ENZIMIOLOGA

ENZIMIOLOGA

La enzimologa es una disciplina bioqumica centrada

en el estudio y caracterizacin de las enzimas, que
son biomolculas proteicas o ribonucleicas que
catalizan reacciones qumicas en los sistema
biolgicos. Estudia, por ello: la implicacin de las
enzimas en el metabolismo; su estructura;
su
cintica;
su
posible
aplicacin
en
la biotecnologa; su variabilidad en la filogenia; los
adyuvantes enzimticos, como los cofactores y
las coenzimas; etc.

ASPECTOS
GENERALE
S

Propiedade
s
Modo de
accin
Regulacin
de la
actividad
enzimtica
Nomenclatu

Ajuste
inducido
Llave
cerradura

ra
Oxidorreductasas

ENZIMAS

CLASIFICACI
N

Transferasas
Hidrolasas
Liasas
Isomerasas

CINTICA
ENZIMTIC
A

Ligasas
Cintica
qumica
Cintica
enzimtica
Modelo cintico
Michaelis Menten
Clculo de la Km
y Vmax de una
enzima
Actividad enzimtica

ENZIMAS

Las enzimas son protenas que catalizan todas las reacciones

bioqumicas. Adems de su importancia como catalizadores
biolgicos, tienen muchos usos mdicos y comerciales.

Un catalizador es una sustancia que disminuye la energa de

activacin de una reaccin qumica. Al disminuir la energa de
activacin, se incrementa la velocidad de la reaccin.

La mayora de las reacciones de los sistemas vivos son

reversibles, es decir, que en ellas se establece el equilibrio
qumico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la formacin de
equilibrio qumico, pero no afectan las concentraciones finales
del equilibrio.

Que es un catalizador?

FUNCIONES
ENZIMTICAS

Catalizadores biolgicos. Protenas de forma

globular
Especficas para un substrato particular (Estreo
especificidad)

Aceleran reacciones especficas qumicas(103-10

20)

Actan en disolucin acuosa, a pH y temp. ptimos

Son las unidades funcionales del metabolismo celular

Reacciones acopladas (catabolismo anabolismo)

Reguladoras de rutas metablicas (Oligomricas)

Las enzimas son protenas globulares

El sitio activo tiene una

forma especfica
debido a la estructura
terciaria de la
protena.

Un cambio en la forma
de la protena afecta a
la forma del sitio activo
y a la funcin de la
Enzima.

ESPECIFICIDAD
La alta especificidad se debe
a que su estructura terciaria
le permite formar cavidades
llamadas sitios activos, lugar
donde se ubica el sustrato
durante
el
proceso
de
catlisis.

La
enzima
se
une
especficamente
a
las
molculas
denominadas
sustratos,
formando
un
complejo enzima-sustrato y
favoreciendo
su
transformacin en productos

ENZIMAS

Caractersticas de las ENZIMAS

Las enzimas Slo cambian la tasa de reaccin. Ellas no

cambian el equilibrio ni los productos finales.

Son especficas para una reaccin en particular

Actan en muy pequeas cantidades debido a su alta

actividad molecular:

Actividad molecular (N de recambio)= nmero de

molculas de Sustrato transformadas por minuto por
una enzima.
Actividad molecular de la Catalasa = 6 x106/min

ETAPAS DE ACTUACIN DE LAS ENZIMAS

MECANISMO DE ACTIVIDAD ENZIMATICA

FACTORES QUE AFECTAN LA

ACTIVIDAD ENZIMATICA

Concentracin del sustrato.- A mayor concentracin del sustrato, a una

concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima. Despus de
que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del sustrato no
tiene efecto en la velocidad de la reaccin.

Concentracin de la enzima.- Siempre y cuando haya sustrato disponible, un

aumento en la concentracin de la enzima aumenta la velocidad enzimtica
hacia cierto lmite.

Temperatura.- Un incremento de 10C duplica la velocidad de reaccin, hasta

ciertos lmites. El calor es un factor que desnaturaliza las protenas por lo
tanto si la temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su actividad.

pH.- El pH ptimo de la actividad enzimtica es 7, excepto las enzimas del

estmago cuyo pH ptimo es cido.

Presencia de cofactores.- Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean

activadores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las enzimas que
tienen cofactores, la concentracin del cofactor debe ser igual o mayor que la
concentracin de la enzima para obtener una actividad cataltica mxima.

