II.

PROCESO DE BIOTRANSFORMACIN
Los humanos y muchos otros animales estn constantemente expuestos en su
medio ambiente a una vasta variedad de agentes xenobiticos; los cuales pueden
ser de origen natural o formados por intervencin del hombre, En general los
compuestos ms lipoflicos son ms fcilmente absorbidos a travs de la piel,
pulmones o del tracto gastrointestinal. La constante exposicin a este tipo de
sustancias podra resultar en su acumulacin dentro del organismo, al menos que
se presente un sistema eficaz de eliminacin. Con excepcin de la exhalacin, para
que un agente xenobitico pueda ser eliminado del organismo, requiere que sea
soluble en fase acuosa, lo anterior funciona para compuestos no voltiles y en
consecuencia sern excretados por la orina y las heces, que son las
predominantes rutas de eliminacin. Sin embargo, los compuestos lipoflicos que
se encuentran en los fluidos de excrecin tienden a difundir hacia las membranas y
en consecuencia son reabsorbidos, mientras que los compuestos solubles en agua
son excretados, lo que dejara aparentemente una acumulacin de los agentes
xenobiticos lipoflicos dentro del organismo (Caldwell and Paulson, 1964;
Klaassen et al, 1986).
1. Panorama general.
De acuerdo a la estructura de la membrana celular, esta le confiere una
selectividad en la absorcin tanto de las sustancias endgenas como xenobiticas.
Esta selectividad permite que existan vas de absorcin especfica para los
nutrimentos hidrosolubles con un gasto energtico (transporte activo), pero por otra
parte aunque la mayora de los organismos vivos son casi impermeables a la gran
mayora de las sustancias hidrosolubles no deseables, no pueden prevenir la
absorcin de la mayora de las sustancias liposolubles. En la Figura 1.1. tenemos
resumido en un esquema ilustrativo, las principales vas de absorcin y eliminacin
tanto de compuestos endgenos como exgenos (Anders, 1985; Manahan, 1990;
Shibamoto y Bjeldanes, 1996).

ABSORCIN
Afortunadamente, los animales superiores han desarrollado un nmero de sistemas
metablicos que convierten los agentes xenobiticos liposolubles en metabolitos
hidrosolubles capaces de ser excretados por las vas de eliminacin.

A esta

actividad bioqumica se le ha denominado proceso de Biotransformacin, el cual se

ha dividido a su vez en dos grandes grupos de actividad enzimtica: reaccin de
Fase I y Fase II como se observa en la Figura 1.2.

La funcin principal del proceso de Biotransformacin es la transformacin de los

agentes xenobiticos para facilitar su remocin a travs del rin y la bilis

principalmente. Sin embargo, cuando se modifica la estructura qumica del agente

xenobitico, se puede presentar en algunos casos, que se modifique la actividad
farmacolgica y en ocasiones hasta un aumento de la toxicidad, lo que se conoce
como

bioactivacin,

como

es

el

caso

de

las

sustancias

denominadas

procarcinognicas, las cuales requieren del proceso de biotranformacin para

manifestar el efecto carcinognico (Loomis, 1978; Anders, 1985).
2. Reacciones fase I.
La funcin de este tipo de reacciones, es modificar la estructura qumica de la
molcula, por introduccin de grupos funcionales como son hidroxilo, amino,
carboxilo entre otros. Tambin, se puede obtener una mayor polaridad del agente
xenobitico por exposicin de grupos funcionales como es el proceso de hidrlisis.
Posiblemente la oxidacin es la reaccin ms importante de las reacciones de fase
I; en general estas reacciones estn mediadas por el sistema de oxidacin
microsomal que contiene el citrocromo P-450, tambin conocido como sistema
oxidasa de funcin mixta, el cual requiere del cofactor nicotin-adenin-dinucletidoreducido (NADPH) como donador inicial de electrones y oxgeno molecular como
oxidante, segn se observa en la Figura 2.1 (Repetto, 1981; Klaassen et al, 1985;
Manahan, 1990).

