelos
tumores y que sta es diferente a la del correspondiente tejido normal. En general, los
tumores estn enriquecidos en la isoforma 3 de p120ctn. Las lneas celulares de cncer de
pulmnHCC33yH1963presentaronlosnivelesmsaltosdeexpresindeTFDP1yseconfirm
la presencia de amplificacin mediante FISH; adems, la sobreexpresin de DP1 en la lnea
HCC33 se confirm a nivel de protena mediante inmunohistoqumica y western blot. Se
interfirilaexpresindeDP1mediantesiRNAenlalneacelularHCC33yenlaslneasH1299y
A549 (sin amplificacin ni sobreexpresin de TFDP1). Se midi la proliferacin celular
mediante ensayos de MTT y se observ que la inhibicin de la expresin de DP1 reduce
alrededor de un 50% la viabilidad de clulas con amplificacin de TFDP1 mientras que no
afectaalasclulassinDP1sobreexpresado.
El gen SOX4 fue el nico sobreexpresado respecto a tejido pulmonar normal en la lnea
celularconamplificacinen6p22.SemidilaexpresindeSOX4enpulmonessanos,tumores
primariosylneascelularesdecncerdepulmn.El3,5%delaslneascelularesyel6%delos
tumoresprimariostenanunaexpresindeSOX4comomnimotresvecessuperioralamedia

55

RESUMEN

entejidosano.Porotrolado,semiditambinlaexpresindeotrosmiembrosdelafamilia
SOX y se encontr que tanto SOX4 como SOX2 y SOX11 estaban sobreexpresados
especficamenteenclulasdecncerdepulmnmicroctico.Asuvez,dentrodelostumores
de cncer de pulmn no microctico, SOX2 y SOX9 estaban sobreexpresado en carcinomas
escamososrespectoaadenocarcinomasySOX4presentabaunpatrncontrario.
ElanlisisdemutacionesdeSOX4encncerdepulmnreveldosvariantesgerminalesen
tumores primarios de pulmn, una de ellas se trataba de un polimorfismo presente en la
poblacinespaolayunamutacinsomticaquecodificaparaunaprotenatruncada.Enlas
lneas celulares se encontraron dos variantes de cambio de aminocido y una delecin en
pauta. La capacidad de transactivacin de SOX4 no cambi en las formas no truncadas
respectoalaformasalvaje,mientrasquelaformatruncadaestabaincapacitadaparaactivarla
transcripcin.MedianteunensayodecooperacinoncognicaconRHOAQ63LyHRASG12V
seobservquelaexpresincrecientedelaformasalvajeylasformasnotruncadasdeSOX4
incrementaban significativamente la habilidad oncognica de RHOAQ63L y no afectaba la
capacidadtransformantedeHRASG12Vmientrasquelaformatruncadareducaelnmerode
focostransformantesoriginadosporHRASG12V.Enexperimentosindependientesseobserv
unaexpresinmuchomselevadadelaformatruncadadeSOX4encomparacinconlasno
truncadas.
Mediante la deplecin de SOX4 se identificaron nuevos genes regulados directa o
indirectamente por este factor de transcripcin, muchos de ellos relacionados con el
desarrollo neural. A su vez, estos genes se sobreexpresaban tras la expresin ectpica de
SOX4 en lneas celulares y en tumores primarios de pulmn con altos niveles de SOX4,
sugiriendo un papel en la carcinognesis pulmonar. Por otro lado, estos genes tenan una
expresin reducida en fibroblastos embrionarios de ratones Sox4/. Adems, en el tejido
pulmonarsanoderatones,tantolosnivelesdeexpresindeSox4comolosdesusgenesdiana
sereducanduranteelenvejecimiento.Finalmente,sedemostrelreclutamientodeSOX4en
lospromotoresdelosgenesMYB,VASH2,TEAD2yTUBB3yenlaregindecontroldelcluster
dePCDHBs.LafirmadeexpresingnicadeSOX4resultcompartirmuchassimilitudesconla
de cncer de pulmn microctico, de origen neuroendocrino, por lo que hay una alta
implicacindeSOX4eneldesarrollodeestetipodecncer.

Conclusiones
Se han identificado tres regiones cromosmicas altamente amplificadas y sobre
expresadas en cncer de pulmn: 11q12, 13q34 y 6p22. En la regin 11q12 varios genes se
encontraban sobreexpresados y la falta de una lnea celular con amplificacin en 11q12
impidiapuntarunoncogncandidatoenestaregin.Laamplificacinen13q34subyaceala
sobreexpresindeTFDP1encncerdepulmn.LainterferenciadelaexpresindeTFDP1en
clulasdecncerdepulmnconamplificacinreducesignificativamentesuviabilidad.SOX4es
el gen conductor de la amplificacin en 6p22. SOX4 est amplificado y sobreexpresado en
cncerdepulmnypresentapropiedadesoncognicasloquepermitesugerirqueSOX4esun
oncogncandidatoencncerdepulmn.LosgenesMYB,VASH2yelclusterdePCDHBsson
nuevas dianas transcripcionales directas de SOX4. Tanto SOX4 como SOX2 y SOX11 estn
sobreexpresadosencncerdepulmnmicrocticoylafirmadeexpresingnicadeSOX4se
asemeja a la de este tipo de cncer, por lo que tiene una implicacin en su desarrollo.

56

Discusin

57

58

DISCUSIN

Discusin

Las regiones de tincin homognea (HSR, del ingls homogeneously staining regions)
son un mecanismo comn de amplificacin gnica en tumores por el cual varios genes
contiguosestnamplificadosy,confrecuencia,sobreexpresadossimultneamente.Enbasea
estemecanismodeamplificacingnica,enelpresentetrabajodetesissehallevadoacabola
bsquedaderegionesamplificadasencncerdepulmn.Paraellosehanutilizadotecnologas
deanlisismasivo,combinandoladeteccindelnmerodecopiasapartirdelDNAgenmicoy
laexpresingnicaglobalentumoresprimariosyenlneascelularesdecncerdepulmn.
EnelartculoIsehanutilizadodatosdelanlisisdeperfilesdeexpresingnicaen69
tumoresprimariosdepulmnnomicroctico,procedentesdeuntrabajoprevio(Anguloetal.,
2008).Paraidentificarregionessobreexpresadasypotencialmenteamplificadas,sealinearon
estos datos de expresin segn su localizacin cromosmica y se seleccionaron aquellas
regiones que contenan varios genes consecutivos sobreexpresados. De este anlisis se
seleccionaronnueveampliconesensieteregionescromosmicasdistintas.EnelartculoIIse
analiz el nmero de copias de DNA genmico y la expresin gnica global en ocho lneas
celularesdecncerdepulmnnomicroctico,utilizandomicroarraysdecDNA.Enestetrabajo
se identificaron siete regiones cromosmicas que presentaban, simultneamente,
amplificacingnicayaumentoenlaexpresindemltiplesgenesdelamplicn.Dentrodelos
amplicones seleccionados en ambos artculos se encontraba la regin 17q12, conteniendo el
oncognERBB2,quehabasidopreviamenteverificadamedianteanlisisdeFISH,tantoenla
lnea celular como en tumores primarios (Conde et al., 2006). Estos resultados estn de
acuerdocondatospreviosdeotrosgruposqueobservanamplificacindeERBB2enungrupo
pequeodetumoresdepulmn(Liuetal.,2010)validando,portanto,larobustezdenuestro
estudio.Adems,enuntumorseobservunareginconsobreexpresindevariosgenesen
el cromosoma 1p34.2, que inclua al oncogn MYCL, el cual se ha descrito tambin activado
poramplificacingnicaenunnmeropequeodetumorespulmonares,preferentementede
tipo microctico (Blanco et al., 2009). Otro tumor evidenci sobreexpresin simultnea de
variosgenesdelacitobanda4q12,tambinamplificadaencncerdepulmnnomicrocticoy
cuyosoncogenesdianapuedenser,probablemente,KITy/oPDGFRA(Ramosetal.,2009).De
entre todos los amplicones identificados se seleccionaron los amplicones en 6p22, 11q12 y
13q34paraseranalizadosenprofundidad.
Los amplicones en los cromosomas 11q12 y 13q34 no haban sido descritos
anteriormente en este tipo de cncer y fueron seleccionados para ser estudiados
exhaustivamente.Lasrazonesprincipalesquejustificabanlaseleccindeestasregionesfueron
su novedad y el hecho de que presentaban unos niveles muy altos de amplificacin y de
expresingnicaenmsdetresgenesconsecutivos.Variosestudioshandescritopreviamente
amplificacin y sobreexpresin en el cromosoma 11q, pero esta afecta concretamente a la
regin 11q1213, situada a unas 12 megabases en direccin telomrica con respecto a la
identificadaenelpresentetrabajo.Elamplicnen11q1213sehaobservadoendistintostipos
decncery,generalmente,eloncogndianapropuestoenestaregineselCCND1(ciclinaD1)
(Huangetal.,2002;Janjetovicetal.,2010;Kweketal.,2009).Porsuparte,elamplicon11q12
identificadoenelpresentetrabajodetesisnosehabadescritoanteriormenteenelcncerde
pulmn,aunquesencarcinomasescamososdeotrostiposdecncer(Bassetal.,2009;Choi
etal.,2007)yenadenomashepatocelulares(Skawranetal.,2008).Enelpresenteestudiose

59

DISCUSIN

determinaron los niveles de expresin de los distintos genes incluidos en la regin 11q12,
concluyendoqueTIMM10,UBE2L6,CLP1,ZDHHC5,MED19,TMX2,BTBD18yCTNND1estaban
sobreexpresadosenaquellostumoresquepresentabanamplificacin.Deentreestosgenes,
soloUBE2L6,MED19,BTBD18yCTNND1hansidorelacionadospreviamenteconeldesarrollo
tumoral. Poco se sabe del gen BTBD18, que codifica para una protena con un dominio
BTB/POZ(Stogiosetal.,2005).LaprotenaBTBD18podraestarimplicadaeneldesarrollodel
cncer ya que se ha identificado una protena de fusin, MLLBTBD18, producida por una
translocacion del gen MLL (myeloid/lymphoid leukemia) con el dominio carboxi terminal de
BTBD18,enlaquesepierdeeldominioBTB/POZ,enunaleucemialinfoblsticaaguda(Alonso,
et al., 2010). El gen UBE2L6 codifica la enzima conjugadora de ubiquitina UBCH8. Se ha
demostradoqueUBCH8seuneaP53RFP,unaenzimaligasadeubiquitina,parapromoverla
apoptosismediadaporP53(Huangetal.,2006).Porotraparte,alinterferirelgenBRCA2en
clulasdecncerdemamalaexpresindeUBE2L6sereduce(TripathiandChaudhuri,2005).
EstoshechospodranindicarunposiblepapeldelgenUBE2L6comosupresortumoral,porlo
que su amplificacin y sobreexpresin en los tumores de pulmn podra ser una alteracin
pasajera (trmino traducido del ingls passenger, referido a aquellas alteraciones genticas
azarosas,sinrelevanciabiolgica)enlugardeconductora(trminotraducidodelinglsdriver,
referido a aquellas alteraciones genticas seleccionadas durante el desarrollo tumoral con
relevancia biolgica). Por su parte, el gen MED19 codifica una subunidad del complejo co
activador de la transcripcin Mediator. Este complejo sirve de puente entre los factores de
transcripcinylaRNApolimerasaII,regulandosucapacidadparaexpresargenescodificantes.
Debido a la composicin de este complejo, con 26 subunidades en humanos, su potencial
regulador de la transcripcin es ilimitado (Taatjes, 2010). MED19 est sobreexpresado en
cncerdevejigaydemama(Lietal.,2011;Zhangetal.,2011).Lainterferenciadelaexpresin
de MED19 en clulas de carcinomas de vejiga, hepatocelular, de mama y en osteosarcomas
detiene el ciclo celular en fase G0/G1, reduce la proliferacin de estas clulas e inhibe la
formacindetumores(Lietal.,2011;Wangetal.,2011;Zhangetal.,2011;Zouetal.,2011).
Es interesante comprobar que el gen MED19 est sobreexpresado en adenocarcinomas de
pulmn,especialmenteaquellosqueestnpocodiferenciados(Sunetal.,2011).Asmismo,la
inhibicin de la expresin de MED19 en una lnea celular de cncer de pulmn disminuye la
proliferacin y la capacidad de esta lnea celular de invasin y formacin de tumores en
ratonesinmunodeprimidos(Sunetal.,2011).
Adems de los genes anteriormente discutidos, el amplicn 11q12 contiene el gen
CTNND1. CTNND1 codifica la catenina p120ctn, una protena con repeticiones del dominio
Armadillo (Arm), similar a catenina, involucrada en la adhesin intercelular. p120ctn es
ademssubstratodelaquinasaSrc(Reynoldsetal.,1989)yejercemltiplesfuncionesenlos
diferentes compartimentos celulares. En la membrana celular, p120ctn se une al dominio
yuxtamembrana de las cadherinas, mientras que catenina se une al dominio de unin a
catenina (Thoreson et al., 2000; Yap et al., 1998). La unin de p120ctn a las cadherinas es
esencialparalaestabilidaddeestasltimas(Davisetal.,2003;Iretonetal.,2002;Xiaoetal.,
2003),mientrasquelaestabilidaddelacateninadependedesuinteraccinconcadherinas
(Nagafuchi et al., 1991), por lo que p120ctn dirige la regulacin del complejo de unin
cadherinacatenina. En el presente trabajo se comprob que los tumores de pulmn con
CTNND1 amplificado y sobreexpresado exhiban una fuerte inmunotincin de p120ctn tanto
en la membrana como en el citoplasma. Adems, fue interesante observar que

60

DISCUSIN

aproximadamente 1 de cada 10 tumores evidenciaba una localizacin de p120ctn

citoplasmtica, en ausencia de amplificacin o sobreexpresin, lo que podra sugerir la
presenciade mutacionesenelgenCTNND1.Laacumulacinde p120ctnenelcitoplasmada
lugaraunadesregulacindelaactividaddeRhoGTPasas,loquepodraafectaralamotilidad
celular y promover la invasin tumoral y la metstasis. En el citoplasma, p120ctn regula
miembros de la familia de Rho como RhoA, Rac1 y Cdc42, que son mediadores clave en la
organizacin y dinmica del citoesqueleto (Anastasiadis et al., 2000; Grosheva et al., 2001;
Noren et al., 2000). Estas caractersticas indican que p120ctn puede promover la adhesin
intercelularolamotilidadcelularatravsdediferentesmecanismos.Mientrasqueessabido
que p120ctn activa Rac1 y Cdc42, su efecto en RhoA no est muy claro ya que depende del
contextocelular.Porejemplo,lainduccindelatransicinepiteliomesnquimaenclulasde
carcinomadecolonestcaracterizadaporelaumentodep120ctncitoplasmtica,laformacin
de un complejo p120ctn/RhoA y la reduccin de la actividad de RhoA (Bellovin et al., 2005).
Por otro lado, la deplecin de p120ctn aumenta la actividad de RhoA endgeno tanto en
clulasqueexpresancadherinacomoenclulasdeficientesencadherina(Bellovinetal.,2005;
Shibataetal.,2004;YanagisawaandAnastasiadis,2006).Porelcontrario,lasobreexpresin
de p120ctn en queratinocitos de ratn resulta en una induccin de la actividad de RhoA
dependiente de PI3K (Cozzolino et al., 2003). As pues, en ltima instancia, el aumento de
p120ctnenelcitoplasmapromuevelamotilidadcelularque,enuncontextotumoral,puede
facilitar la invasin y metstasis (Thoreson and Reynolds, 2002). Al igual que catenina,
p120ctnregulalatranscripcingnicaenelncleo,aunqueadiferenciadecatenina(Willert
and Jones, 2006) el papel de p120ctn en el ncleo est poco caracterizado. En el ncleo
p120ctnseuneaKaiso,unrepresordelatranscripcinbimodal(Danieletal.,2002),einhibela
unindestealDNAevitandolarepresintranscripcionaldesusgenesdianaqueincluyenlas
dianas de catenina/TCF, ciclina D1, matrilysin y siamois. Ello sugirie una implicacin de
p120ctn comoreguladorindirectodelavaWnt(Parketal.,2005;Springetal.,2005).Enel
presenteestudio,nosehadetectadop120ctnnuclearenlostumoresdepulmnanalizados,
aunquesuacumulacinenelcitoplasmapodrallevaraunaumentodeltrficoalncleo.Por
otra parte, el gen CTNND1 codifica para diferentes isoformas por splicing alternativo, las
isoformas ms expresadas de p120ctn en tejido pulmonar normal son la 1 y la 3 (Liu et al.,
2007).Lasdiferentescaractersticasdeestasisoformasaadenungradomsdecomplejidad
enelposiblepapeldep120ctnencncerdepulmn.Actualmentenohayunconsensosobreel
papel que juegan las diferentes isoformas de p120ctn en cncer. Se ha descrito que, en
tumores de pulmn, hay un enriquecimiento de la isoforma 3 mientras que se reduce la
expresindelaisoforma1(Liuetal.,2009);aunqueestudiosenlneascelularesdecncerde
pulmnmostraronquelaisoforma1inhibelacapacidadinvasivamientrasquelaisoforma3
inhibeelciclocelular(Liuetal.,2009).Estasdiscrepanciaspuedenexplicarseporladiferente
capacidaddelasdistintasisoformasderegularlasGTPasasRho.Enelpresentetrabajodetesis
se ha observado una expresin diferencial entre las isoformas de p120ctn en los tumores
primarios de pulmn y sus correspondientes tejidos normales de pulmn. En general, los
tumores pulmonares estaban enriquecidos en isoforma 3, mientras que la isoforma 1 se
perda, tal como se haba descrito anteriormente (Liu et al., 2009). Cabe comentar que la
presenciadeamplificacinysobreexpresindeCTNND1noprodujocambiosenestepatrn
deexpresin.Porotraparte,laexpresinreducidaylalocalizacinaberrantedep120ctnseha
asociado a tumores de prstata, mama, pncreas, colon, piel, vejiga y endometrio (Reynolds

