Dissertacao EstudosPreformulacaoFormulacaoVismia

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PAR
INSTITUTO DE CINCIAS DA SADE

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS FARMACUTICAS
ESTUDOS DE PR-FORMULAO E FORMULAO DE

Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Sarah Regina Pereira Camelo
BELM - PA
2010


Autora: Sarah Regina Pereira Camelo

Orientador: Prof. Dr. Jos Otvio Carerra Silva Jnior
Co-orientador: Prof. Dr. Flvio Vasconcelos
Dissertao
Graduao
apresentada
em
Cincias
ao
Programa
farmacuticas,
de
rea
Psde
concentrao:
Frmacos e Medicamentos, do Instituto
.
de Cincias da Sade da Universidade Federal do Par
como requisito para a obteno do ttulo de Mestre em
Cincias Farmacuticas.
BELM - PA
2010
Dados Internacionais de Catalogao-na-Publicao (CIP)

Biblioteca Central/UFPA, Belm-PA
Camelo, Sarah Regina Pereira, 1983 Estudos de pr-formulao e formulao de Vismia guianensis
(Aubl.) Choisy / Sarah Regina Camelo ; orientador, Jos Otvio
Carrera Silva Junior. 2009
163f.
Dissertao (Mestrado) - Universidade Federal do Par, Instituto
de Cincias da Sade, Programa de Ps-Graduao em Cincias
Farmacutica, Belm, 2009.
1. Clusiaceae. 2. Matria-prima vegetal. 3. Vismia guianensis. 4.
Fitoterpico.
CDD - 22. ed. 615.32624


Autora: Sarah Regina Pereira Camelo

Orientador: Prof. Dr. Jos Otvio Carerra Silva Jnior
Co-orientador: Prof. Dr. Flvio Vasconcelos
Dissertao
Graduao
apresentada
em
Cincias
ao
Programa
farmacuticas,
de
rea
Psde
concentrao: Frmacos e Medicamentos, do Instituto
de Cincias da Sade da Universidade Federal do Par

como requisito para a obteno do ttulo de Mestre em
Cincias Farmacuticas.
Trabalho defendido e aprovado em: 15/01/2010.
_______________________________________
Prof. Dr. Fernando Batista da Costa
Instituio: Universidade de So Paulo
______________________________________________
Prof. Dr. Wagner Luiz Ramos Barbosa
Instituio: Universidade Federal do Par
______________________________________________
Prof. Dr. Jos Otvio Carrra Silva Jnior
Instituio: Universidade Federal do Par
DEDICATRIA
Aos meus pais Benice e Joo Camelo por todo amor e apoio dedicado em todos os
dias da minha vida, juntamente com a minha tia Nete.
Ao meu irmo Pedro Luiz Pereira, pelo seu carinho e ateno; nos momentos mais
difceis sempre pude contar com sua ajuda e cumplicidade, obrigada!
minha querida sobrinha Piera, pelo incentivo e apoio constante. Amo voc!
AGRADECIMENTOS
Deus por tudo o que Ele fez e faz em minha vida.
Aos meus pais e familiares, pelo apoio no somente nesses dois anos, mas em
todos os dias da minha vida.
Ao meu orientador Prof. Dr. Jos Otvio Carrera Silva Jnior pela orientao
concedida durante todos os anos que j trabalhamos juntos.
Ao meu co-orientador Prof. Dr. Flvio Vasconcelos, pelo direcionamento nesses

anos de trabalho.
Prof. Dr. Janaina Gell, pela relevante colaborao cientfica durante a

caracterizao da anatomia vegetal das folhas.
Ao Prof. Dr. Carlos Emerson Costa, pela relevante colaborao cientfica, alm da
disponibilizao do laboratrio de Catlise e Oleoqumica (LCO) do Instituto de
Cincias Exatas e Naturais (ICEN UFPA).
Prof. Dr. Eliana Ozela por disponibilizar o laboratrio de Bromatologia para

realizao deste trabalho.
Prof. Dr. Roseane Maria por disponibilizar o laboratrio de Controle de qualidade

para realizao deste trabalho.
Ao Prof. Dr. Jos Maria Vieira pela colaborao, apoio, amizade e disponibilizao
do Laboratrio de Microbiologia e a Carla Lcia (Farmacutica-tcnica desse
laboratrio), por toda a assistncia.
Ao Prof. Dr. Jos Luiz Vieira e pela ateno, apoio e amizade.

Prof. Dra. Ester Roseli Baptista, pelas suas contribuies, ateno e apoio.
Prof. Dra. Rosali Maria Ferreira da Silva pelas suas contribuies e amizade.
Ao tcnico Jos Luiz do laboratrio de qumica pela liofilizao da tintura.
Ao estagirio do LCO Charles Negro pelas anlises trmicas e pela pacincia.
A todos os ex-integrantes, integrantes e agregados do Programa de Ps-Graduao

em Cincias Farmacuticas (PPGCF), nas pessoas de Kariane, Christian Ribeiro,
Luciana Pinto, Andrex, Luana, Patrcia, Russany, Micheli, Auriekson, Hugo, Jeane,
Andressa, Bruno, Luiz Fbio, Thais, Heitor, Anivaldo Jnior e Eduardo, pelo
companheirismo.
Aos meus amigos Raimundo Jnior e Christian Barbosa, esse ttulo valeu a pena por
vocs, obrigada pelo carinho, compreenso e fora.
As meninas do Laboratrio de Fitoqumica Ndia e Mirth, pelo apoio durante todo o

tempo que estive por l. E ao tcnico responsvel por esse laboratrio Seu Jailton,
futuro mestre do PPGCF.
As funcionrias do PPGCF, Braslia e Cliciane, pelo apoio.
Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES) pelo

auxlio financeiro na forma de bolsa.
A Universidade Federal do Par e ao Programa de Ps-Graduao em Cincias

Farmacutica, pela oportunidade de aprendizado e crescimento profissional.
Ao meu amigo Jaime Jr. pelo primeiro incentivo carreira de pesquisadora.
Pelo carinho, amizade e apoio permanentes do meu grande amigo Abner.
Enfim, a todas as pessoas que de alguma forma contriburam para a realizao

deste trabalho, meus sinceros e profundos agradecimentos.
O Senhor o meu Pastor e nada me faltar. Deitar-me faz em verdes pastos, guiame mansamente s guas tranquilas, refrigera a minha alma, guia-me pelas veredas
da justia por amor do seu nome. Ainda que eu andasse pelo vale da sombra da
morte no temeria mal algum, porque tu ests comigo, a tua vara e o teu cajado me
consolam. Preparas uma mesa perante mim na presena dos meus inimigos, unges
a minha cabea com leo e o meu clice transborda. Certamente que a bondade e a
misericrdia me seguiro todos os dias de minha vida, e habitarei na casa do Senhor
por longos dias.
Amm
RESUMO
CAMELO, S. R. P. Estudos de pr-formulao e formulao de Vismia

guianensis (Aubl.) Choisy. 2010. 164 f. Dissertao (Mestrado) Faculdade de
Farmcia, Universidade Federal do Par, Belm, 2010.
A obteno e a avaliao da formulao fitoterpica foi traada atravs de

parmetros de controle de qualidade realizando-se a caracterizao fsico-qumica
da matria-prima vegetal desidratada e triturada, do seu derivado (extrato liofilizado
da tintura hidroalcolica) e da formulao semi-slida fitoterpica antimicrobiana
contendo a tintura das folhas de Vismia guianensis (Aubl) Choisy. Para tais
caracterizaes utilizaram-se os parmetros especficos para as drogas vegetais
contidos na Farmacopia Brasileira 4. Ed., a anlise trmica: termogravimetria,
anlise trmica diferencial e calorimetria exploratria diferencial e a espectroscopia
na regio do infravermelho e do ultravioleta. A avaliao da atividade antimicrobiana
pelo mtodo de difuso em disco em meio slido identificou a sensibilidade de S.
aureus (ATCC 25923) ao extrato seco da tintura dissolvido em DMSO, nas
concentraes de 500, 250, 125 e 62,5 mg/mL. A CLAE traou o perfil de
composio das sub-fraes A e B provenientes da frao acetato de etila da tintura
e evidenciou o alcance mximo de absoro em 290 nm para a frao acetato de
etila semelhante ao alcance mximo da emodia, sendo essa ento utilizada como
padro de referncia e marcador externo. A validao do mtodo foi realizada
atravs da espectrofotometria no ultravioleta, demonstrando ser um mtodo seletivo,
linear, repetitivo e robusto. A anlise trmica evidenciou possveis incompatibilidades
existentes entre a mistura binria do extrato liofilizado da tintura com a
hidroxietilcelulose e o propilenoglicol; obtendo-se ento um gel com caractersticas
no homogneas devido precipitao de protenas, ocorrida pela interao
polifenol-protina. A avaliao da estabilidade preliminar da formulao permaneceu
dentro dos parmetros, apresentando resultados dentro dos limites aceitveis para
os testes de centrifugao, estresse trmico e caractersticas organolpticas.
Palavras-chave: antraquinonas; controle de qualidade; fitoterpicos; formulao

semi-slida; Vismia guianensis (Aubl.) Choisy.
ABSTRACT
CAMELO, S. R. P. Studies of pre-formulation and formulation of Vismia

guianensis (Aubl.) Choisy. 2010. 164 f. Dissertao (Mestrado) Faculdade de
Farmcia, Universidade Federal do Par, Belm, 2010.
The obtention and evaluation of a new herbal formulation from Vismia

guianensis (Aubl.) Choisy was determined by parameters of quality control. Physicalchemical characterization in plant raw material dried and crushed, its extract of the
tincture
and
semi-solid
formulation
with
antimicrobial
activity.
For
the
characterizations specific parameters for herbal drugs contained in the Brazilian

Pharmacopoeia 4th Ed were used, the thermal analysis: thermogravimetry, differential
thermal analysis and differential scanning calorimetry and infrared and ultraviolet
spectroscopy. The evaluation of the antimicrobial activity by the disk diffusion method
in solid identified the sensitivity of S. aureus (ATCC 25923) to the dried extract
dissolved in DMSO at concentrations of 500, 250, 125 and 62.5 mg / mL. The HPLC
drawing the profile of the composition of the sub-fractions A and B from the ethyl
acetate fraction of the tincture and showed the range of maximum absorption at 290
nm similar to the maximum capacity of emodin being used a reference standard and
an external marker. The method validation was performed by ultraviolet
spectrophotometry, demonstrating a selective method, linear, repeatable and robust.
Thermal analysis showed possible incompatibilities between the binary mixture of the
extract of the tinsture with hydroxyethylcellulose and propylene, then obtaining nonhomogeneous gel due to precipitation of proteins, triggered by the polyphenol-protein
interaction. A preliminary evaluation of the stability of the formulation obtained
remained within the normal parameters, show results within acceptable limits for the
centrifuge tests, thermal stress and organoleptic characteristics.
Keywords: anthraquinones; herbal medicines; quality control; semi-solid formulation

Vismia guianensis (Aubl.) Choisy.
LISTA DE FIGURAS
Figura 1-
Fotografia de um espcime de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy

(Arquivo pessoal).............................................................................
Figura 2-
33
Compostos fenlicos: Vismiona (A) e Ferrunginina (B) e a

antraquinona emodina (C).............................................................
35
Figura 3-
Estrutura da pele, suas camadas e anexos...................................
42
Figura 4-
Esquema representativo das vias de permeao do frmaco

atravs do estrato crneo via transcelular e via intercelular
(MARTINS e VEIGA, 2002)...........................................................
Figura 5-
43
Exsicata de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy, com registro

MG:2500133 (Arquivo pessoal).....................................................
53
Figuras 6- Cortes histolgicos do limbo da folha de Vismia guianensis em

9
microscopia ptica, fixados com glutaraldedo e corados com azul

de toluidina 1%. 6. Epiderme pluriestratificada (40X), 7. Aspecto
da cutcula (10X), 8. Tricomas (40X), 9. Idioblasto no parnquima
palidico(40X).................................................................................
81
Figuras 10- Cortes histolgicos do limbo da folha de Vismia guianensis. 10.

13
Parnquima lacunoso contendo feixes vasculares envolvidos por

clulas parenquimticas apontados pela seta. (10X). 11. Nervura
principal, com idioblastos no Colnquima (40X). 12. Corte
transversal da folha (10x), evidenciando: a) na nervura principal o
parnquima fundamental penetrando entre os elementos do feixe
vascular (na forma de um arco). b) Glndulas do floema externo.
13. Feixes de esclernquima no interior dos elementos do floema e
do parnquima fundamental (40X)..................................................... 82
Figura 14- Determinao da distribuio granulomtrica do p das folhas de

Vismia guianensis (Aubl.) Choisy.....................................................
83
Figura 15- Curvas TG e DTA do p das folhas de Vismia guianensis (Aubl.)

Choisy..............................................................................................
85
Figura 16- Curva DSC do p das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
86
Figura 17- Espectro na regio do infravermelho do p das folhas de Vismia
guianensis (Aubl.) Choisy................................................................
87
Figura 18- Cromatograma da sub-frao A com o eluente: acetonitrila/gua

em 225 nm. Composta por diferentes tipos de antraquinonas (A)..
91
Figura 19- Cromatograma da sub-frao B com o eluente: acetonitrila/gua

em 225 nm. Composta por um tipo de benzofenona (B), um tipo
de derivado de xantona (C) e por diferentes tipos de
antraquiononas (A)..........................................................................
91
Figura 20- Mximos de absoro da tintura hidroalcolica (246,4; 280 e

404,6 nm) (A). E o mximo de absoro da frao acetato de etila
(289,6 nm) (B)..................................................................................
92
Figura 21- Curvas TG e DTA do extrato liofilizado da tintura de Vismia

guianensis (Aubl.) Choisy................................................................
93
Figura 22- Curva DSC do extrato liofilizado da tintura de Vismia guianensis

(Aubl.) Choisy..................................................................................
94
Figura 23- Espectro na regio do infravermelho do extrato liofilizado da

tintura de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy....................................
95
Figura 24- Placa do teste de difuso em disco do extrato seco de Vismia

guianensis (Aubl.) Choisy diludo em DMSO mostrando os halos
de sensibilidade dos Staphylococcus aureus, nas concentraes
de 500, 250, 125 e 62,5 mg/mL......................................................
97
Figura 25- Curvas TG e DTA do padro externo emodina...............................
98
Figura 26- Curva DSC do padro externo emodina.........................................
99
Figura 27- Espectro na regio do infravermelho do padro externo emodina
100
Figura 28- Seletividade com varredura em espectrofotmetro de 240 a 400

nm do padro externo emodina, da frao Acetato de etila e do
solvente (etanol 70 GL)..................................................................
101
Figura 29- Curva de linearidade do padro externo emodina entre as

concentraes de 0,0076; 0,0083; 0,009; 0,010; 0,0111; 0,0125 e
0,0143 mg/mL..................................................................................
Figura 30- Anlise
de
resduos
da
linearidade
mostrando
102
resduos
normalmente distribudos e com homocedastidade........................
103
Figura 31- Curva de calibrao do padro externo emodina entre as

concentraes de 0,0083; 0,009; 0,010; 0,0111 e 0,0125 mg/mL...
104
Figura 32- Robustez com varredura em espectrofotmetro de 240 a 400 nm

para diferentes concentraes nos pHs de 4,3; 5,6 e 6,3................ 106
Figura 33- Robustez com varredura em espectrofotmetro de 240 a 400 nm
para diferentes fabricantes do solvente: A, B e C............................ 107
Figura 34- Curvas TG e DTA da hidroxietilcelulose..........................................
109
Figura 35- Curvas TG e DTA do propilenoglicol...............................................
110
Figura 36- Curvas TG e DTA do metilparabeno................................................ 111

Figura 37- Curva TG da mistura binria da hidroxietilcelulose e o extrato
liofilizado (1:1p/p).............................................................................
112
Figura 38- Curvas TG do extrato liofilizado, da hidroxietilcelulose e da

mistura binria (1:1p/p)....................................................................
113
Figura 39- Curvas TG e DTA da mistura binria entre o propilenoglicol e o

extrato liofilizado (2:1p/p)................................................................
114
Figura 40- Curvas TG do extrato liofilizado, propilenoglicol e da mistura

binria (2:1p/p).................................................................................
115
Figura 41- Curva TG da mistura binria do metilparabeno e o extrato

liofilizado (1:1p/p).............................................................................
116
Figura 42- Curvas TG do metilparabeno, do extrato liofilizado e da mistura

binria (1:1p/p)................................................................................
117
Figura 43- Curva DSC da hidroxietilcelulose....................................................
118
Figura 44- Curva DSC do propilenoglicol.........................................................
119
Figura 45- Curva DSC do metilparabeno..........................................................
120
Figura 46- Curva DSC da mistura binria da hidroxietilcelulose e o extrato

liofilizado (1:1p/p).............................................................................
121
Figura 47- As curvas DSC da mistura binria da hidroxietilcelulose e o

extrato liofilizado (1:1p/p).................................................................
122
Figura 48- Curva DSC da mistura binria de propilenoglicol e extrato

liofilizado (2:1 p/p)............................................................................
122
Figura 49- Curvas DSC do propilenoglicol, do extrato liofilizado e da mistura

binria (2:1 p/p)................................................................................
123
Figura 50- Curva DSC da mistura binria do metilparabeno com o extrato

liofilizado (1:1p/p).............................................................................
124
Figura 51- Curvas DSC do metilparabeno, do extrato liofilizado e da mistura 124
binria (1:1p/p).................................................................................
Figura 52- Estrutura qumica da hidroxietilcelulose........................................... 125
Figura 53- Espectro de absoro na regio do infravermelho para a
hidroxietilcelulose............................................................................. 126
Figura 54- Estrutura qumica do propilenoglicol (1,2-propanodiol)...................
Figura55-
127
Espectro de absoro na regio do infravermelho para o

propilenoglicol..................................................................................
127
Figura 56- Estrutura qumica do metilparabeno (ster metlico do cido 4hidroxibenzico) ..............................................................................
128
Figura 57- Espectro de absoro na regio do infravermelho para o

metilparabeno................................................................................... 128
Figura 58- Espectros na regio do infravermelho da hidroxietilcelulose, do
extrato liofilizado e da mistura binria 1:1 (p/p)...............................
129
Figura 59- Espectros na regio do infravermelho do propilenoglicol, do

130
Figura 60- Espectros na regio do infravermelho do metilparabeno, do

130
Figura 61- Determinao do pH da amostra de referncia 5% (25 C 2 C)

e do lote de bancada 1 (45 C 2 C) na proporo de 5 %...........
133
Figura 62- Determinao do pH da amostra de referncia 10% (25 C 2 C)

e do lote de bancada 2 (45 C 2 C) na proporo de 10 %.........
133
LISTA DE TABELAS
Tabela 1-
Excipientes e suas misturas binrias com o extrato liofilizado de

Vismia guianensis (Aubl.)Choisy.......................................................
Tabela 2-
Composio preliminar da formulao semi-slida fitoterpica

contendo a tintura das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Tabela 3-
85
Perfil calorimtrico exploratrio diferencial do p das folhas de

Vismia guianensis (Aubl.) Choisy......................................................
Tabela 7-
85
Perfil analtico trmico diferencial do p das folhas de Vismia

guianensis (Aubl.) Choisy..................................................................
Tabela 6-
84
Perfil termogravimtrico do p das folhas de Vismia guianensis

(Aubl.) Choisy....................................................................................
Tabela 5-
76
Caracterizao fsico-qumica do p das folhas de Vismia

Tabela 4-
75
87
Nmero de onda (cm-1) e suas respectivas ligaes caractersticas

no espectro da regio do infravermelho para o p das folhas de
Tabela 8-
87
Densidade aparente, pH e percentual de resduo seco da tintura do

p das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy...........................
88
Tabela 9-
Prospeco qumica da tintura de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
89
Tabela 10-
Perfil termogravimtrico do extrato liofilizado da tintura de Vismia

Tabela 11-
Perfil analtico trmico diferencial do extrato liofilizado da tintura de

Tabela 12-
94
Perfil calorimtrico exploratrio diferencial extrato liofilizado da

tintura de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy......................................
Tabela 13-
93
94
Nmero de onda (cm-1) e ligaes caractersticas no espectro da

regio do infravermelho para extrato liofilizado da tintura de Vismia
Tabela 14-
96
Avaliao da atividade antimicrobiana do extrato seco da tintura de

Vismia guianensis (Aubl.) Choisy em diferentes concentraes e
os halos de inibio...........................................................................
96
Tabela 15-
Perfil termogravimtrico do padro externo emodina........................
98
Tabela 16-
Perfil trmico diferencial do padro externo emodina........................
98
Tabela 17-
Perfil calorimtrico exploratrio diferencial do padro externo

emodina.............................................................................................
Tabela 18-
Nmero de onda (cm-1) e ligaes caractersticas do espectro na

regio do infravermelho para o marcador externo emodina..............
Tabela 19-
100
Repetibilidade (preciso intra-corrida) contendo o desvio padro

relativo e a exatido das concentraes de 0,0125; 0,010 e 0,0083
Tabela 20-
99
105
Repetibilidade intermediria (preciso inter-corridas) contendo o

desvio padro relativo e a exatido das concentraes de 0,0125;
0,010 e 0,0083 mg/mL.......................................................................
Tabela 21-
105
Quantificao das antraquinonas totais com equivalentes em

emodina na tintura seca (I) e na frao acetato de etila (II)
provenientes ta tintura hidroalcolica das folhas de Vismia
107
Tabela 22-
Perfil termogravimtrico da hidroxietilcelulose...................................
109
Tabela 23-
Perfil trmico diferencial da hidroxietilcelulose..................................
109
Tabela 24-
Perfil termogravimtrico do propilenoglicol........................................
110
Tabela 25-
Perfil analtico trmico diferencial do propilenoglicol.........................
110
Tabela 26-
Perfil termogravimtrico do metilparabeno........................................
111
Tabela 27-
Perfil analtico trmico diferencial do metilparabeno.........................
111
Tabela 28-
Perfil termogravimtrico da mistura binria da hidroxietilcelulose e

o extrato liofilizado (1:1p/p) ...............................................................
Tabela 29-
Perfil
analtico
trmico
diferencial
da
mistura
binria
da
hidroxietilcelulose e o extrato liofilizado (1:1p/p)...............................

