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Introduo

1.1.
Mecanismo da inflamao
A inflamao uma reao do tecido vivo vascularizado a uma injuria local, ou
seja, o mecanismo de defesa (resposta protetora normal) do organismo contra uma
leso tecidual causada por agentes fsicos (trauma mecnico, radiao, calor, frio),

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qumicos (substncias irritantes, lcalis e outros) ou biolgicos, provocada por


microorganismos tais como fungos, bactrias, vrus ou protozorios. No processo de
inflamao, clulas imunologicamente competentes so acionadas e agem no sentido de
inativar ou destruir microrganismos invasores, remover substncias irritantes e protenas
antgenas, alm de iniciar a reparao tecidual. Esse processo possui quatro sinais
caractersticos, descritos h mais de 2000 anos por CELSUS: rubor, calor, tumor e dor.
Quando o processo reparatrio se completa, naturalmente o processo inflamatrio e seus
sinais desaparecem (Zanini & Oga,1994).
Muito embora este mecanismo de defesa seja geralmente benfico, efeitos
malficos indesejveis so comuns. Estes so ocasionados por uma resposta excessiva
que pode causar leso tecidual progressiva, como por exemplo, no caso das artrites,
onde o processo inflamatrio leva destruio do osso e da cartilagem, comprometendo
a funo articular. Em tais casos, frmacos antiinflamatrios ou imunossupressivos
podem ser necessrios para modular o processo antiinflamatrio.
O processo inflamatrio caracteriza-se pela sua complexidade e dinamismo, sendo
multimediado com a participao de eventos celulares e humorais interdependentes,
podendo manifestar-se de forma diversa tanto no tocante durao quanto na
intensidade da resposta inflamatria, que por sua vez depende do tipo de injria ou
estmulo nocivo. Basicamente, a reao inflamatria aguda caracteriza-se por dilatao
arteriolar, aumento de permeabilidade vascular, acmulo de leuccitos e dor. Os
leuccitos so atrados ao local da leso por mediadores inflamatrios com atividade

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quimiottica1, denominados mediadores qumicos. Os mediadores qumicos especficos


variam de acordo com o tipo de processo inflamatrio. Eles podem ser aminas, como a
histamina e a 5-hidroxitriptamina; lipdios, como as prostaglandinas; pequenos
peptdeos, como a bradicinina, e peptdeos maiores, como a interleucina-1. A descoberta
dessa ampla variedade de mediadores qumicos veio esclarecer um aparente paradoxo,
onde um frmaco antiinflamatrio ao interferir na ao de um mediador particularmente
importante em um tipo de inflamao, no afeta processos inflamatrios independentes
do mediador-alvo desse frmaco.
A inflamao desencadeada pela liberao dos mediadores qumicos originados
nos tecidos lesados e nas clulas migratrias, que provocam distrbios na membrana
celular ocasionando a ativao da fosfolipase A2 e liberao de cido araquidnico e
seus metablitos, PAF-acter (fator ativador de plaquetas) e enzimas lisossmicas.
Essas enzimas tm potente atividade citotxica e destroem clulas vizinhas, liberando
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assim novas enzimas. O metabolismo do cido araquidnico d origem a inmeras


substncias biologicamente ativas como prostaglandinas (PGs), tromboxanas (TXs),
cido hidroxieicosatetraenicos (HETEs) e hidroperoxieicosatetraenicos (HPETEs),
leucotrienos (LTs), lipoxinas (LXs) e cidos epoxieicosatetraenicos (EETs), que tem
importante papel na fisiopatologia da inflamao.
A ao antiinflamatria de muitos frmacos acontece pela inibio da sntese das
PGs, que so cidos graxos insaturados contendo 20 tomos de carbono e uma estrutura
cclica incorporada2, e o entendimento da biossntese desta substncia fundamental
para a compreenso da ao desses frmacos antiinflamatrios.
As PGs e os compostos correlatos so produzidos em quantidades nfimas em
potencialmente todos os tecidos. Em geral agem diretamente nos tecidos onde so
sintetizados, sendo rapidamente metabolizados a produtos inativos em seus stios de
ao. Assim, as PGs no circulam no sangue em concentraes significativas.
As PGs so sintetizadas a partir de um precursor primrio, o cido araquidnico.
Este cido liberado dos fosfolipdeos das membranas celulares pela ao da
fosfolipase A2, atravs de um processo controlado por hormnios e outros estmulos.

Atividade de ao atrativa ou repulsiva demonstrada por certas clulas vivas em relao a outras
clulas ou substncias que exercem uma influncia qumica.
2
Estes compostos so tambm denominados eicosanides; o prefixo eicosa refere-se aos 20
tomos de carbono.

20

Pode-se observar na Figura 1, que h duas vias principais para a sntese de PGs a partir
do cido araquidnico:

Via da cicloxigenase: As PGs, TXs e prostaciclinas (PGI2) so obtidas


atravs da ao cataltica das enzimas cicloxigenases. Foram identificadas
duas cicloxigenases, a COX-1, que constitutiva e amplamente
distribuda e a COX-2, que produzida em resposta a um estimulo
inflamatrio (Harvey et al.,1998).

Via da lipoxigenase: As lipoxigenases podem atuar sobre o cido


araquidnico para formar 5-HPEYE, 12-HPETE e 15-HPETE, que so

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derivados

peroxidados

instveis

que

so

convertidos

em

seus

correspondentes derivados hidroxilados ou, na dependncia do tecido, em


leucotrienos ou lipoxinas (Harvey et al.,1998).

Nos pacientes com artrite reumatide, provvel que a inflamao envolva a


combinao de um antgeno (gamaglobulina) com um anticorpo (fator reumatide),
causando a liberao local de fatores quimiotticos que atraem leuccitos. Os leuccitos
fagocitam os complexos antgeno-anticorpo e complemento e, como consequncia,
liberam muitas enzimas contidas em seus lisossomas. Essas enzimas lisossmicas
causam, ento, danos cartilagem e a outros tecidos, aumentando o grau da inflamao.
As PGs tambm so liberadas durante esse processo e esto envolvidas na inflamao
(Goodman & Gilman, 1987).