61

DISCUSIN

andRoczniakFerguson,2004;ThoresonandReynolds,2002;vanHengelandvanRoy,2007).
Asimismo,diferentesestudioshandemostradounaexpresinreducidadep120ctnencncer
de pulmn no microctico (Liu et al., 2009; Liu et al., 2007; Mortazavi et al., 2010). Estas
observaciones sugieren que p120ctn tendra un papel como supresor tumoral, y por tanto,
CTNND1 no sera un oncogen candidato del amplicn en 11q12. Para poder determinar el
posiblepapeloncognicodelp120ctnenaquellostumoresquetienenamplificacinen11q12,
nobastacondeterminarsuexpresintotal,ydeberanllevarseacaboestudiosexhaustivosde
anlisisdeexpresinyfuncin,incluyendolocalizacinsubcelular,anlisisdelainhibicinde
suexpresinconsiRNAs,estudiosconlasobreexpresinindividualdecadaisoforma,anlisis
de la expresin de cadherinas, etc. Desafortunadamente, en este trabajo no se identific
ninguna lnea celular de cncer de pulmn que tuviera altos niveles de amplificacin y de
sobreexpresindeCTNND1,similaresaloshalladosenlostumoresprimarios,porloquenose
pudieronllevaracaboestetipodeanlisis.
Otrodelosampliconesidentificadosenelactualtrabajoestabaenlaregin13q34.Cabe
resaltarqueesteamplicncontenamsde20copias,reflejandounosnivelesdeamplificacin
gnicarealmentemuyelevadosyperfectamentecomparablesaotrosampliconesqueactivan
oncogenesconocidostalescomoMYC,ERBB2oMYCN.Esporelloqueespocoprobableque
esta alteracin sea una mera consecuencia de la degeneracin y aneuploida global del
genoma de la clula tumoral. Este amplicn se ha descrito anteriormente en carcinomas
cutneos, gastroesofgicos, de mama, hepatocelulares y adenocarcinomas de intestino
delgado(Abbaetal.,2007;Diosdadoetal.,2010;IsingerEkstrandetal.,2010;Melchoretal.,
2009; Salgado et al., 2010; Yasui et al., 2002), aunque en algunos de estos trabajos la
alteracin consiste nicamente en un ligero aumento del nmero de copias. En cncer de
pulmn, este amplicn se haba descrito en un estudio previo al nuestro, en carcinomas
escamosos de pulmn (Choi et al., 2007) aunque sin llevar a cabo ningn tipo de anlisis
posterior. En el presente trabajo se analiz la expresin de los genes contenidos en el
amplicn, PCID2, CUL4A, LAMP1, GRTP1, ADPRHL1, DCUN1D2, TMCO3 y TFDP1, en los dos
tumores de pulmn que presentaron amplificacin en 13q34. Se observ que todos estos
genesestabansobreexpresadosenambostumores.ElgenCUL4Acodificaunasubunidaddel
complejo multifuncional ubiquitinligasa E3 y regula la ubiquitinacin de algunos supresores
tumorales como P53, por lo que cambios importantes en sus niveles de expresin podran
contribuir al desarrollo tumoral (Kopanja et al., 2009). La amplificacin y sobreexpresin de
CUL4A se ha detectado en tumores de mama, hepatocelulares y mesoteliomas (Abba et al.,
2007; Hung et al., 2009; Melchor et al., 2009; Yasui et al., 2002). Por otra parte, el gen
DCUN1D2codificaparaunaprotenaquecontribuyealanedilacindeculinas,entrelasquese
encuentraCUL4A(MeyerSchalleretal.,2009).Aunquelaamplificacinysobreexpresinde
DCUN1D2 no se ha descrito anteriormente en cncer, no podemos descartar que sta
contribuyaaldesarrollotumoral.ElgenLAMP1codificaparaunaglicoprotenademembrana
queseuneaselectinaspresentesenelendoteliovascularfavoreciendolaadhesindeclulas
tumoralesalendoteliolocualpodraestarasociadoalosprocesosdemetstasis(Saitohetal.,
1992; Sawada et al., 1993). La funcin de PCID2 no es muy conocida, aunque se sabe que
participa en el control de la mitosis durante la diferenciacin de linfocitos B (Nakaya et al.,
2010).Hastaelmomentosedesconocelafuncinbiolgicadelasprotenascodificadasporlos
genesGRTP1,ADPRHL1yTMCO3ytampocosehanrelacionadoconningntipodecncer.Por
suparte,elgenADPRHL1codificaparaunaADPribosilhidrolasa,involucradaportantoenla

62

DISCUSIN

modificacinpostraduccional(Glowackietal.,2002).ConrespectoaGRTP1seconocequesus
niveles de expresin estn regulados por la hormona del crecimiento (GH) y que estimula la
actividadGTPasadeprotenasRaslike(Luetal.,2001).
Debidoasufuncinbiolgica,unode losprincipalescandidatos aserelconductordela
amplificacin observada en 13q34 es TFDP1 (DRTF1polypeptide1). TFDP1 codifica para el
factor de transcripcin DP1 que heterodimeriza con E2F1 para regular la transicin G1/S del
ciclo celular. DP1 incrementa la capacidad de unin de E2F1 con el DNA para potenciar la
transcripcindesusgenesdiana(LaThangue,1994).LosgenesreguladosporDP1/E2F1estn
involucradosenelcontroldelciclocelular,ciclinaA(CCNA2),ciclinaE(CCNE1)yCDC2;enla
sntesis de DNA, timidina quinasa (TK1), timidilato sintetasa (TYMS), dihidrofolato reductasa
(DHFR), antgeno nuclear de proliferacin celular (PCNA) y ribonucletido reductasa M1
(RRM1)ylasoncoprotenasnuclearescMyc(MYC)ybMyb(MYBL2)(DeGregorietal.,1995;
Wu et al., 1995). El factor de transcripcin DP1/E2F1 est regulado por la unin a pRB que
inactivasucapacidadtranscripcional.Aspues,lacapacidaddesupresintumoraldelgenRB
viene dada por su capacidad de unin con DP1/E2F1. Las oncoproteinas virales como el
adenovirus E1a, el antgeno T de SV40 y las proteinas E7 del virus del papiloma humano
ejercensucapacidadtumorognicasecuestrandoapRBdetalformaqueDP1/E2F1mantiene
laexpresinconstitutivadesusgenesdiana,porloquesepierdeelcontroldeG2/S(Bandara
andLaThangue,1991;Hiebertetal.,1992;Nevins,1992;ZamanianandLaThangue,1992).En
tumores,lasmutacionesenRBaparecenprincipalmenteeneldominiodeuninaE2F1/DP1,
dando lugar a una activacin constitutiva de la transcripcin mediada por DP1/E2F1. Pocos
estudioshanidentificadoalteracionesdeTFDP1encncer.Elprimerodeellosidentificuna
elevada amplificacin y sobreexpresin de TFDP1 en un carcinoma escamoso del esfago
(Shinomiyaetal.,1999).Adems,TFDP1sehaconsideradounoncogncandidatoalteradopor
amplificacin y sobreexpresin en tumores de mama y hepatocelulares (Abba et al., 2007;
Melchor et al., 2009; Yasui et al., 2002; Yasui et al., 2003). En el presente trabajo se
identificarondostumoresprimariosdepulmnconamplificacinysobreexpresindeTFDP1.
Adems,elanlisisposteriordelosnivelesdeprotenaDP1,queincluyunnmeroadicional
detumores,revelnivelesmuyelevadosdeDP1enlostumoresconamplificacingnicayen
dosdelostumoresadicionalesincluidosenelestudio.Conrespectoaestosltimos,unode
ellosfuenegativoparaamplificacingnica,esdecir,elincrementosubstancialdelosniveles
deDP1noeradebidoaamplificacin.AunqueelpapeldeDP1juntoconE2F1enelcontrolde
latranscripcinyregulacindelciclocelularseconoceconprecisin,lasposiblesfuncionesde
DP1fueradeestecontextonohansidoestudiadas.SesabequelacoexpresindeDP1con
Haras induce la formacin de focos transformantes en fibroblastos embrionarios de rata,
mientrasquelatransfeccindeDP1conE2F1yHarasinterfiereenlatransformacincelular.
De la misma forma, la expresin de DP1 mutado en el dominio de unin a E2F1 tambin
promueve la formacin de focos transformantes en estas clulas (Jooss et al., 1995). Estos
hechos indican que la sobreexpresin de DP1 tiene potencial oncognico de forma
independiente a E2F1. Adems, se comprob que la inhibicin de la expresin de TFDP1 sin
alterarlosnivelesdeE2F1enunalneacelulardecncerdepulmnconTFDP1amplificadoy
sobreexpresado disminuy su proliferacin de forma significativa. Igualmente, la reduccin
extremadelaexpresindeTFDP1enunalneacelularsinsobreexpresindeTFDP1tambin
provocunadisminucin delaproliferacindeestasclulas.Serannecesariosmsestudios
funcionales y anlisis para poder dictaminar si el potencial oncognico de TFDP1 es

63

DISCUSIN

independientedeE2F1enestasclulas.LasobreexpresindelaprotenaDP1enausenciade
amplificacinysobreexpresindeRNAquesehallenuntumordepulmnpodraserdebida
afallosensudegradacinyaquesuexpresinestreguladaporubiquitinacin(Magaeetal.,
1999).Deformainteresante,peroenmenormedida,sehaestudiadoelpapeldeDP1/E2F1en
apoptosis.ElheterodmeroDP1/E2F1puedepromoverlaapoptosisdemaneradependienteo
independiente de P53 (Hitchens and Robbins, 2003). Contrariamente, algunos estudios
demuestranquelaasociacindeP53conDP1/E2F1inhibelafuncindeambos(O'Connoret
al., 1995). Tambin ha sido descrito que P53 compite con E2F1 en su unin con DP1
reduciendo la afinidad del heterodmero con el DNA (Sorensen et al., 1996). Previamente se
haba comprobado que dos de los cuatro tumores primarios de pulmn con sobreexpresin
de DP1 no expresaban P53 por lo que la capacidad de DP1/E2F1 en promover la apoptosis
dependientedeP53estaramermadayE2F1nocompetiraconP53ensuuninconDP1en
estostumores.
Otros amplicones identificados en el estudio se localizaban en 5p13 y 6p21.1, presentes
tantoentumoresprimarioscomoenlneascelulares.ElgenSKP2hasidopreviamentedescrito
amplificadoysobreexpresadoenelcncerdepulmn.Sehaasociadoametstasisandulos
linfticos(Yokoietal.,2004)yesunodelosoncogenescandidatosdelamplicn5p13.Enel
presenteestudioseevaluaronlosnivelesdeexpresiondetodoslosgenescontenidoseneste
amplicn y ninguno de ellos present niveles muy elevados, por lo que se descart para un
estudiomasprofundo.Existesvariasposiblesexplicacionesparaexplicarlaausenciadesobre
expresionenpresenciadeamplificaciongnicatalescomoquelaamplificacion,enestecaso,
fueraunfenmenoespreoynoconlleveunarelevanciafuncionalo,alternativamente,queel
gendianadeamplificacinfueraalgnmiRNAoalguntipodeRNAnocodificante.Estetipode
genesnofueronconsideradoscomooncogenescandidatosenelpresentetrabajodetesis.Con
respectoalaregin6p22,seseleccionparaunestudiomasdetalladoyaquepresentabaunos
niveles muy altos de amplificacin gnica y estaba amplificado con mayor frecuencia en
tumores primarios de pulmn. El amplicn 6p22 tampoco haba sido descrito anteriormente
como diana de amplificacin en cncer de pulmn. Existe una publicacion que describe
amplificacin en 6p21.1, en cncer de pulmn, habindose propuesto el gen VEGFA como
oncogn candidato (Weir et al., 2007). Pero esta regin estaba excluda del amplicn 6p22
identificada en el presente estudio. Los genes ID4 y SOX4, incluidos dentro de esta regin
amplificada en 6p22, presentaron los niveles ms elevados de expresin en relacin con el
restodegenesdelamplicn.LaexpresindeID4enlalneacelularconamplificacinen6p22
estaba reducida en comparacin con su expresin en tejido pulmonar normal. De hecho,
algunostrabajoshandemostradoencncergstrico,demamayleucemiasunadisminucinde
la expresin de ID4 causada por hipermetilacin de su promotor, lo que sugiere un posible
papel de ID4 como supresor tumoral (Umetani et al., 2005; Yu et al., 2005). As pues, a
diferenciadeloqueocurraconlosamplicones11q12y13q34dondevariosgenesdentrode
estas regiones estaban sobreexpresados, SOX4 fue el nico gen sobreexpresado, en
comparacin con tejido normal, dentro del amplicn 6p22 lo que sugiere que es el gen
conductor de esta amplificacin. Adems de estar amplificado y sobreexpresado en lneas
celularesdecncerdepulmn,tambinsepudoconfirmarlapresenciadeestaalteracinen
tumores primarios de pulmn, lo que apoya su relevancia biolgica en el desarrollo de este
tipodecncer.ElgenSOX4(SRYHMGboxgene4)codificaparaunmiembrodelafamiliade
factores de transcripcin denominados SOX, los cuales tienen en comn la homologa en el

64

DISCUSIN

dominio HMGbox (high mobility group box) de unin al DNA. Durante el desarrollo
embrionarioelgenSOX4seexpresa,principalmente,enelsistemanerviosocentral,corazn,
timo, pulmn, colon y pncreas, mientras que en el adulto la expresin de SOX4 se limita al
pncreas, gnadas y timo (Farr et al., 1993; Lioubinski et al., 2003; van de Wetering et al.,
1993;Wegner,1999).LosratonesSox4/muerenelda14deldesarrolloembrionariodebidoa
fallos en el desarrollo de sus sistema circulatorio (Schilham et al., 1996). Existen varias
observaciones que sugieren que SOX4 podra actuar como un oncogn. Por una parte, SOX4
est sobreexpresado en diferentes tipos de cncer tales como vejiga, prstata, endometrio,
colonypulmn(Aaboeetal.,2006;Andersenetal.,2009;Evansetal.,2004;Friedmanetal.,
2004;Liuetal.,2006)yenunestudioprevioenquesehainterferidolaexpresindeSOX4en
clulas tumorales se observa una induccin de la apoptosis y disminucin del crecimiento
celular (Pramoonjago et al., 2006). Por otra parte, en estudios de identificacin de nuevos
oncogenes mediante mutagnesis por insercin retroviral se observ que SOX4, tambin
nombradocomoEvi16porecotropicviralintegrationsite16,esunadelasdianasdeinsercin
retroviral ms frecuente, promoviendo la transformacin neoplsica de clulas
hematopoyticas de ratn (Boyd et al., 2006; Du etal., 2005; Shin et al., 2004; Suzuki et al.,
2002). Adems, la transfeccin de clulas hematopoyticas normales de ratn con Sox4
provocaleucemiasmieloides(Boydetal.,2006).Finalmente,elgenSOX4esunadianadelos
microRNAs miR335 y miR1292, cuya expresin est disminuida en cncer de mama y
endometrio, respectivamente. La restauracin de estos miRNAs en clulas tumorales
deficientes disminuye la expresin de SOX4 y consecuentemente la proliferacin celular, la
invasinylametstasisdeestasclulastumorales(Huangetal.,2009;Tavazoieetal.,2008).
Noobstante,aSOX4tambinselehaatribuidocapacidaddesupresindetumores.Lasobre
expresindeSOX4enclulasdetumoreshepticospromuevelaapoptosis(Ahnetal.,2002)y
la inhibicin de la expresin de SOX4 activa la migracin e invasin de clulas de melanoma
(Jafarnejad et al., 2010). Adems, SOX4 inhibe la tumorognesis induciendo la detencin del
ciclocelularylaapoptosismediantelaestabilizacinyactivacindeP53(Panetal.,2009).Se
ha sugerido que la sobreexpresin de SOX4 es un indicador de buen pronstico en
meduloblastomasymelanomas(deBontetal.,2008;Jafarnejadetal.,2010).
AdemsdelaamplificacingnicaysobreexpresiondeSOX4encncerdepulmn,enel
presente trabajo de tesis se describe cooperacin oncognica entre la sobreexpresin de
SOX4ylaformaactivadeRHOA(RHOAQ63L).EstoshechosapoyanlarelevanciadeSOX4enla
carcinognesispulmonar,ascomosuscapacidadesoncognicas.Adems,enlneascelulares
derivadasdecncerdepulmn microctico,seobservaronnivelesmuy elevadosdeSOX4en
clulastumoralesdepulmnenausenciadeamplificacin.Hastaelmomentosedesconocen
losmecanismosresponsablesdeesteaumentodelosnivelesdeSOX4enestetipodecncer
depulmn.LadisminucindelaexpresindealgunosmicroRNAs,talescomomiR335ymiR
1292, podra ser una de las causas. Tampoco cabe descartar la presencia de alteraciones
genticasenotroscomponentesdelavaenlaqueactaSOX4,niunacaractersticaespecfica
de la clula de origen de este tipo de cncer. Aunque SOX4 haya sido crecientemente
propuesto como oncogn en diversos tipos de cncer, en todos los casos su capacidad
oncognica ha sido relacionada con su sobreexpresin. Pero existen otros mecanismos de
activacindeoncogenes,talescomolasmutacionesactivadoras.Enestetrabajotambinseha
llevado a cabo, en varias lneas celulares y tumores primarios de cncer de pulmn, la
secuenciacin del nico exn que constituye la regin codificante de SOX4, habindose

65

DISCUSIN

identificadovariospolimorfismosenlneagerminal.Ademsdepolimorfismos,seidentificaron
varioscambiosquedabanlugarasustitucionesdeaminocidos,delosquenosepudoconcluir
su naturaleza germinal o somtica al haber sido detectados en lneas celulares sin su tejido
normal correspondiente disponible. Estas variaciones de origen desconocido presentaron la
misma capacidad de potenciar la formacin de focos transformantes de la forma activa de
RHOA(RHOAQ63L)quelaformasalvajedeSOX4.Adems,dichoscambiosmantenanintacta
sucapacidadparaactivarlatranscripcin,loquepodrasugerirquesetratadepolimorfismos
poco frecuentes, teniendo en cuenta que no se detectaron en individuos sanos. Adems de
estas variaciones, se identific una mutacin somtica de SOX4 en un tumor primario.
Curiosamente,estamutacindabalugaraunaprotenatruncadaenlaquefaltabaeldominio
detransactivacin.LaexpresindeestaformatruncadadeSOX4endiferenteslneascelulares
revel su incapacidad para activar la transcripcin, lo que estaba de acuerdo con
observaciones previas de estudios de transactivacin de la transcripcin in vitro (van de
Wetering et al., 1993). Esta forma truncada de SOX4 tampoco fue capaz de aumentar el
nmerodefocostransformantesinducidosporRHOAQ63Lydiolugaraunainhibicindela
formacin de focos transformantes inducida por la forma activa de HRAS (HRASG12V). Por
otrolado,seobservquelosnivelesdelaprotenaSOX4truncadaeranmuchomselevados
quelosdelaformasalvajeydelasdemsvariantescuandoeransobreexpresadasdeforma
ectpicaenlneascelularesdecncer,loquepodrasugerirquelaprotenatruncadaesms
estable.ASOX4selehanatribuidocapacidadesoncognicasindependientesdesupapelcomo
factordetranscripcin.Mediantesucapacidadparaestabilizarlacateninamantieneactiva
la va de Wnt (Kormish et al., 2010; Sinner et al., 2007) y es posible que la forma SOX4
truncada,msestable,seacumuleypotencieeldesarrollotumoraldeformaalternativaenun
contextoindependientealaactivacindeRHOAyHRAS.Lafaltadeanticuerposptimospara
inmunohistoqumica impidi determinar si los niveles de SOX4 estaban aumentados en el
tumor primario que presentaba la mutacion que origina la protena SOX4 truncada. Por otro
lado, el comportamiento diferente de la protena truncada no se deba a una localizacin
aberrantecomosedemostrmedianteinmunofluorescenciatraslaexpresinectpicadeesta
formatruncada.Asimismo,ningunade lasvariacionesidentificadasenSOX4sehallabaen el
dominio HMGbox de unin al DNA, en el que tambin se encuentran las seales de
localizacin y exportacin nuclear (Malki et al., 2010). Por ello no cabe esperar que estas
variantesaltereneltrficoalncleodeSOX4osuuninalDNA.
Aunque SOX4 fue el primer miembro de la familia SOX que demostr capacidad como
factor de transcripcin (van de Wetering et al., 1993), hasta el momento se desconocen la
mayoradelosgenesdianaqueregula.SOX4esunfactordetranscripcinmodular,esdecir,el
dominio de unin al DNA (HMGbox) est separado del dominio transactivador. El dominio
HMGbox se une al surco menor del DNA causando una fuerte torsin de la doble hebra de
DNA.Dehecho,sehapropuestoquefactoresdetranscripcinquecontieneneldominioHMG
box tambin tienen una funcin estructural, ya que su interaccin con el DNA permite el
acceso de otros factores de transcripcin y de elementos reguladores (Ferrari et al., 1992;
Gieseetal.,1992).MedianteensayosdeltipoEMSA(electrophoreticmobilityshiftassay),se
describiqueeldominioHMGboxdeSOX4seunepreferentementealmotivoAACAAAG(van
de Wetering et al., 1993). El primer gen diana de Sox4 que se identific fue Tubb3, un gen
involucradoenladiferenciacinneuronal.Sox4seunealassecuenciasGACAATAGyCACAATG
presentesenelpromotordeTubb3yactivasutranscripcin(Bergslandetal.,2006;Dyetal.,

