REALIZAREA UNOR EXTRACTE POLIFENOLICE STANDARDIZATE

I.

INTRODUCERE

Se remarc n ultimul timp tendina de utilizare a substanelor de origine vegetal mai

ales n profilaxia, ameliorarea sau n scopul tratrii unor maladii uneori fr rspuns la un
tratament convenional. S-au remarcat multe noi produse vegetale care conin derivai polifenolici
folosite n fitoterapie prin proprietile antioxidante, anihilatoare ale aciunii radicalilor oxid i
peroxid care intervin n procesele inflamatoare i de mbtrnire. De asemenea interesul pentru
produsul fitoterapic a crescut pentru produsele vegetale cu aciune imunomodulatoare dar i
pentru produsele vegetale cu efect hipoglicemiant.
Acest interes pentru fitoterapie al pacientului a crescut poate i datorit creterii
diversitii de chimioterapice unele cu efecte adverse de luat n sem atunci cnd se utilizeaz
ntr-o maladie cronic cnd administrarea lor se face pe o perioad lung de timp.
Tinnd cont de aceste efecte adverse omul dar i cercettorul caut substane n asociere
care s limiteze efectele adverse sau chiar s le anihileze. De aici tendina de utilizare a
produselor vegetale care conin ceea ce numete fitoterapia, fitocomplexe, i anume asocieri de
principii active care poteneaz aciunea terapeutic, sczndu-le sau limitnd n acelai timp
toxicitatea.
II.1. DATE DESPRE PROPRIETILE TERAPEUTICE ALE POLIFENOLILOR
Din clasa polifenolilor de natur vegetal fac parte urmtoarele clase de principii active:
II.1.1. Derivaii acidului cafeic
Sunt compui fenolici de tip C6 C3. Majoritatea acestor polifenoli sunt esteri ai acizilor
cafeic, pcumaric, ferulic i sinapic i numai rareori esteri ai acizilor ocumaric, i oferulic.
Datorit celor dou grupri odihidroxi cu caracter fenolic ale acidului cafeic - aceti compui se
mai numesc i ODP-uri.
OH
HO

acid cafeic

OH

Se gsesc rspndii n numeroase plante, mai ales n familiile: Asteraceae, Boraginaceae,

Lamiaceae, Oleaceae, Plantaginaceae, Violaceae, Scrophulariaceae etc.
Din acest grup fac parte:
esterii acidului cafeic cu:

acidul chinic (monocafeil chinici acidul clorogenic i izomerii si; dicafeoil chinici
cinarina i izomerii si);
HO

COOH

3
O

OH
OH

HO

acid clorogenic
OH

O
COOH

HO
OH

HO

O
OH

OH

cinarina

OH

acidul tartric (acidul cichoric = acid 2-3 dicafeoil tartric);

OH
O

COOHO

HO
OH

OH

COOH

Acid cichoric

acidul 2-hidroxi-dihidrocafeic (acidul rozmarinic sau labiatinic i acidul litospermic);

O
HO

HO

COOH

OH

OH

acidul rozmarinic

HO

acid litospermic
HO
COOH
O

COOH

OH

O
OH

O
HO

glucoza (i alte oze) i cu 3,4-dihidroxi-fenil-etanolul (echinacozida, verbascozida,

forsitiozida, plantamajozida, helicozida, angorozida A, poliumozida .a.);
O
HO

R1O

O
RO

OH

OH

HO

Tabel 1. Esteri ai acidului cafeic cu diferite oze

echinozida

R
ramnoz

verbascozida

ramnoz

forsitiozida

R1
glucoz
H
ramnoz

OH

plantamajozida

R
glucoza

R1
H

poliumozida

ramnoz

ramnoz

angorozida A

ramnoz

-L-arabinoza

esterii acidului ferulic cu acidul tartric (acid feruil-tartric).