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Figura 1: Esquema mostrando a sntese de prostraglandinas e leucotrienos. (Fonte:


a

Farmacologia Ilustrada 2 edio Harvey et al., 1998)

A migrao de leuccitos para a rea inflamada um aspecto importante do


processo inflamatrio. No entanto pouco provvel que PGs sejam os principais
envolvidos na resposta quimiottica, pois outro produto do metabolismo do cido
araquidnico, o leucotrieno B4, uma substncia quimiottica muito potente. Outra
evidncia desse fato que a enzima lipoxigenase, que gera os leucotrienos, insensvel
s drogas tipo aspirina; portanto, concentraes dessas drogas que suprimem a formao
de PGs em geral no diminuem a migrao celular (Higgs et al., 1980). A ausncia da
migrao celular costuma ser observada com a presena de maiores concentraes de
PGs, mas a inibio da lipoxigenase no parece estar envolvida. Entretanto, as drogas
que inibem a lipoxigenase e a cicloxigenase possuem aes antiinflamatrias superiores
(Gooldman & Gilman, 1987).

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As PGs esto particularmente associadas ao desenvolvimento da dor que


acompanha leso ou inflamao. Estudos envolvendo a mensurao eletrofisiolgica da
descarga nervosa sensorial na presena de PGs indicaram que quando as PGs foram
administradas, os receptores da dor se tornaram mais sensveis a estmulos qumicos ou
mecnicos (Gooldman & Gilman, 1987).

1.2.
Antiinflamatrios no-esteroidais
Os frmacos antiinflamatrios no-esteroidais (AINEs) constituem um grupo
heterogneo de substncias, que em geral no esto relacionados quimicamente, e que
apesar disso, tem em comum certas aes teraputicas, como atividade antipirtica3,
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analgsica e antiinflamatria. Isto porque atuam na biossntese das PGs, agindo


diretamente na inibio de enzimas da via cicloxigenase, mas no na via lipoxigenase.
Em geral, estas substncias apresentam propriedades cidas com valores de pKa entre 4
e 5.
A aspirina o prottipo dos AINES; o frmaco mais usado e aquele com o qual
todos os demais agentes antiinflamatrios so comparados. Entretanto, cerca de 15%
dos pacientes mostram intolerncia aspirina. Desta forma fez-se necessrio buscar
frmacos alternativos com maior atividade antiinflamatria, menor irritao gstrica, ou
ainda de ao mais longa, diminuindo a dose diria administrada. Em geral os AINEs
mais novos so consideravelmente mais caros que a aspirina e alguns so
comparativamente mais txicos (Harvey et al., 1998).
De forma geral, a atividade antiinflamatria dos AINEs tem mecanismo similar ao
da aspirina, sendo mediada principalmente pela inibio da sntese das PGs. Em graus
variveis, todos os AINEs so inibidores da sntese de protrombina; todos so
analgsicos, antiinflamatrios e antipirticos; todos inibem a agregao plaquetria.
Todos so, tambm irritantes gstricos, embora componentes desse grupo tendem a
causar menor irritao gstrica que a aspirina.

Observa-se cada vez mais

Vale lembrar que apesar do termo "antitrmico" ser amplamente difundido, a expresso
"antipirtico" mais apropriada, pois estes frmacos no controlam qualquer aumento de temperatura,
mas apenas o aumento patolgico. Sobre a hipertermia fisiolgica (aquela que pode ser detectada ao final
de exerccio violento, p.exemplo) estes frmacos no tm qualquer efeito.

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nefrotoxicidade em associao s drogas com as quais ocorre experincia mais ampla


(Katzung, 1994).

1.2.1.
Aspirina e outros salicilatos
A aspirina um cido orgnico fraco que inativa irreversivelmente a
cicloxigenase por acetilao, processo esse peculiar entre os AINEs. Os demais AINEs
so tambm todos inibidores reversveis da cicloxigenase. Ao que parece, os AINEs
(com exceo dos mais modernos como o celecoxibe) no so seletivos sobre uma ou
outra isoenzima da cicloxigenase podendo inibir tanto a COX-1 quanto a COX-2.
A aspirina rapidamente desacetilada por esterases no organismo, dando origem
ao cido saliclico, que possui os efeitos antiinflamatrio, antipirtico e analgsico.
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Esses efeitos so essencialmente conseqncia do bloqueio da sntese de PGs nos


centros termorreguladores hipotalmicos e em stios-alvo perifricos. Alm disso, em
razo da diminuio da sntese de PGs, os salicilatos impedem tambm a sensibilizao
de receptores de dor tanto por estmulos mecnicos como qumicos.

1.2.2.
Derivados dos cidos propinico
O ibuprofeno, que foi sintetizado em 1974, foi o primeiro desta classe de agentes
a estar disponvel nos Estados Unidos, surgindo em seguida o naproxeno, fenoprofeno,
cetoprofeno, flurbiprofeno, fembufeno, indoprofeno, suprofeno e oxaprozin. Estes
frmacos so inibidores reversveis da cicloxigenase.

1.2.3.
Derivados dos cidos indol-acticos
Neste grupo de frmacos est a indometacina alm de outros, que atuam inibindo
reversvelmente a ciclogenase. A indometacina que a droga mais conhecida do grupo e
apresenta atividade antiinflamatria maior que a aspirina, porm inferior aos
salicilatos em relao a doses toleradas pelos pacientes com artrite reumatide, atua
tambm como analgsico e antipirtico.

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1.2.4.
Derivados das oxicanas
O piroxicam uma das mais novas drogas antiinflamatria com potencial
analgsico e antipirtico introduzida na prtica clinica. Nas doses recomendadas, o
piroxicam parece ser equivalente aspirina, indometacina ou naproxeno no tratamento
em longo prazo de artrite reumatide ou osteoartrite. A droga mais bem tolerada que a
aspirina ou a indometacina e, portanto, parece ser equivalente aos derivados do cido
propinico nesse aspecto. A principal vantagem do piroxicam a sua meia-vida
prolongada o que permite a administrao de uma nica dose diria. Os derivados das
oxicanas so inibidores reversveis da cicloxigenase.