66

DISCUSIN

2008; Hoser et al., 2008). Del mismo modo se ha propuesto que Tead2, un factor de
transcripcintambininvolucradoenlaregulacindeldesarrolloneuronal,reclutaaSox4en
supromotorpararegularsutranscripcin.Existeciertacontroversiarespectoalaregulacin
de TEAD2 mediada por SOX4; mientras que un estudio demuestra la unin de Sox4 al
promotor de Tead2 y la consecuente activacin de la transcripcin (Bhattaram et al., 2010),
otroreafirmalaregulacindeTEAD2porSOX4peronoconsiguedemostrarsureclutamiento
alpromotor (Liaoetal.,2008).Ennuestroestudio sehanidentificadoTUBB3yTEAD2como
genes regulados por SOX4 en lneas celulares de cncer de pulmn y adems se ha
demostrado su unin a las secuencias consenso de sus promotores previamente descritas.
Asimismo, en el presente trabajo se ha comprobado que, en fibroblastos embrionarios de
ratones Sox4/, exista una disminucin significativa de la expresin de estos genes en
comparacin con fibroblastos Sox4+/+. Recientemente, se ha descrito una matriz de
probabilidadesdelacomposicindelasecuenciaconsensodeDNAparalaunindeSOX4yse
hautilizadoparalaidentificacindegenesdianadeSOX4enunmodelodecncerdeprstata
(Scharer et al., 2009). Cabe destacar que ninguno de los genes seleccionados por Scharer y
colaboradoresfuereproducidoenelpresentetrabajo,loquepodraindicarquelaregulacin
de la transcripcin mediada por SOX4 es dependiente de la clula de origen. En el presente
trabajosehanutilizadovariosmodelosdeestudio,lamayoriaderivadosdeltejidopulmonar.
Dichosmodelosincluyenlaexpresin ectpicadeSOX4en clulastumoralesdepulmncon
bajos niveles de SOX4, tumores primarios y lneas celulares de cncer pulmn con y sin
expresinelevadadeSOX4,tejidopulmonarnormalderatonesjvenesyviejosyMEFs(mouse
embryonic fibroblasts) knock outs para Sox4. El requerimiento de SOX4 para permitir la
expresingnicadeCCNG2,DLG3,DOCK4,EGR3,GPC2,MLLT11,MTA2,MYB,PCDHBs,RBP1,
RNF122, TMEFF1 y VASH2 se comprob en la mayora de estos modelos. Los tumores
primariosylaslneascelularesdecncerdepulmnconsobreexpresindeSOX4presentaron
unosnivelesdeexpresindeestosgenessignificativamentesuperioralostumoresdepulmn
con baja expresin de SOX4, por lo que estos genes podran haber contribuido a la
carcinognesis de estos tumores ya que muchos de ellos ya se haban relacionado
anteriormente con procesos cancerosos. Curiosamente, se encontr que muchos de estos
genessonaltamenteespecficosdetejidosdeorigenneuralcomocerebro,mdulaespinaly
retinaymuchosdeellossehanrelacionadoconeldesarrollodetejidonervioso.ElgenDLG3
codifica una protena de membrana asociada a la sinapsis expresada durante el desarrollo
tempranodelcerebroyestrelacionadoalretrasomentalligadoalcromosomaX(Mulleret
al.,1996;Tarpeyetal.,2004;Zannietal.,2010).DOCK4esunintercambiadordenucletidos
deguaninainvolucradoenlaregulacindeunionesadherentesentreclulas.Sehandescrito
mutacionesdeestegenenlneascelularesdecncerdeovario,prstata,colorrectalygliomas
(Yajniketal.,2003).EnunmodelodeDrosophilasehadescritoqueDOCK4esnecesariopara
el desarrollo correcto del sistema nervioso central ya que su deficiencia provoca defectos
axonales (Biersmith et al.). El gen MLLT11 se ha encontrado translocado en leucemias y
linfomas (Le Baccon et al., 2001; Lestou et al., 2003) y codifica para AF1Q, cuya sobre
expresinestinvolucradaeneldesarrollodeleucemias,sndromemielodisplsicoycncerde
tiroidesymama(Jacquesetal.,2005;Lietal.,2006;Soetal.,2000;Tseetal.,2005;Tseetal.,
2004). De forma interesante se ha descrito que AF1Q aumenta su expresin durante la
diferenciacin neuronal a partir de clulas madre y progenitoras neurales y su expresin
ectpicapromuevelaexpresindemarcadoresneuralesenclulasembrionariasderin(Lin

67

DISCUSIN

etal.,2004).ElgenTMEFF1codificaparaunaprotenatransmembranaenriquecidaentejidos
neuroendocrinos y preferentemente expresada en cerebro e involucrada en el desarrollo
neural (Eib and Martens, 1996; Kanemoto et al., 2001). Tambin, TMEFF1 se ha relacionado
con tumores cerebrales comportndose como un supresor tumoral (Gery et al., 2003). RBP1
fuelaprimeraprotenaidentificadadeuninaretinol(Napoli,1999).Essabidoqueelretinol
esnecesarioparamantenerelestadodiferenciadodelepitelioadulto,porloque,enparticular
los tumores epiteliales, frecuentemente tienen una expresin alterada de los componentes
involucradosenladisponibilidaddecidoretinoico,comoRBP1(CRBP1)(Estelleretal.,2002;
Kuppumbatti et al., 2000; Williams et al., 2009). Al contrario de lo que ocurre en estos
tumores,RBP1estsobreexpresadoyesunmarcadordemalpronsticoengliomas(Campos
etal.,2011).Adems,elmetabolismodelcidoretinoicoesindispensableparalamaduracin
delsistemanerviosocentralyladiferenciacindelasdistintasestructurascerebrales(Henion
andWeston,1994;Jacobsetal.,2006;Plumetal.,2001).Curiosamente,laexpresindeRBP1
en gliomas se correlaciona con la de SOX2, la cual ya se haba descrito anteriormente que
estabareguladatambinporSOX4enestetipodetumores(Camposetal.,2011;Ikushimaet
al.,2009).RBP1seidentificcomounodelosgenesmsaltamentereguladosporSOX4yaque
suexpresindisminuanotablementetrasladeplecindeSOX4ylaexpresinectpicadeeste
ltimoincrementabahasta20veceslaexpresindeRBP1.Aunas,nosepudodemostrarel
reclutamientodelfactordetranscripcinSOX4ensupromotor,yaseaporquesetratedeuna
regulacin indirecta o porque no se ha identificado correctamente la regin especfica de
unin.
De entre las dianas transcripcionales de SOX4 identificadas en el presente trabajo se ha
podido verificar la unin de SOX4 a los promotores de TUBB3 y TEAD2, anteriormente ya
descritoscomogenesdirectamentereguladosporlaunindeSOX4asupromotor(Bergsland
et al., 2006; Bhattaram et al., 2010). Por otra parte, la regulacion de los niveles de VASH2 y
MYBporlaunindirectadeSOX4asuspromotoresconstituyeunanuevaobservacin.Elgen
VASH2(vasohibin2)fueinicialmenteidentificadocomounhomlogodeVASH1(Shibuyaetal.,
2006),porloqueseespeculqueconstituauninhibidordelaangiognesis.Posteriormente
sedemostrlocontrario,yaqueVash2seexpresabaenlasclulasendotelialesdelosrganos
en desarrollo durante los estadios medios de la gestacin, momento a partir del cual
disminuyesuexpresin(Kimuraetal.,2009;SatoandSonoda,2007).Elpatrondeexpresin
de Vash2 durante el desarrollo embrionario es muy similar al de Sox4 (Mariani et al., 2002;
Shibuyaetal.,2006).Adems,VASH2estpresenteenlasclulasmononuclearesderivadasde
lamdulasea,promoviendolaangiognesis.VASH1yVASH2controlanlaactivacinyelcese
de la angiognesis de forma complementaria (Kimura et al., 2009). As pues, la sobre
regulacindeVASH2enclulastumoralesdebidaalasobreexpresindeSOX4podrainducir
la angiognesis y ser este uno de los mecanismos por los que SOX4 ejerce su capacidad
oncognica. Como se ha mencionado anteriormente, los ratones Sox4/ mueren durante el
desarrolloembrionariodebidoafallosensusistemacirculatorio,probablementerelacionado
con la desregulacin de Vash2. El oncogn cMyb fue inicialmente identificado como el
homlogo celular del gen transformante vMyb inductor de leucemias y, como Sox4, Myb
tambinesunsitiocomndemutagnesisinducidaporinsercinretroviral(Klempnauerand
Bishop,1984;ShenOngetal.,1986;Weinsteinetal.,1986).MYBesunfactordetranscripcin
que se expresa principalmente en clulas madre y progenitoras de la mdula sea, colon y
cerebroadulto,impidiendosudiferenciacin(Emambokusetal.,2003;Malaterreetal.,2007;

68

DISCUSIN

Malaterre et al., 2008). Se ha observado que la activacin constitutiva de MYB, mediante

sobreexpresinomutacionesactivadoras,promueveeldesarrollodeneoplasias(Drabschet
al., 2007; Hugo et al., 2006; Thompson et al., 1997). Asimismo, se han detectado
reorganizacionesgenticasqueafectanelgenMYBenleucemias(Clappieretal.,2007;Tomita
etal.,1998)yamplificacingnicaencncerpulmonar,especialmenteenelcncerdepulmn
de clula no pequea (Griffin and Baylin, 1985; Kiefer et al., 1987). Se han identificado
alrededor de 80 dianas transcripcionales de MYB, de entre las que cabe destacar genes
relacionadosconlaproliferacincelular(MYC,CCNA1,CCNB1,CCNE1yKIT),lasupervivencia
(BCL2,HSPA5yHSP70)yladiferenciacin(GATA3)(Leietal.,2004).Comosehaobservadocon
muchosdelosgenesreguladosporSOX4,MYBtambinjuegaunpapelimportanteentejido
nervioso.ElpatrondeexpresindeMybduranteeldesarrolloembrionariodelcerebroesmuy
similaralobservadoconSox4,yaque presenta unaexpresinelevadaenlas etapasiniciales
deldesarrollomientrasquesereducesignificativamenteenlosestadiosfinales(Marianietal.,
2002; Rosenthal et al., 1996). En el cerebro adulto, la expresin de Myb coincide con la
localizacin de clulas progenitoras neurales por lo que se le considera un factor clave en la
neurognesisadultaysuprdidasecorrespondeconunadisminucindelaexpresindeSox2
(Malaterreetal.,2008;RamsayandGonda,2008).Sehadescritounmecanismoderegulacin
de la expresin de MYB mediante elementos potenciadores de la transcripcin dentro del
primer intrn (Dooley et al., 1996; Manzella et al., 2000); la mayora de las secuencias
identificadasdeuninaSOX4enestegenseencuentranenelprimerintrn,loqueestde
acuerdoconlosresuladosdelpresentetrabajo.
De entre los genes con expresin aumentada por SOX4 se encontraban varias
protocaderinas,especialmentedeltipoB(PCDHB).AunquecadaunodelosgenesPCDHBtiene
supropiopromotor(Tasicetal.,2002;Wangetal.,2002),enelpresentetrabajoseobserv
queSOX4noerareclutadoensuspromotoresindividuales,sinoenunaregindecontroldel
clusterdePcdhsituadoa320kbendireccinaltelmeroydentrodelgenDiap1(Yokotaet
al.,2011).LaunindeSOX4aunelementoreguladorcomndelclusterdePCDHBexplicael
incremento simultneo en la expresin de varios de estos genes. Esta regulacin a distancia
podradarseporlaformacindeunloopdeDNAentrelaregindeunindeSOX4yelsitiode
iniciacin de transcripcin de estas PCDHBs (Ptashne, 1986). Las protocadherinas (PCDH) en
cluster (A,B y G), localizadas en tndem en el mismo cromosoma, codifican protenas
transmembranainvolucradasenlauninclulacluladeneuronas.EstasPCDHsseexpresan
principalementeencerebro,duranteeldesarrolloyeneladulto,yregulanlaformacindelos
circuitosneuronales(Franketal.,2005;Junghansetal.,2008;Takeietal.,2001).Laexpresin
combinada de estas PCDHs contribuye a la alta diversidad neuronal en vertebrados (Yagi,
2008; Zipursky and Sanes, 2010). Las isoformas PCDHA y G son productos del splicing
alternativodeestosgenesmientrasqueelclusterPCDHBlocomponengenesindependientes.
EnnuestroestudiodescubrimosqueSOX4regulalaexpresindevariasPCDHBsrevelandola
importanciadeestefactordetranscripcinenlaregulacinglobaldeestecluster.
Muchasprotenasinvolucradaseneldesarrolloembrionarioestnasuvezimplicadasen
carcinognesis,ydeformasimilar,muchosgenesinicialmenteidentificadoscomooncogenesy
genes supresores de tumores han resultado ser esenciales en el desarrollo embrionario,
indicando que ambos procesos estn ntimamente relacionados. Algunos ejemplos son los
componentesdelasvasdetransduccindesealescomoladeSHh,WntyNotch(Classonand
Harlow,2002;LustigandBehrens,2003;Wickingetal.,1999)ymiembrosdelasfamiliasPAXy

69

DISCUSIN

HOX (Barr, 1997; Chang et al., 1997; Lu et al., 1995). Trabajos ms recientes incluyen el
envejecimientocomootroprocesobiolgicomolecularmenteligadoalcncer.Estosestudios
parecen indicar que estos procesos son complejos tapices biolgicos que, frecuentemente
aunque no siempre, estn tejidos con los mismos hilos moleculares (Finkel et al., 2007). Un
ejemploclarodeestarelacineselgenp16INK4aqueesalavezungensupresortumoralyun
marcador de envejecimiento (Alcorta et al., 1996; Hara et al., 1996; Matheu et al., 2009).
Numerosos estudios han descrito la importancia de SOX4 en el desarrollo de diferentes
rganos. Los ratones Sox4/ mueren durante el desarrollo embrionario debido a fallos en su
sistema circulatorio (Schilham et al., 1996). La interferencia de la expresin de Sox4 en
embrionesdepollobloquealaexpresindegenesdediferenciacinneuronal,mientrasquesu
sobreexpresin promueve la expresin de estos genes (Bergsland et al., 2006). En
consonancia con este hecho, en un estudio de expresin global durante el desarrollo de
pulmn, se ha observado que la expresin de Sox4 disminuye progresivamente durante el
desarrolloembrionario,siendomuyelevadaenlasfasestempranasydisminuyendodeforma
significativaenlasltimasetapasyenadultos(Marianietal.,2002).Porotrolado,laexpresin
ectpicadeSox4afectaladiferenciacindeoligodendrocitosenratn(Potzneretal.,2007),
sugiriendo que el gen Sox4 promueve la diferenciacin de clulas progenitoras en neuronas,
impidiendo su diferenciacin en gla. Sox4 tambin es necesario para la diferenciacin de
linfocitosByaqueclulashematopoyticasSox4/ injertadasenratones salvajessemantienen
en estado proB (Schilham et al., 1996). Por otro lado, la inhibicin de la expresin de Sox4
reduce la proliferacin y diferenciacin de osteoblastos y el explante de pncreas Sox4/
muestra un reducido nmero de clulas beta productoras de insulina (NissenMeyer et al.,
2007;Wilsonetal.,2005).DebidoalaclararelevanciadeSOX4tantoendesarrollocomoen
cncer, en el presente trabajo se estudi el posible papel de SOX4 tambin en el
envejecimiento.EnesteestudiosedeterminquelaexpresindeSox4enpulmndisminuye
significativamente con el envejecimiento. A su vez, muchos de los genes regulados por Sox4
tambinsereducenenciertamedidaconlaedad.Asimismo,Sox2,otromiembrodelafamilia
Sox,esencialparalainduccindelapluripotenciaymarcadordepropiedadesdeclulasmadre
(stemness) (Takahashi and Yamanaka, 2006), se comport de forma similar a Sox4 pero sus
niveles disminuyeron de forma menos acusada. Como cabra esperar, el gen p16INK4a
increment, de manera muy significativa, sus niveles de expresin en pulmn con el
envejecimiento. As pues, se podra sugerir que SOX4 tambin podra tener relevancia en
procesosdeenvejecimiento,especialmenteenelpulmn.
Comosehadichoanteriormente,losmiembrosdelafamiliaSOXestnrelacionadospor
homologaaldominioHMGbox.LafamiliadegenesSOXsedivideenochogrupos,deAaHen
funcindelasimilituddesusprotenas;SOX4,11y12pertenecenalgrupoSOXC(Schepers
et al., 2002). Numerosos miembros de esta familia de factores de transcripcin se han
relacionado con cncer (Dong et al., 2004). En el presente trabajo se determin que la
expresiondeSOX4,2y11eramaselevadaencncerdepulmnmicrocticoqueeneltipono
microcticoensuconjunto.Porotrolado,tambinseobservunaexpresindiferencialdentro
de los subtipos histopatolgicos del cncer de pulmn no microctico, destacndose niveles
maselevadosdeSOX2ySOX9encarcinomasdeltipoescamoso.Mientrasquelarelacinde
SOX9conestetipodecarcinomanosehabadescritohastaelmomento,laexpresinaltade
SOX2 en carcinomas de tipo escamosos es conocida (Hussenet and du Manoir, 2010) y se
asocia a amplificacin del gen SOX2. No obstante cabe comentar que la amplificacin de la

70

DISCUSIN

regin incluye al oncogn PIK3CA, por lo que cualquiera de los dos podra ser la diana de la
amplificacinenestesubtipohistopatolgico(Anguloetal.,2008;Bassetal.,2009;Hussenet
et al., 2010; Yuan et al., 2010). Adems, en un estudio reciente se ha descrito SOX2 como
marcadordiferencialentrecarcinomasescamososyadenocarcinomasdepulmn(Tsutaetal.,
2011).Porotrolado,previamentesehabadescritoqueSOX4esunadianadirectadelavade
TGFyqueactivalatranscripcindeSOX2paramantenerlaspropiedadesdeclulamadreen
clulas iniciadoras de glioma (Ikushima et al., 2009), en nuestro estudio no se ha podido
verificarlaactivacindelatranscripcindeSOX2mediadaporSOX4encncerdepulmn.
Finalmente,elpresentetrabajomuestraquelafirmadeexpresindeSOX4,queincluyeun
gran nmero de genes con expresin especfica de tejido neural, y el perfil de expresion del
cncerdepulmnmicrocticosonsignificativamentesimilares.Estasobservaciones,juntocon
el hecho cada vez ms claro del origen neuroendocrino del cncer de pulmn microctico
(Sutherlandetal.,2011),apuntanaunaclaraimplicacindeSOX4eneldesarrollodeestetipo
decncer.

71

72

Conclusiones

73

74

CONCLUSIONES

Conclusiones

Sehanidentificado13ampliconesencncerdepulmn:1p34.2,4q12,5p13,5q14.1,
6p21.2, 6p22.3, 11q12, 11q13.2, 11q13.4, 13q34, 16p13, 17q12 y 19q13. Los
ampliconesen11q12,13q34y6p22.3sonlosqueseobservanconmayorfrecuenciay
exhibenlosmayoresnivelesdeamplificacinysobreexpresin.

La amplificacin y sobreexpresin en 11q12 se observ en el 3% de los tumores de

pulmn. La protena p120ctn, codificada por el gen CTNND1 dentro de esta regin,
presenta una localizacin celular aberrante. Los tumores de pulmn presentan
enriquecimientodelaisoforma3dep120ctnconrespectoaltejidopulmonarnormal.

