1.

- Diferenciar: ADN Satlite y mini Satlite

ADN SATLITE
Son Secuencias altamente repetitivas de ADN que se encuentran en la
heterocromatina, Que se conocen como VNRT(variable number of tndem repeats)
traducidos como unidades repetitivas en tndem.los loci VNRT. Estn compuestos por
secuencias simples (muy cortas) repetidas de una en una y muchas veces para formar
grandes bloques de secuencias. Fundamentalmente estn cerca de los centrmeros,
comprende un total de 250 Mb del genoma humano. Son secuencias de entre 5 y
varios cientos de nucletidos que se repiten en tndem miles de veces generando
regiones repetidas con tamaos que oscilan entre 100 kb (100.000 nucletidos) hasta
varias megabases.
Reciben su nombre de las observaciones iniciales de centrifugaciones en gradiente de
densidad del ADN genmico fragmentado, que reportaban una banda principal
correspondiente a la mayor parte del genoma y tres bandas satlite de menor
densidad. Esto se debe a que las secuencias satlite tienen una riqueza en nucletidos
A+T superior a la media del genoma y en consecuencia son menos densas.
MINISATLITES
Estn compuestas por una unidad bsica de secuencia de 6-25 10 nucletidos que se
repite en tndem generando secuencias de entre 100 y 20.000 pares de bases. Se
estima que el genoma humano contiene unos 30.000 minisatlites.
Diversos estudios han relacionado los minisatlites con procesos de regulacin de la
expresin gnica, como el control del nivel de transcripcin, el ayuste (splicing)
alternativo o la impronta (imprinting). Asimismo, se han asociado con puntos de
fragilidad cromosmica dado que se sitan prximos a lugares preferentes de rotura
cromosmica, translocacin gentica y recombinacin meitica. Por ltimo, algunos
minisatlites humanos (~10%) son hipermutables, presentando una tasa media de
mutacin entre el 0.5% y el 20% en las clulas de la lnea germinal, siendo as las
regiones ms inestables del genoma humano conocidas hasta la fecha.
En el genoma humano, aproximadamente el 90% de los minisatlites se sitan en los
telmeros de los cromosomas.
2.- A que se denomina Marcador Gentico y porque es importante?
Se denominan marcadores genticos a aquellas seales, sean del tipo que sean, que
sirven para indicarnos la presencia cercana de un gen de inters en un cromosoma
dado. La seal a la que se hace referencia puede ser un rasgo determinado (fenotipo) o
bioqumico, y debe ser fcilmente identificable para facilitar la localizacin de uno o
ms genes. Pueden indicarnos, por ejemplo, la resistencia a una determinada
enfermedad (estrs bitico), tolerancia a salinidad (estrs abitico), sin necesidad de
que las mencionadas situaciones se hayan presentado; en otras palabras, si este
organismo tiene tal seal, presentar tal resistencia o tolerancia.
Para qu sirven?

El conocimiento de estas asociaciones de seales sirve para predecir las cualidades de

un organismo; es decir, la aparicin de una de ellas me indicar la presencia de la otra
y, con esto, se aceleran los tiempos del proceso de mejoramiento.
Los marcadores genticos pueden ser: morfolgicos, bioqumicos y moleculares, cada
uno con sus ventajas y desventajas.
Los ms evidentes son los marcadores morfolgicos: coloracin, tamao, rasgos,
diferencias en el crecimiento y en el comportamiento, etc.
El marcador bioqumico ms utilizado es el denominado anlisis de isoenzimas. Esta
tcnica se basa en la separacin de enzimas con la misma funcin, pero diferenciadas
en tamao, carga o conformacin. Es una tcnica muy utilizada por su sencillez y
economa de manejo, pero tiene la limitacin de poseer una baja sensibilidad.
3.- Qu son los fragmentos de restriccin? Qu es el polimorfismo de
longitud de los fragmentos de restriccin?
Encimas de restriccin o fragmentos de restriccin tambin llamadas:

Nucleasas de restriccin
Endonucleasas de restriccin

Reconocen secuencias de bases especficas en el ADN doble hlice y cortan en lugares

concretos ambas hebras del dplex que contienen las secuencias reconocidas.
Importancia:

Gran especificidad de reconocimiento de una secuencia de ADN dplex y la

consiguiente

hidrlisis de un enlace fosfodister en cada hebra. RFLP (polimorfismos de longitud de

fragmentos de restriccin)
Polimorfismo de longitud de fragmentos de restriccin (RFLP)
Son las variaciones en las bases nitrogenadas en el sitio donde una enzima de
restriccin corta un segmento de ADN. Estas variaciones afectan el tamao de los
fragmentos que resultan del corte. Los RFLP se pueden utilizar como marcadores en la
construccin de mapas fsicos y de ligamiento.
La tcnica RFLP se usa como marcador para identificar:
grupos particulares de personas con riesgo a contraer ciertas enfermedades genticas
en gentica forenseen pruebas de paternidad
4.- Qu es el ADN Fingerprinting?
El ADN es un compuesto qumico que almacena en forma codificada la informacin
gentica de un ser humano. Estos perfiles de ADN, nicos por individuo, al igual que las

huellas dactilares, pueden tener amplias aplicaciones en medicina forense, anlisis de

paternidad, medicina diagnstica o ciencias naturales.
El ADN es idntico tanto si es extrado de sangre, bulbo piloso o semen. Adems, es
estable en la lnea germinal, por lo que las seas correspondientes a un individuo
pueden ser identificadas como pertenecientes a uno u otro progenitor. Estos principios
de identidad nica, heredabilidad e idntica estructura del ADN dentro de todos los
tejidos del mismo cuerpo son los fundamentos de la tcnica de fingerprinting.
La historia de esta tcnica, se remonta a los trabajos de Jeffreys y col. (1985). Estos
autores advierten la presencia en el ADN de regiones en las que una secuencia corta
aparece en sucesivas repeticiones (tandem). Estas regiones se denominaron
minisatlites. El nmero de repeticiones de la regin, y por lo tanto su tamao es
variable en los alelos de diferentes loci genticos. Cuando el ADN es aislado y tratado,
de modo de obtener fragmentos, la observacin del tamao de lo mismos arroja un
perfil diferente para cada individuo (fragmentos de restriccin de longitud polimrfica).
El perfil vara considerablemente entre personas no emparentadas. Por lo tanto es
posible utilizar esta tcnica para la identificacin de lazos parentales con una eficiencia
del ms del 99.99%. Por comparacin del fingerprinting de la madre y su hijo es
posible identificar los fragmentos de ADN presentes en el hijo que estn ausentes en la
madre y por lo tanto han sido heredados de su padre biolgico. Si el presunto padre no
es el padre biolgico la mayor parte de las bandas de origen paterno identificadas en el
hijo no estarn presentes en su fingerprinting. Si por el contratio, el presunto padre es
el biolgico, todas las bandas paternas del hijo estarn en su fingerprinting.
Aplicaciones forenses del estudio del ADN por fingerprinting comprenden:
-determinacin de identidad de sospechosos en homicidios, violaciones.
-confirmacin de la veracidad de una evidencia.
-identificacin de un hecho delictivo como aislado o serial.
Las modernas tcnicas de anlisis del ADN inician un camino de sumo inters por sus
aplicaciones en medicina, que incluyen:
-determinacin de origen gentico de mellizos (mono o dicigticos).
-anlisis de marcadores para transplante de mdula sea.
-deteccin de cambios de ADN en tumores.
-identificacin de contaminacin entre tejidos materno y fetal en anlisis de
vellosidades corinicas.
-identificacin de patgenos.
-estudios familiares para el diagnstico prenatal de enfermedades de inters.
El Instituto de Gentica Humana ha implementado desde enero del ao 1999 el
servicio de determinacin de filiacin por fingerprinting, iniciando por esta tcnica el
camino hacia otras de diagnstico molecular que resulten inters para nuestra ciudad y
su zona de influencia.

5.- En qu consiste la tcnica del PCR?