Tabela 30-
Perfil
analtico
trmico
diferencial
da
mistura
binria
114
Perfil termogravimtrico da mistura binria do metilparabeno e o

extrato liofilizado (1:1p/p)...................................................................
Tabela 33-
114
do
propilenoglicol e o extrato liofilizado (2:1p/p).....................................

Tabela 32-
113
Perfil termogravimtrico da mistura binria do propilenoglicol e o

extrato liofilizado (2:1p/p)...................................................................
Tabela 31-
112
116
Perfil analtico trmico diferencial da mistura binria do

Metilparabeno e o extrato liofilizado (1:1p/p).....................................
116
Tabela 34-
Perfil calorimtrico exploratrio diferencial da hidroxietilcelulose.....
118
Tabela 35-
Perfil calorimtrico exploratrio diferencial do propilenoglicol...........
119
Tabela 36-
Perfil calorimtrico exploratrio diferencial do metilparabeno...........
120
Tabela 37-
Perfil
calorimtrico
diferencial
da
mistura
binria
da
hidroxietilcelulose e o extrato liofilizado (1:1p/p)...............................

Tabela 38-
Perfil
calorimtrico
diferencial
do
extrato
liofilizado,
do
propilenoglicol e da mistura binria (2:1 p/p).....................................

Tabela 39-
Nmeros de onda (cm ) e ligaes caractersticas do espectro na

126
Nmeros de onda (cm-1) e ligaes caractersticas do espectro na

regio do infravermelho para o propilenoglicol..................................
Tabela 42-
124
-1
regio do infravermelho para a hidroxietilcelulose.............................

Tabela 41-
123
Perfil calorimtrico exploratrio diferencial da mistura binria do

metilparabeno com o extrato liofilizado (1:1p/p)................................
Tabela 40-
121
127
Nmeros de onda (cm-1) e ligaes caractersticas do espectro na

regio do infravermelho para o metilparabeno..................................
129
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
ANVISA
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
ATCC
American Type Culture Collection
CCD
Cromatografia em Camada Delgada
DSC
Calorimetria Exploratria Diferencial
DMSO
Dimetil Sulfxido
DTA
Anlise Trmica diferencial
IV
Infravermelho
PNPMF
Poltica Nacional de Plantas Medicinais e Fitoterpicos
PNPIC
Poltica Nacional de Prticas Integrativas e Complementares
q.s.p.
quantidade suficiente para cem por cento
RDC
Resoluo de Diretora Colegiada
RE
Resoluo Especfica
SNMF
Sistema Nacional de Medicina e Farmcia
SUS
Sistema nico de Sade
TG
Termogravimetria
UFC
Unidade Formadora de Colnia
UV-VIS
Ultravioleta-visvel
LISTA DE SMBOLOS E UNIDADES
graus Celsius
GL
graus Gay Lussac
mL
mililitro
microlitro
metro quadrado
mm
milmetro
nm
nanmetros
kg
kilograma
grama
mg
miligrama
hora
min
minuto
p/p
peso/peso
percentagem
cm-1
centmetro-1
J/g
Joule por grama
kJ/g
Kilojoule por grama
entalpia de combusto
SUMRIO
1. INTRODUO.....................................................................................................
24
2. REVISO DE LITERATURA...............................................................................
27
2.1 O desenvolvimento dos medicamentos fitoterpicos........................................
28
2.1.2 Legislao vigente no pas.............................................................................
29
2.2 A espcie botnica estudada..........................................................................
31
2.2.1 A famlia Clusiaceae.......................................................................................
31
2.2.2 O gnero Vismia.............................................................................................
32
2.2.3 A espcie Vismia guianensis (Aubl.) Choisy..................................................
32
2.2.3.1 Constituio qumica...................................................................................
34
2.2.3.2 Atividades biolgicas comprovadas............................................................
35
2.3 Mtodos analticos utilizados no desenvolvimento, avaliao e

caracterizao de medicamentos fitoterpicos...................................................
36
2.3.1 Anlise trmica................................................................................................
37
2.3.2 Espectroscopia nas regies do infravermelho e ultravioleta..........................
38
2.3.3 Cromatografia.................................................................................................
39
2.4 A administrao de frmacos na pele...........................................................
41
2.4.1 A pele.............................................................................................................
41
2.4.2 Formulaes semi-slidas de uso tpico.......................................................
43
2.4.3 Terapia antimicrobiana para uso tpico.........................................................
45
2.5 Avaliao da estabilidade de formulaes semi-slidas............................
46
2.5.1 Avaliao preliminar da estabilidade..............................................................
46
2.5.1.1 Testes de estabilidade.................................................................................
47
3. OBJETIVOS.........................................................................................................
48
3.1 Objetivo geral....................................................................................................
49
3.2. Objetivos especficos.........................................................................................
49
4. MATERIAL E MTODOS....................................................................................
50
4.1 Material.............................................................................................................
51
4.1.1 Matria prima vegetal.....................................................................................
51
4.1.2 Reagentes e solues....................................................................................
51
4.1.3 Equipamentos.................................................................................................
52
4.2 Mtodos............................................................................................................
52
4.2.1 Obteno do material vegetal..........................................................................
53
4.2.2 Identificao botnica do material vegetal.....................................................
53
4.2.3 Caracterizao da anatomia vegetal das folhas de Vismia guianensis

(Aubl.) Choisy...........................................................................................................
54
4.2.4 Processamento da amostra............................................................................
54
4.3 Caracterizao fsica e fsico-qumica do p das folhas de Vismia

guianensis (Aubl.) Choisy.....................................................................................
55
4.3.1 Determinao da distribuio granulomtrica.................................................
55
4.3.2 Determinao da perda por dessecao........................................................
55
4.3.3 Determinao do teor de cinzas totais...........................................................
56
4.3.4 Obteno do perfil trmico.............................................................................
56
4.3.4.1 Termogravimetria........................................................................................
56
4.3.4.2 Anlise trmica diferencial...........................................................................
56
4.3.4.3 Calorimetria exploratria diferencial............................................................
57
4.3.5 Obteno do perfil espectroscpico na regio do infravermelho....................
57
4.4 Obteno e caracterizao qumica e fsico-qumica da tintura do p

das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy.................................................
57
4.4.1 Obteno da tintura hidroalcolica................................................................
57
4.4.2 Caracterizao fsico-qumica da tintura hidroalcolica..............................
58
4.4.2.1 Determinao da densidade aparente........................................................
58
4.4.2.2 Determinao do pH....................................................................................
58
4.4.2.3 Determinao do teor de slidos..................................................................
58
4.4.3 Preparao do extrato seco da tintura e suas fraes...................................
59
4.4.4 Prospeco qumica da tintura.......................................................................
59
4.4.5. Determinao do perfil cromatogrfico da tintura...........................................
65
4.4.5.1 Cromatografia em camada delgada............................................................
65
4.4.5.2 Cromatografia lquida de alta eficincia......................................................
66
4.4.6 Obteno do extrato liofilizado.......................................................................
66
4.4.6.1. Obteno do perfil trmico do extrato liofilizado..........................................
66
4.4.6.1.1 Termogravimetria.....................................................................................
66
4.4.6.1.2 Anlise trmica diferencial........................................................................
67
4.4.6.1.3 Calorimetria exploratria diferencial.........................................................
67
4.4.6.2 Obteno do perfil espectroscpico na regio do infravermelho................

4.5
Avaliao
da
atividade
antimicrobiana
Avaliao
da
67
atividade
antimicrobiana do extrato seco da tintura das folhas de Vismia guianensis

(Aubl.) Choisy.........................................................................................................
68
4.5.1 Teste de difuso em disco em meio slido....................................................
68
4.6 Caracterizao do marcador externo emodina (1,3,8-trihidroxi-6metilantraquinona).................................................................................................
69
4.6.1 Obteno do perfil trmico da emodina..........................................................
69
4.6.1.1 Termogravimetria........................................................................................
69
4.6.1.2 Anlise trmica diferencial...........................................................................
69
4.6.1.3 Calorimetria exploratria diferencial............................................................
69
4.6.2 Obteno do perfil espectroscpico na regio do infravermelho...................
70
4.7 Anlise quantitativa de antraquinonas totais na tintura de Vismia

guianensis (Aubl.) Choisy por espectrofotometria em UV-VIS..........................
70
4.7.1 Validao do mtodo......................................................................................
70
4.7.1.1 Seletividade.................................................................................................
70
4.7.1.2 Linearidade..................................................................................................
71
4.7.1.3 Intervalo.......................................................................................................
71
4.7.1.4 Curva de calibrao.....................................................................................
72
4.7.1.5 Preciso.......................................................................................................
72
4.7.1.5.1 Repetibilidade (preciso intra-corrida)......................................................
72
4.7.1.5.2 Preciso intermediria (preciso inter-corridas).......................................
72
4.7.1.6 Exatido.......................................................................................................
73
4.7.1.7 Limite de deteco.......................................................................................
73
4.7.1.8 Limite de quantificao.................................................................................
74
4.7.1.9 Robustez......................................................................................................
74
4.7.2 Quantificao das antraquinonas totais..........................................................
74
4.7.3 Anlise estatstica............................................................................................
75
4.8 Estudos de formulao de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy....................
75
4.8.1 Ensaios de avaliao dos excipientes da formulao e suas misturas

binrias com o extrato liofilizado da tintura por Anlise trmica e Espectroscopia
na regio do infravermelho.......................................................................................
75
4.9 Obteno da formulao fitoterpica semi-slida contendo a tintura das
76
folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy........................................................

4.10 Avaliao preliminar da estabilidade da formulao.................................
77
4.10.1 Teste de centrifugao.................................................................................
77
4.10.2 Teste de estresse trmico............................................................................
77
4.10.3 Caractersticas organolpticas.....................................................................
78
4.10.4 Caractersticas fsico-qumicas.....................................................................
78
4.10.4.1 Obteno do valor de pH...........................................................................
78
5. RESULTADOS....................................................................................................
79
5.1 Caracterizao da anatomia vegetal das folhas de Vismia guianensis

(Aubl.) Choisy.........................................................................................................
80

guianensis (Aubl.) Choisy.....................................................................................
83
5.2.1 Determinao da distribuio granulomtrica do p.......................................
83
5.2.2 Determinao da perda por dessecao.........................................................
84
5.2.3. Determinao do teor de cinzas totais...........................................................
84
5.2.4 Perfil trmico....................................................................................................
84
5.2.4.1 Termogravimetria e anlise trmica diferencial...........................................
84
5.2.4.2 Calorimetria exploratria diferencial.............................................................
86
5.2.5 Perfil espectroscpico na regio do infravermelho..........................................
87
5.3 Caracterizao qumica e fsico-qumica da tintura do p das folhas.......
88
5.3.1 Determinao da densidade aparente............................................................
88
5.3.2 Determinao do pH........................................................................................
88
5.3.3 Determinao do teor de slidos.....................................................................
88
5.3.4 Prospeco qumica da tintura........................................................................
89
5.3.5 Perfil cromatogrfico da tintura........................................................................
90
5.3.5.1 Cromatografia em camada delgada.............................................................
90
5.3.5.2 Cromatografia lquida de ala eficincia........................................................
90
5.3.6 Perfil trmico do extrato liofilizado da tintura...................................................
93
5.3.6.1 Termogravimetria e anlise trmica diferencial............................................
93
94
5.3.7 Perfil espectroscpico na regio do infravermelho do extrato liofilizado da

tintura........................................................................................................................
95
5.4 Avaliao da atividade antimicrobiana do extrato seco da tintura das
96
folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy........................................................

5.4.1 Teste de difuso em disco em meio slido.....................................................
5.5 Caracterizao do marcador externo emodina
96
(1,3,8-trihidroxi-6-
metilantraquinona).................................................................................................
97
5.5.1 Perfil trmico....................................................................................................
97
97
99
5.5.2 Perfil espectroscpico na regio do infravermelho.......................................... 100

guianensis (Aubl.) Choisy por espectrofotometria em UV-VIS.......................... 101
5.6.1 Validao do mtodo....................................................................................... 101
5.6.1.1 Seletividade.................................................................................................. 101
5.6.1.2 Linearidade................................................................................................... 102
5.6.1.3 Intervalo........................................................................................................ 103
5.6.1.4 Curva de calibrao...................................................................................... 103
5.6.1.5 Preciso e exatido...................................................................................... 104
5.6.1.5.1 Repetibilidade (preciso intra-corrida)....................................................... 104
5.6.1.5.2 Preciso intermediria (preciso inter-corridas)........................................ 105
5.6.1.6 Limites de deteco e quantificao............................................................ 105
5.6.1.7 Robustez......................................................................................................
106
5.6.2 Quantificao das antraquinonas totais.......................................................... 107

5.7 Estudos de formulao de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy..................... 108
5.7.1 Ensaios de avaliao dos excipientes da formulao e suas misturas
binrias com o extrato liofilizado da tintura por anlise trmica e espectroscopia
na regio do infravermelho....................................................................................... 108
108
5.7.1.1.1 Excipientes................................................................................................ 108

5.7.1.1.2 Misturas binrias....................................................................................... 111
5.7.1.2 Calorimetria exploratria diferencial............................................................. 117
5.7.1.2.1 Excipientes................................................................................................ 117
5.7.1.2.2 Misturas binrias.......................................................................................
120
5.7.1.3 Perfil espectrofotomtrico na regio do infravermelho................................. 125

5.7.1.3.1 Excipientes................................................................................................ 125
5.7.1.3.2 Misturas binrias....................................................................................... 129

folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy........................................................ 131
5.9 Avaliao preliminar da estabilidade da formulao fitoterpica semislida contendo a tintura das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy..... 131
5.9.1 Teste de centrifugao.................................................................................... 131
5.9.2 Caractersticas organolpticas........................................................................ 132
5.9.3 Caractersticas fsico-qumicas........................................................................ 132
5.9.3.1 Valor de pH................................................................................................... 132
6. DISCUSSO........................................................................................................ 134
7. CONCLUSES.................................................................................................... 151
8. REFERNCIAS.................................................................................................... 154
24
1.
INTRODUO
25
1. INTRODUO
O Brasil conhecido mundialmente como um vasto e rico reservatrio natural

de espcies vegetais de vrios ecossistemas. To antiga quanto o prprio homem, a
fitoterapia como recurso teraputico avanou pela histria e hoje, em todo o mundo,
objeto de interesse de pesquisadores, da indstria e, claro, da sociedade moderna.
A principal diferena entre os medicamentos convencionais e os fitoterpicos est na
matria-prima, sendo essa os extratos vegetais padronizados, que lhes garante a
sua segurana, eficcia teraputica e reprodutibilidade.
O desenvolvimento e o controle de qualidade dos medicamentos fitoterpicos
obedecem aos mesmos rigores dos medicamentos convencionais. Para conceder o
registro de um fitoterpico a ANVISA, Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria,
exige os mesmos procedimentos para o registro de um medicamento sinttico.
Tamanho critrio por parte dos rgos reguladores mais um fator de segurana ao
usurio de fitoterpicos (BRASIL, 2004).
O governo brasileiro visando importncia desse segmento da economia
lanou a Poltica Nacional de Plantas Medicinais e Fitoterpicos (PNPMF), uma ao
conjunta entre o governo (atravs de financiamentos), universidades (pesquisa e
desenvolvimento) e indstrias (fabricao) buscando o desenvolvimento de novos
medicamentos destinados populao (BRASIL, 2006b). O Sistema nico de
Sade (SUS), tambm foi foco de ao do governo atravs da Poltica de Prticas
Integrativas e Complementares, garantindo a populao acesso seguro e racional ao
uso de medicamentos fitoterpicos (BRASIL, 2006a).
Um espcime vegetal composto por uma rica quantidade de componentes,
sendo que alguns deles so os responsveis pelo seu efeito farmacolgico. Como
exemplo tem-se diferentes classes metablicas de onde se pode destacar as
antraquinonas, reconhecidas pelo seu efeito laxativo so bastante utilizadas na
medicina popular (CUNHA, 2005). Atuam como antioxidantes e como captadoras de
radicais livres, podendo exibir atividade antiprotozoria. Tambm citada sua
atividade inibitria sobre o crescimento de Helicobacter pylori, uma bactria
associada ao surgimento de cncer gstrico (WANG et al. 1998; CAMACHO et al.
2000). Alm disso, vrias antraquinonas, entre as quais a emodina, tm mostrado
atividade antiviral e antimicrobiana (COHEN et al. 1996; KUMAR et al. 1998).
26
A espcie Vismia. guianensis (Aubl) Choisy, (Clusiaceae) popularmente
conhecida como lacre, o ponto de partida a obteno de um futuro medicamento
fitoterpico antimicrobiano de base semi-slida. Tal espcie foi citada em relatos de
utilizao popular em diferentes municpios do Brasil, em particular no estado do
Par. Destacando-se principalmente pela sua utilizao no tratamento de
dermatoses (KERHARO, 1974, p. 485 apud BOTTA et al. 1986, p. 1217),
apresentando-se como potente laxativo (LORENZI e MATOS, 2002), alm de suas
folhas serem empregadas como tnico (MACFOY e SAMA, 1983), e possurem
propriedades antipirticas e anti-reumticas (LORENZI e MATOS, 2002).
O presente trabalho foi baseado na Resoluo de Diretoria Colegiada (RDC)
n48 que dispe sobre o registro dos medicamentos fitoterpicos (BRASIL, 2004).
Tendo como premissa bsica a caracterizao inicial da espcie vegetal, do seu
derivado e da formulao semi-slida antimicrobiana contendo a tintura das folhas
de V. guianensis. Para tal foram utilizados parmetros de controle de qualidade
atravs de metodologias fsico-qumicas contidas na Farmacopia Brasileira 4 Ed.
(1988), tranando-se os perfis trmico e espectroscpicos na regio do
infravermelho e ultravioleta, realizando-se a validao do mtodo assegurando-se a
reprodutibilidade dos resultados e o estabelecimento de limites de aceitao do erro
analtico, atravs da aplicao sistemtica de testes de preciso e exatido e
tambm atravs dos estudos de formulao com a anlise das misturas binrias
entre o ativo e os excipientes e os testes de estabilidade preliminar da formulao.
27
2.
REVISO DE LITERATURA
28
2. REVISO DE LITERATURA
2.1 O desenvolvimento dos medicamentos fitoterpicos
O espao para o desenvolvimento de medicamentos de origem vegetal foi

retomado no cenrio mundial a partir da turbulncia que a indstria farmacutica
passou nos ltimos anos, em parte devido sua prpria natureza, baseada em
tecnologia e crescimento rpido, e, em parte, devido s diversas presses que vm
sofrendo: presses provenientes do controle de custo estatal e presses
provenientes do surgimento de mecanismos pblicos e privados que atuam na
reduo do preo dos medicamentos. As janelas de oportunidade foram rediscutidas
e justamente a prospeco de medicamentos fitoterpicos padronizados seria um
dos caminhos apontados a constituir a nova demanda da indstria farmacutica
mundial. Com o sentido de diminuir custos e aumentar a eficcia; novas tecnologias
foram ento introduzidas no processo de inovao desses medicamentos (VILLAS
BAS e GADELHA, 2007).
A idia primordial na introduo do uso de fitoterpicos na medicina humana
no substituir medicamentos registrados e j comercializados, mas sim aumentar a
opo teraputica dos profissionais de sade ofertando medicamentos equivalentes,
tambm registrados, talvez mais baratos, com espectros de ao mais adequados e
com indicaes teraputicas complementares s existentes. E como objetivos
secundrios, mas no menos importantes, seriam a valorizao das tradies
populares e o fornecimento de substrato para o desenvolvimento da indstria local
(LAPA et al. 2007).
Pases com a biodiversidade como a do Brasil, tenderam a se beneficiar
dessa situao. Como os produtos naturais tradicionalmente j sugerem uma fonte
importante para medicamentos, os extratos vegetais serviram ento como ponto de
partida obteno dos novos medicamentos fitoterpicos. Lembrando que o
processo de validao de um fitoterpico tem como ponto de partida as informaes
etnofarmacolgicas e etnobotnicas, etapa relacionada identificao do material
em estudo. Passando-se posteriormente etapa farmacutica relacionada com a
produo de um extrato padro com o estudo de todos os seus ativos e indicadores,
29
alm do preparo da forma farmacutica para a administrao, com garantia da
qualidade e uniformidade da amostra, assim como com sua estabilidade nos testes
clnicos e pr-clnicos. Na sequncia passa-se a etapa dos ensaios biolgicos prclnicos: farmacodinmicos, farmacocinticos e toxicolgicos em animais de
laboratrio; para finalmente chegar etapa final dos ensaios clnicos realizados na
espcie humana comprovando os benefcios do uso medicinal do novo produto
suplantando os riscos de uma possvel ao txica (LAPA et al. 2007).
2.1.2 Legislao vigente no pas
A trajetria do desenvolvimento de medicamentos de origem vegetal no Brasil