La amplificacin y sobreexpresin de la regin 13q34 se detecta en el 3% de los

tumoresdepulmn.Debidoasufuncinbiolgica,elgenTFDP1seproponecomoel
oncogncandidatodentrodeesteamplicn.

LaprotenaDP1,codificadaporTFDP1,estsobreexpresadaenaquellostumoresque
presentanamplificaciongnica,todosellosdetipoescamoso.Doslneascelularesde
cncer de pulmn microctico (HCC33 y H1963) exhiben amplificacin y sobre
expresindeTFDP1.

LadeplecindeDP1reducealamitadlaviabilidaddelasclulasHCC33apoyandosu
papeloncognico.

ElgenSOX4eselnicosobreexpresadoenlasclulasconamplificacinen6p22,por
loqueseproponecomooncogndianadeestaregin.El6%delostumoresprimarios
yel3,5%delaslneascelularesdecncerdepulmnexhibensobreexpresindeSOX4
conrespectoatejidopulmonarnormal.

Se identifican variaciones en la secuencia de SOX4 en lneas celulares de cncer de

pulmn. Ninguna de estas variaciones es capaz de alterar la capacidad de
transactivacindeSOX4,sugiriendoqueconstituyenpolimorfismospocofrecuentes.

LasobreexpresindeSOX4ydesusvariantespotencialacapacidaddeRHOAQ63Lde
transformar clulas NIH3T3 en un ensayo de cooperacin oncognica, indicando que
SOX4tienepropiedadesoncognicas.

75

CONCLUSIONES

Se identifica una mutacin de origen somtico en SOX4 que codifica una protena
truncada. Dicha forma carece de actividad transactivadora, no potencia la capacidad
transformantedeRHOAQ63LydisminuyelacapacidadtransformantedeHRASG12V,
indicando que la actividad transactivadora de SOX4 es necesaria para incrementar la
capacidadtransformantedeHRASydeRHOA.

La firma de expresin gnica de SOX4 incluye numerosos genes relacionados con el

desarrollo neural. Asimismo, la mayora de estos genes estan sobreexpresados en
tumores de pulmn con altos niveles de SOX4, sugiriendo su implicacin en la
carcinognesispulmonar.

ElanlisisdeinmunoprecipicaciondecromatinaconelanticuerpoantiSOX4evidencia
que los genes MYB y VASH2 y el cluster de genes PCDHBs constituyen dianas
transcripcionalesdirectasdeSOX4.

La expresin de Sox4 y de sus dianas transcripcionales est significativamente

disminudaeneltejidopulmonarderatonesviejosencomparacinconelderatones
jvenes,sugiriendounpapeldestosenelprocesodeenvejecimiento.

LosnivelesdeexpresindelosgenesSOX2,4y11sonsignificativamentesuperiores
en el cncer de pulmn microctico, con respecto al tipo no microctico. Adems, la
firmadeexpresiongnicadeSOX4essignificativamentesimilaralafirmadelcncer
depulmnmicroctico,locualreflejaunaimplicacindeSOX4eneldesarrollodeeste
tipodecncerdeorigenneuroendocrino.

76

Bibliografa

77

78

BIBLIOGRAFA

Bibliografa

A
Aaboe,M.,BirkenkampDemtroder,K.,Wiuf,C.,Sorensen,F.B.,Thykjaer,T.,Sauter,G.,Jensen,K.M.,Dyrskjot,L.,
and Orntoft, T. (2006). SOX4 expression in bladder carcinoma: clinical aspects and in vitro functional
characterization.CancerRes66,34343442.
Abba,M.C.,Fabris,V.T.,Hu,Y.,Kittrell,F.S.,Cai,W.W.,Donehower,L.A.,Sahin,A.,Medina,D.,andAldaz,C.M.
((2007)).Identificationofnovelamplificationgenetargetsinmouseandhumanbreastcanceratasynteniccluster
mappingtomousech8A1andhumanch13q34.CancerRes67,41044112.
Adjei,A.A.,Molina,J.R.,Mandrekar,S.J.,Marks,R.,Reid,J.R.,Croghan,G.,Hanson,L.J.,Jett,J.R.,Xia,C.,Lathia,
C., and Simantov, R. (2007). Phase I trial of sorafenib in combination with gefitinib in patients with refractory or
recurrentnonsmallcelllungcancer.ClinCancerRes13,26842691.
Aguayo,S.M.,Miller,Y.E.,Waldron,J.A.,Jr.,Bogin,R.M.,Sunday,M.E.,Staton,G.W.,Jr.,Beam,W.R.,andKing,
T.E.,Jr.(1992).Briefreport:idiopathicdiffusehyperplasiaofpulmonaryneuroendocrinecellsandairwaysdisease.
NEnglJMed327,12851288.
Ahn,S.G.,Kim,H.S.,Jeong,S.W.,Kim,B.E.,Rhim,H.,Shim,J.Y.,Kim,J.W.,Lee,J.H.,andKim,I.K.(2002).Sox4
isapositiveregulatorofHep3BandHepG2cells'apoptosisinducedbyprostaglandin(PG)A(2)anddelta(12)PGJ(2).
ExpMolMed34,243249.
Alcorta, D. A., Xiong, Y., Phelps, D., Hannon, G., Beach, D., and Barrett, J. C. (1996). Involvement of the cyclin
dependentkinaseinhibitorp16(INK4a)inreplicativesenescenceofnormalhumanfibroblasts.ProcNatlAcadSciU
SA93,1374213747.
Alonso,C.N.,Meyer,C.,Gallego,M.S.,Rossi,J.G.,Mansini,A.P.,Rubio,P.L.,Medina,A.,Marschalek,R.,and
Felice, M. S. BTBD18: A novel MLL partner gene in an infant with acute lymphoblastic leukemia and
inv(11)(q13;q23).LeukRes34,e294296.
Amos,C.I.,Wu,X.,Broderick,P.,Gorlov,I.P.,Gu,J.,Eisen,T.,Dong,Q.,Zhang,Q.,Gu,X.,Vijayakrishnan,J.,etal.
(2008).GenomewideassociationscanoftagSNPsidentifiesasusceptibilitylocusforlungcancerat15q25.1.Nat
Genet40,616622.
Amos,C.I.,Xu,W.,andSpitz,M.R.(1999).Isthereageneticbasisforlungcancersusceptibility?RecentResults
CancerRes151,312.
Anastasiadis, P. Z., Moon, S. Y., Thoreson, M. A., Mariner, D. J., Crawford, H. C., Zheng, Y., and Reynolds, A. B.
(2000).InhibitionofRhoAbyp120catenin.NatCellBiol2,637644.
Andersen, C. L., Christensen, L. L., Thorsen, K., Schepeler, T., Sorensen, F. B., Verspaget, H. W., Simon, R.,
Kruhoffer, M., Aaltonen, L. A., Laurberg, S., and Orntoft, T. F. (2009). Dysregulation of the transcription factors
SOX4,CBFBandSMARCC1correlateswithoutcomeofcolorectalcancer.BrJCancer100,511523.
Angulo,B.,SuarezGauthier,A.,LopezRios,F.,Medina,P.P.,Conde,E.,Tang,M.,Soler,G.,LopezEncuentra,A.,
Cigudosa, J. C., and SanchezCespedes, M. (2008). Expression signatures in lung cancer reveal a profile for EGFR
mutanttumoursandidentifyselectivePIK3CAoverexpressionbygeneamplification.JPathol214,347356.
Armas,O.A.,White,D.A.,Erlandson,R.A.,andRosai,J.(1995).Diffuseidiopathicpulmonaryneuroendocrinecell
proliferationpresentingasinterstitiallungdisease.AmJSurgPathol19,963970.
Auerbach,O.,Forman,J.B.,Gere,J.B.,Kassouny,D.Y.,Muehsam,G.E.,Petrick,T.G.,Smolin,H.J.,andStout,A.
P.(1957).Changesinthebronchialepitheliuminrelationtosmokingandcancerofthelung;areportofprogress.N
EnglJMed256,97104.

79

BIBLIOGRAFA

B
Balak,M.N.,Gong,Y.,Riely,G.J.,Somwar,R.,Li,A.R.,Zakowski,M.F.,Chiang,A.,Yang,G.,Ouerfelli,O.,Kris,M.
G., et al. (2006). Novel D761Y and common secondary T790M mutations in epidermal growth factor receptor
mutantlungadenocarcinomaswithacquiredresistancetokinaseinhibitors.ClinCancerRes12,64946501.
Bandara, L. R., and La Thangue, N. B. (1991). Adenovirus E1a prevents the retinoblastoma gene product from
complexingwithacellulartranscriptionfactor.Nature351,494497.
Barbacid,M.(1987).rasgenes.AnnuRevBiochem56,779827.
Barr,F.G.(1997).Chromosomaltranslocationsinvolvingpairedboxtranscriptionfactors inhumancancer.IntJ
BiochemCellBiol29,14491461.
Bass,A.J.,Watanabe,H.,Mermel,C.H.,Yu,S.,Perner,S.,Verhaak,R.G.,Kim,S.Y.,Wardwell,L.,Tamayo,P.,Gat
Viks, I., et al. (2009). SOX2 is an amplified lineagesurvival oncogene in lung and esophageal squamous cell
carcinomas.NatGenet41,12381242.
Bellovin,D.I.,Bates,R.C.,Muzikansky,A.,Rimm,D.L.,andMercurio,A.M.(2005).Alteredlocalizationofp120
cateninduringepithelialtomesenchymaltransitionofcoloncarcinomaisprognosticforaggressivedisease.Cancer
Res65,1093810945.
Bergsland, M., Werme, M., Malewicz, M., Perlmann, T., and Muhr, J. (2006). The establishment of neuronal
propertiesiscontrolledbySox4andSox11.GenesDev20,34753486.
Bernasconi, N. L., Wormhoudt, T. A., and LairdOffringa, I. A. (2000). Posttranscriptional deregulation of myc
genesinlungcancercelllines.AmJRespirCellMolBiol23,560565.
Betticher, D. C., Heighway, J., Hasleton, P. S., Altermatt, H. J., Ryder, W. D., Cerny, T., and Thatcher, N. (1996).
Prognostic significance of CCND1 (cyclin D1) overexpression in primary resected nonsmallcell lung cancer. Br J
Cancer73,294300.
Bhattaram,P.,PenzoMendez,A.,Sock,E.,Colmenares,C.,Kaneko,K.J.,Vassilev,A.,Depamphilis,M.L.,Wegner,
M.,andLefebvre,V.OrganogenesisreliesonSoxCtranscriptionfactorsforthesurvivalofneuralandmesenchymal
progenitors.NatCommun1,9.
Biersmith,B.,Liu,Z.C.,Bauman,K.,andGeisbrecht,E.R.TheDOCKproteinspongebindstoELMOandfunctions
inDrosophilaembryonicCNSdevelopment.PLoSOne6,e16120.
Blanco,R.,Iwakawa,R.,Tang, M.,Kohno,T.,Angulo,B.,Pio,R.,Montuenga,L.M.,Minna,J.D.,Yokota,J.,and
SanchezCespedes,M.(2009).Agenealterationprofileofhumanlungcancercelllines.HumMutat30,11991206.
Boyd, K. E., Xiao, Y. Y., Fan, K., Poholek, A., Copeland, N. G., Jenkins, N. A., and Perkins, A. S. (2006). Sox4
cooperateswithEvi1inAKXD23myeloidtumorsviatransactivationofproviralLTR.Blood107,733741.
Brummelkamp,T.R.,Bernards,R.,andAgami,R.(2002).Stablesuppressionoftumorigenicitybyvirusmediated
RNAinterference.CancerCell2,243247.
Burney, L. E. (1959). Smoking and lung cancer: a statement of the Public Health Service. J Am Med Assoc 171,
18291837.

C
Campos, B., Centner, F. S., Bermejo, J. L., Ali, R., Dorsch, K., Wan, F., Felsberg, J., Ahmadi, R., Grabe, N.,
Reifenberger, G., et al. Aberrant expression of retinoic acid signaling molecules influences patient survival in
astrocyticgliomas.AmJPathol178,19531964.
Caputi,M.,DeLuca,L.,Papaccio,G.,D'Aponte,A.,Cavallotti,I.,Scala,P.,Scarano,F.,Manna,M.,Gualdiero,L.,
andDeLuca,B.(1997).PrognosticroleofcyclinD1innonsmallcelllungcancer:animmunohistochemicalanalysis.
EurJHistochem41,133138.

80

BIBLIOGRAFA
Carretero, J., Medina, P. P., Pio, R., Montuenga, L. M., and SanchezCespedes, M. (2004). Novel and natural
knockoutlungcancercelllinesfortheLKB1/STK11tumorsuppressorgene.Oncogene23,40374040.
Castillo,S.D.,Angulo,B.,SuarezGauthier,A.,Melchor,L.,Medina,P.P.,SanchezVerde,L.,TorresLanzas,J.,Pita,
G.,Benitez,J.,andSanchezCespedes,M.GeneamplificationofthetranscriptionfactorDP1andCTNND1inhuman
lungcancer.JPathol.
Chang,C.P.,deVivo,I.,andCleary,M.L.(1997).TheHoxcooperativitymotifofthechimericoncoproteinE2a
Pbx1isnecessaryandsufficientforoncogenesis.MolCellBiol17,8188.
Cheng, S. W., Davies, K. P., Yung, E., Beltran, R. J., Yu, J., and Kalpana, G. V. (1999). cMYC interacts with
INI1/hSNF5andrequirestheSWI/SNFcomplexfortransactivationfunction.NatGenet22,102105.
Chin,L.,Pomerantz,J.,andDePinho,R.A.(1998).TheINK4a/ARFtumorsuppressor:onegenetwoproductstwo
pathways.TrendsBiochemSci23,291296.
Chin,L.,Tam,A.,Pomerantz,J.,Wong,M.,Holash,J.,Bardeesy,N.,Shen,Q.,O'Hagan,R.,Pantginis,J.,Zhou,H.,et
al.(1999).EssentialroleforoncogenicRasintumourmaintenance.Nature400,468472.
Choi,Y.W.,Choi,J.S.,Zheng,L.T.,Lim,Y.J.,Yoon,H.K.,Kim,Y.H.,Wang,Y.P.,andLim,Y.(2007).Comparative
genomichybridizationarrayanalysisandrealtimePCRrevealsgenomicalterationsinsquamouscellcarcinomasof
thelung.LungCancer55,4351.
Clappier, E., Cuccuini, W., Kalota, A., Crinquette, A., Cayuela, J.M., Dik, W. A., Langerak, A. W., Montpellier, B.,
Nadel, B., Walrafen, P., et al. (2007). The CMYB locus is involved in chromosomal translocation and genomic
duplicationsinhumanTcellacuteleukemia(TALL),thetranslocationdefininganewTALLsubtypeinveryyoung
children.Blood110,12511261.
Classon,M.,andHarlow,E.(2002).Theretinoblastomatumoursuppressorindevelopmentandcancer.NatRev
Cancer2,910917.
Colby,T.V.,Wistuba,II,andGazdar,A.(1998).Precursorstopulmonaryneoplasia.AdvAnatPathol5,205215.
Colomer, R., Lupu, R., Bacus, S. S., and Gelmann, E. P. (1994). erbB2 antisense oligonucleotides inhibit the
proliferationofbreastcarcinomacellswitherbB2oncogeneamplification.BrJCancer70,819825.
Conde,E.,Angulo,B.,Tang,M.,Morente,M.,TorresLanzas,J.,LopezEncuentra,A.,LopezRios,F.,andSanchez
Cespedes,M.(2006).MolecularcontextoftheEGFRmutations:evidencefortheactivationofmTOR/S6Ksignaling.
ClinCancerRes12,710717.
Cornfield,J.,Haenszel,W.,Hammond,E.C.,Lilienfeld,A.M.,Shimkin,M.B.,andWynder,E.L.(1959).Smoking
andlungcancer:recentevidenceandadiscussionofsomequestions.JNatlCancerInst22,173203.
Corradetti,M.N.,Inoki,K.,Bardeesy,N.,DePinho,R.A.,andGuan,K.L.(2004).RegulationoftheTSCpathwayby
LKB1:evidenceofamolecularlinkbetweentuberoussclerosiscomplexandPeutzJegherssyndrome.GenesDev18,
15331538.
Cozzolino,M.,Stagni,V.,Spinardi,L.,Campioni,N.,Fiorentini,C.,Salvati,E.,Alema,S.,andSalvatore,A.M.(2003).
p120Cateninisrequiredforgrowthfactordependentcellmotilityandscatteringinepithelialcells.MolBiolCell14,
19641977.

D
Daniel,J.M.,andReynolds,A.B.(1999).Thecateninp120(ctn)interactswithKaiso,anovelBTB/POZdomainzinc
fingertranscriptionfactor.MolCellBiol19,36143623.
Daniel, J. M., Spring, C. M., Crawford, H. C., Reynolds, A. B., and Baig, A. (2002). The p120(ctn)binding partner
Kaiso is a bimodal DNAbinding protein that recognizes both a sequencespecific consensus and methylated CpG
dinucleotides.NucleicAcidsRes30,29112919.

81

BIBLIOGRAFA
Davies, H., Bignell, G. R., Cox, C., Stephens, P., Edkins, S., Clegg, S., Teague, J., Woffendin, H., Garnett, M. J.,
Bottomley,W.,etal.(2002).MutationsoftheBRAFgeneinhumancancer.Nature417,949954.
Davis,M.A.,Ireton,R.C.,andReynolds,A.B.(2003).Acorefunctionforp120cateninincadherinturnover.JCell
Biol163,525534.
deBont,J.M.,Kros,J.M.,Passier,M.M.,Reddingius,R.E.,SillevisSmitt,P.A.,Luider,T.M.,denBoer,M.L.,and
Pieters, R. (2008). Differential expression and prognostic significance of SOX genes in pediatric medulloblastoma
andependymomaidentifiedbymicroarrayanalysis.NeuroOncol10,648660.
DeGregori,J.,Kowalik,T.,andNevins,J.R.(1995).CellulartargetsforactivationbytheE2F1transcriptionfactor
includeDNAsynthesisandG1/Sregulatorygenes.MolCellBiol15,42154224.
Ding,L.,Getz,G.,Wheeler,D.A.,Mardis,E.R.,McLellan,M.D.,Cibulskis,K.,Sougnez,C.,Greulich,H.,Muzny,D.
M.,Morgan,M.B.,etal.(2008).Somaticmutationsaffectkeypathwaysinlungadenocarcinoma.Nature455,1069
1075.
Diosdado, B., Buffart, T. E., Watkins, R., Carvalho, B., Ylstra, B., Tijssen, M., Bolijn, A. S., Lewis, F., Maude, K.,
Verbeke,C.,etal.((2010)).Highresolutionarraycomparativegenomichybridizationinsporadicandceliacdisease
relatedsmallboweladenocarcinomas.ClinCancerRes16,13911401.
Dong,C.,Wilhelm,D.,andKoopman,P.(2004).Soxgenesandcancer.CytogenetGenomeRes105,442447.
Dooley, S., Seib, T., Welter, C., and Blin, N. (1996). cmyb intron I protein binding and association with
transcriptionalactivityinleukemiccells.LeukRes20,429439.
Drabsch,Y.,Hugo,H.,Zhang,R.,Dowhan,D.H.,Miao,Y.R.,Gewirtz,A.M.,Barry,S.C.,Ramsay,R.G.,andGonda,
T. J. (2007). Mechanism of and requirement for estrogenregulated MYB expression in estrogenreceptorpositive
breastcancercells.ProcNatlAcadSciUSA104,1376213767.
Du,Y.,Spence,S.E.,Jenkins,N.A.,andCopeland,N.G.(2005).Cooperatingcancergeneidentificationthrough
oncogenicretrovirusinducedinsertionalmutagenesis.Blood106,24982505.
Dy, P., PenzoMendez, A., Wang, H., Pedraza, C. E., Macklin, W. B., and Lefebvre, V. (2008). The three SoxC
proteinsSox4,Sox11andSox12exhibitoverlappingexpressionpatternsandmolecularproperties.NucleicAcids
Res36,31013117.