Unii derivaii ai acidului cafeic au aciune hepatotrop. Astfel acidul clorogenic, cinarina,

izomerii lor i acidul cicoric sunt coleretice i colecistochinetice. Acidul rozmarinic, prin
proprietile antioxidante, anihileaz aciunea radicalilor oxid i peroxid care intervin n procesele
infecioase i de mbtrnire i activeaz circulaia cerebral. Angorozida A este un citostatic;
echinacozida este imunostimulatoare, iar acidul litospermic este un antigonadotrop, tireotrop i
hipoglicemiant .
Produsele cu cel mai mare coninut n aceti derivai sunt: Cynarae folium (acid
clorogenic, cinarin i derivai); Cichorii radix et herba (acid cichoric), Echinaceae radix
(echinacozid, acid feruil-tartric); Verbasci folium et flores (verbascozida), Plantaginis majoris
folium (plantamajozida), Forsynthia viridissima Wahl (forsitiozida), Phlomis armeniaca Willd. i
Scutellaria salviifolia Bentham (Lamiaceae); Lythospermum officinale L., Symphytum officinale
L., Echium vulgare (Boraginaceae), Arctostaphylos uva ursi (L.) Spreng (Ericaceae), Rubus
idaeus L. (Rosaceae), Cnicus benedictus L. (Asteraceae) (acid litospermic).

II.1.2. Flavonozide
Flavonele, n sens larg, sunt substane fenolice naturale, de tip C 6-C3-C6, derivai ai 2fenilbenzopiranului (flavanului) sau 3-fenilbenzopiranului (izoflavanului), substituii cu diferii
radicali: OH, OCH3, CH3, C2H5, isopentenil etc.
Flavonozidele sunt pigmeni vegetali rspunztori de coloraia galben, a florilor,
fructelor, uneori i a frunzelor.
Clasificare. n funcie de gradul de oxidare al segmentului C3 i de substituenii de la C3
deosebim:
- flavone prezint dubl legtur ntre C2 i C3;
- flavonoli sunt flavone 3-hidroxilate;
- flavanone sunt flavone 2,3-dihidrogenate;
- flavanonoli sunt flavanone 3-hidroxilate.
8
7

1
O

3I
2

6
5

4I

B
5I

4
FLAVAN

R
O

R
flavon
flavonol

H
OH

flavanon
flavanolol

H
OH

Structura chimic a flavonelor

n funcie de gradul de nesaturare a segmentului C2-C3 i de prezena gruprii OH la C3, se

deosebesc: flavone, flavonoli, flavanone, flavanololi.
Pn n prezent se cunosc aproximativ 3000 de astfel de compui, dintre care circa 500 se
gsesc n stare liber, n plantele superioare (criptogame vasculare, gimnosperme, angiosperme);
foarte rar se ntlnesc la alge (ex. peonidolul n specii de Chlamidomonas). Au fost semnalate n
insecte i la fluturi unde provin din polenul sau nectarul florilor cu care acetia se hrnesc. Cele
mai rspndite sunt flavonozidele, antocianozidele i catecholii.

Flavonoidele se gsesc att sub form de agliconi, ct i sub form glicolizat. Partea
glucidic poate fi alctuit din una sau mai multe oze legate C-O-C la oricare OH de pe nucleu
sau C-C.
Agliconii flavonozidelor sunt solubili n alcool, acetat de etil, solveni apolari, insolubili
n ap. Datorit hidroxizilor fenolici sunt solubili i n soluii alaline. Heterozidele sunt solubile
n ap, alcool concentrat i diluat, solubile specific n acetat de etil, aceton, insolubile n solveni
polari.
Principala aciune atribuit flavonozidelor este aceea de vitamine P sau factori P (factori
de permeabilitate). Acioneaz prin legarea de proteinele plasmatice intracelulare, scznd
permeabilitatea capilarelor sangvine i crescndu-le rezistena (sunt potenial venoactive).
Noiunea de factor P este legat de observaii asupra tratamentului unor forme de scorbut,
cu acid ascorbic ca atare sau cu suc de lmie. n primul caz manifestrile scorbutice nu au putut
fi ameliorate, n timp ce prin tratare cu suc de lmie ele au disprut. A fost deci remarcat faptul
c acidul ascorbic nu poate aciona dect n asociere cu un alt factor numit ulterior factor P. Astfel
s-a descoperit rolul antioxidant al derivaiilor flavonici.
Heterozidele se gsesc dizolvate n sucul celular, iar agliconii predomin n esuturile
lignificate (vase de lemn, fibre, ideoblaste, cuticul etc.)
Identificarea flavonozidelor poate fi efectuat datorit:

reducerii gruprii ceto de la C4 (reacia cianidolului sau Shibata);

formrii chelailor ntre gruparea ceto de la C4 i oxidrilii vicinali, n poziiile
,,orto i ,,para sau ntre dou grupri OH fenolice, de pe nucleul B (poziia
para);

transformrii fenolilor n fenoxizi, cu itensificarea culorii galbene .