nos remonta a dcada de 50, marcada por forte expanso do mercado de
medicamentos sintticos, surgindo os primeiros casos expressivos de efeitos
colaterais; clssico o ocorrido com a talidomida no ano de 1962, quando milhares
de crianas em todo o mundo nasceram malformadas por influncia desse frmaco.
Esse trgico evento serviu de alerta aos rgos de fiscalizao sanitria ao
demonstrar o risco potencial de medicamentos e estimular um maior controle do que
estava e viria a ingressar no mercado. Para os fitoterpicos, tal contexto propiciou a
formulao, pelo Servio Nacional de Fiscalizao da Medicina e da Farmcia
(SNMF), da Portaria n 22 de 30 de outubro de 1967, que estabeleceu normas para
o emprego de preparaes fitoterpicas (BRASIL, 1967).
Desde 1972, com a tentativa de reviso da Portaria n 22/1967, sentiu-se a
necessidade de atualizao da legislao brasileira de fitoterpicos, realizada
somente na dcada de 90 atravs da Portaria SVS n 6 de 31 de janeiro de 1995,
criada para eliminar as lacunas da legislao anterior e definir os rumos para os
produtos fitoterpicos no mercado brasileiro. No entanto questes permaneciam
como o que fazer com milhares de produtos que estavam sendo comercializados
sem registros, de forma irregular e insuficincia na maioria das novas exigncias
legais. Foi ento que Portaria n 6/1995 fixou um interstcio mximo de 5 anos para a
comprovao da segurana desses produtos atravs da realizao de testes
toxicolgicos pr-clnicos e clnicos (BRASIL, 1995).
30
A edio da Portaria SVS n 6/1995 desencadeou, em todo o mercado
fitoterpico, uma forte reao, oriunda principalmente do setor produtivo. Essa
reao barrou a implementao da norma e forou politicamente a sua reviso e
flexibilizao. Assim, desde janeiro de 1995, discutiram e buscaram-se frmulas para
flexibilizar a norma sanitria brasileira para fitoterpicos, conseguida atravs da
resoluo de Diretoria Colegiada (RDC) n 17 de 24 de fevereiro de 2000, que
classificou os medicamentos fitoterpicos em trs categorias para fins de registro,
alm de padronizar as literaturas aceitas como referncia bibliogrfica (BRASIL,
2000).
Em abril de 2004 o governo brasileiro atravs da ANVISA props a principal
legislao dos medicamentos fitoterpicos, a RDC n 48, que regulamenta o registro
de medicamentos fitoterpicos, estabelecendo requisitos necessrios para sua
concesso, os quais se baseiam na garantia de sua qualidade. As avaliaes
abrangem a matria-prima vegetal; os derivados da droga vegetal com a
determinao de um marcador, componente ou uma classe de compostos qumicos
(ex. alcalides, flavonides, cidos graxos, etc.) presente na matria-prima vegetal,
idealmente o prprio princpio ativo, e preferencialmente que tenha correlao com o
efeito teraputico, alm do o medicamento fitoterpico (produto final) (BRASIL,
2004).
importante evidenciar que os aspectos essenciais ao registro, como a
identificao botnica das espcies vegetais usadas, padres de qualidade e
identidade, eficcia e segurana comprovada para as indicaes propostas, foram
levados em considerao desde a primeira Portaria descrita, passando a um maior
detalhamento ao longo dos anos. Nesse sentido, os documentos oficiais mais
recentes apresentados na rea de fitoterpicos so: o Decreto n. 5.813, de 22 de
junho de 2006, que aprova a Poltica Nacional de Plantas Medicinais e Fitoterpicos
(PNPMF) e a Portaria 971, de 03 de maio de 2006, que aprova a Poltica Nacional
de Prticas Integrativas e Complementares (PNPIC).
O objetivo da PNPMF garantir populao brasileira o acesso seguro e
racional de plantas medicinais e fitoterpicos, promovendo o uso sustentvel da
biodiversidade, o desenvolvimento da cadeia produtiva e da indstria nacional. Entre
suas diretrizes est a garantia e promoo da segurana, eficcia e qualidade no
acesso a plantas medicinais e fitoterpicos, por meio da adoo de boas prticas de
31
cultivo e manipulao de plantas medicinais e de manipulao e produo de
fitoterpicos, segundo legislao especfica (BRASIL, 2006b).
A PNPIC tem como objetivo, no mbito das Plantas Medicinais e Fitoterapia,
garantir populao brasileira o acesso ao uso racional das plantas medicinais,
promovendo o uso da biodiversidade, o desenvolvimento da cadeia produtiva e a
sustentabilidade da indstria nacional. De acordo com a Poltica, para tornar
disponveis plantas medicinais e/ou fitoterpicos nas unidades de sade,
necessrio complementar as Boas Prticas de cultivo, manipulao e fabricao
(BRASIL, 2006a).
2.2 A espcie botnica estudada
2.2.1 A famlia Clusiaceae
A famlia Clusiaceae ou Guttifferae (nomina conservandum), pertence

ordem
Theales,
subclasse
Dilleniidae,
classe
Magnoliopsida
diviso
Magnoliophyta; composta por rvores, subarbustos e poucas ervas, constituda

aproximadamente por 38 gneros e 1100 espcies.
So plantas caracterizadas por possurem folhas opostas ou alternas, sendo
elas simples, sem estpulas e com vrias nervuras secundrias delgadas.
Raramente encontram-se flores solitrias. As inflorescncias so vistosas,
compostas por flores geralmente assimtricas, contendo de 2 a 5 spalas distintas e
4 ou 5 ptalas persistentes, andrginas ou unissexuadas. O androceu em geral
constitudo de muitos estames, filetes filiformes, espessados ou nulos e anteras
bitecas e rimosas. Os gros de plen produzidos possuem tamanho variado. O
ovrio spero, formado de 3 a 15 carpelos, com um a muitos vulos em cada
lculo. Os frutos podem ser cpsula, quando secos e baga ou drupa, quando
carnosos (CRONQUIST, 1981).
Na famlia so encontradas, com grande freqncia, clulas secretoras de
compostos
fenlicos
dispersas,
geralmente
produzindo
armazenando vrios tipos de xantonas (CRONQUIST, 1981).
proantocianidinas e
32
2.2.2 O gnero Vismia
O gnero Vismia compreende 52 espcies, com ampla distribuio nas

Amricas Central e Sul (EWAN, 1962). As antraquinonas so metablitos tpicos que
constituem esse gnero (MIRAGLIA et al. 1981), e a ocorrncia de antraquinonas
preniladas limitado apenas a trs gneros da famlia Clusiaceae: Vismia,
Hurungana e Psorospermum (DELLE MONACHE, 1985). H ainda outros
componentes tambm encontrados nesse gnero, tais como vrios triterpenides,
diantraquinonas, benzofenonas e lignanas (NAGEN e De OLIVEIRA, 1997).
Outro gnero com grande interesse farmacutico pertencente a essa famlia
o Hypericum, de onde provm o Hypericum perforatum L, planta herbcea e perene,
naturalmente encontrada em regies temperadas da Europa, da sia e da frica,
tradicionalmente usada na medicina popular por sua ao cicatrizante, diurtica,
bactericida, analgsica e antiinflamatria (ALAN e MULLER, 1998). Mais
recentemente, os extratos de H. perforatum tm sido utilizados nos tratamentos de
depresses leves e moderadas e nos distrbios do sono (VITIELLO, 1999). Os
principais grupos de constituintes bioativos relacionados s propriedades medicinais
de H. perforatum incluem as naftodiantronas (hipericina e pseudohipericina), os
flavonides (rutina, quercetina, quercitrina, isoquercitrina e hiperosdeo) e os
floroglucinis (hiperforina e adhiperforina) (BOMBARDELLI e MORAZZONI, 1995).
2.2.3 A espcie Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
A Vismia guianensis (Aubl.) Choisy (Figura 1), espcie nativa da Amrica do

Sul, pode ser encontrada na Colmbia, Venezuela, Guiana e Brasil, mais
precisamente nas matas de vegetao secundria dos estados do Amazonas, Par,
Maranho, Bahia e Minas Gerais (EWAN, 1962). conhecida popularmente como
lacre, rvore da febre, goma-lacre, pau-de-lacre ou lacre-branco. rvore de pequeno
porte mede de 3 a 7 metros de altura, copa aberta e irregular, com ramos novos
ferrugneos-pubrulos, cujas folhas so verdes na regio superior e amareladas na
regio inferior (LORENZI e MATOS, 2002).
33
A V. guianensis uma espcie que fornece bonita madeira de cor vermelhoplido com veias finas e claras, tecido fibroso, durabilidade regular, prpria para
construo civil, marcenaria de luxo e carpintaria. A casca muito espessa e por
isso utilizada para a cobertura de casas (PIO CORRA, 1926).
Algumas espcies de Vismia tm importncia devido ao ltex de cor amareloalaranjada que exsudam ao realizar-se um corte em vrias partes da planta. Esse
ltex tem sido utilizado por algumas tribos do Amazonas para o tratamento de
feridas, herpes e infeces por fungos na pele (PASQUA et al. 1995). Do seu ltex
ou goma-resina preparada uma goma resinosa denominada goma-guta
americana utilizada em pintura e para a obteno de esmalte de unhas (LORENZI e
MATOS, 2002), sendo tambm utilizada como purgativo (PIO CORRA, 1926).
Levantamentos realizados em diferentes municpios do Brasil, em particular
no estado do Par, relatam seu uso na medicina popular. Kerharo (1974, p. 485
apud BOTTA et al. 1986, p. 1217) destaca seu uso principalmente no tratamento de
dermatoses, apresentando-se como um potente laxativo (LORENZI e MATOS,
2002), alm de suas folhas serem empregadas como tnico (MACFOY e SAMA,
1983), possurem propriedades antipirticas e anti-reumticas (LORENZI e MATOS,
2002).
Figura 1 - Fotografia de um espcime de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy (Arquivo pessoal)
34
2.2.3.1 Constituio qumica
Para a espcie em estudo, muitos metablitos secundrios j foram

identificados na sua constituio: -sitosterol, vismiona H (BOTTA et al. 1985),
quinonas (GONZALES et al. 1980; DELLE MONACHE et al. 1980), diantronas
(POLITI at al. 2004), antraquinonas (GROSSE et al. 1997; BILIA et al. 2000, POLITI
et al. 2004) e xantonas (BOTTA et al. 1986; BILIA et al. 2000). Seo e colaboradores
(2000) conseguiram isolar da frao clorofrmica das razes de V. guianensis cinco
benzofenonas denominadas de vismiaguianonas e duas benzocumarinas chamadas
de vismiaguianis.
A V. guianensis est entre as espcies vegetais como a Coffea arabica,
produtoras de componentes do metabolismo secundrio que funcionam como um
mecanismo de defesa. Estudos comprovaram que esse metabolismo secundrio
desempenha um impedimento de alimentao predominantemente acumulado nos
rgos e tecidos que esto mais expostos ao ataque e requer mais proteo como
as folhas e os frutos (HARBORNE et al. 1988).
Esse mtodo de defesa pode ser produzido como resposta temporria a
alguma injria, a um ataque patognico ou ainda estar constantemente presente em
diferentes concentraes dependendo do estgio de desenvolvimento e do rgo
onde se encontra. Para a V. guianensis a estratgia de defesa envolve a produo
de dois tipos de componentes fenlicos, que podem ser visualizados na Figura 2, a
vismiona (A) (DELLE MONACHE et al. 1979a, p. 301 apud DELLE MONACHE,
1980, p. 487) e a ferruginina (B) (DELLE MONACHE et al. 1979b, p. 2143 apud
DELLE MONACHE, 1980 p. 487). Monacelli e seus colaboradores (1997)
comprovaram que as folhas de V. guianensis no seu estgio primrio de
desenvolvimento apresentavam 0,44% de vismiona e com o passar do tempo a
porcentagem nas folhas maduras diminua para 0,20%, enquanto que a presena de
ferruginina no foi detectada nas folhas, somente sendo acumulada no tecido
secundrio dos galhos.
Poucos estudos foram realizados at ento para extratos contendo as folhas
de V. guianensis, mas alguns metablitos secundrios j foram isolados:
antraquinonas (GONZALES et al. 1980; POLITI et al. 2004) mistura de diantronas,
vismiona A, triterpenos como o lupeol (SANTOS et al. 2007), -amirina, e -sitosterol
35
(GONZALES et al. 1980), alm de flavonides, benzofenonas e xantonas (POLITI et
al. 2004).
Segundo Politi e colaboradores (2004) esto presentes quatro classes de
metablitos secundrios como componentes principais para as folhas da V.
guianensis: antraquinonas, flavonides, xantonas e benzofenonas, sendo a classe
das antraquinonas o composto que apresentou o maior nmero de componentes
encontrados, cujo esqueleto base dessa classe a emodina: 1,3,8-trihidroxi-6metilantraquinona (Figura 2 - C).
C
Figura 2 - Compostos fenlicos: Vismiona (A) e Ferrunginina (B) e a antraquinona emodina (C)
2.2.3.2 Atividades biolgicas comprovadas
Devido aos seus constituintes qumicos tanto o seu potencial anti-cancergeno

quanto antimicrobiano vem sendo constantemente estudado e confirmado. A
vismiona A, um constituinte pertencente a essa espcie tm sido reportado como um
36
antineoplsico, apresentando forte atividade contra certos tumores, como o
carcinoma de ovrio e melanocarcinoma B16 (CASSINELLI et al. 1986). As
benzofenonas e as benzocumarinas apresentaram uma moderada citotoxicidade
contra a linha celular KB (carcinoma epidermide oral) (SEO et al. 2000).
Os estudos de Suffredini e colaboradores (2006) registram a ocorrncia de
atividade letal significante dos extratos vegetais de V. guianensis sobre clulas
tumorais humanas de mama (MCF-7). J os experimentos de Suffredini e seus
colaboradores no ano de 2007, revelaram que os extratos aquosos dos frutos e das
sementes dessa espcie demonstraram uma boa letalidade sobre uma linha de
clulas cancergenas de adenocarcinoma de clon (KM-12).
lvarez e seus colaboradores em um estudo recente (2008) detectaram a
presena de compostos fenlicos nos frutos de V. guianensis capazes de exercer
uma potente atividade antioxidante. Um desses compostos fenlicos a hidroxiferrunginina A isolada do ltex dessa espcie, capaz de inibir a topoisomerase
II- humana servindo como ponto de partida para o desenvolvimento de futuros
medicamentos antitumorais (LINS et al. 2007).
Os estudos de Santos e colaboradores (2007) utilizando o mtodo de difuso
em meio slido, confirmaram a ao antimicrobiana da frao hexnica da casca e
dos extratos etanlicos bruto da raiz e da casca da V. guianensis frente aos
seguintes
microorganismos:
Mycobacterium
phlei,
Staphylococcus
aureus,
Escherichia coli e Bacillus subitilis.
2.3
Mtodos
analticos
utilizados
no
desenvolvimento,
avaliao
caracterizao de medicamentos fitoterpicos
As anlises fsico-qumicas utilizadas para o controle de qualidade de um

medicamento fitoterpico juntamente com o controle do processo produtivo da planta
medicinal, buscam favorecer a obteno de um produto final padronizado com
garantias de segurana e eficcia.
Atualmente novas metodologias analticas visam substituir os atuais mtodos
clssicos, consumindo muito tempo e dinheiro, alm de utilizarem grandes
quantidades dos extratos vegetais, proporcionando perda excessiva de material e
37
utilizando grandes quantidades de solventes orgnicos e reagentes txicos. Esses
mtodos esto sendo utilizados no desenvolvimento, avaliao e caracterizao da
matria-prima e da formulao semi-slida. Dentre os mais comumente empregados
em vrias indstrias temos as anlises trmicas, a espectroscopia na regio do
infravermelho e ultravioleta e a cromatografia.
2.3.1 Anlise trmica
Anlise trmica um termo que abrange um grupo de tcnicas nas quais uma
propriedade fsica ou qumica de uma substncia, ou de seus produtos de reao,
monitorada em funo do tempo ou temperatura, enquanto a temperatura da
amostra, sob uma atmosfera especfica, submetida a uma elevao controlada de
temperatura. Os mtodos trmicos tm sido utilizados na avaliao da cintica de
reao, estabilidade e decomposio, sendo que os mtodos mais empregados so:
Termogravimetria
(TG),
Anlise
Trmica
Diferencial
(DTA)
Calorimetria
Exploratria Diferencial (DSC) (PORTILLA, 2003).

A TG uma tcnica na qual a mudana da massa de uma substncia
medida em funo da temperatura enquanto esta submetida a uma programao
especfica. Comumente empregada nos estudos da cintica das reaes
envolvendo espcies volteis, nos estudos da desidratao e da higrocospicidade,
reaes no estado slido que liberam produtos volteis, alm da determinao da
umidade, volatilidade e composio de cinzas (RODRIGUES e MARCHETTO,
2002).
A DTA uma tcnica na qual a diferena de temperatura entre uma
substncia e um material de referncia medida em funo da temperatura
enquanto a amostra e o material de referncia so submetidos mesma
programao de aquecimento monitorada por sensores de temperatura. Mudanas
na amostra tais como fuso, solidificao e cristalizao so ento registradas sob a
forma de picos em grficos, sendo a variao na capacidade calorfica da amostra
registrada como um deslocamento da linha base. Seu uso principal detectar a
temperatura inicial dos processos trmicos e qualitativamente caracteriz-los como
endotrmicos e exotrmicos (RODRIGUES e MARCHETTO, 2002).
38
O DSC foi desenvolvido com o intuito de evitar as dificuldades encontradas no
DTA ou compens-las, criando um equipamento capaz de quantificar a energia
envolvida nas reaes de entalpia. Os processos fsicos comumente estudados por
DSC so os que envolvem troca de calor como transio vtrea (troca de linha de
base), cristalizao (transio exotrmica) e fuso (transio endotrmica)
(RODRIGUES e MARCHETTO, 2002).
Os
fatores que
podem influenciar
nos resultados
desses mtodos
termoanalticos podem ser classificados em dois grupos: os fatores instrumentais