E
Eder,J.P.,VandeWoude,G.F.,Boerner,S.A.,andLoRusso,P.M.(2009).Noveltherapeuticinhibitorsofthec
Metsignalingpathwayincancer.ClinCancerRes15,22072214.
Eib,D.W.,andMartens,G.J.(1996).Anoveltransmembraneproteinwithepidermalgrowthfactorandfollistatin
domainsexpressedinthehypothalamohypophysialaxisofXenopuslaevis.JNeurochem67,10471055.
Emambokus, N., Vegiopoulos, A., Harman, B., Jenkinson, E., Anderson, G., and Frampton, J. (2003). Progression
throughkeystagesofhaemopoiesisisdependentondistinctthresholdlevelsofcMyb.EmboJ22,44784488.
Engelman,J.A.,Chen,L.,Tan,X.,Crosby,K.,Guimaraes,A.R.,Upadhyay,R.,Maira,M.,McNamara,K.,Perera,S.
A.,Song,Y.,etal.(2008).EffectiveuseofPI3KandMEKinhibitorstotreatmutantKrasG12DandPIK3CAH1047R
murinelungcancers.NatMed14,13511356.
Engelman,J.A.,andJanne,P.A.(2008).Mechanismsofacquiredresistancetoepidermalgrowthfactorreceptor
tyrosinekinaseinhibitorsinnonsmallcelllungcancer.ClinCancerRes14,28952899.
Engelman,J.A.,Zejnullahu,K.,Mitsudomi,T.,Song,Y.,Hyland,C.,Park,J.O.,Lindeman,N.,Gale,C.M.,Zhao,X.,
Christensen, J., et al. (2007). MET amplification leads to gefitinib resistance in lung cancer by activating ERBB3
signaling.Science316,10391043.

82

BIBLIOGRAFA
Esteller, M.,Guo,M.,Moreno, V.,Peinado,M. A.,Capella,G., Galm,O.,Baylin,S.B.,and Herman,J.G.(2002).
HypermethylationassociatedInactivationoftheCellularRetinolBindingProtein1GeneinHumanCancer.Cancer
Res62,59025905.
Esteller, M., Tortola, S., Toyota, M., Capella, G., Peinado, M. A., Baylin, S. B., and Herman, J. G. (2000).
Hypermethylationassociated inactivation of p14(ARF) is independent of p16(INK4a) methylation and p53
mutationalstatus.CancerRes60,129133.
Evans,A.J.,Gallie,B.L.,Jewett,M.A.,Pond,G.R.,Vandezande,K.,Underwood,J.,Fradet,Y.,Lim,G.,Marrano,P.,
Zielenska,M.,andSquire,J.A.(2004).Defininga0.5mbregionofgenomicgainonchromosome6p22inbladder
cancerbyquantitativemultiplexpolymerasechainreaction.AmJPathol164,285293.

F
Farr,C.J.,Easty,D.J.,Ragoussis,J.,Collignon,J.,LovellBadge,R.,andGoodfellow,P.N.(1993).Characterization
andmappingofthehumanSOX4gene.MammGenome4,577584.
Felsher,D.W.,andBishop,J.M.(1999).ReversibletumorigenesisbyMYCinhematopoieticlineages.MolCell4,
199207.
Ferrari, S., Harley, V. R., Pontiggia, A., Goodfellow, P. N., LovellBadge, R., and Bianchi, M. E. (1992). SRY, like
HMG1,recognizessharpanglesinDNA.EmboJ11,44974506.
Finkel,T.,Serrano,M.,andBlasco,M.A.(2007).Thecommonbiologyofcancerandageing.Nature448,767774.
Fong,K.M.,Sekido,Y.,Gazdar,A.F.,andMinna,J.D.(2003).Lungcancer.9:Molecularbiologyoflungcancer:
clinicalimplications.Thorax58,892900.
Fontanini,G.,Boldrini,L.,Chine,S.,Pisaturo,F.,Basolo,F.,Calcinai,A.,Lucchi,M.,Mussi,A.,Angeletti,C.A.,and
Bevilacqua,G.(1999).ExpressionofvascularendothelialgrowthfactormRNAinnonsmallcelllungcarcinomas.BrJ
Cancer79,363369.
Forgacs,E.,Biesterveld,E.J.,Sekido,Y.,Fong,K.,Muneer,S.,Wistuba,II,Milchgrub,S.,Brezinschek,R.,Virmani,
A.,Gazdar,A.F.,andMinna,J.D.(1998).MutationanalysisofthePTEN/MMAC1geneinlungcancer.Oncogene17,
15571565.
Frank, M., Ebert, M., Shan, W., Phillips, G. R., Arndt, K., Colman, D. R., and Kemler, R. (2005). Differential
expressionofindividualgammaprotocadherinsduringmousebraindevelopment.MolCellNeurosci29,603616.
Friedman,R.S.,Bangur,C.S.,Zasloff,E.J.,Fan,L.,Wang,T.,Watanabe,Y.,andKalos,M.(2004).Molecularand
immunologicalevaluationofthetranscriptionfactorSOX4asalungtumorvaccineantigen.JImmunol172,3319
3327.
Futreal,P.A.,Kasprzyk,A.,Birney,E.,Mullikin,J.C.,Wooster,R.,andStratton,M.R.(2001).Cancerandgenomics.
Nature409,850852.

G
Gazzeri,S.,Gouyer,V.,Vour'ch,C.,Brambilla,C.,andBrambilla,E.(1998).Mechanismsofp16INK4Ainactivationin
nonsmallcelllungcancers.Oncogene16,497504.
Gery, S., Yin, D., Xie, D., Black, K. L., and Koeffler, H. P. (2003). TMEFF1 and brain tumors. Oncogene 22, 2723
2727.
Giese, K., Cox, J., and Grosschedl, R. (1992). The HMG domain of lymphoid enhancer factor 1 bends DNA and
facilitatesassemblyoffunctionalnucleoproteinstructures.Cell69,185195.
Girling,R.,Partridge,J.F.,Bandara,L.R.,Burden,N.,Totty,N.F.,Hsuan,J.J.,andLaThangue,N.B.(1993).Anew
componentofthetranscriptionfactorDRTF1/E2F.Nature365,468.

83

BIBLIOGRAFA
Glowacki,G.,Braren,R.,Firner,K.,Nissen,M.,Kuhl,M.,Reche,P.,Bazan,F.,CetkovicCvrlje,M.,Leiter,E.,Haag,
F., and KochNolte, F. (2002). The family of toxinrelated ectoADPribosyltransferases in humans and the mouse.
ProteinSci11,16571670.
Grandori,C.,andEisenman,R.N.(1997).Myctargetgenes.TrendsBiochemSci22,177181.
Griffin, C. A., and Baylin, S. B. (1985). Expression of the cmyb oncogene in human small cell lung carcinoma.
CancerRes45,272275.
Grosheva, I., Shtutman, M., Elbaum, M., and Bershadsky, A. D. (2001). p120 catenin affects cell motility via
modulation of activity of Rhofamily GTPases: a link between cellcell contact formation and regulation of cell
locomotion.JCellSci114,695707.

H
Haber,D.,andHarlow,E.(1997).Tumoursuppressorgenes:evolvingdefinitionsinthegenomicage.NatGenet
16,320322.
Hanahan,D.,andWeinberg,R.A.(2011).Hallmarksofcancer:thenextgeneration.Cell144,646674.
Hanawalt,P.C.(2001).Controllingtheefficiencyofexcisionrepair.MutatRes485,313.
Hara,E.,Smith,R.,Parry,D.,Tahara,H.,Stone,S.,andPeters,G.(1996).Regulationofp16CDKN2expressionand
itsimplicationsforcellimmortalizationandsenescence.MolCellBiol16,859867.
Hardie, D. G. (2003). Minireview: the AMPactivated protein kinase cascade: the key sensor of cellular energy
status.Endocrinology144,51795183.
Hawley,S.A.,Boudeau,J.,Reid,J.L.,Mustard,K.J.,Udd,L.,Makela,T.P.,Alessi,D.R.,andHardie,D.G.(2003).
ComplexesbetweentheLKB1tumorsuppressor,STRADalpha/betaandMO25alpha/betaareupstreamkinasesin
theAMPactivatedproteinkinasecascade.JBiol2,28.
Hecht,S.S.(1999).Tobaccosmokecarcinogensandlungcancer.JNatlCancerInst91,11941210.
Hecht, S. S. (2002). Cigarette smoking and lung cancer: chemical mechanisms and approaches to prevention.
LancetOncol3,461469.
Helin,K.,Wu,C.L.,Fattaey,A.R.,Lees,J.A.,Dynlacht,B.D.,Ngwu,C.,andHarlow,E.(1993).Heterodimerization
ofthetranscriptionfactorsE2F1andDP1leadstocooperativetransactivation.GenesDev7,18501861.
Hemminki,A.,Markie,D.,Tomlinson,I.,Avizienyte,E.,Roth,S.,Loukola,A.,Bignell,G.,Warren,W.,Aminoff,M.,
Hoglund, P., et al. (1998). A serine/threonine kinase gene defective in PeutzJeghers syndrome.Nature 391, 184
187.
Henion, P. D., and Weston, J. A. (1994). Retinoic acid selectively promotes the survival and proliferation of
neurogenicprecursorsinculturedneuralcrestcellpopulations.DevBiol161,243250.
Hiebert,S.W.,Chellappan,S.P.,Horowitz,J.M.,andNevins,J.R.(1992).TheinteractionofRBwithE2Fcoincides
withaninhibitionofthetranscriptionalactivityofE2F.GenesDev6,177185.
Higashiyama, M., Doi, O., Kodama, K., Yokouchi, H., Kasugai, T., Ishiguro, S., Takami, K., Nakayama, T., and
Nishisho, I. (1997). MDM2 gene amplification and expression in nonsmallcell lung cancer: immunohistochemical
expressionofitsproteinisafavourableprognosticmarkerinpatientswithoutp53proteinaccumulation.BrJCancer
75,13021308.
Hirsch, F. R., Franklin, W. A., Gazdar, A. F., and Bunn, P. A., Jr. (2001). Early detection of lung cancer: clinical
perspectivesofrecentadvancesinbiologyandradiology.ClinCancerRes7,522.
Hitchens,M.R.,andRobbins,P.D.(2003).TheroleofthetranscriptionfactorDPinapoptosis.Apoptosis8,461
468.

84

BIBLIOGRAFA
Hoffmann,D.,Hoffmann,I.,andElBayoumy,K.(2001).Thelessharmfulcigarette:acontroversialissue.atribute
toErnstL.Wynder.ChemResToxicol14,767790.
Hollstein,M.,Sidransky,D.,Vogelstein,B.,andHarris,C.C.(1991).p53mutationsinhumancancers.Science253,
4953.
Horn,L.,andPao,W.(2009).EML4ALK:honinginonanewtargetinnonsmallcelllungcancer.JClinOncol27,
42324235.
Hoser,M.,Potzner,M.R.,Koch,J.M.,Bosl,M.R.,Wegner,M.,andSock,E.(2008).Sox12deletioninthemouse
reveals nonreciprocal redundancy with the related Sox4 and Sox11 transcription factors. Mol Cell Biol 28, 4675
4687.
Huang,J.,Xu,L.G.,Liu,T.,Zhai,Z.,andShu,H.B.(2006).Thep53inducibleE3ubiquitinligasep53RFPinduces
p53dependentapoptosis.FEBSLett580,940947.
Huang,Q.,Yu,G.P.,McCormick,S.A.,Mo,J.,Datta,B.,Mahimkar,M.,Lazarus,P.,Schaffer,A.A.,Desper,R.,and
Schantz, S. P. (2002). Genetic differences detected by comparative genomic hybridization in head and neck
squamous cell carcinomas from different tumor sites: construction of oncogenetic trees for tumor progression.
GenesChromosomesCancer34,224233.
Huang,Y.W.,Liu,J.C.,Deatherage,D.E.,Luo,J.,Mutch,D.G.,Goodfellow,P.J.,Miller,D.S.,andHuang,T.H.
(2009).EpigeneticrepressionofmicroRNA1292leadstooverexpressionofSOX4oncogeneinendometrialcancer.
CancerRes69,90389046.
Hugo,H.,Cures,A.,Suraweera,N.,Drabsch,Y.,Purcell,D.,Mantamadiotis,T.,Phillips,W.,Dobrovic,A.,Zupi,G.,
Gonda,T.J.,etal.(2006).MutationsintheMYBintronIregulatorysequenceincreasetranscriptionincoloncancers.
GenesChromosomesCancer45,11431154.
Hung,M.S.,Mao,J.H.,Xu,Z.,Yang,C.T.,Yu,J.S.,Harvard,C.,Lin,Y.C.,Bravo,D.T.,Jablons,D.M.,andYou,L.
(2009).Cul4Aisanoncogeneinmalignantpleuralmesothelioma.JCellMolMed.
Hung,R.J.,McKay,J.D.,Gaborieau,V.,Boffetta,P.,Hashibe,M.,Zaridze,D.,Mukeria,A.,SzeszeniaDabrowska,
N., Lissowska, J., Rudnai, P., et al. (2008). A susceptibility locus for lung cancer maps to nicotinic acetylcholine
receptorsubunitgeneson15q25.Nature452,633637.
Hussenet, T., Dali, S., Exinger, J., Monga, B., Jost, B., Dembele, D., Martinet, N., Thibault, C., Huelsken, J.,
Brambilla,E.,andduManoir,S.(2010).SOX2isanoncogeneactivatedbyrecurrent3q26.3amplificationsinhuman
lungsquamouscellcarcinomas.PLoSOne5,e8960.
Hussenet,T.,andduManoir,S.(2010).SOX2insquamouscellcarcinoma:Amplifyingapleiotropiconcogenealong
carcinogenesis.CellCycle9,14801486.

I
Ikushima,H.,Todo,T.,Ino,Y.,Takahashi,M.,Miyazawa,K.,andMiyazono,K.(2009).AutocrineTGFbetasignaling
maintainstumorigenicityofgliomainitiatingcellsthroughSryrelatedHMGboxfactors.CellStemCell5,504514.
Ireton,R.C.,Davis,M.A.,vanHengel,J.,Mariner,D.J.,Barnes,K.,Thoreson,M.A.,Anastasiadis,P.Z.,Matrisian,
L.,Bundy,L.M.,Sealy,L.,etal.(2002).Anovelroleforp120catenininEcadherinfunction.JCellBiol159,465476.
IsingerEkstrand,A.,Johansson,J.,Ohlsson,M.,Francis,P.,Staaf,J.,Jonsson,M.,Borg,A.,andNilbert,M.(2010).
Geneticprofilesofgastroesophagealcancer:combinedanalysisusingexpressionarrayandtilingarraycomparative
genomichybridization.CancerGenetCytogenet200,120126.

J
Jackson,E.L.,Willis,N.,Mercer,K.,Bronson,R.T.,Crowley,D.,Montoya,R.,Jacks,T.,andTuveson,D.A.(2001).
Analysis of lung tumor initiation and progression using conditional expression of oncogenic Kras. Genes Dev 15,
32433248.

85

BIBLIOGRAFA
Jacobs, S., Lie, D. C., DeCicco, K. L., Shi, Y., DeLuca, L. M., Gage, F. H., and Evans, R. M. (2006). Retinoic acid is
requiredearlyduringadultneurogenesisinthedentategyrus.ProcNatlAcadSciUSA103,39023907.
Jacques,C.,Baris,O.,PrunierMirebeau,D.,Savagner,F.,Rodien,P.,Rohmer,V.,Franc,B.,Guyetant,S.,Malthiery,
Y.,andReynier,P.(2005).Twostepdifferentialexpressionanalysisrevealsanewsetofgenesinvolvedinthyroid
oncocytictumors.JClinEndocrinolMetab90,23142320.
Jafarnejad,S.M.,Wani,A.A.,Martinka,M.,andLi,G.(2010).PrognosticsignificanceofSox4expressioninhuman
cutaneousmelanomaanditsroleincellmigrationandinvasion.AmJPathol177,27412752.
Jain,M.,Arvanitis,C.,Chu,K.,Dewey,W.,Leonhardt,E.,Trinh,M.,Sundberg,C.D.,Bishop,J.M.,andFelsher,D.
W.(2002).SustainedlossofaneoplasticphenotypebybriefinactivationofMYC.Science297,102104.
Janjetovic,S.,Sticht,C.,Knoepfle,K.,Joos,S.,Hofele,C.,Lichter,P.,andFreier,K.(2010).Comparativeexpressed
sequencehybridizationdetectsrecurrentpatternsofalteredsequenceexpressioninoralsquamouscellcarcinoma.
OncolRep24,369374.
Jenne,D.E.,Reimann,H.,Nezu,J.,Friedel,W.,Loff,S.,Jeschke,R.,Muller,O.,Back,W.,andZimmer,M.(1998).
PeutzJegherssyndromeiscausedbymutationsinanovelserinethreoninekinase.NatGenet18,3843.
Jooss,K.,Lam,E.W.,Bybee,A.,Girling,R.,Muller,R.,andLaThangue,N.B.(1995).Protooncogenicpropertiesof
theDPfamilyofproteins.Oncogene10,15291536.
Junghans, D., Heidenreich, M., Hack, I., Taylor, V., Frotscher, M., and Kemler, R. (2008). Postsynaptic and
differential localization to neuronal subtypes of protocadherin beta16 in the mammalian central nervous system.
EurJNeurosci27,559571.

K
Kaelin,W.G.,Jr.(2005).Theconceptofsyntheticlethalityinthecontextofanticancertherapy.NatRevCancer5,
689698.
Kallioniemi, A., Kallioniemi, O. P., Sudar, D., Rutovitz, D., Gray, J. W., Waldman, F., and Pinkel, D. (1992).
Comparativegenomichybridizationformolecularcytogeneticanalysisofsolidtumors.Science258,818821.
Kanemoto,N., Horie,M.,Omori,K.,Nishino,N.,Kondo, M.,Noguchi,K.,andTanigami,A.(2001).Expressionof
TMEFF1mRNAinthemousecentralnervoussystem:preciseexaminationandcomparativestudiesofTMEFF1and
TMEFF2.BrainResMolBrainRes86,4855.
Karp,D.D.,PazAres,L.G.,Novello,S.,Haluska,P.,Garland,L.,Cardenal,F.,Blakely,L.J.,Eisenberg,P.D.,Langer,
C.J.,Blumenschein,G.,Jr.,etal.(2009).PhaseIIstudyoftheantiinsulinlikegrowthfactortype1receptorantibody
CP751,871incombinationwithpaclitaxelandcarboplatininpreviouslyuntreated,locallyadvanced,ormetastatic
nonsmallcelllungcancer.JClinOncol27,25162522.
Kerr,K.M.(2001).Pulmonarypreinvasiveneoplasia.JClinPathol54,257271.
Kiefer,P.E.,Bepler,G.,Kubasch,M.,andHavemann,K.(1987).Amplificationandexpressionofprotooncogenesin
humansmallcelllungcancercelllines.CancerRes47,62366242.
Kim,C.F.,Jackson,E.L.,Woolfenden,A.E.,Lawrence,S.,Babar,I.,Vogel,S.,Crowley,D.,Bronson,R.T.,andJacks,
T.(2005).Identificationofbronchioalveolarstemcellsinnormallungandlungcancer.Cell121,823835.
Kim,S.W.,Park,J.I.,Spring,C.M.,Sater,A.K.,Ji,H.,Otchere,A.A.,Daniel,J.M.,andMcCrea,P.D.(2004).Non
canonicalWntsignalsaremodulatedbytheKaisotranscriptionalrepressorandp120catenin.NatCellBiol6,1212
1220.
Kimura, H., Miyashita, H., Suzuki, Y., Kobayashi, M., Watanabe, K., Sonoda, H., Ohta, H., Fujiwara, T.,
Shimosegawa,T.,andSato,Y.(2009).Distinctivelocalizationandopposedrolesofvasohibin1andvasohibin2in
theregulationofangiogenesis.Blood113,48104818.

