CONTROL Y ANLISIS DE MEDICAMENTOS AO 2010

CMO RESOLVER PROBLEMAS DE H.P.L.C.?

Para resolver los problemas de HPLC, primero se evala la aptitud del sistema. sto se logra
mediante 2 clculos: Precisin del sistema y Contrastacin de estndares.

Veamos el primer parmetro: PRECISIN DEL SISTEMA

Se efectan 5 inyecciones sucesivas de la solucin estndar 1, obtenindose 5 valores de
rea, con los que se calcula el RSD
n

RSD

100

( Ai A)
i 1

n 1

Donde:

RSD : es la desviacin estndar relativa

Ai : es el rea del pico obtenida en cada inyeccin
A : es el promedio de las reas del pico obtenidas en inyecciones sucesivas
n : es el nmero de inyecciones
Se puede hacer el clculo con ayuda de una calculadora, para lo cual debemos trabajar en
modo SD y al valor obtenido de desvo estndar (sigma de n menos 1), multiplicarlo por 100 y
dividirlo por el promedio de las 5 reas.
Si la calculadora no les permite realizar este clculo, pueden intentar completando el siguiente
cuadro para obtener el desvo estndar SD:
Ai

A1
A2
A3
A4
A5
A

=
/(n-1)=
[/(n-1)]=

Prueben el siguiente clculo:

reas del std 1: 234.523 / 234.672 / 234.821 / 233.989 / 234.207
Debe darles:
Desvo estndar (sigma de n menos 1) = 340,4173909
Promedio de las 5 reas = 234.442,4
RSD = 0,145202996 %

Pgina 1 de 5

CONTROL Y ANLISIS DE MEDICAMENTOS AO 2010

Ahora veamos el segundo parmetro: CONTRASTACIN DE ESTNDARES

Luego de las 5 inyecciones de la solucin estndar 1, se efectan 3 inyecciones de la solucin
estndar 2, con lo que se calcula primero los factores de respuesta (rea normalizada) de los 2
estndares, y luego el cociente porcentual entre ellos.
El factor de respuesta o rea normalizada es el promedio de las reas dividido por el peso del
estndar. Debemos calcularlo para cada uno de las 2 soluciones std.
FR

A
P

Donde:
FR : es el factor de respuesta promedio del estndar
A : es el promedio de las reas del pico obtenidas en inyecciones sucesivas

P : es el peso en mg del testigo

El cociente porcentual entre estndares es el cociente entre los factores de respuesta

multiplicado por 100.
FR STD1
Contrastacin (%)
100
FR STD 2
Donde:
Contrastacion (%) : es la contrastacin de estndares relativa
FR STD1 y FR STD 2 : son los factores de respuesta promedio de cada uno de los testigos
Prueben el siguiente clculo:
Peso std 1 = 99,8 mg
reas del std 1: 234.523 / 234.672 / 234.821 / 233.989 / 234.207
Peso std 2 = 102,5 mg
reas del std 2: 240.893 / 241.624 / 241.005
Debe darles:
Promedio de las 5 reas del std 1 = 234.442,4
Factor de respuesta del std 1 = 2.349,122244
Promedio de las 3 reas del std 2 = 241.174
Factor de respuesta del std 2 = 2.352,917073
Contrastacin de estndares = 99,83871812 %

Una vez que se evalu la aptitud del sistema, ahora podemos resolver el problema.
La frmula general es la misma que la utilizada en los problemas de espectrofotometra.

Pot muestra (% sdtc )

AM PesoT AlicT
Vol M
Vol M

PotT (% sdtc )
AT
Vol T
Vol T
PesoM Alic M

Y las consideraciones para los distintos casos son iguales, ya sea que se trate de materia
prima o producto terminado slido o lquido.
NOTA:
Para los clculos se trabaja con el promedio de las reas de la solucin muestra 1, que se
compara (calcula) primero con el promedio de las reas de la solucin std 1, y luego con el
promedio de las reas de la solucin std 2.
Despus se hace lo mismo con el promedio de las reas de la solucin muestra 2.
As se obtienen 4 resultados porcentuales, a los que se les hace el promedio y se calcula la
desviacin estndar porcentual (RSD) y se informa.
Pgina 2 de 5

CONTROL Y ANLISIS DE MEDICAMENTOS AO 2010

Prueben el siguiente clculo:

VALORACIN DE UNA MATERIA PRIMA CUALQUIERA
DATOS:
Especificacin: 99,0 % 100,5 %
Potencia del std = 99,4 % sdtc
Peso std 1 = 99,8 mg
reas del std 1: 234.523 / 234.672 / 234.821 / 233.989 / 234.207
Peso std 2 = 102,5 mg
reas del std 2: 240.893 / 241.624 / 241.005
Peso muestra 1 = 200,4 mg
reas de la muestra 1: 234.023 / 233.879
Peso muestra 2 = 199,5 mg
reas de la muestra 2: 233.756 / 233.524
Humedad de la muestra por K.F. = 0,3 %
Los std fueron pesados y disueltos en 100 mL de solvente y luego se hizo una dilucin de 5,0
mL a 50 mL.
Las muestras fueron pesadas y disueltas en 200 mL de solvente y luego se hizo una dilucin de
5,0 mL a 50 mL.
La aptitud del sistema ya fue calculada:
Precisin del sistema: RSD = 0,1 %
Contrastacin de estndares = 99,8 %
Ahora el problema:
Los promedios de reas de los std ya fueron calculados:
Promedio de las 5 reas del std 1 = 234.442,4
Promedio de las 3 reas del std 2 = 241.174
Calculemos los promedios de reas de las muestras:
Promedio de reas de la muestra 1 = 233.951
Promedio de reas de la muestra 2 = 233.640
Apliquemos la frmula:
Para muestra 1 / std 1
Pot muestra (% sdtc )