En el esquema anterior, un electrn del NADPH se transfiere al citocromo P-450

mediante la enzima NADPH-Citrocromo P-450-reductasa. Hay que hacer notar
que el origen del citocromo

P-450, se refiere a que es una protena cromgena

que cuando se une al monxido de carbono, da una forma reducida que presenta
un mximo de absorcin espectral a 450 nm. Aunque este sistema oxidativo forma
parte de muchos tejidos del organismo, el sitio de la oxidacin de la mayora de los
xenobiticos se presenta en el retculo endoplsmico liso del hgado. Hay muchas
formas de citocromo P-450 o isoenzimas que le dan caractersticas particulares al

organismo que las contiene, presentndose una diferenciacin en el proceso de

Biotransformacin intra e interespecie.
El sistema de oxidacin microsomal con participacin de la citocromo P-450 es
inducible; as, la administracin de sustancias oxidables incrementa su actividad,
como es el caso de la administracin de barbitricos, ciertos plaguicidas entre otros
xenobiticos; lo que le confiere una adaptacin del retculo endoplsmico liso del
hgado al incremento del proceso oxidativo. El anterior sistema, adems de mediar
muchas reacciones de oxidacin; tambin, puede llevar a cabo reacciones de
reduccin, como es la conversin de los colorantes azicos a sus correspondientes
aminas, cuando se presentan condiciones anaerobias (Hodgson and Guthrie, 1980;
Timbrell, 1985).
2.1. Hidroxilacin aromtica.
La hidroxilacin aromtica, para el sistema ms simple se describe en la Figura
2.1.1, el cual es uno de los

procesos oxidativos de mayor importancia. Los

mayores productos de la hidroxilacin aromtica son fenoles, pero tambin se

pueden formar catacoles y quinoles. Consecuentemente un nmero variable de
metabolitos hidroxilados se pueden formar, lo cual depender de las caractersticas
particulares de la especie considerada.
2.2. Hidroxilacin heterocclica.
Compuestos heterocclicos con tomos de nitrgeno tales como la piridina y
quinoleina, sufren la oxidacin microsomal por hidroxilacin en la posicin 3; as,
en el caso de la quinolena, el anillo aromtico sufre la hidroxilacin en la posicin 3
pero tambin se obtiene el metabolito hidroxilado en la posicin 6 como se observa
en la Figura 2.2.1. Este tipo de reaccin es interesante, ya que sabemos que los
alcaloides tienen como caracterstica estructural, poseer un tomo de nitrgeno
heterocclico.

Otro ejemplo de hidroxilacin heterocclica lo constituye la oxidacin microsomal

del anillo de cumarina, el cual es muy comn en muchos metabolitos secundarios
de algunas plantas superiores y es la estructura bsica de un grupo de rodenticidas
que tienen efecto hemoltico. En este caso la adicin del grupo hidroxilo se lleva a
cabo en la posicin 7, s sta se encuentra libre, como se observa en la Figura
2.2.2. Tambin, hay que mencionar que algunas micotoxinas como las aflatoxinas y
ocratoxinas tienen dentro de su estructura el anillo cumarnico, por lo tanto es
factible que se lleve a cabo la hidroxilacin.

2.3 N-Dealquilacin
La N-dealquilacin es la remocin de grupos alquilo del tomo de nitrgeno y en
realidad,se podra considerar como un proceso donde se exponen los grupos
funcionales como es el grupo amino. Los grupos N-alquil son removidos
oxidativamente por conversin al correspondiente aldehdo como se observa en la
Figura 2.3.1.

2.4. N-Hidroxilacin.

La N-hidroxilacin de arilaminas primarias, arilamidas e hidrazinas, es catalizada

por el sistema de oxidacin microsomal involucrando la participacin del citocromo
P-450 y requiriendo NADPH y oxgeno molecular. As, el ejemplo ms simple es el
de la N-hidroxilacin de la anilina para producir fenilhidroxilamina como se observa
en la Figura 2.4.1. Hay que mencionar que los metabolitos formados por este
proceso oxidativo, pueden ser molculas muy reactivas.

En
este proceso oxidativo se pueden presentar algunos ejemplos de bioactivacin
como es el caso de la N-hidroxilacin del 2 acetilaminofluoreno (Figura 2.4.2) que
produce

un

potente

carcinognico

(Anders,

1985;

Timbrell,

1985).

2.5.
Desulfuracin.
La sustitucin del tomo de azufre por un tomo de oxgeno en una molcula
orgnica por oxidacin microsomal, se conoce como desulfuracin y es un proceso
comn para la Biotransformacin de los insecticidas organofosforados, los cuales
se usan ampliamente en las actividades agrcolas. En la Figura 2.5.1 se tiene un

ejemplo ilustrativo como es la desulfuracin del paratin, con lo cual se obtiene el

metabolito oxidado que tiene mayor efecto inhibidor sobre la acetilcolinestarasa.
(Timbrell, 1985; Miyamoto et al, 1988).
Este proceso de oxidacin microsomal es aprovechado en la bioactivacin de los
insecticidas organofosforados. As, tenemos por ejemplo que el Paratin tiene un
DL50 de 10 a 12 mg/Kg p.c., en tanto que el Paraoxn (metabolito desulfurado)
incrementa su toxicidad con un DL50 entre 0.6 a 0.8 mg/Kg p.c.; los anteriores
datos de toxicidad corresponden a evaluaciones en rata por va intraperitoneal.