(taxa de aquecimento, atmosfera e geometria do forno e porta da amostra) e as
caractersticas da amostra (quantidade, solubilidade dos gases na amostra, tamanho
da partcula, natureza da amostra e condutividade trmica) (MATOS, 2007).
2.3.2 Espectroscopia nas regies do infravermelho e ultravioleta
A radiao infravermelha corresponde aproximadamente parte do espectro

eletromagntico situada entre as regies do visvel e das microondas. A poro de
maior utilidade para a qumica orgnica est situada entre 4000 cm-1 e 400 cm-1
faixa que se converte, quando absorvida por uma molcula orgnica, em energia de
vibrao molecular. O processo quantizado, como uma srie de bandas, pois cada
mudana de nvel de energia vibracional corresponde a uma srie de mudanas de
nveis de energia rotacional. (SILVERSTEIN et al. 2007).
possvel obter espectros de gases, lquidos e slidos no infravermelho. Os
lquidos podem ser examinados no seu estado puro ou em soluo, onde o solvente
deve ser razoavelmente transparente na regio de interesse para no interferir no
resultado e lquidos volteis so examinados em clulas fechadas com espaadores
muito finos. Amostras slidas so examinadas na forma de p em suspenso, de
disco prensado (KBr, ZnSe, etc.) ou de filme vtreo depositado sobre uma placa
transparente (SILVERSTEIN et al. 2007).
O espectro no infravermelho de um composto qumico considerado uma de
suas propriedades fsico-qumicas mais caractersticas e, por conta disto, a
espectroscopia na regio do infravermelho tem extensa aplicao na identificao de
compostos (SILVERSTEIN et al. 2007).
39
Outro tipo de espectroscopia a realizada na regio do ultravioleta (UV)
envolvendo a espectroscopia de ftons, portanto chamada de espectrofotometria.
Utilizando uma faixa compreendida entre 200 a 400 nm nessa faixa de energia as
molculas sofrem transies eletrnicas de orbitais moleculares (SILVERSTEIN et
al. 2007)
A espectrofotometria na regio do UV um dos mtodos analticos mais
usados nas determinaes analticas em diversas reas, sendo aplicada para
determinaes de compostos orgnicos e inorgnicos, como, por exemplo, na
identificao do princpio ativo de frmacos. A espectroscopia de absoro
molecular valiosa para a identificao dos grupos funcionais na molcula. Mais
importante, entretanto, so as aplicaes da espectroscopia de absoro no
ultravioleta para a determinao quantitativa de compostos contendo grupos
cromforos (VINAD e VINAD, 2005)
A espectrofotometria na regio UV do espectro eletromagntico uma das
tcnicas analticas mais empregadas em funo de robustez, custo relativamente
baixo e grande nmero de aplicaes desenvolvidas. fundamentada na lei de
Lambert-Beer, que a base matemtica para medidas de absoro de radiao por
amostras no estado slido, lquido ou gasoso, nas regies ultravioleta, visvel e
infravermelho do espectro eletromagntico (PERKAMPUS, 1992).
O presente trabalho baseia-se na determinao de parmetros de controle de
qualidade de fitoterpico, sendo este constitudo por uma mistura complexa de
componentes e devido s limitaes de sensibilidade dessa metodologia com
deteco espectrofotomtrica, frequentemente necessrio recorrer a etapas
preliminares para separao e concentrao dos elementos desejados, com
consequente aumento de sensibilidade. Dentre essas tcnicas, pode-se citar a
extrao lquido-lquido, precipitao e extrao slido-lquido (CHENG e BRAY,
1955).
2.3.3 Cromatografia
A cromatografia um mtodo fsico-qumico que permite a separao de

misturas de substncias em seus componentes individuais, possibilitando a
40
obteno de informaes quantitativas e qualitativas. Est fundamentada na
migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a
diferentes interaes, entre duas fases imiscveis, a fase mvel e a fase
estacionria. Diversas so as tcnicas de cromatografia que podem ser utilizadas,
entre as principais est a cromatografia em camada delgada (CCD).
A CCD uma tcnica amplamente utilizada para fins de anlise, tanto de
extratos vegetais brutos quanto para avaliar o resultado de um processo de
separao. Consiste na separao dos componentes atravs da migrao
diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobre uma superfcie
plana (LOPES, 2006). til para se avaliar o perfil cromatogrfico de um
determinado extrato obtido a partir de uma espcie vegetal ou de extratos medicinais
para substncias farmacologicamente ativas, antes de uma anlise mais detalhada
por tcnicas instrumentais tais como a cromatografia de coluna (RIJKE et al. 2006)
O parmetro mais importante a ser destacado dentro dessa tcnica o fator
de reteno (Rf), razo entre a distncia percorrida pela substncia em questo e a
distncia percorrida pela fase mvel, sobre a fase estacionria. Mesmo os valores
de Rf sendo influenciados por diversos fatores, tais como temperatura, umidade
ambiental, tamanho da placa, saturao da cuba cromatogrfica e quantidade de
amostra aplicada (LINDEN et al. 2007) esse fator de retardamento serve para
identificao de uma possvel substncia separada ao ser comparada ao seu padro
de referncia.
Tratando-se de um sistema cromatogrfico mais qualificado temos a
Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE), capaz de separar misturas que
contm um grande nmero de compostos similares e realizar determinaes
quantitativas de uma grande variedade de compostos presentes em diversos tipos
de amostras, em escalas de tempo de poucos minutos, com alta resoluo,
eficincia e detectabilidade (JARDIM, 2006).
A cromatografia lquida uma tcnica moderna na qual se utilizam todos os
tipos de cromatografia: adsoro, troca inica e filtrao molecular. Sua vantagem
est na possibilidade de se utilizar micropartculas, aumentando a eficincia da
separao, possui capacidade de separao elevada e separaes a temperatura
ambiente, no se limitando volatilidade ou estabilidade trmica das substncias,
alm da rapidez e reprodutibilidade das anlises, as amostras no so destrudas
41
pelo detector e podem ser coletadas e utilizadas puras (separaes em escala
preparativa) (SHARAPIN, 2000)
Na CLAE pequenas quantidades da amostra so injetadas em uma coluna
fechada reaproveitvel, com recheios de alta resoluo. Essas colunas so muito
eficazes, mas oferecem uma grande resistncia vazo da fase mvel, por isso fazse necessrio empregar uma bomba de alta presso que faz com que a fase mvel
migre a uma velocidade razovel atravs da coluna. Ao final dessa coluna podem
existir vrios tipos de detectores, proporcionando um registro contnuo da
composio do efluente, o que permite obter um cromatograma que se pode utilizar
para identificar e/ou quantificar os componentes da amostra (JARDIM, 2006).
2.4 A administrao de frmacos na pele
2.4.1 A pele
A pele um dos maiores rgos do corpo humano, pesando em um adulto,

por volta de 4 kg, cobrindo uma superfcie de cerca de 2 m e recebendo
2
aproximadamente
um tero
da circulao sangunea do corpo. Com a espessura de
apenas alguns milmetros (2,97 0,28 mm), a pele separa a rede de circulao
sangunea e os demais rgos do corpo do ambiente externo, ajudando a manter a
temperatura corporal, evitando a perda excessiva de gua pelo corpo, alm de
proteger o indivduo contra a entrada de agentes qumicos e ambientais danosos,
particularmente infecciosos (bactrias e vrus), impurezas e radiao solar,
possuindo tambm funes metablicas, imunolgicas e tteis (CHIEN, 1992).
A pele apresenta-se constituda por uma poro epitelial de origem
ectodrmica, a epiderme, e uma poro conjuntiva de origem mesodrmica, a derme
(Figura 3). O limite entre a epiderme e a derme no regular, apresentando
salincias e reentrncias das duas camadas que imbricam e se ajustam entre si.
Abaixo e em continuidade com a derme est a hipoderme, que, embora tenha a
mesma origem da derme, no faz parte da pele (JUNQUEIRA e CARNEIRO, 2004).
Este tecido subcutneo funciona como uma reserva de gordura, com propriedades
42
isolantes e protetoras; no possui um papel na penetrao cutnea de frmacos
porque se situa abaixo do sistema vascular (SINGH et al. 2001).
A derme formada por uma rede de fibras de colgeno de uma espessura
aproximadamente uniforme, que so responsveis pelas propriedades elsticas da
pele. A camada superior da derme formada por papilas que se projetam em
direo epiderme e que contm vasos sanguneos e linfticos, as terminaes
nervosas e os apndices cutneos, como folculos pilosos, glndulas sebceas e
sudorparas (Figura 3) (CHIEN, 1992).
A epiderme pode ser dividida em duas partes: epiderme vivel, parte mais
interna na qual as clulas se proliferam, sofrem alteraes e do origem s clulas
mortas do estrato crneo. O estrato crneo a parte mais superficial, de grande
importncia para os estudos de penetrao cutnea (PIROT et al. 1998; KUMAR e
PHILIP, 2007). O estrato crneo formado por uma estrutura bifsica de lipdioprotena e tem aproximadamente de 10 a 20 m de espessura (PIROT et al. 1998),
sendo composto por clulas anucleadas (cornecitos) dispersas em uma matriz rica
em lipdios no polares. Essa matriz constituda principalmente por ceramidas
(18%), cidos graxos livres (19%), esterides (14%) e triacilgliceris (25%). O estrato
crneo requer no mnimo 10% de umidade para que sua flexibilidade seja mantida, e
a camada de lipdios intercelulares a responsvel direta por evitar a perda de gua
transcutnea (FARTASCH, 1997). Assim, pela sua estrutura e composio, o estrato
crneo a principal barreira limitante difuso percutnea de frmacos.
Figura 3 - Estrutura da pele, suas camadas e anexos

Fonte: <http://www.afh.bio.br/sentidos/img/sentidos%20pele.jpg>
43
Um frmaco pode atravessar o estrato crneo atravs de trs diferentes vias
(Figura 4). So elas: via intercelular: o frmaco difunde-se ao redor dos cornecitos,
permanecendo constantemente dentro da matriz lipdica; via transcelular: o frmaco
passa diretamente atravs dos cornecitos e da matriz lipdica intercelular
intermediria; via apndices: rota paralela, na qual os frmacos podem ser
absorvidos pelo folculo piloso, glndulas sebceas e glndulas sudorparas.
Figura 4 - Esquema representativo das vias de permeao do frmaco atravs do estrato crneo via
transcelular e via intercelular (MARTINS e VEIGA, 2002)
2.4.2 Formulaes semi-slidas de uso tpico
Com o desenvolvimento cientfico e tecnolgico e com o crescimento do uso

dos produtos fitoterpicos, novas pesquisas tm sido desenvolvidas no intuito de
desenvolver novas formas farmacuticas dentro da fitoterapia. Dentre estas formas
pesquisadas esto as de uso externo aplicadas na pele, que vm tendo uma boa
aceitao por parte dos pacientes, aumentando a adeso aos tratamentos. As
pesquisas desenvolvidas tm procurado melhorar a absoro dos fitoterpicos
utilizando facilitadores de permeao cutnea. As vantagens do uso de fitoterpicos
44
aplicados na pele so vrias. H menor irritao e toxicidade sistmica; h proteo
contra a acidez do pH do estmago em relao aos frmacos sensveis; evita o
efeito de primeira passagem e possveis interaes dos frmacos com alimentos e
com a microbiota intestinal; permitindo o controle de absoro e possibilidades de
aplicao em diferentes locais (FERREIRA, 2000).
Os medicamentos tpicos apresentam trs funes principais, fornecer
hidratao pele, proteger feridas abertas do ambiente, permitir o rejuvenescimento
da pele e ainda fornecer um meio especfico para um efeito local ou sistmico. A
formulao deve levar em considerao o fluxo e a reteno da droga sobre a pele,
sua capacidade de reservatrio, sua esttica e aceitabilidade pelo usurio (ALLEN
JNIOR, 2003).
Quando o teor de gua da pele cai menos de cerca de 10%, o estrato crneo
se torna frgil e facilmente quebradio, isso resulta em irritantes e bactrias sendo
capazes de penetrar mais facilmente, causando possveis dermatoses: termo
inespecfico utilizado para qualquer anormalidade ou erupo cutnea incluindo
inmeros transtornos, ou seja, uma desordem na pele. O tratamento vai depender
do problema especfico e da parte da pele envolvida, incluindo anti-inflamatrios,
antibiticos, antifngicos, corticosterides, anestsicos e outros (ALLEN JNIOR,
2003)
Normalmente as formulaes dermatolgicas, so preparaes semi-slidas
incluindo pomadas, cremes, loes, pastas e gis. Os gis so os mais utilizados
devido possurem clareza e brilho, so lavveis com gua e quando expostos a
elevadas temperaturas mantm a sua viscosidade e caractersticas (ALLEN
JNIOR, 1997)
Particularmente utilizam-se os gis hidroflicos como base dermatolgica, pois
apresentam fcil espalhamento, no so gordurosos e podem veicular princpios
ativos hidrossolveis, lipossolveis (em associao com agentes solubilizantes) e
lipossomas. Existe uma ampla variedade de matrias-primas disponveis para a
preparao de gis e a seleo adequada para o desenvolvimento destas
formulaes, baseia-se nos requisitos necessrios para a estabilidade, liberao e
eficcia do ativo que eventualmente ser incorporado na preparao. Vrios
polmeros de origem natural, semi-sinttica e sinttica vm sendo usados nas
formulaes de gis de aplicao cosmtica e/ou farmacutica, podendo apresentar
natureza inica ou no-inica. Os gis de natureza no-inica possuem estabilidade
45
em ampla faixa de pH, sendo possvel veiculao de substncias de carter cido
(ZANGUE, 2008).
2.4.3 Terapia antimicrobiana para uso tpico
Os medicamentos antimicrobianos representam um dos principais avanos da

farmacoterapia nas ltimas dcadas dentro da teraputica medicamentosa. Os
termos antibitico e antimicrobiano so considerados como sinonmia, designando
assim toda substncia oriunda de seres vivos, microrganismos ou vegetais, como
tambm aquelas sintetizadas em laboratrio com a capacidade de em pequenas
concentraes apresentarem atividade letal ou inibitria contra espcies microbianas
e prevenir o desenvolvimento de microrganismos resistentes (AMATO NETO et al.
1994).
Embora as indstrias qumicas e farmacuticas tenham produzido uma
grande diversidade de antimicrobianos que agem sobre diversos microrganismos
patognicos, estudos buscam por um antimicrobiano ideal, que apresente maior
espectro de ao, menor toxicidade, menor custo e menor indcio de resistncia
bacteriana (PAZHANI, 2004). Pesquisas voltadas avaliao de produtos naturais
como teraputicos principalmente com atividade antimicrobiana esto sendo
estimulados no intuito de criar novas drogas, utilizando principalmente plantas da
medicina popular, priorizando a biodiversidade nacional.
A terapia antimicrobiana tpica apresenta vrias vantagens potenciais sobre a
administrao oral ou parenteral de antimicrobianos: facilidade de administrao,
reduo potencial de reaes adversas sistmicas, maior probabilidade de adeso
ao tratamento, rpida liberao de adequadas concentraes no stio de infeco e
um menor custo (dependendo do agente utilizado). Quando administrados na pele,
os antimicrobianos primeiramente atingem o rgo-alvo em concentraes
decrescentes da superfcie da pele para o tecido subcutneo, depois so
distribudos pelo organismo em quantidades variveis e, finalmente, eliminados.
Depois da aplicao de pequenas quantidades do produto diretamente no stio da
46
leso, alcanam altos nveis locais que seriam txicos se provenientes de
administrao sistmica (WANNMACHER, 2006).
2.5 Avaliao da estabilidade de formulaes semi-slidas
2.5.1 Avaliao preliminar da estabilidade
Segundo a Monografia da International Federation of Societies of Cosmetic

Chemists IFSCC (1992) o estudo da estabilidade considerado um procedimento
preditivo, baseado em dados obtidos de produtos armazenados em condies que
visam acelerar alteraes passveis de ocorrer nas condies de mercado. Como em
todo procedimento preditivo os resultados no so absolutos, mas tm probabilidade
de sucesso.
O estudo de estabilidade fornece indicaes sobre o comportamento do
produto, em determinado intervalo de tempo, frente a condies ambientais a que
possa ser submetido, desde a fabricao at o trmino da validade. Pelo perfil de
estabilidade de um produto possvel avaliar seu desempenho, segurana e
eficcia, alm de sua aceitao pelo consumidor. O estudo da estabilidade de
produtos cosmticos pode contribuir para: orientar o desenvolvimento da formulao
e do material de acondicionamento adequado; fornecer subsdios para o
aperfeioamento das formulaes; estimar o prazo de validade e fornecer
informaes para a sua confirmao; auxiliar no monitoramento da estabilidade
organolptica, fsico-qumica e microbiolgica (ANVISA, 2004).
No entanto, cada componente presente na formulao, ativo ou no, pode
afetar a estabilidade de um produto. Variveis relacionadas formulao, ao
processo de fabricao, ao material de acondicionamento e s condies ambientais
e de transporte podem influenciar na estabilidade do produto, como os fatores
externos aos quais o produto est exposto: tempo, temperatura, luz e oxignio,
umidade, material de acondicionamento, microorganismos e vibrao, assim como
os fatores relacionados prpria natureza das formulaes e sobretudo interao
47
de seus ingredientes entre si e ou com o material de acondicionamento resultando
em incompatibilidades de natureza fsica ou qumica (ANVISA, 2004).
2.5.1.1 Testes de estabilidade
Os testes de estabilidade devem ser realizados durante o desenvolvimento de

novas formulaes e de lotes-piloto de laboratrio e de fbrica, quando ocorrerem
mudanas
significativas
no
processo
de
fabricao,
para
validar
novos
equipamentos ou processo produtivo, quando houver mudanas significativas nas

matrias-primas do produto e quando ocorrer mudana significativa no material de
acondicionamento que entram em contato com o produto. Para isso as amostras
devem ser armazenadas em condies que acelerem mudanas passveis de
ocorrer durante o prazo de validade. Devendo-se estar atento para essas condies
no serem to extremas que, em vez de acelerarem o envelhecimento, provoquem
alteraes que no ocorreriam no mercado (ANVISA, 2004).
A seqncia sugerida de estudos seriam os testes: preliminares, acelerados e
de prateleira. No presente trabalho a avaliao da formulao semi-slida
fitoterpica proposta contar apenas com os testes de estabilidade preliminar,
tambm conhecido como Teste de Triagem, Estabilidade Acelerada ou de Curto
Prazo, tendo como objetivo auxiliar e orientar a escolha das formulaes.
Inicialmente o produto ser submetido ao teste de centrifugao tendo que
permanecer estvel e qualquer sinal de instabilidade indicar a necessidade de
reformulao. Se aprovado nesse teste, o produto pode ser submetido aos testes de
estabilidade: estresse trmico e determinao do valor de pH, alm de se avaliar as
suas caractersticas organolpticas (cor, odor e aspecto).
48
3.
OBJETIVOS
49
3. OBJETIVOS
3.1 Objetivo Geral
Contribuir para a elaborao e desenvolvimento de formulao fitoterpica

semi-slida contendo a tintura padronizada de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy.
3.2 Objetivos especficos
Analisar anatomicamente o limbo foliar de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy.
Caracterizar as propriedades fsicas e fsico-qumicas da matria-prima

vegetal (p).
Caracterizar as propriedades qumicas e fsico-qumicas do produto

intermedirio (tintura).
Avaliar a atividade antimicrobiana do extrato seco da tintura de Vismia

guianensis (Aubl.) Choisy.
Analisar quantitativamente o marcador na tintura de Vismia guianensis (Aubl.)

Choisy.
Desenvolver e validar o mtodo de quantificao por espectrofotometria na

regio do ultravioleta.
Planejar a formulao antimicrobiana fitoterpica contendo a tintura

padronizada das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy.
Avaliar
preliminarmente
estabilidade
da
formulao
antimicrobiana
fitoterpica contendo a tintura padronizada das folhas de Vismia guianensis

(Aubl.) Choisy.
50
4. MATERIAL E MTODOS
51
4. MATERIAL E MTODOS
4.1 Material
4.1.1 Matria-prima vegetal
- Nome cientfico: Vismia guianensis (Aubl.) Choisy.

- Famlia botnica: Clusiaceae.
- Tribo: Vismieae.
- Gnero: Vismia.
- Nome popular: lacre, rvore da febre, goma-lacre, pau-de-lacre ou lacrebranco.
-Parte usada: folhas.
4.1.2 Reagentes e solues
Acetato de etila, acetonitrila, cido clordrico (HCl) 5%, gua destilada, gua
oxigenada, gua ultra-pura, lcool etlico absoluto 99,8 P.A, azul de toluidina 1%,
clorofrmio, dimetil sulfxido , ter etlico, fosfato de sdio 0,1M, glutaraldedo 2,5%,
hidroxietilmetacrilato,
n-hexano,
metanol,
metilparabeno,
hidroxietilcelulose,
propilenoglicol, reativo de Pascov, reativo de Fehling A e B, reativo de Bouchard,

reativo de Dragendorff, reativo de Mayer, reativo de Bertrand e reativo de Kede,
soluo de HCl 6N, soluo de NH4OH (6N), soluo metanlica de hidrxido de
potssio 10%, soluo de cloreto frrico e tolueno.
52
4.1.3 Equipamentos
Micrtomo de rotao (Jung); fotomicroscpio modelo XSZ-150Ai (Medlux);

Estufa termoestatizada Quimis Q-314M222; estufa modelo S805T (BIOPAR); moinho
de facas; agitador eletromagntico para peneiras (Bertel); balana analtica modelo
BK 500 (GEHAKA); forno mufla modelo 355l (ENGRO); alcometro de Gay Lussac;
potencimetro modelo pHS3B (pHTek); evaporador rotativo com banho-maria
modelo 802 srie 72025 (Fisatom), bomba de vcuo modelo TE-058; banho de ultrasom Ultrasonic Cleaner
modelo 1450 Unique (MaxiClean), balana analtica
FA2104N (Bioprecisa); cmara de luz ultravioleta 254-365 nm; cromatgrafo lquido

de alta eficincia com arranjo de diodos modelo L-7455 LaCrhom (Merck Hitachi);
liofilizador modelo MicroMicroModulyo/115 srie 1K470021-1B freqncia 60 Hz 20
A acoplado a bomba de vcuo modelo VLP-200 e ao filtro de leo VPOF-110
(Thermo Savent); analisador trmico modelo DTG-60 e DSC-60 (Shimadzu);
espectrmetro de infravermelho IR100 spectrometer (Thermo electro corporation),
centrfuga clnica angular fixo com capacidade 12 x 16 e tacmetro e timer de
velocidade (HT); potencimetro pH21 pH/mV meter (HANNA); espectrofotmetro:
Spectrum UV-VIS spectrophotometer (SP-2000UV).
4.2 Mtodos
As anlises descritas a seguir foram realizadas nos laboratrios de Pesquisa

e Desenvolvimento (P&D) farmacotcnico, Bromatologia, Fitoqumica Controle de
qualidade e Microbiologia da Faculdade de Farmcia. A anlise morfoanatmica das
folhas foi realizada no laboratrio de Botnica do Instituto de Cincias Biolgicas. A
anlise trmica e o IV foram realizados no laboratrio de Catlise e Oleoqumica do
Instituto de Cincias Exatas e Naturais (ICEN), todos da Universidade Federal do
Par.
53
4.2.1 Obteno do material vegetal
O material vegetal foi adquirido junto a associao dos vendedores de ervas

do mercado do Ver-o-Peso (Ver-as-Ervas), procedente da regio metropolitana de
Belm-PA, distrito de Icoaraci (latitude 1 17 46 S e longitude 48 27 58.02 O)
coletado ao final do ms de maro de 2008
4.2.2 Identificao botnica do material vegetal
A identificao da espcie foi realizada pelo Professor Dr. Mrio Augusto G.