OH

OH
OH

HO

H
OH
OH

+
O

HO

Mg + HCl

OH

OH
OH

Reacia Shibata

Cl

O Me
O
O

O
O

Me

(I)

O
Me

(II)

(III)

Structura chelailor

II.1.2.1. Flavononol lignanii

Flavononol lignanii sunt combinaii ale lignanilor cu flavonolii. Lignanii sunt compui
rezultai din condensarea a dou pn la cinci molecule de derivai fenilpropanici (C 6-C3)n, legai
prin catenele laterale, aciclici sau ciclici, adesea lactonizai, -glucozidai sau neglucozidai.
Flavanonolii (flavononol lignanii) pot prezenta structur benzodioxanic (silibina), 2,3benzofuranic (silicristina) sau lactonic (silidianina).
H2
C

OH
HO

O
O

CH3

OH
OH

OH

Silibina
OH
O
OH
O

HO

H2C
OH
OH

OH
H3C

Silicristina
OCH3
HO
H

OH

OH

HO
O
H

silidianina
HO

Sunt substane solide, cristalizate, incolore, optic active, solubile n ap, alcool diluat,
aceton diluat (formele heterozidice) sau alcool diluat, aceton, benzen, eter, cloroform .a.,
puin solubile n eter de petrol (formele neglicozidate). Formeaz cu hidroxizii alcalini, fenoxizi
solubili n ap, greu solubili n alcool. n aceleai condiii flavononol lignanii lactonicigenereaz
hidroxiacizi. n mediul acid sau bazic se izomerizeaz uor .
Extracia se realizeaz cu hidroxizi alcalini. Purificarea se poate efectua prin diferite
procedee cromatogrfice (HPLC, CSS, cromatografie pe coloan etc).
Identificarea flavononolilor se face cu clorura de fer (III) cnd se coloreaz n verde.
Flavononol lignanii se coloreaz n verde sau albastru cu verdele de iod, n galben cu anilina
sulfuric, iar cu floroglucina clorhidric n rou.
Au aciune hepatoprotectoare flavononol lignanii americanin A, B, D din Phytolacca
americana L., silibina, silidianina, silicristina din Silybum marianum, wuweizisu C din
Schizandra chinensis i ginsengul rou corean).
O

H2
C
OH

OH
O
O

americanin A

OH

OH
OH
O
OH

C
H2

OH

americanin D
O

II.1.3. Derivaii stilbenici

Stilbenele sunt compui cu structur de tip C 14H12. Sunt

HO
OH

resveratrol
HO

substane solide de culoare galben sau verde. Cel mai

important reprezentant al clasei este resveratrolul - 3,3',4,5'
tetrahidroxistilben (C14H12O3).

M. Abdel-Mogib, S.A.Basaif i T.R. Sobahi au constatat prezena resveratrolului n

extractul de Scirpus holoschoenus. Resveratrolul este un polifenol natural prezent n unele plante
medicinale (Polygonum cuspidatum), via de vie, etc. Resveratrolul are puternice proprieti
chemoprotectoare

mpotriva

carcinogenezei

intestinale.

Derivatul

metilat

(Z-3,3',4,5'

tetrahidroxistilben) al resveratrolului, care a fost sintetizat, a exercitat o inhibare a creterii cu

7

80% a celulelor canceroase n cancerul de colon, la o concentraie de 0,3 M. La o concentraie