1.2.5.
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Outros AINEs no-seletivos


Os derivado dos fenamatos (cido mefenmico e o meclofenamato) no
apresentam vantagens sobre outros AINEs como agentes antiinflamatrios. Os
derivados pirazolnicos como a fenilbutazona so potentes agentes antiinflamatrios,
porm seus efeitos analgsicos e antipirticos so discretos. O diclofenaco mais
potente que a indometacina ou naproxeno. A tolmetina e nabumetona so to potentes
quanto a aspirina, porm com a vantagem de apresentar menos efeitos adversos. J o
cetorolaco tem ao similar aos outros AINEs.

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1.2.6.
AINEs seletivos
Como se pode observar todos os AINEs possuem vantagens e desvantagens uns
em relao aos outros (Figura 2), desta forma a escolha do frmaco aplicvel a cada
tratamento uma combinao de necessidades e resposta teraputica particular a cada
paciente. Um determinado frmaco pode promover uma resposta teraputica em um
determinado paciente e no ser eficiente em outro que esteja sofrendo da mesma

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molstia.

Figura 2: Vantagens e desvantagens dos AINEs. (Adaptado de Harvey at al., 1998)

Pesquisas mais recentes levaram ao desenvolvimento de um grupo de frmacos


antiinflamatrios seletivos. Como j foi dito, as ciclooxigenases (COXs) so enzimas
que catalisam o primeiro estgio da biossntese das prostaglandinas provenientes do
cido araquidnico. Os AINEs inibem de forma no seletiva a formao das duas
isoformas da COXs, em teoria a inibio seletiva da COX-2 poderia trazer vantagens,
pois esta isoforma estaria confinada aos tecidos inflamados. Desta forma, novos AINEs
vem sendo desenvolvidos como por exemplo o celecoxibe (4-[5-(4-metilfenil)-3(trifluorometil)-1H-pirazol-1-il]benzenesulfonamide)

(Brutigam

et

al.,

2001;

Schnberger et al., 2002; Saha et al., 2002), e outros de sua famlia, que so inibidores
da COX-2. Estes frmacos esto sendo amplamente utilizado em tratamentos de

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osteoartrites e artrite reumatide. Dados clnicos mostram tambm uma maior tolerncia
gstrica quando comparados aos AINEs no-seletivos.

1.3.
Antiinflamatrios esteroidais - Corticosterides
Os corticosterides so substncias endgenas que esto quimicamente
classificadas como esterides, e so originalmente identificados no crtex da glndula
adrenal. A glndula adrenal na verdade consiste em duas pequenas glndulas dispostas
acima dos rins. A poro externa da glndula adrenal, o crtex adrenal, essencial para
a vida. Sua origem embriolgica completamente diferente daquela da medula adrenal.
O crtex adrenal produz vrios hormnios potentes, todos derivados esterides
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possuindo o ncleo ciclopentanoperidrofenantreno caracterstico.


Estes hormnios esterides so agrupados em 3 classes gerais, cada uma com
funes caractersticas:

(1)

Os glicocorticides, que atuam primariamente no metabolismo das


protenas, carboidratos e lipdeos.

(2)

Os mineralocorticides, que atuam primariamente no transporte de


eletrlitos e na distribuio de gua nos tecidos.

(3)

Os andrognios ou estrognios, que atuam primariamente sobre as


caractersticas sexuais secundrias em seus rgos alvos especficos.

No ser humano, o principal glicocorticide o cortisol (ou hidrocortisona),


enquanto o mineralocorticide mais importante a aldosterona.

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1.3.1.
Ao antiinflamatria
Os glicocorticides tm a capacidade de modificar o processo inflamatrio dos
tecidos que ao serem agredidos apresentam um extravasamento de fluidos intracelulares
para o espao peri-tecidual; em seguida a rea invadida por leuccitos e se inicia o
processo de cicatrizao com a formao de cogulo. As doses farmacolgicas de
cortisol e seus anlogos tm a propriedade de limitar esse processo, sendo que esses
efeitos levam a encobertar processos infecciosos em pacientes que fazem uso dessas
substncias por longo tempo. No entanto, tira-se vantagem desse mesmo mecanismo no
tratamento da artrite reumatide, como foi demonstrado por HENCHI & KENDAL em
1949 (Zanini, 1994).
Essa propriedade teraputica de reduzir dramaticamente a resposta inflamatria e
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suprimir a imunidade a mais importante dos glicocorticides. O mecanismo exato


complexo e no totalmente compreendido. Entretanto, sabe-se que a diminuio e a
inibio dos linfcitos e macrfagos perifricos tm participao no processo. H
tambm evidncias substanciais de que os glicocorticides induzem a sntese de uma
protena que inibe a fosfolipase A (devido elevao esteride-dependente da
lipolicortina) e, portanto, diminui a liberao de cido araquidnico dos fosfolipdios
(como mostrado na Figura 1), o que diminui a formao de PGs, leucotrienos e
compostos correlatos, que tem papel importante na quimiotaxia4 e na inflamao.
Em termos clnicos, a administrao de corticosterides pelos seus efeitos
antiinflamatrio uma terapia paliativa, pois a causa subjacente da doena permanece e
as manifestaes antiinflamatrias so meramente suprimidas. Essa supresso da
inflamao e suas conseqncias tornaram os corticosterides agentes teraputicos
valiosos e, de fato, s vezes salvadores. Porm tambm esta propriedade que lhes d
um potencial quase nico de desastre teraputico. Os sinais e sintomas da inflamao
so expresses do processo patolgico que indica o diagnostico e permite uma avaliao
da eficcia do tratamento. Eles podem estar ausentes em pacientes tratados com
glicocorticides. Esta situao foi resumida no cruel e jocoso dito de que os
corticosterides, quando mal empregados, fazem com que o paciente v andando para a
sala de autopsia! (Gooldman & Gilman, 1987).

Ao atrativa ou repulsiva demonstrada por certas clulas vivas.