ESTRUCTURAS FUNCIONALES DE
LAS ENZIMAS CONJUGADAS
En las protenas conjugadas podemos distinguir dos partes:

Apoenzima: Es la parte poli peptdica de la enzima.

Cofactor: Es la parte no proteica de la enzima.

La combinacin de la apoenzima y el cofactor forman la holoenzima.

Los cofactores pueden ser:

*Iones metlicos: Favorecen la actividad cataltica general de la enzima, si no

estn presentes, la enzima no acta. Estos iones metlicos se denominan
activadores. Ejemplos: Fe2+, Mg2+, Cu2+, K+, Na+ y Zn2+

*La mayora de los otros cofactores son coenzimas las cuales generalmente son
compuestos orgnicos de bajo peso molecular, por ejemplo, las vitaminas del
complejo B son coenzimas que se requieren para una respiracin celular
adecuada.

EFECTO DE LOS COFACTORES SOBRE LA

ACTIVIDAD ENZIMTICA
Una enzima requiere para su funcin
la presencia de sustancias no
proteicas que colaboran en la
catlisis:
COFACTORES

Los cofactores pueden

ser iones inorgnicos
como el Fe++, Mg++,
Mn++, Zn++ etc. Casi un
tercio de los enzimas
conocidos
requieren
cofactores.

COENZIMAS
Cuando el cofactor es
una molcula orgnica
se llama coenzima.
Muchos
de
estos
coenzimas se sintetizan
a partir de vitaminas.

APOENZIMA + GRUPO PROSTTICO= HOLOENZIMA

Las propiedades de los enzimas

derivan del hecho de ser
protenas y de actuar como
catalizadores. Como protenas,
poseen una conformacin natural
ms estable que las dems
conformaciones posibles.

Los
cambios
en
la
conformacin
suelen
ir
asociados en cambios en la
actividad cataltica.

Los factores que influyen de manera

ms directa sobre la actividad de un
enzima son:

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD

ENZIMTICA

Los enzimas poseen grupos

qumicos ionizables (carboxilos COOH; amino -NH2; tiol -SH;
imidazol, etc.) en las cadenas
laterales de sus aminocidos
La mayora de los enzimas son
muy sensibles a los cambios de
pH.

El pH afecta la formacin de puentes de H y de S

en las protenas y as afectan a su forma.
tripsina

colinesterasa

Tasa de reaccin (M)

pepsina

pH

10

Enzima

pH ptimo

Pepsina

1.5

Tripsina

7.7

Catalasa

7.6

Arginasa

9.7

Fumarasa

7.8

Ribonucleasa

7.8

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE

LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
En general, los aumentos de
temperatura
aceleran
las
reacciones qumicas: por cada
10C de incremento, la velocidad
de reaccin se duplica.
La temperatura a la cual la
actividad cataltica es mxima se
llama temperatura ptima .

La prdida de actividad cataltica

debida a la desnaturalizacin trmica.

Las ENZIMAS se desnaturalizan a 60oC

Tasa de reaccin

Temperatura ptima

La Enzima se
desnaturaliza y pierde su
capacidad cataltica

La tasa de
duplica cada
10oC

Temperatura

Algunas bacteria termfilas tienen

ENZIMAS con T ptimas de 85oC

Enzima
Temp. pt.
Mamferos

(oC)
37

Bacterias y algas

aprox.

100

Bacterias rticas

aprox.

Bacterias en muestra de hielo antigu

Reacciones Enzimticas
En Reacciones anablicas
las enzimas facilitan la unin
de molculas sustrato.

En Reacciones catablicas
el sitio activo de la Enzima
afecta a los enlaces de los
Sustratos de modo que estos
son ms fciles de romper

La actuacin del enzima (1) permite

que los reactantes (sustratos) se
unan a su centro activo con una
orientacin ptima para que la
reaccin se produzca y (2) modifica
las
propiedades
qumicas
del
sustrato unido a su centro activo,
debilitando los enlaces existentes y
facilitando la formacin de otros
nuevos

MODELO LLAVE-CERRADURA
El modelo llave-cerradura supone
que la estructura del sustrato y la
del
centro
activo
son
complementarias, de la misma
forma que una llave encaja en una
cerradura. Este modelo es vlido
en muchos casos, pero no es
siempre correcto.