de 0,4 M a inhibat total dezvoltarea cancerului. i resveratrolul are o puternic aciune
anticanceroas eficient n cancerul de colon ns, derivatul su metilat are o aciune de 100 de
ori mai puternic. De asemenea, izomerul cis al 3,3',4,5' tetrahidroxistilbenului a exercitat o
aciune de 100 de ori mai puternic dect izomerul trans.
Efectul antimitotic al resveratrolului a fost evideniat de numeroase echipe de cercettori
din lumea ntreag. Aceast substan i-a ctigat o binemeritat notorietate n lumea tiinific.
Astfel, au aprut chiar i medicamente cu resveratrol extras din plante medicinale.
Tratamentul celulelor canceroase n cancerul de colon cu 25 M de resveratrol a cauzat
inhibiia creterii acestor celule cu 70 %. Celulele au fost stopate n faza S/G2 din ciclul celular.
Nu au fost detectate semne de cititoxicitate sau apoptoz celular. Resveratrolul a cauzat o
inhibiie semnificativ asupra activitii enzimei ornitin decarboxilaz, enzim cheie n biosinteza
poliaminei, care ar cauza dezvoltarea cancerului. Inhibiia ornitin decarboxilazei a cauzat
reducerea putresceinei coninut intracelular, indicnd faptul c poliaminele ar putea reprezenta
una din cele cteva inte implicate n efectele antiproliferative ale resveratrolului.
De asemenea s-a constatat inducerea apoptozei i moartea unor celule n leucemia HL60
dar i n carcinomul de sn T47D la doze de toxicitate minim pentru limfocitele normale.
Resveratrolul este una din substanele prezente n vinul alb i mai ales n cel rou. Din
acest caz au fost fcute studii cu privire la consumul de vin rou i incidena bolilor coronariene.
S-a constatat efectul antioxidant i antiinflamator al resveratrolului. Acest efect determin o
inhibare a formrii plachetelor sangvine.
n cercetarea pentru stabilirea unor noi compui eficieni n lupta mpotriva cancerului sau analizat sute de plante, printre care i Polygonum cuspidatum, plant prezent n medicina
popular chinezeasc. Astfel c au aprut suplimente naturale cu extras din aceast plant
medicinal. Unul dintre acetia, este i produsul firmei Inovatics prezent i n farmaciile
autohtone.
Din pcate, ncercarea noastr de a identifica i doza aceast substan nu a dat roade
acest lucru fiind datorat unei lipse a substanei de referin pn la data ncheierii acestei lucrri
tiinifice. Sperm ca n viitorul apropiat s efectum aceste determinri n laboratoarele
facultii.

II.1.4. Antocianozide
Sunt pigmeni vegetali, derivai ai flavanului, care dau culoarea roie, violet sau albastr
florilor, fructelor i altor organe.
Rspndire: Sunt prezeni la Angiosperme, n familiile Rosaceae, Moracea, Rhamnaceae,
Polygonaceae, Berberidacea, Saxifragaceae, Malvaceae, Caprifoliaceae, Malvaceae, Ericaceae,
Asteraceae, Fabaceae, Anacardiaceae, Solanaceae, Poaceae, Liliaceae.
Cei mai rspndii antocianidoli sunt: pelargonidolul, cianidolul, delfinidolul i derivaii
lor metoxilai, dintre carea menionm: peonidolul (3-O-metil-cianidolul), petunidolul (3-Ometil-delfinidolul),

(3,5-O-dimetil-delfinidolul),

malvidolul

mirtilidolul

(7-O-metil-

delfinidolul).
Partea glucidic poate fi alctuit din monoze (glucoz, galactoz, ramnoz), bioze
(rutinoz, primveroz), rar trioze i se fixeaz la una sau mai multe grupri hidroxil de pe nucleul
de baz (la C 3 i la C 5). n funcie de aceti factori, se disting mono-, di- sau triglicozide, mai
des ntlnite fiind 3-monozidele i 3,5-diozidele, dar se cunosc i 3,7-diozide, sau 3,5,3-triozide.

R1

pelargonidol
cianidol
delfinidol
peonidol
petunidol
malvidol
mirtilidol

OH

Cl
R3O

O
R2

OH
OH

R1

R2

R3

H
OH
OH
OCH3
OCH3
OCH3
OH

H
H
OH
H
OH
OCH3
OH

H
H
H
H
H
H
CH3

Tab. 2. Structura unor antocianozide

Nr.
1.
2.
3.
Proprieti

Antocianozida Restul glucidic i locul de fixare Agliconul

cianozida
3,5-diglucozil
cianidolul
delfinozida
3,5-O-glucozil
cianidolul
Mecocianozida 3-geniobiozil
cianidolul
fizico-chimice. Sunt substane solide, cristalizate, colorate n nuane de rou,

albastru sau violet, n funcie de pH, solubile n ap i alcool, ap acidulat i alcool acidulat,
insolubile n solveni organici apolari. n lumina UV prezint o fluorescen roie-brun, mai
intens la temperatur joas.
Agliconii (antocianidoli) sunt solubili n alcool i solveni organici apolari i insolubili n
ap la pH = 7. n ap acidulat (pH 3 ) formeaz sruri de oxoniu solubile, colorate n rou.
9