86

BIBLIOGRAFA
Klempnauer, K. H., and Bishop, J. M. (1984). Neoplastic transformation by E26 leukemia virus is mediated by a
singleproteincontainingdomainsofgagandmybgenes.JVirol50,280283.
Knudson,A.G.,Jr.(1971).Mutationandcancer:statisticalstudyofretinoblastoma.ProcNatlAcadSciUSA68,
820823.
Kobielak,K.,Stokes,N.,delaCruz,J.,Polak,L.,andFuchs,E.(2007).Lossofaquiescentnichebutnotfolliclestem
cellsintheabsenceofbonemorphogeneticproteinsignaling.ProcNatlAcadSciUSA104,1006310068.
Kopanja,D.,Stoyanova,T.,Okur,M.N.,Huang,E.,Bagchi,S.,andRaychaudhuri,P.(2009).Proliferationdefects
andgenomeinstabilityincellslackingCul4A.Oncogene28,24562465.
Kormish, J. D., Sinner, D., and Zorn, A. M. (2010). Interactions between SOX factors and Wnt/betacatenin
signalingindevelopmentanddisease.DevDyn239,5668.
Kubokura,H.,Tenjin,T.,Akiyama,H.,Koizumi,K.,Nishimura,H.,Yamamoto,M.,andTanaka,S.(2001).Relations
ofthecmycgeneandchromosome8innonsmallcelllungcancer:analysisbyfluorescenceinsituhybridization.
AnnThoracCardiovascSurg7,197203.
Kuppumbatti, Y. S., Bleiweiss, I. J., Mandeli, J. P., Waxman, S., and Mira, Y. L. R. (2000). Cellular retinolbinding
proteinexpressionandbreastcancer.JNatlCancerInst92,475480.
Kwek, S. S., Roy, R., Zhou, H., Climent, J., MartinezCliment, J. A., Fridlyand, J., and Albertson, D. G. (2009). Co
amplifiedgenesat8p12and11q13inbreasttumorscooperatewithtwomajorpathwaysinoncogenesis.Oncogene
28,18921903.

L
LaThangue,N.B.(1994).DPandE2Fproteins:componentsofaheterodimerictranscriptionfactorimplicatedin
cellcyclecontrol.CurrOpinCellBiol6,443450.
LeBaccon,P.,Leroux,D.,Dascalescu,C.,Duley,S.,Marais,D.,Esmenjaud,E.,Sotto,J.J.,andCallanan,M.(2001).
Novel evidence of a role for chromosome 1 pericentric heterochromatin in the pathogenesis of Bcell lymphoma
andmultiplemyeloma.GenesChromosomesCancer32,250264.
Lee,H.M.,Zhang,H.,Schulz,V.,Tuck,D.P.,andForget,B.G.(2010).DownstreamtargetsofHOXB4inacellline
modelofprimitivehematopoieticprogenitorcells.Blood116,720730.
Lee,J.J.,Liu,D.,Lee,J.S.,Kurie,J.M.,Khuri,F.R.,Ibarguen,H.,Morice,R.C.,Walsh,G.,Ro,J.Y.,Broxson,A.,et
al. (2001). Longterm impact of smoking on lung epithelial proliferation in current and former smokers. J Natl
CancerInst93,10811088.
Lee,W.,Jiang,Z.,Liu,J.,Haverty,P.M.,Guan,Y.,Stinson,J.,Yue,P.,Zhang,Y.,Pant,K.P.,Bhatt,D.,etal.(2010).
Themutationspectrumrevealedbypairedgenomesequencesfromalungcancerpatient.Nature465,473477.
Lei, W., Rushton, J. J., Davis, L. M., Liu, F., and Ness, S. A. (2004). Positive and negative determinants of target
genespecificityinmybtranscriptionfactors.JBiolChem279,2951929527.
Lestou, V. S., Ludkovski, O., Connors, J. M., Gascoyne, R. D., Lam, W. L., and Horsman, D. E. (2003).
Characterization of the recurrent translocation t(1;1)(p36.3;q21.12) in nonHodgkin lymphoma by multicolor
bandingandfluorescenceinsituhybridizationanalysis.GenesChromosomesCancer36,375381.
Levine,A.J.(1997).p53,thecellulargatekeeperforgrowthanddivision.Cell88,323331.
Li,D.Q.,Hou,Y.F.,Wu,J.,Chen,Y.,Lu,J.S.,Di,G.H.,Ou,Z.L.,Shen,Z.Z.,Ding,J.,andShao,Z.M.(2006).Gene
expressionprofileanalysisofanisogenictumourmetastasismodelrevealsafunctionalroleforoncogeneAF1Qin
breastcancermetastasis.EurJCancer42,32743286.
Li,L.H.,He,J.,Hua,D.,Guo,Z.J.,andGao,Q.(2011).LentivirusmediatedinhibitionofMed19suppressesgrowth
ofbreastcancercellsinvitro.CancerChemotherPharmacol.

87

BIBLIOGRAFA
Liao,Y.L.,Sun,Y.M.,Chau,G.Y.,Chau,Y.P.,Lai,T.C.,Wang,J.L.,Horng,J.T.,Hsiao,M.,andTsou,A.P.(2008).
Identification of SOX4 target genes using phylogenetic footprintingbased prediction from expression microarrays
suggeststhatoverexpressionofSOX4potentiatesmetastasisinhepatocellularcarcinoma.Oncogene27,55785589.
Lin, H. J., Shaffer, K. M., Sun, Z., Jay, G., He, W. W., and Ma, W. (2004). AF1q, a differentially expressed gene
duringneuronaldifferentiation,transformsHEKcellsintoneuronlikecells.BrainResMolBrainRes131,126130.
Lin,M.,Wei,L.J.,Sellers,W.R.,Lieberfarb,M.,Wong,W.H.,andLi,C.(2004).dChipSNP:significancecurveand
clusteringofSNParraybasedlossofheterozygositydata.Bioinformatics20,12331240.
Lioubinski, O., Muller, M., Wegner, M., and Sander, M. (2003). Expression of Sox transcription factors in the
developingmousepancreas.DevDyn227,402408.
Liu, C. X., Musco, S., Lisitsina, N. M., Forgacs, E., Minna, J. D., and Lisitsyn, N. A. (2000). LRPDIT, a putative
endocyticreceptorgene,isfrequentlyinactivatedinnonsmallcelllungcancercelllines.CancerRes60,19611967.
Liu, L., Shao, X., Gao, W., Bai, J., Wang, R., Huang, P., Yin, Y., Liu, P., and Shu, Y. (2010). The role of human
epidermalgrowthfactorreceptor2asaprognosticfactorinlungcancer:ametaanalysisofpublisheddata.JThorac
Oncol5,19221932.
Liu,P.,Ramachandran,S.,AliSeyed,M.,Scharer,C.D.,Laycock,N.,Dalton,W.B.,Williams,H.,Karanam,S.,Datta,
M.W.,Jaye,D.L.,andMoreno,C.S.(2006).SexdeterminingregionYbox4isatransformingoncogeneinhuman
prostatecancercells.CancerRes66,40114019.
Liu,R.,Liu,D.,Trink,E.,Bojdani,E.,Ning,G.,andXing,M.(2011).TheAktSpecificInhibitorMK2206Selectively
InhibitsThyroidCancerCellsHarboringMutationsThatCanActivatethePI3K/AktPathway.JClinEndocrinolMetab
96,E577585.
Liu,Y.,Dong,Q.Z.,Zhao,Y.,Dong,X.J.,Miao,Y.,Dai,S.D.,Yang,Z.Q.,Zhang,D.,Wang,Y.,Li,Q.C.,etal.(2009).
P120cateninisoforms1Aand3Adifferentlyaffectinvasionandproliferationoflungcancercells.ExpCellRes315,
890898.
Liu,Y.,Wang,Y.,Zhang,Y.,Miao,Y.,Zhao,Y.,Zhang,P.X.,Jiang,G.Y.,Zhang,J.Y.,Han,Y.,Lin,X.Y.,etal.(2009).
Abnormal expression of p120catenin, Ecadherin, and small GTPases is significantly associated with malignant
phenotypeofhumanlungcancer.LungCancer63,375382.
Liu,Y.,Xu,H.T.,Dai,S.D.,Wei,Q.,Yuan,X.M.,andWang,E.H.(2007).Reductionofp120(ctn)isoforms1and3is
significantlyassociatedwithmetastaticprogressionofhumanlungcancer.Apmis115,848856.
Logan,C.Y.,andNusse,R.(2004).TheWntsignalingpathwayindevelopmentanddisease.AnnuRevCellDevBiol
20,781810.
Lu,C.,Kasik,J.,Stephan,D.A.,Yang,S.,Sperling,M.A.,andMenon,R.K.(2001).Grtp1,anovelgeneregulatedby
growthhormone.Endocrinology142,45684571.
Lu,Q.,Knoepfler,P.S.,Scheele,J.,Wright,D.D.,andKamps,M.P.(1995).BothPbx1andE2APbx1bindtheDNA
motif ATCAATCAA cooperatively with the products of multiple murine Hox genes, some of which are themselves
oncogenes.MolCellBiol15,37863795.
Lucito,R.,West,J.,Reiner,A.,Alexander,J.,Esposito,D.,Mishra,B.,Powers,S.,Norton,L.,andWigler,M.(2000).
Detectinggenecopynumberfluctuationsintumorcellsbymicroarrayanalysisofgenomicrepresentations.Genome
Res10,17261736.
Lustig,B.,andBehrens,J.(2003).TheWntsignalingpathwayanditsroleintumordevelopment.JCancerResClin
Oncol129,199221.
Lynch,T.J.,Bell,D.W.,Sordella,R.,Gurubhagavatula,S.,Okimoto,R.A.,Brannigan,B.W.,Harris,P.L.,Haserlat,S.
M., Supko, J. G., Haluska, F. G., et al. (2004). Activating mutations in the epidermal growth factor receptor
underlyingresponsivenessofnonsmallcelllungcancertogefitinib.NEnglJMed350,21292139

88

BIBLIOGRAFA

M
Magae,J.,Illenye,S.,Chang,Y.C.,Mitsui,Y.,andHeintz,N.H.(1999).AssociationwithE2F1governsintracellular
traffickingandpolyubiquitinationofDP1.Oncogene18,593605.
Malaterre,J.,Carpinelli,M.,Ernst,M.,Alexander,W.,Cooke,M.,Sutton,S.,Dworkin,S.,Heath,J.K.,Frampton,J.,
McArthur,G.,etal.(2007).cMybisrequiredforprogenitorcellhomeostasisincoloniccrypts.ProcNatlAcadSciU
SA104,38293834.
Malaterre,J.,Mantamadiotis,T.,Dworkin,S.,Lightowler,S.,Yang,Q.,Ransome,M.I.,Turnley,A.M.,Nichols,N.
R., Emambokus, N. R., Frampton, J., and Ramsay, R. G. (2008). cMyb is required for neural progenitor cell
proliferationandmaintenanceoftheneuralstemcellnicheinadultbrain.StemCells26,173181.
Malki,S.,BoizetBonhoure,B.,andPoulat,F.ShuttlingofSOXproteins.(2010).IntJBiochemCellBiol42,411416.
Manzella,L.,Gualdi,R.,Perrotti,D.,Nicolaides,N.C.,Girlando,G.,Giuffrida,M.A.,Messina,A.,andCalabretta,B.
(2000).Theinterferonregulatoryfactors1and2bindtoasegmentofthehumancmybfirstintron:possiblerolein
theregulationofcmybexpression.ExpCellRes256,248256.
Mariani,T.J.,Reed,J.J.,andShapiro,S.D.(2002).Expressionprofilingofthedevelopingmouselung:insightsinto
theestablishmentoftheextracellularmatrix.AmJRespirCellMolBiol26,541548.
Marks,J.L.,Gong,Y.,Chitale,D.,Golas,B.,McLellan,M.D.,Kasai,Y.,Ding,L.,Mardis,E.R.,Wilson,R.K.,Solit,D.,
etal.(2008).NovelMEK1mutationidentifiedbymutationalanalysisofepidermalgrowthfactorreceptorsignaling
pathwaygenesinlungadenocarcinoma.CancerRes68,55245528.
Matheu,A.,Maraver,A.,Collado,M.,GarciaCao,I.,Canamero,M.,Borras,C.,Flores,J.M.,Klatt,P.,Vina,J.,and
Serrano,M.(2009).AntiagingactivityoftheInk4/Arflocus.AgingCell8,152161.
Matsumori,Y.,Yano,S.,Goto,H.,Nakataki,E.,Wedge,S.R.,Ryan,A.J.,andSone,S.(2006).ZD6474,aninhibitor
ofvascularendothelialgrowthfactorreceptortyrosinekinase,inhibitsgrowthofexperimentallungmetastasisand
productionofmalignantpleuraleffusionsinanonsmallcelllungcancermodel.OncolRes16,1526.
Matsumoto, S., Iwakawa, R., Takahashi, K., Kohno, T., Nakanishi, Y., Matsuno, Y., Suzuki, K., Nakamoto, M.,
Shimizu,E.,Minna,J.D.,andYokota,J.(2007).PrevalenceandspecificityofLKB1geneticalterationsinlungcancers.
Oncogene26,59115918.
McKay,J.D.,Hung,R.J.,Gaborieau,V.,Boffetta,P.,Chabrier,A.,Byrnes,G.,Zaridze,D.,Mukeria,A.,Szeszenia
Dabrowska,N.,Lissowska,J.,etal.(2008).Lungcancersusceptibilitylocusat5p15.33.NatGenet40,14041406.
Medina, P. P., Castillo, S. D., Blanco, S., SanzGarcia, M., Largo, C., Alvarez, S., Yokota, J., GonzalezNeira, A.,
Benitez, J., Clevers, H. C., et al. (2009). The SRYHMG box gene, SOX4, is a target of gene amplification at
chromosome6pinlungcancer.HumMolGenet18,13431352.
Medina,P.P.,Romero,O.A.,Kohno,T.,Montuenga,L.M.,Pio,R.,Yokota,J.,andSanchezCespedes,M.(2008).
FrequentBRG1/SMARCA4inactivatingmutationsinhumanlungcancercelllines.HumMutat29,617622.
Medina, P. P., and SanchezCespedes, M. (2008). Involvement of the chromatinremodeling factor
BRG1/SMARCA4inhumancancer.Epigenetics3,6468.
Melchor, L., SaucedoCuevas, L. P., MunozRepeto, I., RodriguezPinilla, S. M., Honrado, E., Campoverde, A.,
Palacios, J., Nathanson, K. L., Garcia, M. J., and Benitez, J. (2009). Comprehensive characterization of the DNA
amplification at 13q34 in human breast cancer reveals TFDP1 and CUL4A as likely candidate target genes. Breast
CancerRes11,R86.
Memisoglu,A.,andSamson,L.(2000).Baseexcisionrepairinyeastandmammals.MutatRes451,3951.
Mendel,D.B.,Laird,A.D.,Xin,X.,Louie,S.G.,Christensen,J.G.,Li,G.,Schreck,R.E.,Abrams,T.J.,Ngai,T.J.,Lee,
L. B., et al. (2003). In vivo antitumor activity of SU11248, a novel tyrosine kinase inhibitor targeting vascular
endothelial growth factor and plateletderived growth factor receptors: determination of a
pharmacokinetic/pharmacodynamicrelationship.ClinCancerRes9,327337.

89

BIBLIOGRAFA
MeyerSchaller,N.,Chou,Y.C.,Sumara,I.,Martin,D.D.,Kurz,T.,Katheder,N.,Hofmann,K.,Berthiaume,L.G.,
Sicheri, F., and Peter, M. (2009). The human Dcn1like protein DCNL3 promotes Cul3 neddylation at membranes.
ProcNatlAcadSciUSA106,1236512370.
Minna,J.D.,Roth,J.A.,andGazdar,A.F.(2002).Focusonlungcancer.CancerCell1,4952.
Mita,M.M.,Mita,A.C.,Chu,Q.S.,Rowinsky,E.K.,Fetterly,G.J.,Goldston,M.,Patnaik,A.,Mathews,L.,Ricart,A.
D.,Mays,T.,etal.(2008).PhaseItrialofthenovelmammaliantargetofrapamycininhibitordeforolimus(AP23573;
MK8669)administeredintravenouslydailyfor5daysevery2weekstopatientswithadvancedmalignancies.JClin
Oncol26,361367.
Mori, N., Yokota, J., Akiyama, T., Sameshima, Y., Okamoto, A., Mizoguchi, H., Toyoshima, K., Sugimura, T., and
Terada,M.(1990).VariablemutationsoftheRBgeneinsmallcelllungcarcinoma.Oncogene5,17131717.
Mortazavi,F.,An,J.,Dubinett,S.,andRettig,M.(2010).p120cateninistranscriptionallydownregulatedbyFOXC2
innonsmallcelllungcancercells.MolCancerRes8,762774.
Muller,B.M.,Kistner,U.,Kindler,S.,Chung,W.J.,Kuhlendahl,S.,Fenster,S.D.,Lau,L.F.,Veh,R.W.,Huganir,R.
L., Gundelfinger, E. D., and Garner, C. C. (1996). SAP102, a novel postsynaptic protein that interacts with NMDA
receptorcomplexesinvivo.Neuron17,255265.

N
Nagafuchi,A.,Takeichi,M.,andTsukita,S.(1991).The102kdcadherinassociatedprotein:similaritytovinculin
andposttranscriptionalregulationofexpression.Cell65,849857.
Nakaya, T., Kuwahara, K., Ohta, K., Kitabatake, M., Toda, T., Takeda, N., Tani, T., Kondo, E., and Sakaguchi, N.
(2010). Critical role of Pcid2 in B cell survival through the regulation of MAD2 expression. J Immunol 185, 5180
5187.
Naoki, K., Chen, T. H., Richards, W. G., Sugarbaker, D. J., and Meyerson, M. (2002). Missense mutations of the
BRAFgeneinhumanlungadenocarcinoma.CancerRes62,70017003.
Napoli,J.L.(1999).Interactionsofretinoidbindingproteinsandenzymesinretinoidmetabolism.BiochimBiophys
Acta1440,139162.
Nevins, J. R. (1992). E2F: a link between the Rb tumor suppressor protein and viral oncoproteins. Science 258,
424429.
NissenMeyer,L.S.,Jemtland,R.,Gautvik,V.T.,Pedersen,M.E.,Paro,R.,Fortunati,D.,Pierroz,D.D.,Stadelmann,
V. A., Reppe, S., Reinholt, F. P., et al. (2007). Osteopenia, decreased bone formation and impaired osteoblast
developmentinSox4heterozygousmice.JCellSci120,27852795.
Norbury,C.J.,andHickson,I.D.(2001).CellularresponsestoDNAdamage.AnnuRevPharmacolToxicol41,367
401.
Noren, N. K., Liu, B. P., Burridge, K., and Kreft, B. (2000). p120 catenin regulates the actin cytoskeleton via Rho
familyGTPases.JCellBiol150,567580.

