Anlisis de agua por el mtodo !

del nmero ms probable

Debido a que un gran nmero de enfermedades son transmitidas por va fecal-oral utilizando
como vehculo los alimentos y el agua, es necesario contar con microorganismos que funcionen
como indicador de contaminacin fecal. Estos deben de ser constantes, abundantes y exclusivos
de la materia fecal, deben tener una sobrevivencia similar a la de los patgenos intestinales y
deben ser capaces de desarrollarse extraintestinalmente.

Bacterias Coliformes
Coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia
relevante como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos."
Pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y se caracterizan por su capacidad para fermentar la lactosa con produccin de cido y
gas, ms o menos rpidamente, en un periodo de 48 horas y con una temperatura de incubacin comprendida entre 30-37C."
!

El grupo contempla a todas las bacterias entricas que se caracterizan por tener las siguientes propiedades bioqumicas:"
" 1" ser aerobias o anaerobias facultativas;"
" 2" ser bacilos Gram negativos;"
" 3" no ser esporgenas; (Si es Gram negativo NO esporula)"
!

Habitad
!

Las bacterias de este gnero se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es
decir, homeotermos, pero tambin ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y vegetales."
Los coliformes se introducen en gran nmero al medio ambiente por las heces de humanos y animales. Por tal motivo suele
deducirse la mayora de los coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. Sin embargo, aun existen muchos
coliformes de vida libre.

Los coliformes como indicadores

Tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de contaminacin fecal en el control de calidad del agua
destinada al consumo humano en razn de que, en los medios acuticos, los coliformes son ms resistentes que las bacterias
patgenas intestinales y porque su origen es principalmente fecal. Por tanto, su ausencia indica que el agua es
bacteriolgicamente segura."
Asimismo, su nmero en el agua es directamente proporcional al grado de contaminacin fecal; mientras ms coliformes se
aislan del agua, mayor es la gravedad de la descarga de heces."
Bacterias que integran el grupo de los coliformes
El grupo de los coliformes incluye bacterias en forma de bacilo, gram negativos, con las siguientes propiedades bioqumicas:
oxidasa negativo y capacidad de fermentar lactosa, con produccin de gas en 48 horas a una temperatura de 37C."
El grupo coliforme est formado por los siguientes gneros:"
!1!Escherichia"
!2!Klebsiella"
!3!Enterobacter"
!4!Citrobacter"
No todos los autores incluyen al gnero Citrobacter dentro del grupo coliforme.

El grupo de bacterias coliformes totales el cual comprende a todos los bacilos Gram-negativos aerobios o anaerobios facultativos,
no esporulados, que fermentan la lactosa con produccin de gas en un lapso mximo de 48 h. a 35C 1oC. Este grupo est
conformado por 4 gneros principalmente: Enterobacter, Escherichia, Citrobacter y Klebsiella."
El grupo de coliformes fecales, est constituido por bacterias Gram-negativas capaces de fermentar la lactosa con produccin de
gas a las 48 h de incubacin a 44.5 0.1C. Este grupo no incluye una especie determinada, sin embargo la ms prominente es
Escherichia coli."
La demostracin y el recuento de organismos coliformes, puede realizarse mediante el empleo de medios de cultivo lquidos y
slidos con caractersticas selectivas y diferenciales.

EL MTODO DE NMERO MAS PROBABLE (NMP)

Es una estrategia para la determinacin del NMP de bacterias

coliformes en una muestra, se hace a partir de la tcnica de los
tubos mltiples, en la cual volmenes decrecientes de la
muestra (diluciones decimales consecutivas) son inoculadas
en un medio de cultivo adecuado.!
la combinacin de los resultados positivos y negativos es
usada en la determinacin del NMP.

aplicacin: !
El procedimiento del NMP para la determinacin de coliformes total puede ser usada para evaluar la
potabilidad de las aguas tratadas y como indicador de la calidad bacteriolgica de aguas naturales y
contaminadas.!
Ventajas: !
la prueba presuntiva y confortativa consiste en observar la presencia o ausencia de gas, para lo cual se
requiere mnima experiencia.!
muchas muestras de agua con alta turbiedad y gran numero de algas no producen aparente efectos
nocivos en la reaccin de los tubos.!
limitaciones:!
el tiempo requerido para la prueba puede ser de 96 horas con la prueba confirmativa.

Medios de cultivo
Caldo lauril triptosa (CLT).!
Triptosa 40.0g!
Lactosa 10.0g!
Cloruro de sodio (NaCl) 10.0g!
Fosfato monobsico de potasio (KH2PO4) 5.5g!
Fosfato dibsico de potasio (K2HPO4) 5.5g!
Lauril sulfato de sodio 0.2g!
Agua para llevar a 1000 cm3!
Aadir la triptosa y el cloruro de sodio al agua, calentar para disolver y aadir el lauril sulfato de sodio. Disolver el resto de
los componentes por separado y agregarlos a los anteriores mezclando suavemente para evitar la formacin de espuma.

Medios de cultivo
Caldo bilis lactosa verde brillante:!
Peptona 10.0g!
Lactosa 10.0g!
Bilis de buey (deshidratada) 20.0g!
Verde brillante (1% m/m en solucin acuosa) 13 cm3!
Agua para llevar a 1000 cm3

Medios de cultivo
Medio EC:!
Triptosa o tripticasa 20.0g!
Lactosa 5.0g!
Mezcla de sales biliares 1.5g!
Fosfato dibsico de potasio (K2HPO4) 4.0g!
Fosfato monobsico de potasio (KH2PO4) 1.5g!
Cloruro de sodio (NaCl) 5.0g !
Agua para llevar a 1000 cm3!
Distribuir el medio de simple concentracin en volmenes indicados en que debe contener un tubo de fermentacin invertido
(Durham). Colocar en autoclave y esterilizar. Disolver los componentes por separado y agregarles agitando suavemente y esterilice.!
Nota:Como medio confirmativo para coliformes totales, el ms generalizado es el caldo de bilis lactosa verde brillante (BLVB). Para
confirmar la presencia de coliformes fecales se utilizan tanto el BLVB como el caldo EC.

Tabla de recuento de coliformes

Gracias por su atencin