Prin alcalinizare, dac adugarea soluiei alcaline se face treptat i modificarea pH-ului
este lent, se obine mai nti o pseudobaz incolor, instabil (la pH = 7), apoi forma chinonic,
violet, stabil (la pH=7-8), urmat de fenoxidul, de culoare albastr, stabil (la pH = 8-10); la pH
= 12 se obine calchona colorat n galben.
+ Cl
O

HO

OH

OH
HO

OH

OH

OH
OH
OH

OH

OH
pseudobaz - instabil
(pH = 7 - incolor)

sare de oxoniu
(pH acid - rosie)

+
OK

OH
O

HO

OH
OH

OH
OH

OH

OH

chinon
(pH slab bazic - violet)

fenoxid
(pH = 8 - albastru)

OH
HO

OH

OH

O
OH
OH
calchon
(pH = 12 + galben)

Comportamentul antocianozidelor n soluie la pH-uri diferite

Caracterul amfoter al antocianilor explic folosirea lor ca indicatori acido-bazici n chimia

analitic.
Antocianii cu dou sau trei grupri hidroxil vicinale pe fenilul de la C 2 formeaz chelai
cu ionii metalelor bi-i trivalente, de culoare albastr, albastr-verzuie, cu condiia ca una din
grupri s fie sub form chinonic.
Antocianii stimuleaz sistemul imunitar prin creterea produciei de limfocite ce lupt
contra bolilor infecioase.
Antocianozidele sunt considerate factori P, alturi de flavonozide i de protoantocianidoli
(diminu permeabilitatea i cresc rezistena capilarelor). Mecanismul capilaro-protector este
acelai ca la flavone (inhibiia elastazei i colagenazei, a hialuronidazei i a COMT).

10

Cresc acuitatea vizual prin mrirea sintezei de rodopsin (chemoreceptor pentru

bastonaele retiniene care uureaz adaptarea la vederea crepuscular).
Scad permeabilitatea barierei hematoencefalice pentru substanele toxice: acioneaz ca
antioxidani i captatori de radicali liberi (ca majoritatea compuilor fenolici), inhib agregarea
plachetar i favorizeaz retracia cheagului datorit reducerii sintezei de tromboxan A2 (TXA2).
Multe au aciune antiinflamatoare, prin inhibarea ciclooxigenazei i lipooxigenazei i
antihistaminic, antiagregant-plachetar.
Aciunea diuretic este nsoit i de o cretere a eliminrii de acid uric.
Antocianozidele inhib parial aciunea limfopenizant a citostaticelor. Unele dintre ele
sunt dotate cu proprieti antimitotice.Acestea se pot datora formrii de sisteme redox care inhib
peroxidazele, inducnd astfel deficiene n diviziunea celular.
Reduc rspunsul contractil al coronarelor izolate la clorur de bariu (pe iepure), aciune
imprimat de stimularea sintezei locale de prostaglandine (PG) vasodilatatoare; influeneaz
activitatea corpului galben ovarian i a tiroidei.
Peroxidarea acizilor grai polinesaturai pe cale enzimatic i neenzimatic este inhibat
semnificativ n experimentele in vitro. Conform studiilor cinetice, antocianii sunt inhibitori
necompetitivi ai peroxidrii lipidice.
Antocianii reduc agregarea trombocitar in vitro i ofer protecie esutului vascular.
Aorta obolanilor tratat cu extracte antocianozidice din afine a prezentat un grad de relaxare
ridicat datorat generrii de NO de ctre esutul endotelial.
Compuii polifenolici din fructele colorate (flavone, antociani, taninuri) au aceleai efecte
de stopare a mbtrnirii celulei nervoase.
II.1.5. Taninurile
Taninurile sunt substane organice polifenolice (derivai ai 3-hidroxiflavanului, poliesteri
sau glicozide ale acidului galic), cu o mas molecular cuprins ntre 500 i 5000 de daltoni.
n funie de structura chimic i originea lor biosintetic se disting:
taninuri catcehice;
taninuri galice;
taninuri mixte.
Taninurile catechice sunt derivai flavanici, mono- sau polimeri, constituii din entiti
flavan-3-ol legate C-C.
Dup orientarea oxidrilului de la C3 se deosebesc dou serii de compui:
11

 seria 2-R, 3-S (cu OH-ul de la C3 orientat ) care cuprinde afzelecholul, catecholul i
galocatecholul;
seria 2-R, 3-R (cu OH-ul de al C 3 orientat ) sau epi, incluznd epiafzelecholul,
epicatecholul i epigalocatecholul.
Dintre acetia, catecholul i epigalocatecholul, galocatecholul i epigalocatecholul sunt
uniti structurale de baz ale oligo- i polimerilor, care se formeaz prin condensarea succesiv a
monomerilor. Legtura interflavanic este, n majoritatea cazurilor, de tip C 4-C8 i aproape
ntotdeauna trans n raport cu hidroxilul de la C3.