La hiptesis Llave-cerradura postula que el sitio activo

de una Enzima tiene una forma rgida

Sin embargo, los estudios cristalogrficos indican que las

protenas son flexibles.

MODELO DEL AJUSTE INDUCIDO

En algunos casos, el centro
activo adopta la conformacin
idnea slo en presencia del
sustrato. La unin del sustrato
al centro activo del enzima
desencadena
un
cambio
conformacional que da lugar a
la formacin del producto.

Una molcula de enzima no tiene por

qu actuar siempre a la misma
velocidad. Su actividad puede estar
modulada por:

pH
T

Cofactore
s
[Sustrato]

Isoenzimas
Protelsis
Modificaci Modificaci
n Alostrica n Covalente

Hay varias formas mediante las cuales

se asigna un nombre a una enzima:
NOMBRES
PARTICULARES
Antiguamente,
los
enzimas
reciban
nombres particulares,
asignados
por
su
descubridor.
Al
ir
aumentando el nmero
de enzimas conocidos,
se hizo necesaria una
nomenclatura
sistemtica
que
informara
sobre
la
accin especfica de
cada enzima y los
sustratos sobre los que

NOMBRE SISTEMTICO
El nombre sistemtico de un enzima
consta actualmente de 3 partes:
- El sustrato preferente
- El tipo de reaccin realizado
- Terminacin "asa"
Un ejemplo sera la glucosa fosfato
isomerasa
que
cataliza
la
isomerizacin de la glucosa-6-fosfato
en fructosa-6-fosfato.

NOMENCLATURA DE LA
COMISIN ENZIMTICA

El nombre de cada enzima puede ser

identificado por un cdigo numrico,
encabezado por las letras EC
(enzyme commission), seguidas de
cuatro nmeros separados por
puntos.

la ATP: glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa) se

define como EC 2.7.1.2. El nmero 2 indica que es
una transferasa, el 7 que es una fosfotransferasa, el 1
indica que el aceptor es un grupo OH, y el ltimo 2
indica que es un OH de la D-glucosa el que acepta el
grupo fosfato.

Nombre sistemtico:

Grupo transferido

ATP: hexosa fosfotransferasa

Donador

Aceptor

Nmero sistemtico

Enzyme
Comission

Grupo Subgrupo

EC 2.7.1.1

Enzima

Sub-subgrupo
Nombre comn:

Hexokinasa

CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS

Clasificacin de las enzimas de acuerdo a su

complejidad

De acuerdo a su complejidad las enzimas se

clasifican como:

Nombrando a las ENZIMAS:

Enzimas
intracelulares:

Enzimas
extracelulares:
ATP + CREATINA

Actan dentro de la clula; Ej. DNA

polimerasa
Secretadas por clulas y actan fuera de
ellas; ej. pepsina, amilasa
ADP + FOSFOCREATINA

Corto, de preferencia terminado en

Nombre recomendado: asa ej,. creatin kinasa

Nombre sistemtico:

Describe el tipo de reaccin que est

siendo catalizada; ej. ATP:CREATIN
FOSFOTRANSFERASA.

Clasificacin Enzimas deacuerdo a tipo de reaccin :

No.

Clase

Tipo de reaccin que

catalizan
De xido reduccin (transferencia de e-)

Ejemplo
Deshidrogenasas
Peroxidasa Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas
Kinasas
Transaminasas
Pirofosfatasa
Tripsina
Aldolasa
(Sintasas)
Descarboxilasa pirvica

Oxidorreductasas

Transferasas

Hidrolasas

Liasas

Isomerasas

Transferencia de grupos en el
interior de las molculas para
dar formas ismeras

Mutasas
Epimerasas
Racemasas

Ligasas

Formacin de enlaces C-C,

C-S, C-O y C-N. Mediante
reacciones de condensacin,
acopladas a la ruptura del ATP

Sintetasas

Transferencia de grupos
Hidrlisis, con transferencia de grupos
funcionales del agua
Lisis de un substrato, generando un
doble enlace, o
Adicin de un substrato a un doble
enlace de un 2o. substrato
(Sintasa)

Clase 1: OXIDORREDUCTASAS Catalizan

reacciones
de
oxidorreduccin, es decir,
transferencia de hidrgeno
(H) o electrones (e-) de un
sustrato a otro, segn la
reaccin general:

AH2 + B

Ared + Box

A + BH2

Aox + Bred

Ejemplos
son
la
succinato
deshidrogenasa o la citocromo c
oxidasa.
Si una molcula se reduce, tiene que haber otra que se oxide

Clase 2: TRANSFERASAS Catalizan la transferencia de un grupo

qumico (distinto del hidrgeno) de un
sustrato a otro, segn la reaccin:

A-B + C

A + C-B

Un
ejemplo
es
la
glucoquinasa,
que
cataliza
la
reaccin
representada
en
la
Figura de la derecha:
glucosa + ATP

ADP + glucosa-6-fosfato

Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrlisis:

A-B + H2O

AH + B-OH

Un ejemplo es la lactasa, que cataliza

la reaccin:
glucosa + galactosa
lactosa + agua
Transforman polmeros en monmeros.
Actan sobre:
enlace ster
enlace glucosdico
enlace peptdico
enlace C-N

Clase 4: LIASAS
(Adicin a los dobles enlaces)

Entre C y C
Entre C y O
Entre C y N
Catalizan reacciones de ruptura o
soldadura de sustratos:

A-B

A+B

Un ejemplo es la acetacetato descarboxilasa,

que cataliza la reaccin:

cido acetactico

CO2 + acetona

Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversin de ismeros:

Son
ejemplos
la
fosfotriosa
isomerasa
y
la
fosfoglucosa
isomerasa,
que
catalizan
las
reacciones representadas en la tabla
inferior:

(Reacciones de isomerizacin)

Clase 6: LIGASAS
(Formacin de enlaces, con aporte de ATP)

Entre C y O
Entre C y S
Entre C y N
Entre C y C
Catalizan la unin de dos sustratos
con hidrlisis simultnea de un
nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.):

A + B + XTP

A-B + XDP + Pi

Un ejemplo es la piruvato carboxilasa, que

cataliza la reaccin:

piruvato + CO2 + ATP

oxaloacetato + ADP + Pi

Los principios generales de las

reacciones qumicas se aplican
tambin a las reacciones enzimticas.

Cintica
enzimtica

Modelo cintico
Michaelis Menten

Clculo de la Km y
Vmax de una
enzima

Actividad
enzimtica

La
medida
se
realiza siempre en
las
condiciones
ptimas de pH,
temperatura,
presencia
de
cofactores, etc.
En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la
velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse
bien midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin
de los reactivos.

En este esquema, k1, k2 y k3 son las

constantes cinticas individuales de
cada proceso y tambin reciben el
nombre
de
constantes
microscpicas de velocidad.

v1 = k1 [E] [S]
v2 = k2 [ES]
v3 = k3 [ES]

[ET] = [E] + [ES]

Vmax = k3 [ET]

Se define la unidad de actividad enzimtica (U)

como la cantidad de enzima que cataliza la
conversin de 1 mol de sustrato en un minuto. La
actividad especfica es el nmero de unidades de
enzima por miligramo de protena (U/mg prot)

Recientemente, el Sistema Internacional de unidades

(SI) ha definido la unidad de actividad enzimtica
como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de
sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal

Inhibicin Enzimtica
Inhibidor:

Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de

interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).

Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a

la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzim

PRINCIPALES ENZIMAS USADAS EN EL DIAGNOSTICO

CLINICO
Lactato
deshidrogenasa

Infarto del
miocardio

Amilasa

Pancreatitis Aguda

Creatinacinasa

Trastornos musculares
e infarto del
miocardio

Lipasa

Pancreatitis Aguda

Fosfatasa cida

Cncer de Prstata

Definiendo los siguientes trminos:

1.

Reacciones anablicas: Reacciones que construyen molculas

2.

Reacciones catablicas:Reacciones que descomponen molculas

3.

Metabolismo:

Combinacin de reacciones anablicas y

catablicas

4.

Catalizador:

Una Sustancia que acelera las reacciones

sin cambiar las sustancias producidas

5.

Va metablica:

6.

Especificidad:

7.

Sustrato:

La molcula(s) donde opera la enzima

8.

Producto:

Molcula(s) producida por ENZIMAS

Secuencia de reacciones controladas por

enzimas
Slo pueden catatizar reacciones
especficas