2.6. Reacciones de oxidacin no microsomal.

Aunque el sistema de oxidacin microsomal con la participacin del citocromo P-450, es el
proceso enzimtico ms comn en la oxidacin de un compuesto extrao, hay otras vas
metablicas que pueden llevar a cabo la oxidacin de algunas molculas orgnicas como
son: la oxidacin de aminas, alcoholes, aldehidos y purinas entre otras (Timbrell, 1985;
Miyamoto et al, 1988).
En la oxidacin de aminas, hay la participacin ya sea de monoamino o diamino oxidasas,
ambas involucradas en la desaminacin tanto de aminas primarias, secundarias y
terciarias, resultando como productos sus respectivos aldehidos como se puede observar
en la Figura 2.6.1. La enzima monoamina oxidasa se localiza en las mitocondrias de varios
tejidos; en tanto que la diamino oxidasa se encuentra en el citosol de las clulas.

Aunque in vitro el sistema microsomal oxidativo ha demostrado que puede oxidar el

etanol; sin embargo, in vivo la enzima que lleva a cabo esta funcin es la alcohol
deshidrogenasa, la cual se encuentra en la fraccin soluble de varios tejidos. Los
productos de oxidacin de esta enzima, son los correspondientes aldehdos o cetonas, de
acuerdo a s son alcoholes primarios o secundarios respectivamente. Los productos
carbonlicos de la accin de la alcohol deshidrogenasa, pueden sufrir una posterior
oxidacin por la aldehidos deshidrogenasa y producir los respectivos cidos orgnicos,
como se muestra en el ejemplo de la Figura 2.6.2.

2.7. Reduccin:
Aunque el sistema de oxidacin microsomal que contiene citocromo P-450 normalmente
lleva a cabo la oxidacin xenobitica; este sistema puede funcionar como un proceso de
biotranformacin reductivo. El proceso reductivo se presenta cuando hay una baja tensin
de oxgeno molecular (baja concentracin) y por consiguiente ciertos substratos
xenobiticos pueden aceptar uno o dos electrones que son proporcionados por el sistema
microsomal con participacin del Citocromo P-450, en lugar del oxgeno. En este
panorama reductivo, incluso el oxgeno acta como inhibidor de esta ruta, ya que compite
con los substratos por los electrones; adicionalmente, los mismos productos de reduccin
son inhibidores de este sistema, ya que pueden competir con los propios sitios de unin
del Citocromo P-450 y por consiguiente detener el flujo de electrones, por lo cual este
proceso es menos efectivo que la oxidacin (Klaassen et al, 1986; Gilman et al, 1990;
Shibamoto y Bdjeldanes, 1996).
En la figura 2.7.1 se tiene esquematizado las principales reacciones de reduccin que
puede llevar a cabo el anterior sistema, recordando que esta ruta solo se presenta en un
ambiente anaerbico. En base a lo anterior, se establece que la microflora intestinal tiene
una gran influencia en este proceso de reduccin; ya que estos microorganismos tienen
su sistema de oxidacin microsomal normal, pero debido al medio en que se encuentran
(reduccin de la tensin de oxgeno), pueden llevar a cabo el proceso de reduccin en
lugar de la oxidacin (Hodgson and Guther; 1980; Klaassen et al, 1986).

4.1. Hidrlisis
Glucsidos
Los mamferos adultos carecen de glucosida sa en la mucosa, por lo que su origen
es microbiano Especialmente Streptococcus faecalis exhibe una gran actividad glucosidasa, aunque hay otros gneros que tambin la muestran en menor
intensidad (Pelkonen y Hanninen,1986).
Muchas sustancias importantes desde el punto de vista toxicolgico estn
presentes de forma natural en las plantas como glucsidos. Generalmente, no se
absorben fcilmente y por tanto son poco txicos. Sin embargo, son hidrolizados
por las bacterias intestinales a un aglucn (fraccin no glucdica) y el
correspondiente azcar. Este aglucn puede ser el responsable de la toxicidad
observada. Este es el caso, por ejemplo, de la cicasina, un glucsido natural
presente en el fruto de la responsable de los efectos txicos observados en los
consumidores de estos frutos. Los sntomas de la intoxicacin varan desde
hemorragias hasta parlisis. La ruta de administracin de la cicasina es de gran
importancia, ya que la toxicidad se produce slo cuando el compuesto se ingiere
por va oral. La sustancia responsable de los efectos txicos es el
metilazoximetanol, el aglucn liberado en la Hidrlisis de la cicasina por las
glucosidasas Bacterianas. El metilazoximetanol es absorbido puede ser
posteriormente transformado en los tejidos a metildiazonio, un agente alquilante
muy potente (Roland et al., 1993).
Los glucsidos cianognicos muestran su toxicidad tras su hidrlisis microbiana
intestinal. As, la amigdalina, el gentobisido de benzaldehido cianohidrina se
degrada a mndelo nitrilo, que se descompone a benzaldehido y cido cian- hdrico
(Figura 3.1). Reacciones similares se pueden esperar de otros glucsidos
cianognicos encontrados en otros productos alimenticios.