R
HO

HO

OH
H
OH

OH

R
O

OH
H
OH

R1
OH

R
catechol

OH

R1

R1

OH

epigalocatechol OH

OH

epicatechol

galocatechol OH

OH

R1

Structura chimic a taninurilor catechice

Taninurile galice sunt esteri ai acizilor galic i hexahidroxidifenic de configuraie (R)

(acid elagic, acid luteolic), sau (S) (eugenin, pedunculagin, geraniin), cu oze (glucoz,
hamameloz).
OH
COOH
HO

HO

OH

COOH
COOH

COOH

HO
HO

OH

OH

COOH
OH

HO

OH
OH

acid galic

acid (R)/hexahidroxidifenic

12

HO

OH
OH

acid (S)-hexahidroxidifenic

OH

HO
HO

HO

OH
O

OH

OH

O
HO

HO

OH

O
OH

HO

O
OH

OH

OH

pentagaloilglucoza
Structura galotaninurilor

Taninurile mixte sunt esteri ai acidului galic cu catecholul, epicatecholul,

galocatecholul i epigalocatecholul (galatul de catechol sau de epicatechol i galatul de
galocatechol sau de epigalocatechol). Monomerii flavanici se pot lega i cu acidul cafeic, cu
formare de lactone.
Taninurile se gsesc localizate n toate organele plantei; se acumuleaz n cantiti foarte
mari n scoare (Cinchona sp., Quercus sp., Salix sp., Castanea sp.), organe subterane (Krameria
triandra Ruiz et Pav.), lemn (Acacia catechu Willd.), frunze (Hamamelis virgiana L.), flori (Rosa
centifolia L., Rosa galica L.), fructe imature (Sobus acuparia L., Rhamnus catharthica L.),
semine (Cola nitida Schott et Endl., Cola acuminata Schott et Endl.), formaiuni patologice
(Gallae). Sunt dizolvate n sucul celular (vacuolar), libere sau combinate cu proteine, alcaloizi,
mucilagii.
Administrate intern taninurile au aciune antidiareic, antimicotic, antiviral i
antiseptic, ca urmare a precipitrii proteinelor bacteriene i fungice; pe cale extern (aplicri
topice) impermeabilizeaz straturile superficiale ale pielii i mucoaselor protejnd astfel straturile
subiacente i grbind cicatrizarea, la acest process contribuind i efectul antiseptic; au effect
vasoconstrictor manifestat asupra vaselor mici, superficiale. De asemenea taninurile sunt
inhibitori ai peroxidrii lipidelor i ai formrii ionului superoxid.
II.2. STUDIU DOCUMENTAR PRIVIND REALIZAREA DE EXTRACTE
POLIFENOLICE DIN SURSE VEGETALE
In ultimele decenii, s-a acordat o atentie deosebita realizarii unor produse cu efect
antioxidant, antiinflamator i cu efect de protecie a endoteliilor. n acest sens, compuii

13

polifenolici de origeine vegetal, ntlii n caniti importante n fructele i legumele colorate,