O
O'Connor,D.J., Lam,E.W.,Griffin,S.,Zhong,S.,Leighton,L.C.,Burbidge,S.A.,andLu,X.(1995).Physicaland
functional interactions between p53 and cell cycle cooperating transcription factors, E2F1 and DP1. Embo J 14,
61846192.
O'Donnell, A., Faivre, S., Burris, H. A., 3rd, Rea, D., Papadimitrakopoulou, V., Shand, N., Lane, H. A., Hazell, K.,
Zoellner, U., Kovarik, J. M., et al. (2008). Phase I pharmacokinetic and pharmacodynamic study of the oral
mammaliantargetofrapamycininhibitoreverolimusinpatientswithadvancedsolidtumors.JClinOncol26,1588
1595.

90

BIBLIOGRAFA

P
Paez,J.G.,Janne,P.A.,Lee,J.C.,Tracy,S.,Greulich,H.,Gabriel,S.,Herman,P.,Kaye,F.J.,Lindeman,N.,Boggon,
T. J., et al. (2004). EGFR mutations in lung cancer: correlation with clinical response to gefitinib therapy. Science
304,14971500.
Pal, S. K., Figlin, R. A., and Reckamp, K. (2010). Targeted therapies for nonsmall cell lung cancer: an evolving
landscape.MolCancerTher9,19311944.
Pal, S. K., Figlin, R. A., and Reckamp, K. L. (2008). The role of targeting mammalian target of rapamycin in lung
cancer.ClinLungCancer9,340345.
Pan,X.,Zhao,J.,Zhang,W.N.,Li,H.Y.,Mu,R.,Zhou,T.,Zhang,H.Y.,Gong,W.L.,Yu,M.,Man,J.H.,etal.(2009).
InductionofSOX4byDNAdamageiscriticalforp53stabilizationandfunction.ProcNatlAcadSciUSA106,3788
3793.
Pandya, K. J., Dahlberg, S., Hidalgo, M., Cohen, R. B., Lee, M. W., Schiller, J. H., and Johnson, D. H. (2007). A
randomized, phase II trial of two dose levels of temsirolimus (CCI779) in patients with extensivestage smallcell
lungcancerwhohaverespondingorstablediseaseafterinductionchemotherapy:atrialoftheEasternCooperative
OncologyGroup(E1500).JThoracOncol2,10361041.
Park,J.I.,Kim,S.W.,Lyons,J.P.,Ji,H.,Nguyen,T.T.,Cho,K.,Barton,M.C.,Deroo,T.,Vleminckx,K.,Moon,R.T.,
andMcCrea,P.D.(2005).Kaiso/p120cateninandTCF/betacatenincomplexescoordinatelyregulatecanonicalWnt
genetargets.DevCell8,843854.
Pegg,A.E.(2000).RepairofO(6)alkylguaninebyalkyltransferases.MutatRes462,83100.
Pinkel, D., Segraves, R., Sudar, D., Clark, S., Poole, I., Kowbel, D., Collins, C., Kuo, W. L., Chen, C., Zhai, Y., et al.
(1998). High resolution analysis of DNA copy number variation using comparative genomic hybridization to
microarrays.NatGenet20,207211.
Plum,L.A.,Parada,L.F.,Tsoulfas,P.,andClagettDame,M.(2001).Retinoicacidcombinedwithneurotrophin3
enhances the survival and neurite outgrowth of embryonic sympathetic neurons. Exp Biol Med (Maywood) 226,
766775.
Pollack,J.R.,Perou,C.M.,Alizadeh,A.A.,Eisen,M.B.,Pergamenschikov,A.,Williams,C.F.,Jeffrey,S.S.,Botstein,
D., and Brown, P. O. (1999). Genomewide analysis of DNA copynumber changes using cDNA microarrays. Nat
Genet23,4146.
Pollack,J.R.,Sorlie,T.,Perou,C.M.,Rees,C.A.,Jeffrey,S.S.,Lonning,P.E.,Tibshirani,R.,Botstein,D.,Borresen
Dale,A.L.,andBrown,P.O.(2002).MicroarrayanalysisrevealsamajordirectroleofDNAcopynumberalteration
inthetranscriptionalprogramofhumanbreasttumors.ProcNatlAcadSciUSA99,1296312968.
Pomerantz,J.,SchreiberAgus,N.,Liegeois,N.J.,Silverman,A.,Alland,L.,Chin,L.,Potes,J.,Chen,K.,Orlow,I.,Lee,
H. W., et al. (1998). The Ink4a tumor suppressor gene product, p19Arf, interacts with MDM2 and neutralizes
MDM2'sinhibitionofp53.Cell92,713723.
Potzner, M. R., Griffel, C., LutjenDrecoll, E., Bosl, M. R., Wegner, M., and Sock, E. (2007). Prolonged Sox4
expressioninoligodendrocytesinterfereswithnormalmyelinationinthecentralnervoussystem.MolCellBiol27,
53165326.
Pramoonjago, P., Baras, A. S., and Moskaluk, C. A. (2006). Knockdown of Sox4 expression by RNAi induces
apoptosisinACC3cells.Oncogene25,56265639.
Ptashne,M.(1986).Generegulationbyproteinsactingnearbyandatadistance.Nature322,697701.

91

BIBLIOGRAFA

R
Rabindran,S.K.,Discafani,C.M.,Rosfjord,E.C.,Baxter,M.,Floyd,M.B.,Golas,J.,Hallett,W.A.,Johnson,B.D.,
Nilakantan,R.,Overbeek,E.,etal.(2004).AntitumoractivityofHKI272,anorallyactive,irreversibleinhibitorofthe
HER2tyrosinekinase.CancerRes64,39583965.
Ramos, A. H., Dutt, A., Mermel, C., Perner, S., Cho, J., Lafargue, C. J., Johnson, L. A., Stiedl, A. C., Tanaka, K. E.,
Bass,A.J.,etal.(2009).Amplificationofchromosomalsegment4q12innonsmallcelllungcancer.CancerBiolTher
8,20422050.
Ramsay,R.G.,andGonda,T.J.(2008).MYBfunctioninnormalandcancercells.NatRevCancer8,523534.
Reynolds,A.B., andRoczniakFerguson,A.(2004).Emergingrolesforp120cateninin celladhesionandcancer.
Oncogene23,79477956.
Reynolds, A. B., Roesel, D. J., Kanner, S. B., and Parsons, J. T. (1989). Transformationspecific tyrosine
phosphorylation of a novel cellular protein in chicken cells expressing oncogenic variants of the avian cellular src
gene.MolCellBiol9,629638.
Riely, G. J., and Miller, V. A. (2007). Vascular endothelial growth factor trap in non small cell lung cancer. Clin
CancerRes13,s46234627.
Rosell, R., Moran, T., Queralt, C., Porta, R., Cardenal, F., Camps, C., Majem, M., LopezVivanco, G., Isla, D.,
Provencio,M.,etal.(2009).Screeningforepidermalgrowthfactorreceptormutationsinlungcancer.NEnglJMed
361,958967.
Rosell,R.,Robinet,G.,Szczesna,A.,Ramlau,R.,Constenla,M.,Mennecier,B.C.,Pfeifer,W.,O'Byrne,K.J.,Welte,
T., Kolb, R., et al. (2008). Randomized phase II study of cetuximab plus cisplatin/vinorelbine compared with
cisplatin/vinorelbinealoneasfirstlinetherapyinEGFRexpressingadvancednonsmallcelllungcancer.AnnOncol
19,362369.
Rosenthal,M.A.,Thompson,M.A.,Ellis,S.,Whitehead,R.H.,andRamsay,R.G.(1996).Colonicexpressionofc
mybisinitiatedinuteroandcontinuesthroughoutadultlife.CellGrowthDiffer7,961967.
Rowinsky, E. K., Youssoufian, H., Tonra, J. R., Solomon, P., Burtrum, D., and Ludwig, D. L. (2007). IMCA12, a
humanIgG1monoclonalantibodytotheinsulinlikegrowthfactorIreceptor.ClinCancerRes13,5549s5555s.

S
Saitoh,O.,Wang,W.C.,Lotan,R.,andFukuda,M.(1992).Differentialglycosylationandcellsurfaceexpressionof
lysosomalmembraneglycoproteinsinsublinesofahumancoloncancerexhibitingdistinctmetastaticpotentials.J
BiolChem267,57005711.
Salgado,R.,Toll,A.,Alameda,F.,Baro,T.,MartinEzquerra,G.,Sanmartin,O.,MartorellCalatayud,A.,Salido,M.,
Almenar,S.,Sole,F.,etal.(2010).CKS1Bamplificationisafrequenteventincutaneoussquamouscellcarcinoma
withaggressiveclinicalbehaviour.GenesChromosomesCancer49,10541061.
Samuels,Y.,Wang,Z.,Bardelli,A.,Silliman,N.,Ptak,J.,Szabo,S.,Yan,H.,Gazdar,A.,Powell,S.M.,Riggins,G.J.,et
al.(2004).HighfrequencyofmutationsofthePIK3CAgeneinhumancancers.Science304,554.
SanchezCespedes, M. (2007). A role for LKB1 gene in human cancer beyond the PeutzJeghers syndrome.
Oncogene26,78257832.
SanchezCespedes,M.(2009).Lungcancerbiology:ageneticandgenomicperspective.ClinTranslOncol11,263
269.
SanchezCespedes,M.,Parrella,P.,Esteller,M.,Nomoto,S.,Trink,B.,Engles,J.M.,Westra,W.H.,Herman,J.G.,
andSidransky,D.(2002).InactivationofLKB1/STK11isacommoneventinadenocarcinomasofthelung.CancerRes
62,36593662.

92

BIBLIOGRAFA
SanchezCespedes, M., Reed, A. L., Buta, M., Wu, L., Westra, W. H., Herman, J. G., Yang, S. C., Jen, J., and
Sidransky,D.(1999).InactivationoftheINK4A/ARFlocusfrequentlycoexistswithTP53mutationsinnonsmallcell
lungcancer.Oncogene18,58435849.
Sato, Y., and Sonoda, H. (2007). The vasohibin family: a negative regulatory system of angiogenesis genetically
programmedinendothelialcells.ArteriosclerThrombVascBiol27,3741.
Sauter, E. R., Nesbit, M., Litwin, S., KleinSzanto, A. J., Cheffetz, S., and Herlyn, M. (1999). Antisense cyclin D1
inducesapoptosisandtumorshrinkageinhumansquamouscarcinomas.CancerRes59,48764881.
Sawada, R., Lowe, J. B., and Fukuda, M. (1993). Eselectindependent adhesion efficiency of colonic carcinoma
cells is increased by genetic manipulation of their cell surface lysosomal membrane glycoprotein1 expression
levels.JBiolChem268,1267512681.
Scagliotti,G.V.,Selvaggi,G.,Novello,S.,andHirsch,F.R.(2004).Thebiologyofepidermalgrowthfactorreceptor
inlungcancer.ClinCancerRes10,4227s4232s.
Scharer,C.D.,McCabe,C.D.,AliSeyed,M.,Berger,M.F.,Bulyk,M.L.,andMoreno,C.S.(2009).Genomewide
promoteranalysisoftheSOX4transcriptionalnetworkinprostatecancercells.CancerRes69,709717.
Schepers, G. E., Teasdale, R. D., and Koopman, P. (2002). Twenty pairs of sox: extent, homology, and
nomenclatureofthemouseandhumansoxtranscriptionfactorgenefamilies.DevCell3,167170.
Schilham,M.W.,Oosterwegel,M.A.,Moerer,P.,Ya,J.,deBoer,P.A.,vandeWetering,M.,Verbeek,S.,Lamers,
W.H.,Kruisbeek,A.M.,Cumano,A.,andClevers,H.(1996).DefectsincardiacoutflowtractformationandproB
lymphocyteexpansioninmicelackingSox4.Nature380,711714.
Sekido,Y.,Fong,K.M.,andMinna,J.D.(1998).Progressinunderstandingthemolecularpathogenesisofhuman
lungcancer.BiochimBiophysActa1378,F2159.
ShenOng,G.L.,Morse,H.C.,3rd,Potter,M.,andMushinski,J.F.(1986).Twomodesofcmybactivationinvirus
inducedmousemyeloidtumors.MolCellBiol6,380392.
Shepherd, F. A., Rodrigues Pereira, J., Ciuleanu, T., Tan, E. H., Hirsh, V., Thongprasert, S., Campos, D.,
Maoleekoonpiroj,S.,Smylie,M.,Martins,R.,etal.(2005).Erlotinibinpreviouslytreatednonsmallcelllungcancer.
NEnglJMed353,123132.
Shibata,T.,Kokubu,A.,Sekine,S.,Kanai,Y.,andHirohashi,S.(2004).Cytoplasmicp120ctnregulatestheinvasive
phenotypesofEcadherindeficientbreastcancer.AmJPathol164,22692278.
Shibuya, T., Watanabe, K., Yamashita, H., Shimizu, K., Miyashita, H., Abe, M., Moriya, T., Ohta, H., Sonoda, H.,
Shimosegawa, T., et al. (2006). Isolation and characterization of vasohibin2 as a homologue of VEGFinducible
endotheliumderivedangiogenesisinhibitorvasohibin.ArteriosclerThrombVascBiol26,10511057.
Shieh, S. Y., Ikeda, M., Taya, Y., and Prives, C. (1997). DNA damageinduced phosphorylation of p53 alleviates
inhibitionbyMDM2.Cell91,325334.
Shin,M.S.,Fredrickson,T.N.,Hartley,J.W.,Suzuki,T.,Akagi,K.,andMorse,H.C.,3rd(2004).Highthroughput
retroviraltaggingforidentificationofgenesinvolvedininitiationandprogressionofmousesplenicmarginalzone
lymphomas.CancerRes64,44194427.
Shinomiya,T., Mori, T.,Ariyama,Y.,Sakabe,T.,Fukuda,Y.,Murakami,Y.,Nakamura,Y.,andInazawa,J.(1999).
Comparativegenomichybridizationofsquamouscellcarcinomaoftheesophagus:thepossibleinvolvementofthe
DPIgeneinthe13q34amplicon.GenesChromosomesCancer24,337344.
Sinner,D.,Kordich,J.J.,Spence,J.R.,Opoka,R.,Rankin,S.,Lin,S.C.,Jonatan,D.,Zorn,A.M., andWells,J.M.
(2007). Sox17 and Sox4 differentially regulate betacatenin/Tcell factor activity and proliferation of colon
carcinomacells.MolCellBiol27,78027815.
Skawran,B.,Steinemann,D.,Weigmann,A.,Flemming,P.,Becker,T.,Flik,J.,Kreipe,H.,Schlegelberger,B.,and
Wilkens, L. (2008). Gene expression profiling in hepatocellular carcinoma: upregulation of genes in amplified
chromosomeregions.ModPathol21,505516.

93

BIBLIOGRAFA
Slebos, R. J., Hruban, R. H., Dalesio, O., Mooi, W. J., Offerhaus, G. J., and Rodenhuis, S. (1991). Relationship
betweenKrasoncogeneactivationandsmokinginadenocarcinomaofthehumanlung.JNatlCancerInst83,1024
1027.
So,C.W.,Ma,S.K.,Wan,T.S.,Chan,G.C.,Ha,S.Y.,andChan,L.C.(2000).AnalysisofMLLderivedtranscriptsin
infantacutemonocyticleukemiawithacomplextranslocation(1;11;4)(q21;q23;p16).CancerGenetCytogenet117,
2427.
Soda,M.,Choi,Y.L.,Enomoto,M.,Takada,S.,Yamashita,Y.,Ishikawa,S.,Fujiwara,S.,Watanabe,H.,Kurashina,
K.,Hatanaka,H.,etal.(2007).IdentificationofthetransformingEML4ALKfusiongeneinnonsmallcelllungcancer.
Nature448,561566.
Solit,D.B.,Garraway,L.A.,Pratilas,C.A.,Sawai,A.,Getz,G.,Basso,A.,Ye,Q.,Lobo,J.M.,She,Y.,Osman,I.,etal.
(2006).BRAFmutationpredictssensitivitytoMEKinhibition.Nature439,358362.
Sonoda,I.,Imoto,I.,Inoue,J.,Shibata,T.,Shimada,Y.,Chin,K.,Imamura,M.,Amagasa,T.,Gray,J.W.,Hirohashi,
S., and Inazawa, J. (2004). Frequent silencing of low density lipoprotein receptorrelated protein 1B (LRP1B)
expression by genetic and epigenetic mechanisms in esophageal squamous cell carcinoma. Cancer Res 64, 3741
3747.
Sonpavde,G.,andHutson,T.E.(2007).Pazopanib:anovelmultitargetedtyrosinekinaseinhibitor.CurrOncolRep
9,115119.
Sorensen, T. S., Girling, R., Lee, C. W., Gannon, J., Bandara, L. R., and La Thangue, N. B. (1996). Functional
interactionbetweenDP1andp53.MolCellBiol16,58885895.
Spring,C.M.,Kelly,K.F.,O'Kelly,I.,Graham,M.,Crawford,H.C.,andDaniel,J.M.(2005).Thecateninp120ctn
inhibitsKaisomediatedtranscriptionalrepressionofthebetacatenin/TCFtargetgenematrilysin.ExpCellRes305,
253265.
Stogios,P.J.,Downs,G.S.,Jauhal,J.J.,Nandra,S.K.,andPrive,G.G.(2005).Sequenceandstructuralanalysisof
BTBdomainproteins.GenomeBiol6,R82.
Sun,M.,Jiang,R.,Li,J.D.,Luo,S.L.,Gao,H.W.,Jin,C.Y.,Shi,D.L.,Wang,C.G.,Wang,B.,andZhang,X.Y.(2011).
MED19promotesproliferationandtumorigenesisoflungcancer.MolCellBiochem.
Sutherland,K.D.,Proost,N.,Brouns,I.,Adriaensen,D.,Song,J.Y.,andBerns,A.(2011).Celloforiginofsmallcell
lungcancer:inactivationofTrp53andRb1indistinctcelltypesofadultmouselung.CancerCell19,754764.
Suzuki,T.,Shen,H.,Akagi,K.,Morse,H.C.,Malley,J.D.,Naiman,D.Q.,Jenkins,N.A.,andCopeland,N.G.(2002).
Newgenesinvolvedincanceridentifiedbyretroviraltagging.NatGenet32,166174.

T
Taatjes,D.J.(2010).ThehumanMediatorcomplex:aversatile,genomewideregulatoroftranscription.Trends
BiochemSci35,315322.
Takahashi, K., and Yamanaka, S. (2006). Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult
fibroblastculturesbydefinedfactors.Cell126,663676.
Takei,Y.,Hamada,S.,Senzaki,K.,Mutoh,T.,Sugino,H.,andYagi,T.(2001).TwonovelCNRsfromtheCNRgene
clusterhavemolecularfeaturesdistinctfromthoseofCNR1to8.Genomics72,321330.
Tammemagi, M. C., McLaughlin, J. R., and Bull, S. B. (1999). Metaanalyses of p53 tumor suppressor gene
alterationsandclinicopathologicalfeaturesinresectedlungcancers.CancerEpidemiolBiomarkersPrev8,625634.
Tang,D.,Phillips,D.H.,Stampfer,M.,Mooney,L.A.,Hsu,Y.,Cho,S.,Tsai,W.Y.,Ma,J.,Cole,K.J.,She,M.N.,and
Perera,F.P.(2001).AssociationbetweencarcinogenDNAadductsinwhitebloodcellsandlungcancerriskinthe
physicianshealthstudy.CancerRes61,67086712.