La reaccin en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en ingls
(polymerase chain reaction),

es

una

tcnica

debiologa

molecular desarrollada

en 1986 por Kary Mullis, cuyo objetivo es obtener un gran nmero de copias de un
fragmento de ADNparticular, partiendo de un mnimo; en teora basta partir de una
nica copia de ese fragmento original, o molde.
Esta tcnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la
amplificacin
resulta
mucho
ms
fcil
identificar
con
una
muy
alta
probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas
(cadveres) o hacer investigacin cientfica sobre el ADN amplificado. Estos usos
derivados de la amplificacin han hecho que se convierta en una tcnica muy
extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a
cabo.
Fases:
Inicio
Este paso consiste en llevar la reaccin hasta una temperatura de 94-96 C ( 98 C si
se est usando una polimerasa termoestable extrema), que se mantiene durante 1-9
minutos. Esto slo es necesario para ADN polimerasas que requieran activacin por
calor.
Desnaturalizacin
En primer lugar, se desnaturaliza el ADN (se separan las dos cadenas de las cuales est
constituido). Este paso puede realizarse de diferentes modos, siendo el calentamiento
(94-95 C) de la muestra la forma ms habitual. La temperatura a la cual se decide
realizar la desnaturalizacin depende, por ejemplo, de la proporcin de G+C que tenga
la cadena, como tambin del largo de la misma. Otros mtodos, raramente empleados
en la tcnica de la PCR, seran la adicin de sales o agentes qumicos capaces de
realizar la desnaturalizacin.
Alineamiento o unin del cebador
A continuacin se producir la hibridacin del cebador, es decir, el cebador se unir a
su secuencia complementaria en el ADN molde. Para ello es necesario bajar la
temperatura a 40-68 C durante 20-40 segundos (segn el caso), permitiendo as el
alineamiento. Los puentes de hidrgeno estables entre las cadenas de ADN (unin
ADN-ADN) slo se forman cuando la secuencia del cebador es muy similar a la
secuencia del ADN molde. La polimerasa une el hbrido de la cadena molde y el
cebador, y empieza a sintetizar ADN. Los cebadores actuarn como lmites de la regin
de la molcula que va a ser amplificada.
Extensin o elongacin de la cadena
Acta la ADN polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la cadena
complementaria y partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la sntesis
de nuevo ADN. La polimerasa sintetiza una nueva hebra de ADN complementaria a la

hebra molde aadiendo los dNTP complementarios en direccin 5' 3', uniendo el
grupo 5'-fosfato de los dNTP con el grupo 3'-hidroxilo del final de la hebra de ADN
creciente (la cual se extiende). La temperatura para este paso depende del ADN
polimerasa que usemos. Para la polimerasa Taq, la temperatura de mxima actividad
est en 75-80 C (comnmente 72 C). El tiempo de extensin depende tanto de el
ADN polimerasa usada como de la longitud del fragmento de ADN que se va a
amplificar. Hay una regla comnmente usada: en su temperatura ptima, la polimerasa
de ADN polimerizar mil bases en un minuto.
Elongacin final
Etapa nica que se lleva a cabo a una temperatura de 70-74 C durante 5-15 minutos
tras el ltimo ciclo de PCR. Con ella se asegura que cualquier ADN de cadena simple
restante sea totalmente ampliado.
Conservacin
Este es un paso que se lleva a cabo a 4-15 C durante un tiempo indefinido para
conservar la reaccin a corto plazo.
La PCR normalmente se realiza con un volumen de reaccin de 15-100 L, en
pequeos tubos de 0.2-0.5 mL que se colocan en el termociclador.
Hoy, todo el proceso de la PCR est automatizado mediante un aparato
llamado termociclador, que permite calentar y enfriar los tubos de reaccin para
controlar la temperatura necesaria para cada etapa de la reaccin. Por lo general, la
PCR es una tcnica comn y normalmente indispensable en laboratorios de
investigacin mdica y biolgica para una gran variedad de aplicaciones. Entre ellas se
incluyen la clonacin de ADN para la secuenciacin, la filogenia basada en ADN,
el anlisis funcional de genes, el diagnstico de trastornos hereditarios, la
identificacin de huellas genticas (usada en tcnicas forenses y test de paternidad) y
la deteccin y diagnstico de enfermedades infecciosas.