constituie factori eficieni de terapie, dup cum s-a artat mai sus.
Surse importante i valorificabile de polifenoli (n special antocianozide i flavonozide) l
constituie fructele colorate (strugurii negri, afinele, coaczele negre, dudele negre, murele).
Exist brevete de invenie care descriu procedee de obinere a concentratelor antocianice
provenite din diverse surse. Dintre acestea putem cita:
-brevetul de invenie RO 93530 din 30.01.1988 descrie un procedeu de obinere al unui
extract metanolic din fructe de afin (Vaccinum myrtilis);
-brevetul de invenie RO 115224 B1 din 30.12 1999 descrie un procedeu de obinere al
unui concentrat antocianic din turte de afine prin percolare cu o soluie etanolic acidulat,
urmat de dezalcoolizarea i liofilizarea produsului;
-brevetul de invenie RO 110036 B1 din 29.09. 1995 descrie un procede de purificare al
antocianilor din extracte metanolice de fructe de afin prin precipitare cu aceton;
-brevetul de invenie PT 98517 din 02.02.1994, descriind metoda de preparare a unor
extracte antocianice din turte de struguri negri (borhot), dude, viine, coacze, zmeur, turte de
fructe de soc, utiliznd soluii apoase acide, la cald.
n general, acestea se refer la extracte provenind din surse mult utilizate n alimentaie (afine,
struguri, coacze negre) i mai puin la materii prime cu utilizri alimentare reduse. Fructele de
soc, surs bogat n glicozide ale cianidolului, au o utilizare limitat pentru alimentaie n
Romnia. Neexistnd pentru aceste produse vegetale o competiie cu industria agro-alimentar,
ele pot constitui astfel surse valoroase de obinere a extractelor polifenolice cu proprieti
terapeutice.
III OBINEREA I CARACTERIZAREA EXTRACTULUI POLIFENOLIC DIN
FRUCTE DE SOC (Sambucus nigra L. Caprifoliacea)
Sambuci nigri fructus fructele de soc sunt unele dintre cele mai bogate surse de
antocianozide, care reprezint cel mai larg grup de pigmeni hidrosolubili din plante.
Concentraia n antociani coninui n fructele proaspete de soc sunt cuprinse ntre 300200 mg/100g substan uscat. Antocianii prezeni n fructele de soc se acumuleaz n vacuolele
celulelor ce alctuiesc esuturile epidermice.
III 1.Materiale i metode
Ca materie prim s-au utilizat fructele de soc, fr adaus de conservani, recoltate din
flora spontan din trei zone geografice ale Romniei, n perioada august-septembrie. Acestea au
14

fost meninute la -20C pn la momentul folosirii. Calitatea materiei prime vegetale s-a
determinat

prin

metode

calitative

cantitative,

respectndu-se

protocolul

analizei

farmacognostice pentru un produs vegetal.

Analiza chimic calitativ s-a realizat pe diferite soluii:
-soluie eteric, metanolic nehidrolizat; metanolic hidrolizat, apoas, apoas hidrolizat i a
decurs conform procedurii clasice:
-n soluia eteric au fost evidaniai carotenoizi (reacia cu acid sulfuric concentrat), agliconi
flavonici (reacia Shibata), agliconi sterolici (reacia Lieberman-Burchard);
-n soluia metanolic au fost evideniai compui reducatori (reacia Fehling), taninuri (reacia cu
Fe Cl3);
-n soluia metanolic hidrolizat au fost evideniai compui flavonozidici (reacia Shibata),
heterozide sterolice (reacia Lieberman-Burchard), antocianozide (reacia de viraj a culorii n
funcie de pH);
-n soluia apoas au fost evideniate poliholozide (precipitare cu metanol), comui reductori
(reacia Fehling), taninuri (reacia cu Fe Cl3), oze (reacia Molish);
-in soluia apoas hidrolizat au fost evideniate heterozide sterolice (reacia LiebermanBurchard).
Analiza chimic cantitativ a cuprins determinarea umiditii produselor, coninutului n
antociani i coninutul n metale grele (Fe, Pb).
Avnd n vedere faptul c fructele luate n lucru au corespuns cerinelor din punct de vedere al
coninutului chimic, s-a recurs la obinerea unei soluii extractive totale care a folosit materia
prim recoltat i caracterizat.
Pentru extracie s-a aplicat o metod ntlnit n literatura de specialitate consultat, creia
i s-au adus o serie de modificri.
Solubilitatea n ap a antocianozidelor permite utilizarea metodei de extracie cu ap.
Ozele i pectinele mpiedic purificarea antocianozidelor, de aceea fructele decongelate i
zdrobite, suspendate ntr-o soluie 1% acid citric n raport de mas 1:1, au fost supuse
fermentaiei alcoolice n prezen de Saccharomyces cerevisiae timp de 72 ore la temperatura
camerei. Dup fermentaie i macerare, fructele au fost decantate iar sucul rezultat a fost filtrat
(soluia extractiv 1). Peste fructele fermentate s-a adugat ap fierbinte n raport de mas 1,5:1 i
s-a lsat la macerat 24 ore. Prin presarea i filtrarea fructelor s-a obinut soluia extractiv 2. n
acelai mod s-a procedat pentru obinerea soluiei extractive 3. n final, cele trei soluii extractive
15

au fost reunite i concentrate la presiune sczut i temperatur mai mic de 45C pn la 25%
din volumul iniial al extractului total (schema 1).

