VICERRECTORA ACADMICA

INSTITUTO DE CIENCIAS NATURALES

CURSO DE BIOQUMICA

PRACTICO N 4
INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA CQU-310

Puntaje: 60 pts / 60 pts

Nombre Alumnos

Pamela Mardones
Constanza Manqueo
Cynthia Lillo
Danalis Loyola
Maximo Toledo

Fecha

01 de Marzo de 2015

Curso

CQU 310 -

Grupo A

I.- TITULO (1 pto)

Mtodo enzimtico Glucosa- oxidasa GOD

II.-OBJETIVOS (2 pts)

Determinar la concentracin de D-glucosa en muestras problemas, utilizando el mtodo

enzimtico de la glucosa oxidasa.

III.- CLCULOS Y RESULTADOS:

a.- Datos: (1 pts)
GOD:
Absorbancia Estndar: 1,81
Absorbancia Muestra Problema 1: 2,813
Absorbancia Muestra Problema 2: 2,374
Factor de dilucin Muestra Problema 1 (fdMP1): 0.5ml
Volumen de Muestra Problema: 0.02 ml

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b.- Clculos. ( No olvidar Unidades). (20 pts)

Factor de dilucin MP1 (fdMP1) = Volumen final
=
Volumen inicial

1 ml = 2ml
0.5ml

Calcular slo muestra problema 1 y completar la tabla a continuacin (no olvidar unidades).
mg Glucosa = AbsMP x 0,05 =
AbsSTD
Concentracin de Glucosa =

2.813 x 100
1.81

= 155.24

mgGlucosa x fdMP1 = 155.24 x 0.5ml= 155.2

VolumenMP
0.5

Muestra Problema
MP 1
MP 2

Concentracin de Glucosa
500ul
500ul

IV.- ANLISIS:
a) Discusin de Resultados (25 pts.)

En este prctico con el mtodo enzimtico GOD/POD, evidenciamos que la intensidad

del color formado es proporcional a la concentracin de glucosa presente en la muestra.
En este mtodo la glucosa oxidasa cataliza a la oxidacin de la D-glucosa a acido Dgluconico con la formacin de perxido de hidrogeno, este es utilizado por peroxidasa
para oxidar a la 4-aminantipirina y al fenol, dando lugar a la quinonaimina coloreada.
Una de las limitaciones del procedimiento pueden ser las sustancias interferentes
conocidas
en la(10
muestra
como los reductores que disminuyen la respuesta al color,
b) Preguntas
pts)
mientras que los oxidantes colorean el reactivo, dichos agentes son encontrados
frecuentemente en el agua destilada empleada para preparar el reactivo del trabajo,
tambin se debe tener precaucin en el manejo del reactivo fenol que es toxico e
irritante.

Qu ventaja tiene un mtodo de determinacin de carbohidratos enzimtico respecto a

uno qumico?
El mtodo enzimtico consigue una gran especificidad,
son fcilmente aplicables al anlisis clnico ya que utiliza

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enzimas purificadas que actan selectivamente sobre la

molcula de glucosa, no interfiriendo el resto de los
hidratos de carbono o derivados que se encuentran
fisiolgicamente en los lquidos biolgicos, en cambio el
mtodo qumico carece de especificidad
El mtodo GOD/POD es directo o indirecto?. Explique.
Es un mtodo indirecto, porque es una reaccin acoplada que puede producir un
nucletido
reducido
o
un
producto
coloreado
que
puede
medirse
espectroscpicamente en donde la intensidad del color es proporcional a la
concentracin de glucosa.
En el caso de la determinacin de azcar en la bebida, Podra existir un mtodo ms
representativo?. Explique con reacciones.
Pensamos que podramos usar el mtodo de la hexoquinasa que es el mtodo de referencia y
consiste en dos reacciones acopladas, en la primera reaccin (especfica), catalizada por la enzima
hexoquinaza, se fosforila la glucosa formndose glucosa 6-fosfato. La glucosa 6-fosfato, es una
reaccin posterior (reaccin indicadora), se transforma en 6- fosfogluconato producindose NADPH (1
mol por cada molcula de glucosa). La produccin de NADPH origina un aumento de absorbancia a
esta longitud de onda ser directamente proporcional a la concentracin de glucosa.

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