94

BIBLIOGRAFA
Taron,M.,Ichinose,Y.,Rosell,R.,Mok,T.,Massuti,B.,Zamora,L.,Mate,J.L.,Manegold,C.,Ono,M.,Queralt,C.,
et al. (2005). Activating mutations in the tyrosine kinase domain of the epidermal growth factor receptor are
associatedwithimprovedsurvivalingefitinibtreatedchemorefractorylungadenocarcinomas.ClinCancerRes11,
58785885.
Tarpey,P.,Parnau,J.,Blow,M.,Woffendin,H.,Bignell,G.,Cox,C.,Cox,J.,Davies,H.,Edkins,S.,Holden,S.,etal.
(2004).MutationsintheDLG3genecausenonsyndromicXlinkedmentalretardation.AmJHumGenet75,318324.
Tasic, B., Nabholz, C. E., Baldwin, K. K., Kim, Y., Rueckert, E. H., Ribich, S. A., Cramer, P., Wu, Q., Axel, R., and
Maniatis,T.(2002).PromoterchoicedeterminessplicesiteselectioninprotocadherinalphaandgammapremRNA
splicing.MolCell10,2133.
Tavazoie,S.F.,Alarcon,C.,Oskarsson,T.,Padua,D.,Wang,Q.,Bos,P.D.,Gerald,W.L.,andMassague,J.(2008).
EndogenoushumanmicroRNAsthatsuppressbreastcancermetastasis.Nature451,147152.
Thompson, M. A., Flegg, R., Westin, E. H., and Ramsay, R. G. (1997). Microsatellite deletions in the cmyb
transcriptional attenuator region associated with overexpression in colon tumour cell lines. Oncogene 14, 1715
1723.
Thoreson,M.A.,Anastasiadis,P.Z.,Daniel,J.M.,Ireton,R.C.,Wheelock,M.J.,Johnson,K.R.,Hummingbird,D.
K.,andReynolds,A.B.(2000).Selectiveuncouplingofp120(ctn)fromEcadherindisruptsstrongadhesion.JCellBiol
148,189202.
Thoreson,M.A.,andReynolds,A.B.(2002).Alteredexpressionofthecateninp120inhumancancer:implications
fortumorprogression.Differentiation70,583589.
Timofeevski, S. L., McTigue, M. A., Ryan, K., Cui, J., Zou, H. Y., Zhu, J. X., Chau, F., Alton, G., Karlicek, S.,
Christensen,J.G.,andMurray,B.W.(2009).EnzymaticcharacterizationofcMetreceptortyrosinekinaseoncogenic
mutantsandkineticstudieswithaminopyridineandtriazolopyrazineinhibitors.Biochemistry48,53395349.
Tomita,A.,Watanabe,T.,Kosugi,H.,Ohashi,H.,Uchida,T.,Kinoshita,T.,Mizutani,S.,Hotta,T.,Murate,T.,Seto,
M.,andSaito,H.(1998).TruncatedcMybexpressioninthehumanleukemiacelllineTK6.Leukemia12,14221429.
Travis, W.D., Brambilla, E., MllerHermelink, H.K., Harris, C.C. (2004). Pathology and Genetics: Tumours of the
Lung,Pleura,ThymusandHeart.Lyon:IARC.
Tripathi,M.K.,andChaudhuri,G.(2005).DownregulationofUCRPandUBE2L6inBRCA2knockeddownhuman
breastcells.BiochemBiophysResCommun328,4348.
Tse,W.,JoachimDeeg,H.,Stirewalt,D.,Appelbaum,F.R.,Radich,J.,andGooley,T.(2005).IncreasedAF1qgene
expressioninhighriskmyelodysplasticsyndrome.BrJHaematol128,218220.
Tse,W.,Meshinchi,S.,Alonzo,T.A.,Stirewalt,D.L.,Gerbing,R.B.,Woods,W.G.,Appelbaum,F.R.,andRadich,J.
P.(2004).ElevatedexpressionoftheAF1qgene,anMLLfusionpartner,isanindependentadverseprognosticfactor
inpediatricacutemyeloidleukemia.Blood104,30583063.
Tsuta,K.,Tanabe,Y.,Yoshida,A.,Takahashi,F.,Maeshima,A.M.,Asamura,H.,andTsuda,H.(2011).Utilityof10
ImmunohistochemicalMarkersIncludingNovelMarkers(Desmocollin3,Glypican3,S100A2,S100A7,andSox2)for
DifferentialDiagnosisofSquamousCellCarcinomafromAdenocarcinomaoftheLung.JThoracOncol.

U
Umetani, N., Mori, T., Koyanagi, K., Shinozaki, M., Kim, J., Giuliano, A. E., and Hoon, D. S. (2005). Aberrant
hypermethylation of ID4 gene promoter region increases risk of lymph node metastasis in T1 breast cancer.
Oncogene24,47214727.

95

BIBLIOGRAFA

V
vandeWetering,M.,Oosterwegel,M.,vanNorren,K.,andClevers,H.(1993).Sox4,anSrylikeHMGboxprotein,
isatranscriptionalactivatorinlymphocytes.EmboJ12,38473854.
vanHengel,J.,andvanRoy,F.2007.Diversefunctionsofp120ctnintumors.BiochimBiophysActa1773,7888.
Volm,M.,andKoomagi,R.(2000).PrognosticrelevanceofcMycandcaspase3forpatientswithnonsmallcell
lungcancer.OncolRep7,9598.

W
Wang, D. G., Fan, J. B., Siao, C. J., Berno, A., Young, P., Sapolsky, R., Ghandour, G., Perkins, N., Winchester, E.,
Spencer,J.,etal.(1998).Largescaleidentification,mapping,andgenotypingofsinglenucleotidepolymorphismsin
thehumangenome.Science280,10771082.
Wang, T., Hao, L., Feng, Y., Wang, G., Qin, D., and Gu, G. (2011). Knockdown of MED19 by lentivirusmediated
shRNAinhumanosteosarcomacellsinhibitscellproliferationbyinducingcellcyclearrestintheG0/G1phase.Oncol
Res19,193201.
Wang, X., Su, H., and Bradley, A. (2002). Molecular mechanisms governing Pcdhgamma gene expression:
evidenceforamultiplepromoterandcisalternativesplicingmodel.GenesDev16,18901905.
Wang,Y.,Broderick,P.,Webb,E.,Wu,X.,Vijayakrishnan,J.,Matakidou,A.,Qureshi,M.,Dong,Q.,Gu,X.,Chen,W.
V.,etal.(2008).Common5p15.33and6p21.33variantsinfluencelungcancerrisk.NatGenet40,14071409.
Wegner,M.(1999).Fromheadtotoes:themultiplefacetsofSoxproteins.NucleicAcidsRes27,14091420.
Weinstein, I. B. (2000). Disorders in cell circuitry during multistage carcinogenesis: the role of homeostasis.
Carcinogenesis21,857864.
Weinstein,I.B.(2002).Cancer.AddictiontooncogenestheAchilleshealofcancer.Science297,6364.
Weinstein, I. B., and Joe, A. K. (2006). Mechanisms of disease: Oncogene addictiona rationale for molecular
targetingincancertherapy.NatClinPractOncol3,448457.
Weinstein,Y.,Ihle,J.N.,Lavu,S.,andReddy,E.P.(1986).Truncationofthecmybgenebyaretroviralintegration
inaninterleukin3dependentmyeloidleukemiacellline.ProcNatlAcadSciUSA83,50105014.
Weir,B.A.,Woo,M.S.,Getz,G.,Perner,S.,Ding,L.,Beroukhim,R.,Lin,W.M.,Province,M.A.,Kraja,A.,Johnson,
L.A.,etal.(2007).Characterizingthecancergenomeinlungadenocarcinoma.Nature450,893898.
Westra,W.H.(2000).Earlyglandularneoplasiaofthelung.RespirRes1,163169.
Westra,W.H.,Slebos,R.J.,Offerhaus,G.J.,Goodman,S.N.,Evers,S.G.,Kensler,T.W.,Askin,F.B.,Rodenhuis,S.,
andHruban,R.H.(1993).Krasoncogeneactivationinlungadenocarcinomasfromformersmokers.Evidencethat
Krasmutationsareanearlyandirreversibleeventinthedevelopmentofadenocarcinomaofthelung.Cancer72,
432438.
Wicking,C.,Smyth,I.,andBale,A.(1999).Thehedgehogsignallingpathwayintumorigenesisanddevelopment.
Oncogene18,78447851.
Willert,K.,andJones,K.A.(2006).Wntsignaling:isthepartyinthenucleus?GenesDev20,13941404.
Williams, S. J., Cvetkovic, D., and Hamilton, T. C. (2009). Vitamin A metabolism is impaired in human ovarian
cancer.GynecolOncol112,637645.
Wilson,M.E.,Yang,K.Y.,Kalousova,A.,Lau,J.,Kosaka,Y.,Lynn,F.C.,Wang,J.,Mrejen,C.,Episkopou,V.,Clevers,
H. C., and German, M. S. (2005). The HMG box transcription factor Sox4 contributes to the development of the
endocrinepancreas.Diabetes54,34023409.

96

BIBLIOGRAFA
Wistuba,II,andGazdar,A.F.(2006).Lungcancerpreneoplasia.AnnuRevPathol1,331348.
Wistuba,II,Mao,L.,andGazdar,A.F.(2002).Smokingmoleculardamageinbronchialepithelium.Oncogene21,
72987306.
Wittinghofer, A., Scheffzek, K., and Ahmadian, M. R. (1997). The interaction of Ras with GTPaseactivating
proteins.FEBSLett410,6367.
Woods,A.,Johnstone,S.R.,Dickerson,K.,Leiper,F.C.,Fryer,L.G.,Neumann,D.,Schlattner,U.,Wallimann,T.,
Carlson,M.,andCarling,D.(2003).LKB1istheupstreamkinaseintheAMPactivatedproteinkinasecascade.Curr
Biol13,20042008.
Wu,C.L.,Zukerberg,L.R.,Ngwu,C.,Harlow,E.,andLees,J.A.(1995).InvivoassociationofE2FandDPfamily
proteins.MolCellBiol15,25362546.

X
Xiao, K., Allison, D. F., Buckley, K. M., Kottke, M. D., Vincent, P. A., Faundez, V., and Kowalczyk, A. P. (2003).
Cellular levels of p120 catenin function as a set point for cadherin expression levels in microvascular endothelial
cells.JCellBiol163,535545.

Y
Yagi,T.(2008).Clusteredprotocadherinfamily.DevGrowthDiffer50Suppl1,S131140.
Yajnik,V.,Paulding,C.,Sordella,R.,McClatchey,A.I.,Saito,M.,Wahrer,D.C.,Reynolds,P.,Bell,D.W.,Lake,R.,
vandenHeuvel,S.,etal.(2003).DOCK4,aGTPaseactivator,isdisruptedduringtumorigenesis.Cell112,673684.
Yanagisawa, M., and Anastasiadis, P. Z. (2006). p120 catenin is essential for mesenchymal cadherinmediated
regulationofcellmotilityandinvasiveness.JCellBiol174,10871096.
Yap,A.S.,Niessen,C.M.,andGumbiner,B.M.(1998).Thejuxtamembraneregionofthecadherincytoplasmictail
supportslateralclustering,adhesivestrengthening,andinteractionwithp120ctn.JCellBiol141,779789.
Yasui, K., Arii, S., Zhao, C., Imoto, I., Ueda, M., Nagai, H., Emi, M., and Inazawa, J. (2002). TFDP1, CUL4A, and
CDC16identifiedastargetsforamplificationat13q34inhepatocellularcarcinomas.Hepatology35,14761484.
Yasui,K.,Okamoto,H.,Arii,S.,andInazawa,J.(2003).AssociationofoverexpressedTFDP1withprogressionof
hepatocellularcarcinomas.JHumGenet48,609613.
Yokoi,S.,Yasui,K.,Mori,M.,Iizasa,T.,Fujisawa,T.,andInazawa,J.(2004).Amplificationandoverexpressionof
SKP2areassociatedwithmetastasisofnonsmallcelllungcancerstolymphnodes.AmJPathol165,175180.
Yokomizo, A., Tindall, D. J., Drabkin, H., Gemmill, R., Franklin, W., Yang, P., Sugio, K., Smith, D. I., and Liu, W.
(1998).PTEN/MMAC1mutationsidentifiedinsmallcell,butnotinnonsmallcelllungcancers.Oncogene17,475
479.
Yokota, S., Hirayama, T., Hirano, K., Kaneko, R., Toyoda, S., Kawamura, Y., Hirabayashi, M., Hirabayashi, T., and
Yagi,T.(2011).IdentificationoftheClusterControlRegionfortheProtocadherin{beta}GenesLocatedbeyondthe
Protocadherin{gamma}Cluster.JBiolChem286,3188531895.
Yu,L.,Liu,C.,Vandeusen,J.,Becknell,B.,Dai,Z.,Wu,Y.Z.,Raval,A.,Liu,T.H.,Ding,W.,Mao,C.,etal.(2005).
Global assessment of promoter methylation in a mouse model of cancer identifies ID4 as a putative tumor
suppressorgeneinhumanleukemia.NatGenet37,265274.
Yuan,P.,Kadara,H.,Behrens,C.,Tang,X.,Woods,D.,Solis,L.M.,Huang,J.,Spinola,M.,Dong,W.,Yin,G.,etal.
(2010).SexdeterminingregionYBox2(SOX2)isapotentialcelllineagegenehighlyexpressedinthepathogenesis
ofsquamouscellcarcinomasofthelung.PLoSOne5,e9112.

97

BIBLIOGRAFA

Z
Zamanian, M., and La Thangue, N. B. (1992). Adenovirus E1a prevents the retinoblastoma gene product from
repressingtheactivityofacellulartranscriptionfactor.EmboJ11,26032610.
Zanni, G., van Esch, H., Bensalem, A., Saillour, Y., Poirier, K., Castelnau, L., Ropers, H. H., de Brouwer, A. P.,
Laumonnier, F., Fryns, J. P., and Chelly, J. (2010). A novel mutation in the DLG3 gene encoding the synapse
associatedprotein102(SAP102)causesnonsyndromicmentalretardation.Neurogenetics11,251255.
Zhang,H.,Jiang,H.,Wang,W.,Gong,J.,Zhang,L.,Chen,Z.,andDing,Q.(2011).ExpressionofMed19inbladder
cancertissuesanditsroleonbladdercancercellgrowth.UrolOncol.
Zhou,W.,Ercan,D.,Chen,L.,Yun,C.H.,Li,D.,Capelletti,M.,Cortot,A.B.,Chirieac,L.,Iacob,R.E.,Padera,R.,et
al.(2009).NovelmutantselectiveEGFRkinaseinhibitorsagainstEGFRT790M.Nature462,10701074.
Zipursky, S. L., and Sanes, J. R. (2010). Chemoaffinity revisited: dscams, protocadherins, and neural circuit
assembly.Cell143,343353.
ZochbauerMuller,S.,andMinna,J.D.(2000).Thebiologyoflungcancerincludingpotentialclinicalapplications.
ChestSurgClinNAm10,691708.
Zou,S.W.,Ai,K.X.,Wang,Z.G.,Yuan,Z.,Yan,J.,andZheng,Q.(2011).TheroleofMed19intheproliferationand
tumorigenesisofhumanhepatocellularcarcinomacells.ActaPharmacolSin32,354360.

98

Informedeladirectoradelfactordeimpactodelosartculos
publicados

LHospitaletdeLlobregat,15deJunio2011.

PorlapresentecertificoqueladoctorandaSANDRACASTILLODIEZleerlatesisIdentificacin
yanlisisfuncionaldenuevosoncogenesamplificadosencncerdepulmnporcompendio
detresartculos.Sucontribucinencadaunodelosartculosseindicaacontinuacin:

Publicacin1:MedinaPP,CASTILLOSD,BlancoS,SanzGarciaM,LargoC,AlvarezS,YokotaJ,
GonzalezNeiraA,BenitezJ,CleversHC,CigudosaJC,LazoPA,SanchezCespedesM.

TITULO:TheSRYHMGboxgene,SOX4,isatargetofgeneamplificationatchromosome6pin
lungcancer.

REVISTA:HumMolGenet.2009Apr1;18(7):13435.PMID:19153074
FI:7.386(D1,Biochemistry&MolecularBiology:27/275)

EnestetrabajoladoctorandaSandraCastillollevoacabodiversosexperimentosclave.Entre
elloscabedestacardiversoswesternblotsdeSOX4endistintaslneascelularesdecncerde
pulmn (Figura 2E); medidas de expresin gnica, mediante RTPCR cuantitativa en tiempo
real, de SOX4 en lneas celulares y tumores primarios de pulmn (Figura 3AB) y anlisis
mutacionaldeSOX4(Figura3CD).Tambincontribuyactivamentealclonaje,envectoresde
expresinenmamferos,delaformasalvajeydediferentesmutacionesdeSOX4(Figura4A).

Publicacin 2: CASTILLO SD, Angulo B, SuarezGauthier A, Melchor L, Medina PP, Sanchez

VerdeL,TorresLanzasJ,PitaG,BenitezJ,SanchezCespedesM.

TITULO: Gene amplification of the transcription factor DP1 and CTNND1 in human lung
cancer.

REVISTA:JPathol.2010Sep;222(1):8998.PMID:20556744
FI:7.274(D1,Pathology:2/71)

En este artculo Sandra Castillo realiz contribuciones esenciales, por lo que lidera la autora
deltrabajo.Porunapartecontribuymuysignificativamenteenlafigura2,realizandomucho
de los ensayos de FISH para determinar el nmero de copias en los distintos amplicones
seleccionados (Figura 2A). Adems, llev a cabo la prctica totalidad de las PCRs y RTPCRs
cuantitativasentiemporealparaevaluarlosnivelesdeexpresinynmerodecopiasdelos
diferentesgenesseccionados(Figura3Ayfigurassuplementarias1,2y3).Ademsseencargo
de realizar los westernsblots (Figura 3C y Figuras 5A y C). Tambin llev a cabo los
experimentosdeinterferenciadeTFDP1enlneascelularesyloscorrespondientesestudiosde
viabilidad(Figura5BC).Finalmente,colaboractivamenteenrealizarlasdistintasfigurasdel
manuscrito.

99

Publicacin3:CASTILLOSD,MatheuA,MarianiN,LopezRiosF,CarreteroJ,LovellBadgeR,
SanchezCespedesM.

TITULO:NoveltranscriptionaltargetsoftheSRYHMGboxtranscriptionfactorSOX4linkits
expressiontothedevelopmentofsmallcelllungcancer.

REVISTA:CancerRes.Inpress.
FI:8.234(D1,Oncology:12/185)

Enestetrabajo,SandraCastillollevlaprcticatotalidaddelosexperimentosqueconstituyen
el artculo. Desde la generacin de los clones que expresan el shSOX4 de forma estable e
inducible en la lnea H522, a todos los westernsblots, RTPCRs en tiempo real de lneas
celularesydetumoresprimarios,inmunoprecipitacionesdecromatinadeSOX4,etc.Unaparte
del trabajo, especialmente la relacionada con los ratones heterocigotos y KO de Sox4, fue
desarrolladaporSandraduranteunaestanciadetresmesesenLondres,enellaboratoriode
Robin LovellBadge. En algunos experimentos Sandra cont con la ayuda del estudiante de
msterNicoloMariani.

Yparaqueasconste,atodoslosefectos:

Montse Sanchez-Cespedes, PhD

Genes and Cancer Group Leader
Programa Epigenetica i Biologia del Cancer-PEBC
Bellvitge Biomedical Research Institute (IDIBELL)
Hospital Duran i Reynals
Av. Gran Via del'Hospitalet, 199-203
08908-Hospitalet de Llobregat-Barcelona, Spain
email: mscespedes@idibell.cat
Phone number: +34.93.260.71.32.
Fax number: +34.93.260.72.19

100

peroesaesotrahistoria
ydebesercontadaenotraocasin.

LaHistoriaInterminable.MichaelEnde

101

102