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Os glicocorticides so utilizados tambm no tratamento dos sintomas das reaes


alrgicas a frmacos, soro e transfuses, da asma brnquica e da rinite alrgica.
Entretanto, estes frmacos no so curativos, um exemplo o uso do dipropionato de
beclometasona e a triancinolona que so aplicados topicamente na mucosa do trato
respiratrio superior por inalao reduzindo os efeitos sistmicos da doena.(Harvey et
al., 1998).

1.3.2.
A qumica dos glicocorticides
Todos os hormnios esterides tm um anel ciclopentanoperidrofenantreno como
seu ncleo qumico. Este anel de 4 membros, e seu sistema convencional de numerao
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so ilustrados na estrutura do cortisol ou hidrocortisona (Figura 3).


A maioria dos esterides naturais contm cadeias laterais alcolicas e, por esta
razo, so indicados como esteris. possvel ainda uma grande variedade de formas
isomricas dos esterides: a unio dos anis A e B pode ter uma configurao trans ou
cis. J os estrognios no apresentam esta forma de isomeria porque seu anel A
aromtico. Hidrognios ou outros grupos podem estar ligados aos anis com uma
orientao acima (b-) ou abaixo (a-) do plano do anel.

Figura 3: Estrutura molecular da hidrocortisona (cortisol).

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Cerca de 50 esterides cristalinos foram isolados da adrenal, mas apenas oito, ao


que se sabe, possuem atividade fisiolgica. Os mais importantes so: cortisona,
hidrocortisona (cortisol, 17-hidroxicorticosterona), aldosterona, e os dois andrognios,
androstenediona (androst-4-ene-3,17-diona) e desidroepiandrosterona. O cortisol o
principal hormnio adrenocortical livre circulante no plasma humano. O nvel normal
de cortisol no plasma de 12 mg dL-1. Os demais hormnios esterides encontram-se no
plasma humano em concentraes relativamente pequenas (Harper et al., 1982).
Estruturalmente, glicocorticides apresentam grupos polares, hidroxilas ou
cetonas conjugadas, na posio 3 (anel A) e uma cadeia lateral hidroxicetnica na
posio 17 (anel D). Grupos cetona ou hidroxila so tambm comuns na posio 11
(anel C). Alguns glicocorticides sintticos apresentam substituies na posio 16,
como a dexamentasona (R = OH) e a triancinolona (R= CH3). O metabolismo de

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glicocorticides envolve, normalmente, a hidroxilao da posio 6, como no 6 hidroxicortisol e a reduo dos grupamentos cetona presentes na posio 3, como no
tetraidrocortisol e na tetraidrocortisona.

1.3.3.
Glicocorticides sintticos
Devido ao extenso uso dos corticosterides no tratamento de doenas
inflamatrias e alrgicas, muitas pesquisas foram desenvolvidas na tentativa de
sintetizar derivados que apresentassem aumento das propriedades teraputicas, ao
mais especfica, limitaes dos efeitos adversos e maior potncia. As modificaes na
molcula podem resultar em (i) uma afinidade aumentada do anlogo de esterides para
a protena receptora no citosol, (ii) no aumento da capacidade do complexo esteridereceptor para agir a nvel nuclear, e (iii) na degradao mais lenta no organismo. De um
modo geral, as modificaes de estrutura da hidrocortisona levaram a aumentos na
proporo entre potncia antiinflamatria e retentora de sdio, de tal modo que, em
vrios dos derivados atualmente disponveis, os efeitos eletrolticos adversos no tm
conseqncias srias, mesmo quando estes derivados so administrados em doses mais
altas. As alteraes na estrutura molecular podem modificar o potencial biolgico, como
resultado de alteraes na absoro, na ligao protica, na taxa de transformao

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metablica, na taxa de excreo, na capacidade de atravessar membranas e na eficcia


intrnseca da molcula em seu local de ao.
No entanto estas modificaes estruturais da molcula esteride, com
caractersticas de aumento da atividade antiinflamatria, freqentemente podem
acarretar em novas propriedades indesejveis, tais como o efeito retentor de sal (no caso
de derivados halogenados) e mascaramento dos processos infecciosos, osteoporose,
astenia, abaixamento do limiar cerebral etc.
O mecanismo de ao desses corticosterides sintticos semelhante ao dos
compostos naturais e suas diferenas de potncia se devem principalmente ao aumento
da meia-vida e atraso na sua catabolizao ao nvel heptico. A ttulo de ilustrao, a
meia-vida da hidrocortisona de 98 minutos e a dos sintticos, prednisolona e
dexamentasona de 200 minutos (Harper et al., 1982).
Observando a Figura 3 e 4, pode-se entender as modificaes do ncleo pregnano
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que tm valor como agentes teraputicos. Os locais moleculares de alterao so


mostrados, em linhas escuras e letras.
Anel A. A ligao dupla 4,5 e a 3-cetona so, ambas, necessrias para a atividade
adrenocorticosteride tpica. A introduo de uma ligao dupla 1,2. como na
prednisona ou prednisolona, aumenta a proporo entre a potncia reguladora de
carboidrato e a de reteno de sdio. Alm disso, a prednisolona metabolizada mais
lentamente que o cortisol.
Anel B. A introduo de uma dupla-ligao 1-2, a metilao na posio 6 ou a
halogenao, modificam a atividade antiinflamatria. A substituio 6a tem efeitos
imprevisveis. No caso particular do cortisol, a metilao 6a aumenta os efeitos
antiinflamatrios, a eliminao de nitrognio e a reteno de sdio nos seres humanos.
Por outro lado, a 6a-metilprednisolona tem potncia antiinflamatria ligeiramente
maior e potncia reguladora de eletrlitos menor do que a prednisolona. A adio de
flor na posio 9a acentua todas as atividades biolgicas dos corticosterides,
aparentemente pelo seu efeito de retirada de eltrons no grupo 11b-hidroxi.
Anel C. A presena de um oxignio em C 11 indispensvel para uma potncia
antiinflamatria significativa e reguladora de carboidratos, mas no necessria para
elevada potncia retentora de sdio, como demonstrado pela desoxicorticosterona.