Jardim botnico do Museu Paraense Emlio Goeldi. Uma exsicata encontra-se
depositada no herbrio desse museu, sob o nmero de registro MG: 2500133
(Figura 5).
Figura 5 - Exsicata de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy, com registro MG:2500133 (Arquivo pessoal)
54
4.2.3 Caracterizao da anatomia vegetal das folhas de Vismia guianensis (Aubl.)
Choisy
A anlise das caractersticas estruturais das folhas de V. guianensis foi

realizada com observaes no material in vivo e no material fixado. As imagens das
caractersticas macroscpicas das estruturas, in vivo, foram realizadas utilizando-se
cmera fotogrfica digital. Para imagens de algumas estruturas do material in vivo,
usou-se microscpio estereoscpico, acoplado a equipamento fotogrfico.
Os estudos microscpicos foram realizados com o material fixado em
glutaraldedo 2,5%, em tampo fosfato de sdio 0,1 M (pH 7,2). Posteriormente
houve a desidratao do material em srie gradual etlica crescente para infiltrao
em hidroxietilmetacrilato (Jungs Historesin). As seces de 8 m de espessura
foram feitas em micrtomo de rotao para a confeco das lminas permanentes.
O material foi corado com azul de toluidina 1%, observado em microscpio ptico.
4.2.4 Processamento da amostra
As folhas frescas foram separadas manualmente, retirando-se as que se

apresentavam deterioradas, manchadas e com sinal de ataque por insetos ou
fungos. Em seguida foram lavadas com lcool 70 GL, para a retirada das sujidades,
e postas na bancada para secar a temperatura ambiente por quatro dias
consecutivos. Aps esse perodo, levaram-se as mesmas para secar em estufa de ar
circulante, a uma temperatura de 40 2 C. Aps a retirada das folhas j secas da
estufa, estas foram ento trituradas em moinho de facas inoxidvel e o produto
obtido desta etapa foi o p.
55
guianensis (Aubl.) Choisy (FARMACOPIA BRASILEIRA 4 Ed., 1988)
4.3.1. Determinao da distribuio granulomtrica
Aproximadamente 5 g do p foram submetidos a uma srie de tamises com

abertura de malha (1700, 710, 355, 250, 180 e 125 m) usando-se um vibrador de
tamises, durante 20 minutos. O tamanho das partculas foi analisado em triplicata e
avaliado pela quantificao percentual de reteno do p em cada tamis.
4.3.2. Determinao da perda por dessecao
Exatamente 1 g do p foi transferido para pesa-filtro previamente dessecado e

tarado. A amostra foi submetida a aquecimento em estufa a 105 C durante 2 horas
seguidas de resfriamento em dessecador e pesagem. A operao foi repetida at
obteno de peso constante. Os resultados de trs determinaes foram avaliados
em termos de porcentagem ponderal sobre a quantidade da amostra, utilizando a
equao 1:
% perda = Pu Ps x 100
Pa
Pa = peso da amostra (g)
Pu = peso do pesa-filtro contendo a amostra antes da dessecao (g)
Ps = peso do pesa-filtro contendo a amostra aps a dessecao(g)
(1)
56
4.3.3 Determinao do teor de cinzas totais
Exatamente 3 g do p foram transferidos a cadinhos de porcelana

previamente calcinados, resfriados e pesados. As amostras foram carbonizadas em
mufla e incineradas a 450 C por 2 horas. Aps resfriamento em dessecador, as
mesmas foram pesadas em balana analtica, repetindo-se o procedimento at a
obteno de peso constante. A porcentagem de cinzas, obtidas em triplicata, foi
calculada em relao droga seca.
4.3.4 Obteno do perfil trmico (SILVA JUNIOR, 2006a)
4.3.4.1 Termogravimetria
A caracterizao termoanaltica atravs da curva TG foi realizada em uma

termobalana, utilizando cadinhos de platina contendo aproximadamente 8 mg de
massa da amostra, sob atmosfera dinmica de nitrognio (25 mL/min) e razo de
aquecimento de 5 C/min na faixa de temperatura de 25 C a 600 C.
4.3.4.2 Anlise trmica diferencial
A caracterizao termoanaltica atravs da curva DTA foi realizada em uma

57
4.3.4.3 Calorimetria exploratria diferencial
Para a caracterizao termoanaltica a curva DSC foi obtida em um cadinho

de platina contendo aproximadamente 8 mg de massa da amostra, sob atmosfera
dinmica de nitrognio (25 mL/min) e razo de aquecimento de 5 C/min na faixa de
temperatura de 25 C a 600 C, com auxlio de um analisador trmico.
4.3.5 Obteno do perfil espectroscpico na regio do infravermelho (SILVA

JUNIOR, 2006a)
Para a obteno do perfil espectroscpico na regio do IV da amostra de V.

guianensis as bandas de absoro foram obtidas utilizando-se um espectrmetro de
IV. As leituras foram realizadas no comprimento de onda na faixa de 500 a 4000 cm 1
(nmero de onda). Onde quantidades apropriadas da droga vegetal foram
comprimidas com Seleneto de zinco (ZnSe).
4.4 Obteno e caracterizao qumica e fsico-qumica da tintura do p das

folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
4.4.1 Obteno da tintura hidroalcolica (FARMACOPIA BRASILEIRA 1 Ed., 1926)
Exatamente 500 g do p das folhas de V. guianensis permaneceram em

macerao durante uma semana em 2500 mL de lcool 70 GL em um recipiente de
ao inoxidvel e fechado ao abrigo da luz e a temperatura ambiente, o qual era
agitado frequentemente. Aps o trmino da extrao efetuou-se a filtrao do
macerado. A tintura foi armazenada em frascos escuros, tipo mbar e mantidos sob
refrigerao.
58
4.4.2 Caracterizao fsico-qumica da tintura hidroalcolica (FARMACOPIA
BRASILEIRA 4 Ed., 1988)
4.4.2.1 Determinao da densidade aparente
Um picnmetro com capacidade para 5 mL, previamente tarado, foi

preenchido com o lquido padro (gua recm-destilada e fervida) e pesado. Em
seguida o picnmetro foi preenchido com 5 mL da amostra (tintura) e pesado. A
relao em triplicata entre o peso da amostra e do padro, em um volume fixo
temperatura de 20 C, forneceu o valor da densidade relativa da tintura de V.
guianensis.
4.4.2.2 Determinao do pH
A determinao do pH foi realizada em potencimetro previamente calibrado

com solues tampo pH 4,0 e 7,0 e os resultados correspondem mdia de trs
determinaes.
4.4.2.3 Determinao do teor de slidos
Cerca de 1 g da tintura em soluo foi pesado e transferido para pesa-filtro

previamente tarado nas condies empregadas durante a anlise propriamente dita.
Posteriormente, o material foi levado secura em placa aquecedora e dessecado
em estufa sob temperatura 105 C por duas horas. Aps este perodo, o pesa-filtro
foi resfriado em dessecador e pesado em balana analtica. O teor de slidos foi
calculado em relao a 100 g de tintura seca, pela mdia de trs determinaes.
59
4.4.3 Preparao do extrato seco da tintura e suas fraes
Transferiu-se 150 mL da tintura a um balo de fundo redondo (250 mL) e

concentrou-se em evaporador rotativo a baixa presso. Ao final da evaporao do
lcool, colocou-se cerca de 40 mL de lcool butlico para a evaporao da gua
remanescente no balo. Aps concentrao do extrato, calculou-se o seu
rendimento.
Um grama do extrato seco foi submetido partio slido-lquido com 5
alquotas de 10 mL de clorofrmio, em seguida esse volume foi filtrado em papel
de filtro e reservado em balo de fundo redondo; a extrao foi finalizada com a
obteno de uma soluo clara e lmpida. Aps a obteno da frao clorofrmica,
esse mesmo procedimento foi realizado para mais dois solventes acetato de etila e
metanol, respectivamente para obteno das fraes acetato de etila e metanlica.
Todas essas fraes foram concentradas em evaporador rotativo.
4.4.4 Prospeco qumica da tintura (BARBOSA, 2001)
A prospeco qumica da tintura foi direcionada para verificar a presena de

constituintes qumicos naturais, tais como: cidos orgnicos, acares redutores,
alcalides,
aminocidos,
antraquinonas,
catequinas,
depsdeos,
depsidonas,
derivados da cumarina, esterides, fenis, flavonides (antocianinas, antocianidinas,

auronas, catequinas (taninos catquicos), chalconas, flavonas, flavanonas, flavonis,
flavanonis, leucoantocianidinas, xantonas), glicosdeos cardacos, polissacardeos,
protenas, purinas, saponinas, sesquiterpenolactonas e outras lactonas, taninos e
triterpenides.
As anlises foram realizadas em triplicata, na concentrao de 5 mg/mL.
60
Saponinas espumdicas
Foram dissolvidos 25 mg do extrato seco em 5 mL de gua destilada. Em
seguida, diludos para 15 mL e agitado vigorosamente durante 2 min em tubo
fechado. A camada de espuma permanecendo estvel por mais de 30 min.,
resultado considerado positivo.
Acares redutores
Foram dissolvidos 25 mg do extrato seco em 5 mL de gua destilada e
filtrados. Adicionou-se 2 mL do reativo de Fehling A e 2 mL do reativo de Fehling B.
Aqueceu-se em banho de gua em ebulio durante 5 minutos. Se houver o
aparecimento de um precipitado vermelho tijolo, resultado considerado positivo.
Polissacardeos
Foram dissolvidos 25 mg do extrato seco 5 mL de gua destilada e filtrados.
Adicionou-se II gotas de lugol. O aparecimento de colorao azul, resultado
considerado positivo.
Protenas e aminocidos
filtrada. Adicionou-se 0,5 mL de soluo aquosa de Nihidrina a 0,1% e aqueceu-se
at ebulio. O aparecimento de colorao violeta persistente, indica resultado
positivo.
Fenis e taninos
filtrados. Adicionou-se II gotas de soluo alcolica de FeCl 3 a 1%. Qualquer
mudana na colorao ou formao de precipitado indicativo de reao positiva,
quando comparado com o teste em branco. Colorao inicial entre o azul e o
vermelho, indicativo da presena de fenis, quando o teste em branco for negativo;
precipitado escuro de tonalidade azul, indica presena de taninos piroglicos, e
verde, presena de taninos catquicos.
61
Flavonides
Geral
Foram dissolvidos 25 mg do extrato seco em 5 mL de metanol e filtrados.
Adicionou-se 5 gotas de HCl concentrado e raspas de magnsio. O surgimento de
uma colorao rsea na soluo indica reao positiva.
Por classes
a) Antocianidinas, antocianinas, flavonas, flavononis, xantonas, chalconas, auronas
e flavanonis
filtrados. Transferiu-se para trs tubos de ensaio, 3 mL da soluo (para cada tubo).
Acidulou-se um a pH 3, alcalinizou-se os dois restantes a pH 8.5 e 11;
- A presena de colorao vermelha em pH 3, lils em pH 8.5 e azul prpura em pH
11 indica resultado positivo para antocianidinas e antocianinas;
- A presena de colorao amarela em pH 11 indica resultado positivo para flavonas,
flavonis, xantonas;
- A presena de colorao vermelha em pH 3 e vermelho prpura em pH 11 indica
resultado positivo para chalconas, auronas;
- A presena de colorao vermelho-laranja em pH 11 indica resultado positivo para
flavanonis.
b) Leucoantocianidinas, catequinas e flavanonas
filtrados. Transferiu-se para dois tubos de ensaio, 3 mL da soluo (para cada tubo).
Acidulou-se um a pH 1 3 com HCl e alcalinizou-se os outros a pH 11 com soluo
de NaOH. Aqueceu-se com auxlio de uma lmpada de lcool durante 2 3 minutos
e observou-se se houve modificao na colorao, comparando-se com os tubos
utilizados no teste anterior (para antocianidinas, antocianinas, flavonas, flavononis,
xantonas, chalconas, auronas e flavanonis).
62
- A presena de colorao vermelho em pH cido indica resultado positivo para
Leucoantocianidinas;
- A presena de colorao pardo - amarela em pH cido indica resultado positivo
para catequinas (taninos catquicos);
- A presena de colorao vermelho - alaranjado em pH alcalino indica resultado
positivo para flavanonas.
c) Flavonis, flavanonas, flavanonis e xantonas
Transferiu-se para um tubo de ensaio, 3 mL da soluo extrativa usada no
teste anterior e acrescentou-se alguns miligramas de magnsio em raspas, e 0,5 mL
de HCl concentrado. Aguardou-se o trmino da efervescncia e observou-se por
comparao a mudana na colorao em relao aos tubos acidificados dos testes
anteriores. O aparecimento ou intensificao da cor vermelha indicativo da
presena dos metablitos acima citados.
Glicosdios cardacos
Separou-se em duas pores de 2 mL cada e adicionou-se gotas do reativo de
Keede. O aparecimento de colorao azul ou violeta indica reao positiva.
Catequinas
Juntou-se 1 mL de soluo aquosa de vanilina a 1% e 1 mL de HCl concentrado. O
surgimento de uma colorao vermelha intensa indica reao positivo.
Derivados benzoquinonas, naftoquinonas e fenantraquinonas

Adicionou-se II gotas de Na2CO3 a 25%, II gotas de Formaldeido a 4% e II gotas de
o-dinitrobenzeno a 5%. Aqueceu a mistura em BM. A colorao violeta indica reao
positiva.
63
Lactonas sesquiterpnicas e outras lactonas
Adicionou-se XII gotas de soluo alcolica de cloridrato de hidroxilamina a 10% e II
gotas de soluo metanlica de KOH a 10 %. Aqueceu-se suavemente em banhomaria durante 2 minutos. Em seguida resfriou-se e acidulou-se com soluo de HCl
a 1N e adicionou-se I gota de FeCl 3 1%. O surgimento de uma colorao violeta
indica reao positiva.
Esterides e triterpenoides
Foram dissolvidos 50 mg do extrato seco em 10 mL de clorofrmio e filtrados
sobre carvo ativado. Transferiu-se o filtrado para um tubo de ensaio completamente
seco e adicionou-se 1 mL de anidrido actico e agitou-se suavemente. Em seguida,
adicionou-se cuidadosamente, III gota de H2SO4 concentrado e agitou-se
novamente. O rpido desenvolvimento de cores, que vo do azul evanescente, ao
verde persistente indicam resultado positivo.
Azulenos
Foram dissolvidos 10mg do extrato seco em 2 mL de clorofrmio e filtrados.
Concentrou-se at 0,5 em banho-maria e adicionou 2,5 mL da soluo pdimetilaminobenzaldedo. Aqueceu em banho-maria por 5 minutos, e aps esfriar em
um funil de decantao, agitou com 10 mL de ter de petrleo. Aps as duas fases
ficarem distintas, observou-se a fase aquosa. Se houver presena de proazulenos, a
fase aquosa adquire colorao azul, porm, quando estes esto em pequena
quantidade, a colorao observada esverdeada.
Carotenides
Foram dissolvidos 15 mg do extrato seco em 2 mL de clorofrmio e filtrados.
Juntou-se 2 mL de clorofrmio saturado com tricloreto de antimnio. O aparecimento
da colorao azul indica resultado positivo.
64
Alcalides
Foram dissolvidos 25 mg do extrato seco em 5 mL de soluo de HCl a 5% e
filtrados. Separaram-se quatro pores de 1 mL em placa de toque e adicionou-se 3
gotas dos reativos de Bouchard, Dragendorff, Mayer e Bertrand. Precipitao ou
turvao em pelo menos um tubo indicativa de resultado positivo.
Purinas
Numa cpsula de porcelana, juntou-se 5 mg do extrato seco, III gotas de
soluo de HCl 6N e II gotas de H2O2 concentrado (30%) e evaporou-se em banhomaria at a formao de um resduo corado de vermelho. Juntou-se III gotas de
soluo de NH4OH (6N). O surgimento de colorao violeta indica reao positiva.
Depsdeos e depsidonas
Foram dissolvidos 25 mg do extrato seco em 5 mL de ter etlico e filtrados.
Evaporou-se todo o ter em banho-maria e juntou-se ao resduo 3 mL de metanol.
Aps agitao, adicionou-se III gotas de soluo de FeCl 3 a 1%. O aparecimento de
colorao verde, azul ou cinza, indica reao positiva.
Derivados da cumarina
Foram dissolvidos 25 mg do extrato seco em 5 mL de ter etlico e
concentrados em banho-maria at 0,5 mL. Em papel filtro, aplicaram-se gotas da
soluo etrea, de modo que se formaram duas manchas de aproximadamente 1 cm
de dimetro cada. A uma destas, adicionou-se I gota de soluo de NaOH a 1N.
Cobriu-se a metade da mancha com papel escuro, e exps-se a outra metade a luz
ultravioleta. Descobriu-se e compararam-se as manchas. O aparecimento de
fluorescncia azul na parte exposta da mancha indica reao positiva.
Antraquinonas
Foram dissolvidos 25 mg do extrato seco em 5 mL de tolueno e filtrados.
Adicionou-se 2 mL de soluo de NH4OH a 10 % e agitou-se suavemente. O
aparecimento de colorao rsea, vermelha ou violeta na fase aquosa, indica reao
positiva.
65
4.4.5 Determinao do perfil cromatogrfico da tintura
4.4.5.1 Cromatografia em camada delgada
As fraes obtidas pela extrao slido-lquido a partir do extrato seco da

tintura com clorofrmio, acetato de etila e metanol sofreram anlises em diferentes
propores de eluentes a fim de se estabelecer qual o melhor sistema de separao
das manchas por CCD. Inicialmente foram testados: clorofrmio/metanol (95:5)
solvente 1, clorofrmio/metanol/gua (80:20:10) solvente 2, clorofrmio/etanol/gua
(80:20:10) solvente 3 e acetato de etila/metanol/gua nas propores de (80:20:10)
e (75:15:10) solventes 4 e 5, repectivamente.
CCD Analtica
O extrato seco da tintura na concentrao 10 mg/mL solubilizado em metanol,

a frao acetato de etila na concentrao de 10 mg/mL tambm solubilizada em
metanol, juntamente com as sub-fraes A e B da frao acetato de etila
solubilizadas em clorofrmio 5 mg/mL, foram aplicas em cromatoplaca de gel de
slica de fase normal pr-fabricada e eludas com o solvente 5 e borrifadas com
soluo metanlica de KOH 10%.
CCD Preparativa
A frao acetao de etila (AcOEt) foi submetida a CCD preparativa, em que

40,8 mg da frao foram dissolvidas em metanol e aplicadas em cromatoplaca
preparativa de gel de slica de fase normal e eluda com o solvente 5.
66
4.4.5.2 Cromatografia lquida de alta eficincia (POLITI et al. 2004)
Para a anlise das sub-fraes A e B provenientes da cromatografia

preparativa realizada com a frao acetato de etila, as amostras foram preparadas
na concentrao de 5 mg/mL dissolvidas em metanol e posteriormente filtradas em
filtro microporoso (0,45 m). Alquotas de 20 L das duas amostras foram
manualmente injetadas no cromatgrafo lquido de alta eficincia a fim de definir os
perfis da composio de cada uma.
O sistema cromatogrfico era composto de coluna LiChrospher 100 (250x3, 5
m) com gel de slica RP-18 como fase estacionria. A temperatura do forno foi
estabilizada em 25 1 C e utilizou-se um fluxo de 1 mL/min da fase mvel
composta por acetonitrila/gua em uma proporo gradiente: 0 min (10:90), 15 min
(40:60) e 75 min (100:0) mantidos por 20 minutos.
Alm do perfil de composio das sub-fraes A e B, a CLAE serviu para
determinar os mximos de absoro da tintura hidroalcolica e da frao AcOEt.
4.4.6 Obteno do extrato liofilizado da tintura
Concentrou-se 100 mL da tintura hidroalcolica em evaporador rotativo at

que toda quantidade de lcool tivesse sido evaporada. Exatamente 22 mL da
tintura j concentrada foram levados ao liofilizador e desidratado sob alto vcuo.
4.4.6.1 Obteno do perfil trmico do extrato liofilizado da tintura (SILVA JUNIOR,