233.951
99,8mg 5,0mL
200mL
50mL

99,4(% sdtc ) 98,79 %

234.442,4 100mL
50mL
200,4mg 5,0mL

Para muestra 1 / std 2

Pot muestra (% sdtc )

233.951 102,5mg 5,0mL

200mL
50mL

99,4(% sdtc ) 98,63 %

241.174
100mL
50mL
200,4mg 5,0mL

Para muestra 2 / std 1

Pot muestra (% sdtc )

233.640
99,8mg 5,0mL
200mL
50mL

99,4(% sdtc ) 99,10 %

234.442,4 100mL
50mL 199,5mg 5,0mL

Para muestra 2 / std 2

Pgina 3 de 5

CONTROL Y ANLISIS DE MEDICAMENTOS AO 2010

Pot muestra (% sdtc )

233.640 102,5mg 5,0mL

200mL
50mL

99,4(% sdtc ) 98,94 %

241.174
100mL
50mL 199,5mg 5,0mL

Sacamos el promedio de las 4 determinaciones

Potencia de la Muestra (sdtc) = 98,86 %
Determinemos el RSD de las 4 determinaciones
RSD = 0,2 %
Por ltimo sacamos el valor sobre droga seca:

Potmuestra % sds

Potmuestra % sdtc
100
100 Humedad %

Pot muestra % sds

98,86 %
100 99,2 %
100 0,3 %

Para terminar, comparamos los resultados con las especificaciones y damos la evaluacin de la
materia prima:
Parmetro

Especificacin

Resultado

Evaluacin

Precisin del Sistema

2,0 %

0,1 %

Cumple

Contrastacin de
estndares

98,0 % - 102,0 %

99,8 %

Cumple

Precisin de las
Muestras

2,0 %

0,2 %

Cumple

99,0 % - 100,5 %

99,2 %

Cumple

Valor (%sds)

El cumplimiento de los tres primeros parmetros nos indica la validez del ensayo. Si alguno de
ellos no cumpliese con la especificacin, el cuarto parmetro (Valor de la droga) no es
confiable, y no debe tomarse en cuenta para decidir sobre la aprobacin o rechazo de la droga
o producto en anlisis.
Si falla la precisin del sistema, nos indica que estamos ante una reproducibilidad pobre del
sistema. En la mayora de los casos, la causa de una reproducibilidad pobre se debe a una
falla del sistema cromatogrfico.
Suponiendo que el equipo est bajo un sistema de calificacin y mantenimiento, la falla puede
deberse a causas que tengan que ver con el acondicionamiento. Por ej.; los solventes de la
fase mvil no tienen una adecuada pureza o no han sido adecuadamente filtrados y
desgasificados; hay prdidas en algn punto a lo largo de las tuberas por donde circula la fase
mvil; no se ha esperado el tiempo suficiente para que el equipo est en rgimen antes de dar
comienzo con el anlisis.
Tambin puede deberse a causas que tengan que ver con la tcnica de uso. Por ej., no hay
una correcta carga del loop en sistemas de inyeccin manual; entre otras causas probables.
Si falla la contrastacin de estndares, estamos ante un problema de preparacin. Deber
verificarse la correcta tcnica de pesada y disolucin del estndar.
Si falla la precisin de las muestras, aqu tambin estamos ante un problema de preparacin,
por ejemplo una falta de homogeneidad de la sustancia que estamos analizando.
Si estamos realizando el ensayo de valoracin de un producto terminado, la tcnica analtica
comienza diciendo: se rene una cantidad de comprimidos (o lo que fuera), se reduce a polvo
Pgina 4 de 5

CONTROL Y ANLISIS DE MEDICAMENTOS AO 2010

fino en un mortero y se homogeniza . . .. En este caso, la falla en la precisin de las muestras,

invalida el resultado obtenido en la valoracin del producto.
Pero tambin puede darse el caso de querer determinar la homogeneidad de un granulado o
de una mezcla de polvos que nos traen de produccin, o el anlisis de uniformidad de unidades
de dosificacin. En este caso, la precisin de las muestras deja de ser un parmetro de validez
del ensayo para convertirse en un parmetro de cumplimiento del producto analizado.
Por ltimo, si los parmetros de validez del ensayo cumplen con la especificacin, la
evaluacin del resultado obtenido en la valoracin y su especificacin, nos indicar si la droga
o producto en anlisis tiene el valor requerido; esto es, si cumple o no cumple con la
especificacin. Dato que ser tenido en cuenta, junto con el resto de los anlisis, para
determinar la condicin de estado: Aprobado o Rechazado.

Pgina 5 de 5