31

Anel D. A 16-metilao ou hidroxilao elimina o efeito de reteno de sdio, mas


modifica muito ligeiramente a potncia relativa aos efeitos sobre o metabolismo e a
inflamao.
Todos os esterides antiinflamatrios atualmente usados so compostos 17ahidroxi. Embora alguns efeitos reguladores de carboidratos e antiinflamatrios possam
ocorrer em compostos 17-desoxi, a expresso mxima dessas atividades requer a

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presena do substituto 17a-hidroxi.

Figura 4: Relao entre estrutura e atividade dos corticosterides. As linhas e letras claras
indicam caractersticas estruturais comuns a compostos que tm ao antiinflamatria. Os
pontilhados escuros e letras escuras indicam modificaes que aumentam ou suprimem
atividades caractersticas. (De Liddle, 1961. Cortesia do Clinical Pharmacology and
Therapeutics.)

O corpo tem mais dificuldade de metabolizar e eliminar os corticosterides


sintticos, por isso, estes possuem efeito mais prolongado e potncia elevada.
Provavelmente, a molcula modificada tenha menos tendncia a ser fixada pelos
sistemas enzimticos presentes. Desta forma o incio da sua atividade imediato, porm
a durao da ao varia, dependendo do frmaco. A Tabela 1 mostra que a
hidrocortisona e a cortisona so de durao curta e requerem doses fracionadas vrias
vezes ao dia para manter o efeito. Os corticosterides de mdia e longa ao
administrados via oral suprimem a liberao de adrenocorticides, mesmo em terapia de
dias alternados. Algumas das aes biolgicas dos corticosterides possibilitam medidas

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quantitativas e so expressas em relao a ao da hidrocortisona que considerada 1


para atividade antiinflamatria e atividade retentora de sal.
Tabela 1: Potncia relativa de alguns corticosterides (Katzung,1994; Harvey et al., 1998).

Atividade1
Corticosteride

Atividade1

antiinflamatria retentora de sdio

Equivalncia
quanto dose
oral (mg)

Ao curta
Hidrocortisona

1,0

1,0

20

Cortisona

0,8

0,8

25

Prednisona

4,0

0,3

Prednisolona

5,0

0,3

Metilprednisolona

5,0

Muito fraca

5,0

Muito fraca

30,0

Muito fraca

0,75

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(cortisol)

Ao intermediria
Triancinolona
Ao prolongada
Dexametasona
1

Potencia relativa a ao da hidrocortisona, que considerada igual a 1.


Os corticosterides antiinflamatrios so valiosos no tratamento de doenas

crnicas que ocorrem periodicamente e na ausncia de uma causa conhecida, como


artrite, tendinite, bursite, conjuntivite ou dermatite. Estes frmacos devem ser
administrados localmente, sempre que possvel, ao invs da via sistmica. Pois mesmo
que haja alguma absoro, o baixo nvel de corticosteride sistmico preserva a
integridade do crtex ao mesmo tempo em que mantm um alto nvel local da droga.

33

1.3.4.
Triancinolona Acetonido
A triancinolona acetonido5 (Figura 5) um corticosteride sinttico derivado do
cortisol, que difere pela presena de uma dupla-ligao entre os tomos de carbono 1 e 2
do anel A e a adio do flor na posio 9. A presena da insaturao e do halognio na
molcula prolonga a meia-vida deste frmaco em mais de 50 % em relao a
hidrocortisona.
A

triancinolona

tem

outros

sinnimos

tais

como

9a-fluor-16a-

hidroxiprednisolona e fluoxiprednisolona. Seu nome qumico segundo IUPAC,1979,


9a-fluor-11b,16a,17a,21-tetrahidroxipregna-1,4-diene-3,20-dione

ligada

um

grupamento acetonido, apresenta frmula estrutural C24H31FO6 e peso molecular de


434,5. um p branco ou levemente amarelado cristalino, com ponto de ebulio de
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277oC. solvel em etanol e metanol, relativa solubilidade em acetona e clorofrmio e


praticamente insolvel em gua (The Pharmaceutical Society of Great Britain,1986).
CH2OH
CH3

OH
CH3

O
O
O

C(CH3)2

F
O

Figura 5: Estrutura molecular da triancinolona acetonido

As potncias relativas de atividade antiinflamatria e de atividade retentora de


sdio da triancinolona so mostradas na Tabela 1, considerando a hidrocortisona como
referncia, este glicocorticide favorecido por um aumento da atividade
antiinflamatria.
Os derivados acetonido-substitudos apresentam atividade de superfcie
aumentada e so teis em dermatologia. Alm disso, a triancinolona acetonido til no
tratamento tpico da rinite alrgica, estando disponvel na forma de sprays nasais ou
sendo empregada por inalao.

34

1.3.5.
Prednisolona
A prednisolona (Figura 6) difere de seu anlogo a cortisona, somente pela
presena de uma dupla-ligao entre os tomos de carbono 1 e 2, o que altera as suas
atividades farmacolgicas.
As potncias relativas de atividade antiinflamatria e de atividade retentora de
sdio da prednisolona so mostradas na Tabela 1, considerando a hidrocortisona como
referncia, este glicocorticide favorecido por um aumento da atividade
antiinflamatria, alm disto seu metabolismo mais lento que o da hidrocortisona
(Goodman,1987). A prednisolona tambm pode ser administrada na forma de uma prPUC-Rio - Certificao Digital N 0212136/CA

droga, como o caso da prednisona, que rapidamente convertida em prednisolona no


organismo.
CH2OH
OH

CH3

O
OH

CH3

Figura 6: Estrutura molecular da prednisolona

O nome qumico da prednisolona, segundo IUPAC (1979), 11b,17a,21trihidroxipregna-1,4-diene-3,20-dione, sendo tambm conhecida pelos sinnimos 1,2dehidrohidrocortisona, deltahidrocortisona e metacortandralone. A prednisolona
apresenta frmula estrutural C21H28O5 e peso molecular de 360,4, sendo um p branco,
higroscpio e cristalino, com ponto de ebulio entre 230 a 235oC (com decomposio).
solvel em dioxano e metanol, relativa solubilidade em etanol e clorofrmio e
praticamente insolvel em gua (The Pharmaceutical Society of Great Britain,1986).