El alcaloide de la patata, la solanina, puede reducir su toxicidad por la hidrlisis

de la microbiota intestinal a solanidina, que es menos txica y menos absorbible.
La reaccin de degradacin inicial de los glucsidos flavonoides por las bacterias
intestinales es mediante hidrlisis. As, la hesperidina, un ramnoglucsido
encontrado en la uva, se
Hidroliza primero a hesperitina y fenil--D-glucsido. Posteriormente la degradacin
microbiana conduce a fenol. El aglucn, hesperitina, es ms liposoluble que el
compuesto original. Una situacin similar tiene lugar con la naringina, tambin
encontrada en la uva, y la rutina, que est presente en relativa gran cantidad en el
trigo y otras plantas.
Conjugados
Las sustancias absorbidas suelen conjugarse con cido glucurnico, glicina, taurina
y otros com- puestos. Estos conjugados pueden ser excretados en la bilis y luego
ser hidrolizados por los microorganismos intestinales. Los compuestos libres
pueden ser posteriormente reabsorbidos sufriendo circulacin enteroheptica. De
esta forma, la toxicidad de un compuesto puede aumentar, ya que la exposicin del
organismo al compuesto se ve prolongada (Rowland, 1988; Chadwick et al., 1992)
Ejemplos de hidrlisis de glucurnidos por las bacterias intestinales son el
dietilestilbestrol (DES) y el di-ter-butilhidroxibenzoato del BHT. La circulacin
enteroheptica de los aglucones del DES-glucurnido y BHT-glucurnido ha sido
demostrada
Los fenoles de las plantas se excretan probablemente como glucurnidos en la
bilis. De forma similar, estos glucurnidos estn sujetos a hidrlisis intestinal
microbiana previa a otro tipo de degradacin microbiana. As, el glucurnido del
cido ferlico (cido 3-metoxi-r-hidroxi cinmico) es hidrolizado por las bacterias
intestinales. El cido libre es luego reducido en el doble enlace, desmetilado y
deshidroxilado. El producto final de estas reacciones, el cido m-hidroxifenil
propinico, es absorbido y excretado en la orina.
La enzima glucuronidasa se encuentra en muchas especies de bacterias
intestinales particularmente E. coli. El alto grado de actividad glucuronidasa en el
colon y el ciego se correlaciona bien con la alta densidad microbiana en estas
reas del tracto
El cido hiprico, un conjugado con glicina del benzoato, tambin se hidroliza por
las bacterias intestinales, particularmente por especies del gnero Enterococcus.
Los benzoatos producidos, al ionizarse a pH alcalino, pueden ser pobremente
absorbidos debido al ligero pH alca- lino del colon donde tiene lugar una
significativa hidrlisis del cido hiprico.
La N-hidroxifluorenilacetamida es un carcingeno destoxicado por enzimas
hepticas y eliminadas por va biliar en forma de glucurnido. Weisburger y
colaboradores (1970) encontraron

Encontraron que la mayor parte del material excretado era desconjugado en ratas
convencionales, en con- trasposicin a lo que ocurra en ratas libres de
microorganismos. El mismo tipo de estudio explica algunas de las acciones de la
dimetilh drazina (DMH), un carcingeno usado para inducir cncer intestinal. Se
descubri que la DMH era bioactivada en el hgado a una deriva- do carcinognico
muy potente, el azoximetano (posteriormente transformado a metildiazonio).
El azoximetano es conjugado con glucurnico y secretado en la bilis, llegando de
esta forma a las bacterias intestinales. Esto puede explicar por qu su potencial
carcinognico es mucho menor en ratas libres de microorganismos. Otras
molculas que aparentemente siguen el mismo tipo de biotransformacin son el 1nitropireno, el 3,2-dimetil-4-aminobifenil, el venzo pireno, etc.
Los conjugados de la bilirrubina son hidrolizados por glucuronidasas bacterianas y
los Pigmentos
Biliares sufren circulacin enteroheptica.
Los glucurnidos de los estrgenos sufren una extensa recirculacin. La
administracin de ampicilina aumenta en gran medida la excrecin fecal de
conjugados de estrgenos debido a la disminucin del metabolismo bacteriano. .
Un efecto similar ocurre en el metabolismo de la progesterona.