2006a)
4.4.6.1.1. Termogravimetria
67
4.4.6.1.2 Anlise trmica diferencial

4.4.6.1.3 Calorimetria exploratria diferencial

temperatura de 25 C a 600 C, com auxlio de um analisador trmico.
4.4.6.2 Obteno do perfil espectroscpico na regio do infravermelho (SILVA

JUNIOR, 2006a)
Para a obteno do perfil espectroscpico na regio do infravermelho as

bandas de absoro do extrato liofilizado foram obtidas utilizando-se um
espectrmetro de infravermelho. As leituras foram realizadas no comprimento de
onda na faixa de 500 a 4000 cm-1 (nmero de onda). Quantidades apropriadas da
amostra foram comprimidas com Seleneto de zinco (ZnSe).
68
4.5 Avaliao da atividade antimicrobiana do extrato seco da tintura das folhas
de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
4.5.1 Teste de difuso em disco em meio slido
A avaliao da atividade antimicrobiana foi realizada pelo teste de difuso em

disco (BAUER et al. 1966; CLSI, 2003; KARTAL et al. 2003) onde foram testadas as
seguintes cepas gram-positiva: Staphylococcus aureus (ATCC 25923), gramnegativas: Escherichia coli (ATCC 25922) e Pseudomonas aeruginosa (ATCC
10145) e o fungo: Candida albicans (ATCC 10231).
Para a obteno do inculo preparou-se uma suspenso em soluo salina
contendo de 3 a 4 colnias (do cultivo) dos microorganismos citados anteriormente,
acertou-se a turbidez da suspenso de acordo com o tubo nmero 0,5 da escala de
Mac Farland (1 x 108 UFC/mL), em seguida umideceu-se um swab nessa
suspenso, o qual foi pressionado contra a parede do tubo para a retirada do
excesso e semeou-se em toda a superfcie de placas contendo o meio gar Mller
Hinton.
Sobre essas placas adicionou-se discos de papel de filtro de 6 mm de
dimetro, impregnados com 10 L do extrato seco da tintura solubilizado em dimetil
sufxido (DMSO), nas seguintes concentraes 500, 250, 125 e 62,5 mg/mL. Em
seguida, as placas j prontas foram levadas estufa para incubao em posio
invertida a uma temperatura de 35 C por no mnimo 24 h.
Aps esse perodo foi realizada a leitura dos resultados medindo-se o halo
formado ao redor dos discos. Considerou-se como resultado final a mdia de trs
medidas e como suscetvel o halo com dimetro igual ou superior a 8 mm,
denominados de sensveis; os demais halos foram considerados resistentes
(PAREKH e CHANDA, 2007).
69
4.6
Caracterizao
do
marcador
externo
emodina
metilantraquinona)
4.6.1 Obteno do perfil trmico da emodina (SILVA JUNIOR, 2006a)
4.6.1.1 Termogravimetria

4.6.1.2 Anlise trmica diferencial


temperatura de 25C a 300C, com auxlio de um analisador trmico.
70
4.6.2 Obteno do perfil espectroscpico na regio do infravermelho (SILVA
JUNIOR, 2006a)
Para a obteno do perfil espectroscpico na regio do infravermelho as

bandas de absoro do extrato liofilizado foram obtidas utilizando-se um
espectrmetro de infravermelho. As leituras foram realizadas no comprimento de
onda na faixa de 500 a 4000 cm-1 (nmero de onda). Quantidades apropriadas da
amostra foram comprimidas com Seleneto de zinco (ZnSe).

guianensis (Aubl.) Choisy por espectrofotometria em UV-VIS
4.7.1 Validao do mtodo (BRASIL, 2003)
A validao do mtodo foi realizada com o objetivo de se garantir, atravs dos

estudos experimentais, que o mtodo utilizado atenda s exigncias das aplicaes
analticas, assegurando a confiabilidade dos resultados. A deteco e a
quantificao da emodina na frao foram realizadas por espectrofotometria no UVVIS, para tanto realizaram-se a determinao dos parmetros de seletividade,
linearidade, intervalo, curva de calibrao, preciso: repetibilidade e preciso
intermediria, exatido e robustez.
4.7.1.1 Seletividade
O ensaio de seletividade foi conduzido com a frao acetato de etila

proveniente da tintura hidroalcolica das folhas de V. guianensis (0,01 mg/mL), com
o solvente (lcool 70 GL) e a com a soluo de emodina (SIGMA) como padro
(0,01 mg/mL), para a verificao de possveis interferentes. Os espectros de
71
absorvncia foram realizados na faixa compreendida entre 240 - 400 nm, fornecendo
o comprimento de onda mximo de absoro e demonstrando a capacidade de
seleo do mtodo entre os compostos com estruturas interferentes que podem
estar presentes.
4.7.1.2 Linearidade
A linearidade do mtodo foi avaliada empregando-se concentraes

crescentes da soluo padro de emodina 0,0076, 0,0083, 0,0090, 0,0100, 0,0111,
0,0125 e 0,0143 mg/mL. As mdias de trs anlises das absorvncias de emodina
foram plotadas no eixo das ordenadas e as respectivas concentraes nas
abscissas. A equao da reta foi obtida pelo mtodo dos mnimos quadrados e
expressa por y= a+bx, onde o coeficiente angular (b) a inclinao da reta em
relao aos eixos e o coeficiente linear (a) a interseco da reta com o eixo y. A
faixa linear de trabalho foi determinada por intermdio do coeficiente de correlao
de Pearson (r). Aps a determinao da linearidade, foi realizada a anlise de
resduos para garantir a adequao do ajuste linear curva de calibrao.
4.7.1.3 Intervalo
a faixa entre os limites de quantificao superior e inferior de um mtodo

analtico. Normalmente derivado do estudo de linearidade e depende da aplicao
pretendida pelo mtodo. Dessa forma a faixa de intervalo aplicada para a anlise de
quantificao foi estabelecida de acordo com a mdia das concentraes
encontradas para a emodina na frao (alcance de 80-120%).
72
4.7.1.4 Curva de calibrao
A curva de calibrao para a emodina foi construda atravs da faixa de

intervalo encontrado para a emodina (0,0125, 0,0111, 0,0100, 0,0090, 0,0083
mg/mL). Sendo assim, as mdias das absorvncias de emodina foram plotadas no
eixo das ordenadas e as respectivas concentraes no eixo das abscissas. A
regresso linear foi realizada para a obteno da reta (y=ax+b) e o coeficiente de
Pearson (r) para avaliar as concentraes de acordo com as absorvncias.
4.7.1.5 Preciso
4.7.1.5.1 Repetibilidade (preciso intra-corrida)
A repetibilidade do mtodo foi verificada atravs da leitura em quintuplicata de

trs controles: de concentraes baixa, mdia e alta do padro emodina no
espectrofotmetro em um nico dia (intra-corrida). Logo aps foi calculado o valor do
coeficiente de variao das leituras para expressar a preciso do mtodo. A preciso
pode ser expressa como desvio padro relativo (DPR) ou coeficiente de variao
(CV%), segundo a equao 2:
DPR = DP
CMD
x 100
DP: Desvio padro

CMD: Concentrao mdia determinada
(2)
4.7.1.5.2 Preciso intermediria (preciso inter-corridas)
A preciso inter-corridas foi realizada no mesmo laboratrio, sendo obtida em

dois dias diferentes. A preciso intermediria foi obtida atravs da leitura em
quintuplicada de trs controles: de concentrao baixa, mdia e alta do padro
73
emodina. Logo aps foi calculado o valor do coeficiente de variao das leituras para
expressar a preciso do mtodo. A preciso pode ser expressa como desvio padro
relativo (DPR) ou coeficiente de variao (CV%), segundo a equao 2:
DPR = DP
CMD
x 100
DP: Desvio padro

CMD: Concentrao mdia determinada
(2)
4.7.1.6 Exatido
A exatido de um mtodo analtico a proximidade dos resultados obtidos

pelo mtodo em estudo em relao ao valor verdadeiro. Foi verificada atravs da
leitura de trs controles (em quintuplicata) de concentrao baixa (0,0083 mg/mL),
mdia(0,0100 mg/mL) e alta (0,0125 mg/mL) do padro de emodina.
E (%) = CME x100

CT
CME: concentrao mdia determinada

CT: concentrao terica
(3)
4.7.1.7 Limite de deteco
Com a finalidade de identificar a menor quantidade do analito presente na

amostra que pode ser detectada, mas no quantificada utilizou-se a equao 4,
obtendo-se assim o limite de deteco.
LD = DPa x 3
IC
DPa:desvio padro
IC: inclinao da curva de calibrao
(4)
74
4.7.1.8 Limite de quantificao
O limite de quantificao a menor quantidade do analito em uma amostra

que pode ser determinada com preciso e exatido aceitveis sob condies
experimentais estabelecidas. Utilizando-se a equao 5 pode-se determinar esse
limite.
LD = DPa x 10
IC
DPa:desvio padro
IC: inclinao da curva de calibrao
(5)
4.7.1.9 Robustez
Como mtodo utilizado foi espectrofotometria os parmetros considerados

na determinao da robustez do mtodo analtico foram: a variao do pH e
diferentes fabricantes do solvente. Realizaram-se varreduras na faixa de 240 400
nm em pH: 4,3; 5,6 e 6,3. E varreduras nessa mesma faixa de comprimento de onda
para trs solventes de marcas diferentes: A, B e C. Aps a obteno dos resultados
da robustez, realizou-se a Anlise de Varincia ANOVA (dois critrios) seguida pelo
teste de Tukey para verificar a diferena entre as mdias que foram realizadas.
4.7.2 Quantificao das antraquinonas totais
Aps validao de metodologia espectrofotomtrica utilizando-se a emodina

como referncia, pode-se quantificar as antraquinonas totais presentes na tintura
hidroalcolica de V. guianensis utilizando-se a equao da reta obtida com a curva
de calibrao. A frao acetato de etila na concentrao de 0,01 mg/mL foi
submetida leitura em espectrofotmetro no comprimento de onda 290 nm.
75
4.7.3 Anlise estatstica
Os dados foram analisados nos programas Microsoft Office Excel 2007 e

Bioestat 5.0.
4.8 Estudos de formulao de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
4.8.1 Ensaios de avaliao dos excipientes da formulao e suas misturas binrias

com o extrato liofilizado da tintura por anlise trmica e espectroscopia na regio do
infravermelho
Os ensaios preliminares das misturas binrias dos excipientes com o extrato

liofilizado de V. guianensis, foram realizados nas propores devidas de acordo com
a Tabela 1. A metodologia utilizada para a avaliao dos perfis trmicos e
espectroscpico na regio do IV foram realizados de acordo com a metodologia j
descrita anteriormente tanto para o p das folhas como para extrato liofilizado da
tintura de V. guianensis.
Tabela 1 - Excipientes e suas misturas binrias com o extrato liofilizado de Vismia guianensis (Aubl.)
Choisy
Misturas binrias
Proporo
Hidroxietilcelulose/extrato liofilizado
1:1 p/p
Propilenoglicol/extrato liofilizado
2:1 p/p
Metilparabeno/extrato liofilizado
1:1 p/p
76
Para o preparo da base da formulao foram pesados separadamente os

seguintes excipientes: hidroxietilcelulose, propilenoglicol, metilparabeno e gua
destilada q.s.p. em propores que podem ser visualizadas na Tabela 2. A base
gelificante de caracterstica hidroflica empregou o polmero hidroxietilcelulose,
incorporando a tintura das folhas de V. guianensis a 5% e 10% de sua concentrao.
Inicialmente o conservante metilparabeno foi dissolvido em gua destilada
q.s.p. e essa mistura foi levada ao aquecimento sob placa aquecedora
temperatura de 75 C. Logo aps resfriamento, o hidroxietilcelulose umedecido em
propilenoglicol, foi adicionado a soluo do conservante j dissolvido, agitando-se
continuamente com basto de vidro at completa dissoluo desses componentes a
uma temperatura de 55 C 2,0 C. Obtida a dissoluo a mistura foi retirada da
placa aquecedora e deixada em repouso a temperatura ambiente por 24 h at a
incorporao da tintura.
Tabela 2 - Composio preliminar da formulao semi-slida fitoterpica contendo a tintura das folhas
Componentes
Concentrao (%)
Hidroxietilcelulose
1,0
Propilenoglicol
5,0
Metilparabeno
0,2
gua destilada q.s.p.
100,0
Tintura
5,0
10,0
77
4.10 Avaliao preliminar da estabilidade da formulao fitoterpica semislida contendo a tintura das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
O estudo da estabilidade fornece indicaes sobre o comportamento do

produto, em determinado intervalo de tempo, frente a condies ambientais a que
possa ser submetido, desde a fabricao at o trmino da validade. A formulao
sujeita s condies de estresse trmico, visando acelerar o surgimento de
possveis sinais de instabilidade. As que apresentarem modificaes aps o teste
devero ser rejeitadas pelo estudo ou pesquisadas quais as possveis modificaes
nos componentes da formulao (ANVISA, 2004).
4.10.1 Teste de centrifugao
Foram pesados 5 g do gel de V. guianensis em tubos de 10 g de centrfuga.

Procedeu-se o teste de centrifugao em rplicas de trs, nas seguintes condies
experimentais: temperatura ambiente (25 C 2 C), velocidade de rotao de 3000
rpm e tempo de teste de 30 min. A ocorrncia de instabilidade indicativa da
necessidade de reformulao. As amostras consideradas, por este ensaio,
inicialmente estveis, podem ser submetidas aos demais ensaios de estabilidade
preliminar.
4.10.2 Teste de estresse trmico
Para a realizao desse teste, utilizaram-se rplicas de 12 amostras do gel

(peso de 5 g) do mesmo lote, as quais foram acondicionadas em vidros neutros tipo
mbar (10 mL). Sendo assim, seis amostras foram submetidas ao aquecimento em
estufa temperatura de 45 2 C em ciclos avaliados no intervalo de 24 h, enquanto
que as outras 6 amostras permaneceram em temperatura ambiente (25 2 C) para
serem utilizadas como controle de referncia, condies onde so esperadas as
78
menores alteraes. Os resultados obtidos do primeiro at o sexto dia - ciclos de t1 a
t6 - das amostras da estufa foram comparados com os resultados das amostras de
referncia (ANVISA, 2004).
4.10.3 Caractersticas organolpticas
As formulaes obtidas a partir da incorporao a frio de 5% e 10% da tintura

hidroalcolica de V. guianensis a base gelificante a 1% de HEC. Foram avaliadas
macroscopicamente quanto as suas caractersticas organolpticas (aspecto, cor e
odor). Foi traada uma comparao entre as amostras de referncia que
permaneceram a temperatura de 25 2 C e as amostras de lote de bancada que
permaneceram a temperatura de 45 2 C.
4.10.4 Caractersticas fsico-qumicas
4.10.4.1 Obteno do valor de pH
Foi determinado em rplicas de trs, com a disperso da amostra do gel em

gua recm destilada na proporo de 1:10 (p/p), usando potencimetro digital,
avaliando a diferena de potencial entre dois eletrodos imersos diretamente na
amostra aquosa em estudo (ANVISA, 2004).
79
5. RESULTADOS
80
5. RESULTADOS
5.1 Caracterizao da anatomia vegetal das folhas de Vismia guianensis (Aubl.)

Choisy
Na Figura 6, o limbo em corte transversal mostra a epiderme com trs

camadas de clulas (seta), cuja parede periclinal externa espessada e recoberta
por cutcula relativamente espessa visualizada na Figura 7 (seta).
Os tricomas so glandulares, pluricelulares e unisseriados com paredes
espessadas revestidos de cutcula. Esto presentes na superfcie abaxial da folha
sendo visualizados na Figura 8 (seta). Subjacente face adaxial da epiderme, existe
uma camada subepidrmica de clulas parenquimticas alongadas periclinalmente,
sendo que, neste tecido, h idioblastos contendo drusas e cristais de oxalato de
clcio podendo ser visualizado na Figura 9 (seta). O idioblasto uma clula vegetal
isolada que difere notavelmente das clulas adjacentes, na forma, contedo e
estrutura parietal.
Na Figura 10 observa-se o mesofilo dorsiventral, constitudo geralmente de
uma camada de parnquima palidico e uma camada de parnquima lacunoso
pluriestratificado, no qual se encontram feixes vasculares de pequeno porte envoltos
por uma bainha parenquimtica.
A nervura central, em seco transversal, cncava na face adaxial e planoconvexa na superfcie oposta conforme visualizado na Figura 7. Junto face abaxial,
observaram-se vrias camadas de colnquima angular, j no parnquima
fundamental as clulas apresentam paredes regularmente espessadas.
Tanto no colnquima quanto no parnquima fundamental, encontram-se
idioblastos contendo drusas (Figura 11). Na superfcie oposta, ocorrem cerca de
quatro estratos desse tecido de sustentao. As clulas parenquimticas tendem a
distribuir de maneira a penetrar entre os elementos constituintes do sistema vascular
(Figuras 12 e 13).
Na Figura 12 pode-se visualizar o feixe vascular colateral, na forma de um
arco circundado por uma bainha esclerenquimtica (seta-a), formada por vrias
camadas de clulas. No floema externo, encontram-se cinco glndulas distribudas
81
regularmente (seta-b); as clulas esclerenquimticas tambm so encontradas como
pequenos feixes no parnquima fundamental (Figuras 7 e 13).
Figuras 6-9 - Cortes histolgicos do limbo da folha de Vismia guianensis em microscopia ptica,
fixados com glutaraldedo e corados com azul de toluidina 1%. 6. Epiderme
pluriestratificada (40X), 7. Aspecto da cutcula (10X), 8. Tricomas (40X), 9. Idioblasto no
parnquima palidico (40X)
82
10 11
H
12
13
Figuras 10-13 - Cortes histolgicos do limbo da folha de Vismia guianensis. 10. Parnquima lacunoso
contendo feixes vasculares envolvidos por clulas parenquimticas apontados pela
seta. (10X). 11. Nervura principal, com idioblastos no Colnquima (40X). 12. Corte
transversal da folha (10x), evidenciando: a) na nervura principal o parnquima
fundamental penetrando entre os elementos do feixe vascular (na forma de um arco).
b) Glndulas do floema externo. 13. Feixes de esclernquima no interior dos elementos
do floema e do parnquima fundamental (40X)
83
guianensis (Aubl.) Choisy
5.2.1 Determinao da distribuio granulomtrica
Na anlise granulomtrica observou-se que as partculas passaram em sua

totalidade pelo tamis com abertura nominal de malha 1700 m e menos de 40% das
partculas do p passou pelo tamis com abertura nominal de malha de 355 m, o
que caracteriza o p como sendo grosso, segundo a Farmacopia Brasileira 4. Ed.
(1988) visualizada na Figura 14.
% massa retida
desvio padro
Figura 14 - Determinao da distribuio granulomtrica do p das folhas de V. guianensis (Aubl.)