Utilizou-se como referncia nomenclatura utilizada pelo Dicionrio de especialidades


farmacuticas, 32a edio 2003/04.

35

1.3.6.
Corticosteride pela viso do doping
A principal utilizao de glicocorticides em desacordo com a sua destinao
mdica est relacionada dopagem esportiva, tanto em humanos como em animais
(especialmente cavalos de corrida). A principal razo para a utilizao de
glicocorticides est relacionada sua ao antiinflamatria e analgsica. A utilizao
destes frmacos permite a participao de atletas (e animais) com leses articulares em
provas esportivas reprimindo provisoriamente a dor e a inflamao. Disto resultam
conseqncias graves para o atleta, estas, freqentemente irreversveis. Assim, o Comit
Olmpico Internacional (COI) restringe a utilizao sistmica de glicocorticides de
modo que as administraes pelas vias oral, retal, intravenosa e intramuscular ficam
proibidas. Administraes intra-articulares e tpicas so permitidas, desde que
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previamente declaradas por um mdico responsvel. Em cavalos de corrida o uso de


glicocorticides proibido, segundo o Cdigo Nacional de Corridas.

1.4.
Controle de qualidade dos medicamentos
At o sculo XIX predominava, amplamente, na teraputica, o uso de drogas, ou
seja, os princpios ativos de produtos naturais na forma de preparaes brutas. A partir
daquele sculo, com o desenvolvimento das tcnicas de isolamento de substncias puras
dos produtos naturais, e tambm dos mtodos de elucidao das estruturas qumicas, foi
possvel isolar e identificar os princpios ativos dos produtos naturais usados na
medicina popular.
Foi apenas na primeira metade do sculo XX, com o desenvolvimento da sntese
orgnica, que se observou a fase urea da evoluo da farmacologia, com o
desenvolvimento de numerosos frmacos, que modificaram a medicina. Os frmacos de
origem sinttica foram, paulatinamente, substituindo os de origem natural, de tal forma
que passaram a dominar amplamente.

36

O aumento de novos frmacos introduzidos no mercado foi vertiginoso at o


incio da dcada de 1960, quando, a partir da Tragdia de Talidomida6, as regras para
a aprovao de novos medicamentos para uso comercial ficaram muito mais rgidas. A
qualidade, a segurana e a eficcia dos produtos farmacuticos so uma preocupao
constante dos rgos sanitrios de todos os pases, sendo o setor pblico, por meio de
agncias governamentais (Federal Drug Administration, FDA, nos Estados Unidos da
Amrica e a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, ANVISA, no Brasil)
responsveis pela definio dos parmetros de qualidade, estabelecimento de regras,
bem como pela fiscalizao do seu cumprimento (Rosenberg, 1997).
Dos novos frmacos introduzidos na teraputica nos ltimos anos, a grande
maioria de origem sinttica (Cheng, 1995,1996; Galatisis, 1997,1998). Segundo dados
da Organizao Mundial de Sade, em 1985 existiam 253 frmacos considerados
essenciais, onde 123 (48 %) eram obtidos por sntese total. J em 1991, no mercado
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farmacutico mundial, encontravam-se disponveis 866 frmacos, dos quais 680 (78,6
%) eram de origem sinttica.
Os novos frmacos so descobertos ou planejados por um ou mais dos seguintes
processos ou estratgias: ao acaso, triagem emprica, extrao de fontes naturais,
modificao molecular e planejamento racional. O mtodo da modificao molecular ,
no momento, o que mais contribui para a introduo de novos frmacos na teraputica.
Este mtodo consiste na modificao estrutural de uma substncia com determinada
atividade farmacolgica, denominado prottipo, visando obter frmacos com vantagens
sobre o dito prottipo. Em geral buscam-se princpios ativos mais potentes, com menos
efeitos colaterais e com maior especificidade (Reis, [19--]). Evidentemente, as
modificaes dos grupos funcionais ou da estereoqumica de uma substncia acarretam
em mudanas nas ligaes frmaco-receptor e, conseqentemente, na atividade.
preciso tambm considerar que as propriedades farmacocinticas (absoro, transporte,
metabolismo e excreo) so tambm alteradas em relao ao prottipo, pois estas so
dependentes das caractersticas fsico-qumicas da molcula e portanto da estrutura
qumica.
Os corticosterides possuem vrias propriedades requeridas para cobrir extenso
campo de aplicao teraputica, como atividade antiinflamatria e antialrgica, por isso
6

A talidomida foi utilizada na dcada de 60 para diminuir a nusea e o vomito durante a gestao,
o que levou ao nascimento de crianas com malformaes congnitas.

37

diversos produtos foram desenvolvidos a partir de frmacos sintticos provenientes do


prottipo cortisol (hidrocortisona). Estes so lanados no mercado em diversas
apresentaes: comprimidos, solues orais, solues oftalmolgicas, solues
injetveis, aerossis e uma vasta gama de produtos para uso tpico, como pomadas,
cremes e ungentos. Estas formulaes podem ser encontradas na forma pura ou
associadas a outros frmacos. Existe ainda, alm dos medicamentos ditos de marcas
tradicionais, o medicamento genrico dos glicocorticides. O medicamento genrico
uma alternativa que os grandes laboratrios farmacuticos empregam, visando diminuir
seu custo para o consumidor, e so produtos vendidos pelo nome de seu princpio ativo,
com caractersticas farmacolgicas exatamente iguais as de marcas tradicionais. No
Brasil, pequenos e mdios laboratrios foram credenciados pelo Ministrio da Sade
para a produo de genricos. Atualmente, segundo a ANVISA, existem no Brasil cerca
de 427 medicamentos genricos, sendo que muitos outros esto espera de registro para
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serem lanados. Para serem autorizados, esses medicamentos passam por ensaios de
qualidade que, mesmo aps a sua aprovao, devem ser feitos periodicamente para que
a presena do(s) princpio(s) ativo(s), em quantidades equivalentes aos dos
medicamentos de referncia, seja comprovada. Tais ensaios de monitoramento
requerem metodologias analticas simplificadas, muitas vezes com um grau de
seletividade e sensibilidade apuradas alm de especficos para cada medicamento
comercial, j que cada um possui uma composio especfica.
Na indstria farmacutica a importncia e o rigor com o controle de qualidade so
bem maiores, devido os aspectos morais e ticos que esto relacionados com a produo
de medicamentos. Qualquer falha no processo produtivo de medicamentos pode traduzir
em risco para o paciente, podendo evoluir desde a ineficcia, toxicidade ou at mesmo
morte. Assim, faz-se necessrio um controle rigoroso dos produtos colocados no
mercado, sendo a ANVISA o rgo encarregado de efetuar esta fiscalizao, com poder
de suspender a comercializao do medicamento caso seja identificado algum problema,
seja este um defeito de fabricao ou uma falsificao. A ANVISA estabelece regras
que garantem as atividades e inocuidades dos medicamentos e correlatos e de
cosmticos disponveis no mercado, passando pelo aprimoramento dos processos de
pesquisa laboratorial testes de eficcia e toxicidade (Zanini, 1994). Os lotes produzidos
devem apresentar caractersticas idnticas a um lote padro e o produto deve possuir
estabilidade definida mediante estudos com metodologia adequada (Prista, 1988; Brasil,
1983).