Schema 1. Schema de extracie a compuilor polifenolici din Sambuci nigri fructus

Concentratul astfel obinut s-a pstrat n flacoane bine nchise, la loc rcoros, ferit de
lumin.
n vederea determinrii calitii extractului obinut s-a realizat analiza sa fizico-chimic n
conformitate cu normele recomandate de F.R. X.
Coninutul n substan uscat al extractului s-a determinat conform FR X
Coninutul n antocianozide a fost determinat conform protocolului de lucru descris de
Current Protocols in Food Analytical Chemistry, prin spectroscopie UV-Vis la viraj de pH.

16

Principiul de determinare al antocianilor prin aceast metod se bazeaz pe proprietatea

antocianilor de a-i modifica structura i absorbana n domeniul vizibil n funcie de pH-ul
mediului. Forma oxoniu predomin la pH=1,0 iar forma semicetalic incolor la pH= 4,5.
Metoda difernial de pH permite o determinare exact i rapid de determinare a totalului
antocianozidic
Coninutul de Fe i Pb al materiei prime i extractelor a fost determinat prin spectrometrie
de absorbie atomic utiliznd un spectrometru de absorbie Shimadzu model AA6200 echipat cu
flacr aer-acetilen. Acetilena a avut o puritate de 99,99% i o vitez de curgere de 1,8-2 L/min.
Pentru fiecare element determinat s-a folosit cte o lamp monoelemet cu catod scobit.
IV. REZULTATE OBINUTE
Analiza farmacognostic a materiei prime (fructe coapte de soc) a evideniat caracterele
macroscopice, microscopice, compoziia chimic a produsului vegetal, descrise n literatura de
specialitate, confirmnd astfel identitatea speciei.
Organoleptic, extractul polifenolic s-a caracterizat prin: aspect de soluie limpede, culoare roierubinie, miros particular.
Pentru antocianozide s-au obinut procente comparabile exprimate n Cyan- 3 Glc g% S.
U., 1,2144g Cyan- 3 Glc g% S. U n medie pentru fructele de soc.

17

Tabel 3 Rezultatele analizei chimice calitative a fructelor de soc

Soluia extractiva analizata

Reacia practicata

Principiul activ

Eterica

Acid sulfuric concentrat

identificat
Carotenoide

Eterica

Reacia Shibata

Agliconi flavonici

Eterica

Reacia Lieberman-Burchard

Agliconi sterolici

Metanolica nehidrolizata

Reactivul Fehling

Compui reducatori

Reacia cu FeCl3

taninuri

Reacia Shibata

Flavonozide

Metanolica hidrolizata (extract eteric)

Reacia Lieberman-Burchard

Heterozide sterolice

Metanolica hidrolizata (soluia acida

Virajul culorii in funcie de pH

Antocianozide

eter)
Apoasa

Precipitare in metanol

poliholozide

Apoasa

Reacia cu FeCl3

taninuri

Apoasa
Apoasa

Reactiv Fehling (I + II)

Reacia Molisch

Compui reductori
Oze

Apoas

Metoda spumefierii

Soluia apoas hidrolizat

Reacia Lieberman-Burchard

Heterozide sterolice

Metanolica nehidrolizata

Metanolica hidrolizata (extract eteric)

rmasa dup extracia cu

18

19

Schema 2 Analiza chimic calitativ a soluiei extractive eterice

20

Schema 3 Analiza chimic calitativ a soluiei extractive alcoolice

Schema 4 - Analiza chimic calitativ a soluiei extractive apoase

21

Tabelul 4 Rezultatele determinrilor chimice pe fructele de soc

Nr. i locul

Substan

recoltrii probei

uscat (SU) g

1.
2.
3.
4.

Fe

Pb

Antocianozide
Exprimate n
Cyan- 3 Glc g
% S. U.

22,9308
25,6174
24,1511
20,3097

1,4805
1,0123
1,0930
0,3969

354.30.013
371.60.031
387.50.047
105.30.044

0.550.019
0.230.02
0.550.017
0.170.019

22