Choisy
84
5.2.2 Determinao da perda por dessecao
O teor de gua e substncias volteis encontra-se descrito na Tabela 3.
5.2.3 Determinao do teor de cinzas totais
A determinao da pureza do p das folhas e a mdia das trs determinaes

encontram-se descritos na Tabela 3.
Tabela 3 - Caracterizao fsico-qumica do p das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Determinaes
Resultados
Perda por dessecao
11,60,12%
Teor de cinzas totais
1,640,25%
5.2.4 Perfil trmico
5.2.4.1 Termogravimetria e anlise trmica diferencial
A Figura 15 mostra as curvas TG e DTA do p das folhas de Vismia

guianensis, a qual apresentou trs eventos trmicos (Tabela 4). O primeiro evento
foi registrado na faixa de temperatura de 46 a 89 C com perda de massa de 12,5%,
os prximos eventos a partir da temperatura de 256 C registraram perdas de massa
bem
mais
acentuada,
culminando
em
uma
perda
de
massa
final
de
aproximadamente 98% a 600 C, eventos esses confirmados pelos eventos

endotrmicos e exotrmicos registrados na curva DTA, cujos valores podem ser
visualizados na Tabela 5.
85
TGA
DTA
Figura 15 - Curvas TG e DTA do p das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Tabela 4 - Perfil termogravimtrico do p das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Temperatura C
massa
46 89
12,5%
256 326
46,3%
333 428
38,8%
Tabela 5 - Perfil analtico trmico diferencial do p das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Temperatura C
Eventos
33 96
429,80 j/g
endotrmico
307 352
172,84 J/g
exotrmico
383 440
70,24 J/g
exotrmico
86
A curva DSC do p (Figura 16) demonstrou dois eventos endotrmicos at a

temperatura de 405 C e um evento exotrmico na faixa de temperatura de 454 C a
596 C, esses eventos e suas respectivas entalpias encontram-se demonstrados na
Tabela 6.
Figura 16 - Curva DSC do p das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Tabela 6 - Perfil calorimtrico exploratrio diferencial do p das folhas de Vismia guianensis (Aubl.)
Choisy
Temperatura C
Eventos
25 - 122
268,77 J/g
endotrmico
205 405
306,51 J/g
endotrmico
454 - 596
2,89 KJ/g
exotrmico
87
5.2.5 Perfil espectroscpico na regio do infravermelho
O espectro na regio do IV para o p das folhas apresentou bandas de

absoro na regio de 3550-3200 cm-1 caracterstica de vibrao de deformao
axial O-H (de alcois e fenis), banda forte de absoro na faixa de 1260-1000 cm-1
caracterstica da ligao C-O (de alcois ou fenis), banda mdia de absoro na
regio de 2900 cm-1 caracterstica de ligao C-H de alcano e uma banda de
absoro mdia na regio 1600 cm-1 caracterstica da ligao C=C de componentes
aromticos, podendo ser visualizadas na Figura 17 e na Tabela 7.
99
98
97
91
90
1240,97
92
1158,63
93
1605,21
%T ransm it t ance
94
2914,81
3336,36
3290,63
3243,21
95
1441,66
96
89
1032,32
87
86
85
84
83
3500
3000
2500
2000
1500
1000
96
611,40
597,
580,
76 91
561,
63
529, 49 551,
521, 05
498, 30
665, 42
88
Wavenumbers (cm-1)
Figura 17 - Espectro na regio do infravermelho do p das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Tabela 7 - Nmero de onda (cm -1) e suas respectivas ligaes caractersticas no espectro da regio
do infravermelho para o p das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Regio de absoro
Tipo de ligao
3550-3200 cm-1
O-H
2900 cm-1
C-H
1600 cm-1
C=C
-1
1260-1000 cm
C-O
88
5.3 Caracterizao qumica e fsico-qumica da tintura do p das folhas de
5.3.1 Determinao da densidade aparente
O resultado obtido em triplicata encontra-se demonstrado na Tabela 8.
5.3.2 Determinao do pH
O valor do pH obtido em triplicata est demonstrado na Tabela 8.
5.3.3 Determinao do teor de slidos
O percentual de resduo seco da tintura das folhas de V. guianensis est

presente na Tabela 8.
Tabela 8 - Densidade aparente, pH e percentual de resduo seco da tintura do p das folhas de

Determinaes
Resultados
Densidade aparente
0,890,0025% g/mL
pH
5,690,09%
Percentual de resduo seco
9,5% de resduo seco
89
5.3.4 Prospeco qumica da tintura
O resultado do screening fitoqumico pode ser visualizado na Tabela 9.

Tabela 9 - Prospeco qumica da tintura de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Metablitos secundrios
Resultado
Saponinas espumdicas
Acares redutores
Polissacardeos
Protenas e aminocidos
Fenis e taninos
indicativo
Flavonides
Antocianinas e antocianidinas
Flavonas, flavonis e xantonas
Chalconas e auronas
Flavononis
Leucoantocianidinas
indicativo
-
Catequinas (taninos catquicos)
Flavanonas
indicativo
Flavonis, flavanonas, flavanonis e xantonas
indicativo
Glicosdios cardacos
Catequinas
Benzoquinonas, naftoquinonas e fenantraquinonas
Lactonas
sesquiterpnicas eeoutras
ssseSesquiterpenolactonas
outraslactonas
Lactonas
Esterides
e triterpenides
Sesquiterpenolactonas
e outras Lactonas
Azulenos
Fenantraquinonas
Carotenides
Alcalides
Purinas
Dpsdeos e dpsidonas
Derivados da cumarina
Antraquinonas
90
5.3.5 Perfil cromatogrfico da tintura
5.3.5.1 Cromatografia em camada delgada
CCD Analtica
Aps a asperso da soluo metanlica de KOH 10% sobre a cromatoplaca

de gel de slica de fase normal, pode-se visualizar na que a macha caracterstica da
sub-frao A (Rf 0,83) e a mancha caracterstica da sub-frao B (Rf 0,72) podem
ser visualizada no extrato seco da tintura e na frao acetato de etila, indicando que
essas sub-fraes so proveniente da tintura hidroalcolica, sendo utilizadas para
traar o perfil de composio da tintura das folhas de V. guianensis.
CCD preparativa
Ao final da CCD preparativa realizada com a frao Acetato de etila duas

zonas foram separadas, as mesmas foram visualizadas em luz ultravioleta a 365 nm
demarcadas e raspadas. A zona de Rf 0,83; denominada de sub-frao A, aps
lavagem da slica com soluo clorofrmio/metanol (1:1) apresentou um rendimento
de 8,1% e a zona de Rf 0,72; denominada de sub-frao B, aps lavagem da slica
com soluo clorofrmio:metanol (1:1) apresentou um rendimento de 4,2%.
5.3.5.2 Cromatografia lquida de ala eficincia
As sub-fraes A e B obtidas da CCD preparativa da frao acetato de etila,

foram analisas por CLAE, segundo mtodo proposto por Politi e colaboradores
(2004), e forneceram o perfil das sub-fraes; mostrados nas Figuras 18 e 19.
Analisando-se o perfil da sub-frao A, identificamos que a tintura apresenta-se
91
composta por diferentes tipos de antraquinonas cujos tempos de reteno so
respectivamente: 35,2; 47,2 e 62,8 minutos.
Figura 18 - Cromatograma da sub-frao A com o eluente: acetonitrila/gua em 225 nm. Composta

por diferentes tipos de antraquinonas (A)
Analisando-se o perfil da sub-frao B visualizado na Figura 19, pode-se

observar que a mesma apresenta-se constituda por um tipo de benzofenona (12,2
min), um tipo de derivado de xantona (27,07 min) e diferentes tipos de antraquinonas
(35,1; 47,2; 62,8 e 75,2 min)
Figura 19 - Cromatograma da sub-frao B com o eluente: acetonitrila/gua em 225 nm. Composta

por um tipo de benzofenona (B), um tipo de derivado de xantona (C) e por diferentes
tipos de antraquiononas (A)
92
Alm do perfil de composio das sub-fraes A e B, na Figura 20 pode-se
observar que a CLAE determinou os mximos de absoro da tintura (A) e da frao
acetato de etila (B). Analisando-se os grficos observamos que a tintura apresentou
diferentes picos de alcance mximo (246,4 nm; 280 nm e 404,6 nm), enquanto a
frao acetato de etila apresentou somente um mximo de absoro em 289,6 nm
aproximadamente 290 nm, comprimento de onda utilizado na espectrofotometria no
UV.
A
Figura 20 Mximos de absoro da tintura hidroalcolica (246,4; 280 e 404,6 nm) (A). E o mximo
de absoro da frao acetato de etila (289,6 nm) (B)
93
5.3.6 Perfil trmico do extrato liofilizado da tintura
A Figura 21 mostra o grfico correspondente as curvas TG e DTA do extrato

liofilizado da tintura de V. guianensis, no qual se observam vrios eventos trmicos
culminando em uma perda de massa final de 77,5% (Tabela 10). Na Tabela 11
podem ser visualizadas as entalpias do perfil analtico trmico diferencial do extrato
liofilizado, de acordo com as perdas de massa da curva TG.
Figura 16. Curva TG do extrato liofilizado de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
TGA
DTA
Figura 21 - Curvas TG e DTA do extrato liofilizado da tintura de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Tabela 10 - Perfil termogravimtrico do extrato liofilizado da tintura de Vismia guianensis (Aubl.)

Choisy
Temperatura C
massa
39 48
6,17%
148 167
6,85%
220 262
15,37%
391 463
19,58%
443 492
29,36%
94
Tabela 11 - Perfil analtico trmico diferencial do extrato liofilizado da tintura de Vismia guianensis
(Aubl.) Choisy
Temperatura C
Eventos
60 472
373 J/g
endotrmico
473 499
56,61 J/g
exotrmico
516 579
116 J/g
exotrmico
A curva DSC do extrato liofilizado representado no grfico abaixo (Figura 22)

demonstrou sucessivos eventos de entalpia, dois endotrmicos e um evento
exotrmico a temperatura de 368,47 C, valores que podem ser observados na
Tabela 12.
Figura 22 - Curva DSC do extrato liofilizado da tintura de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Tabela 12 - Perfil calorimtrico exploratrio diferencial extrato liofilizado da tintura de Vismia

Eventos
78,18
164,31
106,05 J/g
4,26 J/g
endotrmico
endotrmico
368,47
40,80 J/g
exotrmico
Temperatura C
95
5.3.7 Perfil espectroscpico na regio do infravermelho do extrato liofilizado da
tintura
O espectro na regio do IV para o extrato liofilizado (Figura 23) apresentou

bandas de absoro na regio de 3200 cm-1 caracterstica da vibrao de
deformao axial O-H (de alcois e fenis), uma banda larga de absoro na faixa
de absoro 1000 cm-1 caracterstica da ligao C-O (de alcois ou fenis), uma
banda de absoro mdia na regio 1600 cm-1 caracterstica da ligao C=C
provenientes de compostos aromticos e uma banda na regio 770 cm-1
caracterstica de ligao tipo C-H de compostos aromticos. As bandas de absoro
e seus respectivos tipos de ligao encontram-se demonstrados na Tabela 13.
98
96
94
86
1360,28
770, 89
84
1243,88
1516,76
88
1602,38
1035,41
82
579, 63
80
78
76
3500
3000
2500
2000
1500
1000
545, 67
516, 68
%T ransm it t ance
90
1442,06
3239,70
92
Wavenumbers (cm-1)
Figura 23 - Espectro na regio do infravermelho do extrato liofilizado da tintura de Vismia guianensis

(Aubl.) Choisy
96
Tabela 13 - Nmero de onda (cm-1) e ligaes caractersticas no espectro da regio do infravermelho
para extrato liofilizado da tintura de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
Regio de absoro
Tipo de ligao
3550-3200 cm-1
1600 cm-1
1260-1000 cm-1
770 cm-1
O-H
C=C
C-O
C-H
5.4 Avaliao da atividade antimicrobiana do extrato seco da tintura das folhas

5.4.1 Teste de difuso em disco em meio slido
A avaliao da atividade antimicrobiana atravs da tcnica de difuso em

disco determinou o halo de inibio formado ao redor dos discos com o auxlio de
uma rgua em mm. Os resultados obtidos esto expressos na Tabela 14 e tambm
podem ser visualizados na Figura 24.
Tabela 14 - Avaliao da atividade antimicrobiana do extrato seco da tintura de Vismia guianensis

(Aubl.) Choisy em diferentes concentraes e os halos de inibio
Extrato seco em DMSO (mg/mL)

Cepas
500
250
125
62,5
S(8 mm)
S(9 mm)
S(10 mm)
S(11 mm)
E. coli (ATCC 25922)
P. aeruginosa (ATCC 10145)
C.
albicans (ATCC 10231)
10145)
S. aureus (ATCC 25923)
R Resistente
S Sensvel
97
Figura 24 - Placa do teste de difuso em disco do extrato seco de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
diludo em DMSO mostrando os halos de sensibilidade dos Staphylococcus aureus, nas
concentraes de 500, 250, 125 e 62,5 mg/mL
5.5
Caracterizao
do
marcador
externo
emodina
metilantraquinona)
5.5.1 Perfil trmico
A substncia de referncia externa utilizada na identificao da tintura de V.

guianensis foi antraquinona emodina, inicialmente caracterizada atravs das
anlises trmicas.
Na Figura 25 podem-se visualizar as curvas TG e DTA do padro externo,
onde observamos que a sua estabilidade trmica vai ate a temperatura de
aproximadamente 90 C (Tabela 15), quando se inicia a sua desidratao na faixa
de temperatura de 91 a 95 C; acima de 200 C verifica-se uma intensificao na
perda de massa cuja porcentagem de perda foi 74% de sua massa total e a partir de
300 C observa-se o incio da decomposio trmica da amostra marcada por trs
98
eventos exotrmicos consecutivos, cujos valores de suas entalpias podem ser
visualizadas na Tabela 16.
TGA
DTA
Figura 25 - Curvas TG e DTA do padro externo emodina
Tabela 15 - Perfil termogravimtrico do padro externo emodina
Temperatura C
massa
91 95
291 322
6,3%
74%
424 443
18%
515,5 557
1%
Tabela 16 - Perfil trmico diferencial do padro externo emodina
Eventos
84 106
269,99 J/g
endotrmico
258 263
305 366
92,82 J/g
46,28 J/g
endotrmico
exotrmico
423 475
1,07 KJ/g
exotrmico
502 528,5
1,12 KJ/g
exotrmico
Temperatura C
99
A Figura 26 apresenta-se constituda pela curva DSC da emodina,

inicialmente observa-se um evento endotrmico na faixa de temperatura de 82 a 108
C correspondente a perda de umidade do padro; o prximo evento endotrmico
com o pico a temperatura de 261 C caracterstico do ponto de fuso dessa
substncia, as entalpias envolvidas nesse processo podem ser visualizadas na
Tabela 17.
Figura 26 - Curva DSC do padro externo emodina
Tabela 17 - Perfil calorimtrico exploratrio diferencial do padro externo emodina
Eventos
82 -108
58,07 J/g
endotrmico
261
107,19 J/g
endotrmico
Temperatura C
100
5.5.2 Perfil espectroscpico na regio do infravermelho
Na Figura 27 pode-se visualizar o espectro na regio do IV da emodina uma

1,3,8-trihidroxi-6-metilantraquinona onde se pode visualizar duas bandas de
absoro em 3476 e 3336 cm-1 caractersticas da vibrao de deformao axial O-H
de fenis, banda de absoro na regio de 2900 cm-1 referentes a ligao C-H, uma
banda de absoro mdia na regio de 1600 cm-1 caracterstica de ligao C=O de
antraquinonas e uma banda de absoro mdia na regio de 700 cm -1 caracterstica
de compostos aromticos. Todas essas regies de absoro e suas ligaes
caractersticas esto apresentadas de forma resumida na Tabela 18.
Figura 27 - Espectro na regio do infravermelho do padro externo emodina
Tabela 18 - Nmero de onda (cm-1) e ligaes caractersticas do espectro na regio do infravermelho

para o marcador externo emodina
Regio de absoro
Tipo de ligao
3550-3200 cm-1
O-H
-1
3000-2840 cm
C-H
1600 cm-1
C=O
1260-1000 cm-1
700 cm-1
C-O
C-H
101
guianensis (Aubl.) Choisy por espectrofotometria em UV-VIS
5.6.1 Validao do mtodo
5.6.1.1 Seletividade
Na Figura 28 pode-se observar o espectro no UV obtido na faixa

compreendida entre 240 a 400 nm, para a frao acetato de etila da tintura de V.
guianensis (0,01 mg/mL), para o padro externo Emodina (0,01 mg/mL) e para o
solvente etanol a 70 GL utilizado na dissoluo das amostra, sendo evidenciado
apenas um mximo de absoro mxima em 290 nm.
Absovncia
Seletividade
0,5
0,45
0,4
0,35
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
Emodina
Frao AcOEt
Solvente
240 260 270 280 290 300 310 320 340 360 380 400
Comprimento de onda (nm)
Figura 28 - Seletividade com varredura em espectrofotmetro de 240 a 400 nm do padro externo
emodina, da frao Acetato de etila e do solvente (etanol 70 GL)
102
5.6.1.2 Linearidade
A curva analtica de linearidade pode ser visualizada na Figura 29, traada a

partir de 7 pontos que se encontram dentro da faixa limite de absoro de 0,25 a
0,75. Cujo coeficiente de Pearson (r) foi de 0,9955 e o coeficiente de determinao
obtido foi de 0,9909.
y= -0.0620 + 50.7662x
R2= 0.9909
Figura 29 - Curva de linearidade do padro externo emodina entre as concentraes de 0,0076;

0,0083; 0,009; 0,010; 0,0111; 0,0125 e 0,0143 mg/mL
Aps a obteno da linearidade com os seus respectivos coeficientes,

tranou-se a anlise de resduos dessa curva, podendo ser visualizada na Figura 30
a adequao do ajuste linear curva de calibrao.
103
Figura 30 Anlise de resduos da linearidade mostrando resduos normalmente distribudos e com

homocedastidade
5.6.1.3 Intervalo
Os limites de quantificao superior e inferior do mtodo analtico advindo da

linearidade encontram-se entre os limites percentuais de 80 a120%, cujo intervalo de
concentrao variou de 0,0076 a 0,0143 mg/mL
5.6.1.4 Curva de calibrao
A curva de calibrao foi obtida partindo-se de 5 pontos encontrados na

linearidade. A Figura 31 mostra a curva de calibrao para a emodina (SIGMA) cujo
coeficiente de Pearson (r) foi de 0,9925 mostrando uma boa correlao entre as
104
medidas de absorvncia e concentrao. J o coeficiente de determinao (R 2) foi
de 0,9857 demonstrando uma boa associao entre as referidas medidas.
y= -0.0908 + 53.2857x
R2= 0,9857
Figura 31 - Curva de calibrao do padro externo emodina entre as concentraes de 0,0083; 0,009;
0,010; 0,0111 e 0,0125 mg/mL
5.6.1.5 Preciso e exatido
5.6.1.5.1 Repetibilidade (preciso intra-corrida)
Os resultados do desvio padro relativo e da exatido dos trs controles na

mdia de cinco determinaes utilizados na repetibilidade podem ser visualizados na
Tabela 19.
105
Tabela 19 - Repetibilidade (preciso intra-corrida) contendo o desvio padro relativo e a exatido das
concentraes de 0,0125; 0,010 e 0,0083
Concentrao
terica (mg/mL)
Concentrao
Desvio
mdia (mg/mL) padro
Desvio padro
Exatido
Relativo (%)
(%)
0,0083
0,0084
0,00394
4,6
101,2
0,010
0,0098
0,00012
1,24
98
0,0125
0,0127
0,00062
4,92
101,6
5.6.1.5.2 Preciso intermediria (preciso inter-corridas)
Os resultados do desvio padro relativo e da exatido dos trs controles em

quintuplicata utilizados na preciso inter-corridas podem ser visualizados na Tabela
20.
Tabela 20 - Repetibilidade intermediria (preciso inter-corridas) contendo o desvio padro relativo e
a exatido das concentraes de 0,0125; 0,010 e 0,0083
Concentrao
terica (mg/mL)
Concentrao
Desvio
mdia (mg/mL) padro
Desvio padro
Exatido
Relativo (%)
(%)
0,0125
0,01193
0,00028
2,42
95,46
0,010
0,00993
9
0,00020
2,1
99,33
0,0083
0,0084
8
0,0001
1,19
101,2
5.6.1.6 Limites de deteco e quantificao
Os limites de deteco (LD) e quantificao (LQ) estimados pelas equaes 4

e 5, foram 0,005 mg/mL e 0,016 mg/mL respectivamente.
106
5.6.1.7 Robustez
Os resultados da robustez referente aos diferentes pHs testados podem ser

visualizados no grfico contido na Figura 32. Observa-se que mesmo variando o pH
em trs concentraes o mximo de absoro ainda continua sendo o de 290 nm.
Os resultados da robutez receberam tratamento estatstico pela Anlise de Varincia
ANOVA (dois critrios) fator duplo seguido de teste de Tukey e obteve um p<0,05.
Absorvcia
Robustez
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
pH 4,3
pH 5,6
pH 6,3
240 260 270 280 290 300 310 320 340 360 380 400
Comprimento de onda (nm)
Figura 32 - Robustez com varredura em espectrofotmetro de 240 a 400 nm para diferentes

concentraes nos pHs de 4,3; 5,6 e 6,3
Os resultados da robustez tambm podem ser visualizados na Figura 33,

onde se observa que a varredura realizada na faixa de 240 a 400 nm, para
diferentes fabricantes do solvente, o alcance mximo continua sendo a 290 nm de
comprimento de onda.
107
Robustez
1
Absorvncia
0,8
0,6
Solvente A
0,4
Solvente B
0,2
Solvente C
0
240 260
70
280 290 300 310 320 340 360 380 400

comprimento de onda (nm)
Figura 33 - Robustez com varredura em espectrofotmetro de 240 a 400 nm para diferentes

fabricantes do solvente: A, B e C
5.6.2 Quantificao das antraquinonas totais
Aps a leitura em triplicata da soluo metanlica de 10 mg/mL da frao

acetato de etila da tintura em espectrofotmetro (290 nm) obteve-se uma absoro
mdia de 0,329. Utilizando-se a equao da reta da curva de calibrao pode-se
calcular a quantidade de antraquinonas totais com equivalentes em emodina
presentes nas amostras, os resultados encontram-se condensados na Tabela 21.
Tabela 21 Quantificao das antraquinonas totais com equivalentes em emodina na tintura seca (I) e
na frao acetato de etila (II) provenientes ta tintura hidroalcolica das folhas de Vismia
Material
Tintura seca
Frao acetato de etila
antraquinonas totais
Peso
1g
54,4 mg
42,85 mg
100%
II
4,285%
100%
78,78%
108
5.7 Estudos de formulao de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
5.7.1 Ensaios de avaliao dos excipientes da formulao e suas misturas binrias

com o extrato liofilizado da tintura por anlise trmica e espectroscopia na regio do
infravermelho
5.7.1.1.1 Excipientes
Nas Figuras 34, 35 e 36 esto apresentados os resultados das curvas TG e