38

Com o desenvolvimento de novas tcnicas analticas o controle de qualidade


evoluiu significativamente. Inicialmente s havia preocupao com a matria-prima e o
produto acabado, nas ultimas dcadas assumiu-se um maior dinamismo passando a
controlar as diversas etapas da produo, caracterizando-se mais como um processo
preventivo que visa alcanar um produto final com a devida qualidade (Reis, [19--]).
Desta forma importante que metodologias analticas estejam em constante
desenvolvimento, visando melhoria da anlise em termos de: sensibilidade,
seletividade, praticidade e custo.
Dentre os parmetros farmacopicos importantes esto:
(1) a identificao do frmaco que deve ser feita por mtodos fsico-qumicos ou

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qumicos adotando metodologias descritas nas farmacopias (Reis,1999).


(2) o doseamento, que realizado por meio de tcnicas analticas fsico-qumicas,
microbiolgicas e biolgicas descritas nas farmacopias. Em todas as formulaes
farmacuticas, necessrio determinar o teor e potncia do frmaco, atravs do
doseamento. Com o doseamento verifica-se se o medicamento est com o teor e
potncia ativa dentro dos limites estabelecidos de variao em relao ao valor
rotulado nos cdigos farmacuticos. Em casos de associaes, deve ser realizado o
doseamento dos frmacos separadamente (Reis, 1999).

39

1.5.
Metodologias analticas aplicadas determinao da prednisolona e
triancinolona acetonido
As metodologias analticas utilizadas para a determinao de glicocorticides,
destinam,-se a analisar estes frmacos em formulaes farmacuticas visando o controle
de qualidade dos medicamentos. Em matrizes biolgicas a aplicao analtica d suporte
ao controle de dopagem, assim como no monitoramento de pesquisas envolvendo estes
frmacos. Os pesquisadores tm-se concentrado mais no desenvolvimento de mtodos
analticos para fluidos biolgicos, principalmente em urina por ser de fcil coleta, e por
estar disponvel em maior quantidade. A principal dificuldade nestas anlises que na
maioria das vezes, apenas uma pequena quantidade do frmaco excretada na forma
inalterada, enquanto que a maior parte pode estar presente como produto de
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biotransformao. Alm disso, corticosterides sintticos mais recentes so excretados


muito lentamente, sendo liberados em pequenas quantidades. Desta forma faz-se
necessrio a existncia de metodologias analticas mais sensveis.
Para anlise de triagem em controle de dopagem os mtodos imunolgicos (Neto
et al., 1996), como a tcnica de radioimunoensaio (RIA Radioimmonoassay) e ELISA
(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), so muito indicados uma vez que apresentam
alta sensibilidade e especificidade, necessitando de pequeno volume de material
biolgico e sem tratamento prvio da amostra. Porm, faz-se necessrio o uso de
metodologias de confirmao, com nveis de sensibilidade compatveis com a tcnica de
imunoensaio, para complementar os resultados da anlise.
Ao longo das ltimas duas dcadas, tcnicas analticas como a cromatografia
lquida com deteco na regio do ultravioleta (HPLCUV), cromatografia lquida
acoplada espectrometria de massas (HPLCEM) e cromatografia a gs acoplada
espectrometria de massas (CGEM) tm sido empregadas na deteco de esterides
polifuncionais (Pereira et al., 2002).
Os mtodos aplicados a HPLC-UV, tem sido os mais utilizados para determinao
de glicocorticides (Doppenschmitt et al.,1995; AbuRuz et al., 2003; Cho et al., 2003),
no entanto esta tcnica apresenta como maiores limitaes a baixa sensibilidade,
havendo a necessidade de um eficiente tratamento da amostra (para extrao e prconcentrao do analito) que muita vezes no seletivo. Como alternativa para um
melhor desempenho da determinao por HPLC-UV, Neto et al. (1996) sugerem uma

40

tcnica de extrao slido-lquido utilizando colunas de imunoafinidade, o que permite


uma extrao seletiva com boa recuperao e pr-concentrao da amostra,
proporcionando um aumento na sensibilidade do mtodo.
O emprego da tcnica de cromatografia a gs acoplada espectrometria de massas
(CGEM) na anlise de glicocorticides preconiza a adoo de uma etapa de derivao
na preparao da amostra, uma vez que a ramificao hidroxicetnica na posio 17
torna os analitos passveis de termodegradao (Baillie & Brooks, 1972). Tm-se
desenvolvido vrios trabalhos na tentativa de estabelecer um agente de derivao
realmente eficiente, como no caso do estudo de Pereira et al. (2002) que utiliza N,O-bistrimetilsililtrifluoroacetamida (BSTFA) e o N-metil-N-trimetilsililtrifluoroacetamida
(MSTFA) como agentes de silanizao em presena de catlise cida e bsica.. No
entanto, a falta de um procedimento eficiente na derivao dos corticosterides tem
levado pesquisadores a evitar o uso da cromatografia gasosa em mtodos de rotina. Com
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o avano tecnolgico, mtodos altamente especficos, utilizando HPLC-EM ou at


mesmo HPLC-EM-EM (cromatografia em duas dimenses), tem sido propostos para
deteco de corticosterides (Teale et al., 2003; Gotzmann et al., 2003; koupai-abyazani
et al.,1995). Estas tcnicas possibilitam a identificao da substncia e sua determinao
com alta sensibilidade, porm o custo muito alto.
Os mtodos desenvolvidos para anlise destes frmacos em urina e sangue (ou
plasma sangneo) giram em torno da cromatografia lquida, alguns trabalhos podem ser
citados (Cho et al., 2003; Doppenschmitt et al., 1995; AbuRuz et al., 2003) em que as
metodologias

utilizadas

envolvem

extrao,

da

prednisolona,

prednisona

hidrocortisona, da matriz com solvente orgnico (extrao lquido-lquido) ou ainda


extrao em fase slida analisando o extrato em HPLC-UV, obtendo limites de
quantificao (LQ) de 2 11 ng mL-1. Na cromatografia em fase gasosa com detector
de massas podemos citar estudos feitos por Amendola (2003), que desenvolve uma
metodologia de triagem e confirmao para 6 glicocorticides endgenos e 17
sintticos, em urina humana, por derivao. Foram testados procedimentos com
diferentes misturas de reagentes derivatizantes, utilizando a energia de microondas
como fonte de calor. Esta metodologia obteve LDs para os glicocorticides sintticos na
faixa de 3 25 ng mL-1, sendo 4 e 3 ng mL-1 para prednisolona e triancinolona
acetonido, respectivamente. No entanto esta metodologia trabalhosa e longa por ter
que se lidar com toda a problemtica da reao de derivao. Rodchenkov (1988, 1998,
1990), tem estudado mtodos analticos para a determinao dos metablitos da

41

prednisolona, triancinolona acetonido e de outros glicocorticides sintticos, tambm


utilizando reaes de derivao e posterior separao e deteco por CG-EM.
Trabalhos mais recentes substituem a CG-EM por HPLC-EM ou ainda HPLCEM-EM, acabando com a necessidade de se formar derivados destas molculas que
apresentem maior estabilidade trmica.
Na rea de controle de dopagem, em humanos (Frerichs, 2004) e cavalos (Popot et
al., 2003; Gotzmann et al., 2003; Teale et al., 2003), a tcnica de HPLC-EM j esta
sendo muito utilizada, visando necessidade de mtodos sensveis, seletivos,
reprodutivos e confiveis, como demonstra Gaillard (1999) que trabalhou com urina e
cabelo de ciclistas para determinao de anfetaminas, anabolizantes e corticosterides
(dentre eles a prednisolona e triancinolona acetonido) utilizando HPLC-EM-EM e CGEM.
Uma alternativa para determinao destes frmacos a utilizao de mtodos
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espectrofluorimtricos e por quimiluminescncia. Iglesias et al. (2002) utilizou luminol


como reagente, para determinao de prednisolona e triancinolona em plasma por
HPLC, com limites de deteco na ordem de 2 15 ug mL-1. Outros trabalhos tm sido
desenvolvidos para prednisolona em plasma com reagentes fluorognicos e posterior
anlise por HPLC-fluorescncia, o caso de Yamaguchi et al., 1991, que utiliza
metilenodioxibenzeno (DMB), a obteve LD de 3 ng mL-1 , porm, essa metodologia no
se mostrou eficiente para triancinolona. J Katayama et al., 1993 utiliza uma prderivao em linha com 2-(4-carboxifenil)-5,6-dimetilbenzimidazole (CDB) e Shibata
et al.,1998, alcana LD de 0,1 ng mL-1 utilizando 9-anthoroyl nitrile, no entanto, essa
uma tcnica trabalhosa e pouco vivel para anlise de rotina.
Para determinao de glicocorticides em formulaes farmacuticas no existem
muitos trabalhos publicados, no entanto tambm se utiliza a HPLC-fluorescncia aps
derivao qumica (Koukli, 1990), como foi o caso de Pan & Yu (2004) que
desenvolveram duas metodologias de determinao de triancinolona acetonido por
HPLC com deteco fluorimtrica aplicando uma reao de derivao utilizando betaciclodextrina (beta-CD), que gerou LD de 1,8 x 10-8

mol L-1 e com brometo de

cetiltrimetilamonio (CTMAB), apresentando LD de 3,59 x 10-8

mol L-1. Estas

metodologias foram utilizadas para medicamentos injetveis. Para determinao de


triancinolona acetonido em creme (Matysova, 2003; Gordon, 1976) e suspenso
(Xu,1999; Gordon, 1976), associado ou no a outros componentes, tem-se utilizado
mtodos simples e rpidos utilizando o HPLC-UV em 240 nm, estas metodologias

42

podem ser aplicadas ao contole de qualidade com sucesso por proporcionarem


recuperao e coeficiente de variao satsfatrios aos critrios analticos. J para
determinao

de

(2003,2003,2003),

prednisolona

em

desenvolveram

soluo
tcnicas

creme,

utilizando

Gallego

&

Arroyo

cromatografia

capilar

eletrocintica em meio micelar, apresentando bons resultados. A cromatografia lquida


tambm foi utilizada para tabletes e comprimidos (Brower, 1984). Em um trabalho
recentemente publicado, Grg (2004), apresenta um levantamento baseado nas
monografias publicadas nas ltimas edies da Farmacopia Europia, Farmacopia dos
Estados Unidos e da Farmacopia Japonesa onde so comentados os recentes avanos
na determinao de hormnios e outros esterides utilizando tcnicas analticas na rea
da espectroscopia, espectrofotometria e cromatografia. Neste trabalho a prednisolona e a
triancinolona acetonido so citadas em uma tabela em que se renem as metodologias
utilizadas nas Farmacopias europia, americana e japonesa, todas utilizam HPLC-UV
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com coluna de fase reversa.

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