DTA dos adjuvantes farmacotcnicos escolhidos para fazerem parte da formulao
semi-slida utilizada para a incorporao da tintura de V. guianensis. Os resultados
da termogravimetria podem ser justificados pelos seus correspondentes nas curvas
de DTA.
Na Figura 34 tm-se o resultado das curvas TG e DTA da hidroxietilcelulose
(HEC), o polmero responsvel pela base gelificante da formulao cuja estabilidade
trmica vai at a temperatura de 38,62 C e a perda de massa final a 600 C foi de
78,5%, valores que podem ser visualizados na Tabela 22. Na mesma figura pode-se
observar a curva DTA do polmero registrando um evento endotrmico na faixa de
temperatura de 29 C a 74 C representando a perda de gua e dois eventos
exotrmicos acima de 200 C onde se tem incio decomposio trmica da
amostra, valores que podem ser visualizados na Tabela 23.
109
TGA
DTA
Figura 34 - Curvas TG e DTA da hidroxietilcelulose
Tabela 22 - Perfil termogravimtrico da hidroxietilcelulose
Temperatura C
massa
39 62
7,2%
271 318
65,7%
434 600
5,6%
Tabela 23 - Perfil trmico diferencial da hidroxietilcelulose
Temperatura C
29 74
277 308
311 328,5
Eventos
352,54 J/g
447,93 J/g
303,29 J/g
endotrmico
exotrmico
exotrmico
Na Figura 35 podem-se visualizar as curvas TG e DTA do Propilenoglicol o

umectante da formulao, e observar sua perda de massa em dois eventos
endotrmicos (Tabela 25); sua perda de massa final foi de aproximadamente 97%,
nas faixas de temperatura que podem ser visualizadas na Tabela 24.
110
TGA
DTA
Figura 35 - Curvas TG e DTA do propilenoglicol
Tabela 24 - Perfil termogravimtrico do propilenoglicol
Temperatura C
massa
65 86
14,2%
114 134
82,75%
Tabela 25 - Perfil analtico trmico diferencial do propilenoglicol
Eventos
38 76
117,82 J/g
endotrmico
109 140
638,35 J/g
endotrmico
Temperatura C
A Figura 36 apresenta as curvas TG e DTA do conservante metilparabeno,

cuja estabilidade trmica vai at a temperatura de 143 C, ocorrendo uma perda de
massa final de aproximadamente 97% (Tabela 26), em apenas um evento
endotrmico (Tabela 27), pois o primeiro evento endotrmico ocorrido na faixa de
temperatura de 125 a 135 C referente sua fuso, uma vez que os processos de
perda de massa somente iro ocorrer a partir de 144 C.
111
TGA
DTA
Figura 36 - Curvas TG e DTA do metilparabeno
Tabela 26 - Perfil termogravimtrico do metilparabeno
Temperatura C
massa
144 157
6,8%
191 214
90%
Tabela 27 - Perfil analtico trmico diferencial do metilparabeno
Eventos
125 135
211,83 J/g
endotrmico
182 220,5
435 J/g
endotrmico
Temperatura C
5.7.1.1.2 Misturas binrias
O estudo inicial da formulao advm da compatibilidade entre seus

componentes, gerando uma formulao estvel e/ou instvel. O controle de
112
qualidade inicial termoanaltico requer a juno do ativo e seus excipientes em uma
mistura fsica na proporo 1:1 (em massa).
Na Figura 37 pode-se observar a curva TG da mistura entre o extrato
liofilizado e a HEC (1:1p/p) e visualizar suas perdas de massa na Tabela 28 com
uma perda de massa final de aproximadamente 95%; ainda nessa mesma figura
encontra-se a curva DTA dessa mistura, exibindo os eventos endotrmicos e
exotrmicos de acordo com os eventos de perda de massa da curva TG, onde os
valores correspondentes podem ser visualizados na Tabela 29.
TGA
DTA
Figura 37 - Curva TG da mistura binria da hidroxietilcelulose e o extrato liofilizado (1:1p/p)
Tabela 28 - Perfil termogravimtrico da mistura binria da hidroxietilcelulose e o extrato liofilizado

(1:1p/p)
Temperatura C
massa
37 72
9,6%
256 281,5
33,4%
407 437
24%
434 -472,5
517 522
4%
23%
113
Tabela 29 - Perfil analtico trmico diferencial da mistura binria da hidroxietilcelulose e o extrato
liofilizado (1:1p/p)
Temperatura C
Eventos
37 75
124,5 J/g
endotrmico
275 282
711,96
exotrmico
401 470
1,68 KJ/g
endotrmico
477,5 -505
1,90 KJ/g
endotrmico
Na Figura 38 pode-se visualizar a comparao entre as curvas TG do extrato

liofilizado, da hidroxietilcelulose e da mistura binria (1:1p/p).
Extrato liofilizado
HEC
Mistura (1:1p/p)
Figura 38 - Curvas TG do extrato liofilizado, da hidroxietilcelulose e da mistura binria (1:1p/p)
Na Figura 39 podem-se visualizar as curvas TG e DTA da mistura binria do

propilenoglicol e do extrato liofilizado (2:1p/p) e na Tabela 30 observar as faixas de
temperatura que esto ocorrendo os eventos de perda de massa, cuja porcentagem
de perda final de massa de aproximadamente 91%, na Tabela 31 podem-se
visualizar os valores e os tipos de eventos envolvidos nessa perda de massa. E na
Figura 40 pode-se observar a comparao entre as curvas TG do extrato liofilizado,
do propilenoglicol e da sua mistura binria (2:1p/p).
114
TGA
DTA
Figura 39 - Curvas TG e DTA da mistura binria entre o propilenoglicol e o extrato liofilizado (2:1p/p)
Tabela 30 - Perfil termogravimtrico da mistura binria do propilenoglicol e o extrato liofilizado (2:1p/p)
Temperatura C
massa
53 76
8%
99 138
54%
204 261
14%
464,5 532
540 565
3%
12%
Tabela 31 - Perfil analtico trmico diferencial da mistura binria do propilenoglicol e o extrato

Temperatura C
Eventos
32 88,5
93,65 J/g
endotrmico
94 138
277,37 J/g
endotrmico
189 204
1,62 J/g
endotrmico
464 491
45,04 J/g
exotrmico
506 593
1,54 KJ/g
exotrmico
115
Extrato liofilizado
Propilenoglicol
Mistura (2:1p/p)
Figura 40 - Curvas TG do extrato liofilizado, propilenoglicol e da mistura binria (2:1p/p)
Na Figura 41 podem-se visualizar as curvas trmicas de TG e DTA da mistura

do metilparabeno e o extrato liofilizado (1:1p/p), com eventos que se somam quando
comparados com as curvas TG das substncias separadas. O primeiro evento na
faixa de temperatura de 40 C a 62 C correspondente a perda de umidade, a
degradao do metilparabeno realizada at a temperatura de 214 C, portanto o
terceiro evento de perda de massa associado somente ao extrato liofilizado, que
possuir sua decomposio total entre 443 C e 492 C. Nas Tabelas 32 e 33 podem
ser visualizados os valores de porcentagem de perda de massa e os valores das
entalpias envolvidas nesses processos, respectivamente.
116
TGA
DTA
Figura 41 - Curva TG da mistura binria do metilparabeno e o extrato liofilizado (1:1p/p)
Tabela 32 - Perfil termogravimtrico da mistura binria do metilparabeno e o extrato liofilizado (1:1p/p)
Temperatura C
massa
40 62
6,75%
154 188
29,34%
217 246
27,8%
489 589
18%
Tabela 33 - Perfil analtico trmico diferencial da mistura binria do Metilparabeno e o extrato

Temperatura C
Eventos
124 132,5
92,03 J/g
endotrmico
181 192
35 J/g
endotrmico
329 504
312,26 J/g
endotrmico
513 572,5
96,5 J/g
exotrmico
117
Na Figura 42, visualizam-se as curvas TG do metilparabeno, do extrato
liofilizado e da mistura binria (1:1 p/p)
Extrato liofilizado
Metilparabeno
Mistura (1:1p/p)
Figura 42 - Curvas TG do metilparabeno, do extrato liofilizado e da mistura binria (1:1p/p)
Nas Figuras 43, 44 e 45 sero apresentadas as curvas DSC dos adjuvantes

empregados na formulao fitoterpica semi-slida de uso tpico.
A Figura 43 apresenta a curva DSC da HEC, exibindo um evento endotrmico
at a temperatura de 134 C referente perda de umidade e outro evento
exotrmico acima de 200 C marcando o incio da decomposio do polmero; as
entalpias envolvidas nesses eventos podem ser visualizadas na Tabela 34.
118
Figura 43 - Curva DSC da hidroxietilcelulose
Tabela 34 - Perfil calorimtrico exploratrio diferencial da hidroxietilcelulose
Temperatura C
Eventos
88,5 134
69,25 J/g
endotrmico
187 214,5
4,08 J/g
exotrmico
275 302
132,5 J/g
endotrmico
Na Figura 44 pode-se observar a curva DSC do propilenoglicol exibindo um

evento endotrmico marcante na faixa de temperatura de 230 C a 235 C
caracterstico do processo de fuso desse umectante, cuja entalpia pode ser
visualizada na Tabela 35.
119
Figura 44 - Curva DSC do propilenoglicol
Tabela 35 - Perfil calorimtrico exploratrio diferencial do propilenoglicol
Temperatura C
Eventos
176 205
39,11 J/g
endotrmico
216 225
62,82 J/g
endotrmico
230 235
154,25 J/g
endotrmico
A Figura 45 apresenta-se constituda pela curva DSC do metilparabeno, cujo

primeiro evento endotrmico faz referncia a fuso desse conservante, ocorrida na
faixa de temperatura de 126 C a 132 C. As demais temperaturas e entalpias
envolvidas nos eventos endotrmicos podem ser visualizadas na Tabela 36.
120
Figura 45 - Curva DSC do metilparabeno
Tabela 36 - Perfil calorimtrico exploratrio diferencial do metilparabeno
Temperatura C
Eventos
126 132
149 J/g
endotrmico
198 208
81,64 J/g
endotrmico
231 241
36,5 J/g
endotrmico
5.7.1.2.2 Misturas binrias
A associao dos excipientes com o extrato liofilizado, o componente ativo

proveniente da tintura, tambm apresentou um perfil calorimtrico exploratrio
diferencial, apresentado nas figuras a seguir, assim como tambm apresentaremos
figuras contendo as curvas comparativas entre o excipiente, o extrato liofilizado e a
mistura entre eles.
Na Figura 46 pode-se observar a curva DSC da mistura binria (1:1p/p) do
HEC com extrato liofilizado, apresentando inicialmente um pico endotrmico
referente desidratao e finalizando com outro evento endotrmico caracterstico
da decomposio desse material, os valores das entalpias desses processos podem
121
ser visualizados na Tabela 37. E na Figura 47 observa-se a comparao entre as
curvas TG da HEC, do extrato liofilizado e a mistura binria gerado pelo dois na
proporo de 1:1 em peso.
Figura 46 - Curva DSC da mistura binria da hidroxietilcelulose e o extrato liofilizado (1:1p/p)
Tabela 37 - Perfil calorimtrico diferencial da mistura binria da hidroxietilcelulose e o extrato

Temperatura C
Eventos
33 79,5
73,92 J/g
endotrmico
194 296
253,4 J/g
endotrmico
122
Extrato liofilizado
HEC
Mistura (1:1p/p)
Figura 47 - As curvas DSC da mistura binria da hidroxietilcelulose e o extrato liofilizado (1:1p/p)
Na Figura 48 observa-se a curva DSC da mistura binria do propilenoglicol

com o extrato liofilizado na proporo de 2:1 em peso, as entalpias envolvidas no
processo podem ser visualizadas na Tabela 38. Na Figura 49 pode-se visualizar a
comparao das curvas DSC do extrato liofilizado, do propilenoglicol e da mistura
(2:1 p/p) entre os dois.
Figura 48 - Curva DSC da mistura binria de propilenoglicol e extrato liofilizado (2:1 p/p)
123
Tabela 38 - Perfil calorimtrico diferencial do extrato liofilizado, do propilenoglicol e da mistura binria
(2:1 p/p)
Temperatura C
Eventos
163 167
225,51 J/g
endotrmico
193 207
48,44 J/g
endotrmico
Extrato liofilizado
Propilenoglicol
Mistura (2:1p/p)
Figura 49 - Curvas DSC do propilenoglicol, do extrato liofilizado e da mistura binria (2:1 p/p)
Na Figura 50 pode-se visualizar a curva DSC da mistura binria do

metilparabeno com o extrato liofilizado (1:1 p/p) e visualizar o ponto de fuso do
conservante na faixa de temperatura de 123 C a 129 C e um evento endotrmico
aps a temperatura de 168 C, marcando a decomposio dessa associao. As
entalpias referentes a esses processos podero ser visualizadas na Tabela 39. E na
Figura 51 podem ser observadas as curvas DSC do metilparabeno, do extrato
liofilizado e da mistura binria entre os dois na proporo de 1:1 em massa.
124
Figura 50 - Curva DSC da mistura binria do metilparabeno com o extrato liofilizado (1:1p/p)
Tabela 39 - Perfil calorimtrico exploratrio diferencial da mistura binria do metilparabeno com o

extrato liofilizado (1:1p/p)
Temperatura C
Eventos
123 129
96,58 J/g
endotrmico
168 191
74,45 J/g
endotrmico
Extrato liofilizado
Metilparabeno
Mistura (1:1p/p)
Figura 51 - Curvas DSC do metilparabeno, do extrato liofilizado e da mistura binria (1:1p/p)
125
5.7.1.3 Perfil espectrofotomtrico na regio do infravermelho
Nas figuras a seguir encontram-se os espectros de absoro na regio do

infravermelho
dos
adjuvantes
utilizados
na
pr-formulao
fitoterpica
antimicrobiana contendo as folhas de V. guianensis .

Na Figura 53 podem-se visualizar as bandas de absoro caractersticas do
polmero hidroxietilcelulose (Figura 52). Onde podemos visualizar uma banda larga
de absoro na regio de 3334 cm-1 provenientes da ligao O-H, uma banda mdia
de absoro na regio de 2900 cm-1 caracterstica da ligao C-H, uma banda de
absoro em 1600 cm-1 caracterstica da ligao C-C de cclicos, uma banda larga
de absoro em 1000 cm-1 caracterstica da ligao C-O. Todas essas regies de
absoro e suas ligaes caractersticas esto apresentadas de forma resumida na
Tabela 40.
Figura 52 - Estrutura qumica da hidroxietilcelulose
126
Figura 53 - Espectro de absoro na regio do infravermelho para a hidroxietilcelulose
Tabela 40 - Nmeros de onda (cm-1) e ligaes caractersticas do espectro na regio do infravermelho

para a hidroxietilcelulose
Regio de absoro
Tipo de ligao
3550-3200 cm-1
O-H
2900 cm-1
C-H
1600 cm-1
C-C
1200-1000 cm-1
C-O
O espectro contido na Figura 55 correspondente ao umectante

Propilenoglicol (Figura 54), cujas bandas de absoro caractersticas so: 3303 cm -1
uma banda intensa caracterizando o grupo hidroxila proveniente de alcois, duas
bandas de absoro em 2971 e 2930 cm-1 caractersticas da ligao C-H (de
alcanos) e uma banda intensa de absoro em 1000 cm-1 caracterstica da ligao
C-O proveniente de alcois. Todas essas regies podem ser visualizadas de forma
resumida na Tabela 41.
127
Figura 54 - Estrutura qumica do propilenoglicol (1,2-propanodiol)
Figura 55 - Espectro de absoro na regio do infravermelho para o propilenoglicol

para o propilenoglicol
Regio de absoro
Tipo de ligao
3550-3200 cm-1
O-H
3000-3840 cm-1
C-H
1200-1000 cm-1
C-O
O espectro de absoro no IV para o metilparabeno (Figura 56) pode ser

visualizado na Figura 57, onde se observa um agregado de bandas de absoro, de
onde podemos destacar uma banda de absoro em 3286 cm-1 caracterstica da
128
ligao O-H provenientes do fenol, uma banda de absoro na regio de 2900 cm-1
caracterstica da ligao C-H do grupo aromtico, uma banda de absoro em 1670
cm-1 caracterstica da ligao C=O provenientes de steres, uma ligao em 1220
cm-1 caracterstica da ligao C (=O)-O de acetato e uma banda de absoro em
770 cm-1 caracterstica de composto aromticos. Tais bandas e suas deformaes
axiais podem ser visualizadas na Tabela 42.
Figura 56 - Estrutura qumica do metilparabeno (ster metlico do cido 4-hidroxibenzico)
Figura 57 - Espectro de absoro na regio do infravermelho para o metilparabeno
129
para o metilparabeno
Regio de absoro
Tipo de ligao
3550-3200 cm-1
O-H
2900 cm-1
C-H
1670 cm-1
C=O
1220 cm-1
C (=O)-O
-1
770 cm
C-H
5.7.3.2 Misturas binrias
Nas Figuras 58, 59 e 60 podem-se visualizar os espectros de comparao

entre os excipientes, o extrato liofilizado de V. guianensis e suas mistura binrias.
Figura 58 - Espectros na regio do infravermelho da hidroxietilcelulose, do extrato liofilizado e da

mistura binria 1:1 (p/p)
130
Figura 59 - Espectros na regio do infravermelho do propilenoglicol, do extrato liofilizado e da mistura

binria 2:1 (p/p)
Figura 60 - Espectros na regio do infravermelho do metilparabeno, do extrato liofilizado e da mistura

binria 1:1 (p/p)
131
A base gelificante foi preparada sob a temperatura de 55 2 C e somente

aps 24 h de resfriamento e repouso e a tintura hidroalcolica foi incorporada a ela.
Sendo preparadas formulaes semi-slidas contendo 5% e 10% da tintura. O gel
obtido a 5% apresentou-se com uma aparncia visual bem mais lmpida que o gel
obtido incorporando-se 10% da tintura, o mesmo apresentou-se com inmeras
partculas que no se incorporaram totalmente a base e uma consistncia mais
viscosa de difcil fluidez sobre a pele.
Sua colorao apresentou-se em um amarelo escuro, aparncia heterognea
e odor caracterstico da tintura de V. guianensis.
5.9 Avaliao preliminar da estabilidade da formulao fitoterpica semi-slida

contendo a tintura das folhas de Vismia guianensis (Aubl.) Choisy
5.9.1 Teste de centrifugao
A base gelificante mesmo sob da fora centrfuga gerada pela centrifugao

apresentou-se aparentemente sem sinais de instabilidade, uma vez que no ocorreu
separao
de
fases,
somente
ocorreu
sedimentao
das
partculas
no
incorporadas totalmente base gelificante. Notou-se que quanto maior a quantidade

da tintura presente no gel, maior quantidade de partculas que no se
incorporaram base gelificante e acabaram precipitando por ao da fora
centrfuga.
132
5.9.2 Caractersticas organolpticas
O aspecto, cor e odor tanto das amostras de referncia como das amostras
que sofreram o estresse trmico permaneceram os mesmos, com leves
modificaes devido exposio temperatura elevada de 45 2 C.
Apresentando-se com uma cor amarelo escura, aspecto heterogneo devido
presena de substncias que no se incorporaram totalmente a base gelificante e
odor forte caracterstico da tintura de V. guianensis.
5.9.3 Caractersticas fsico-qumicas
5.9.3.1 Valor de pH
O estresse trmico pelo qual passaram as amostras: referncias (5% e 10%

da tintura) que permaneceram temperatura ambiente (25 C 2 C) e as amostras
de lotes de bancada: 1 (5%) e lote de bancada 2 (10%) que permaneceram a
temperatura de 45 C 2 C, durante um perodo de 6 dias, onde a cada 24 h
completava-se um ciclo, totalizando-se 6 ciclos.
O pH das amostras a 5% permaneceu na faixa de 4,5 0,37%, j o pH das
amostras a 10% teve uma mdia de 4,65 0,15%, resultados que podem ser
visualizados nos grficos das Figuras 61 e 62.
133
Estresse trmico
6
Valores de pH
5
4
3
2
Referncia
Lote de bancada 1
0
t1
t2
t3
t4
t5
t6
Ciclos (24 h-24 h)

Figura 61 - Determinao do pH da amostra de referncia 5% (25 C 2 C) e do lote de bancada 1
(45 C 2 C) na proporo de 5 %
Estresse trmico
6
Valores de pH
5
4
3
2
Referncia
Lote de bancada 2
0
t1
t2
t3
t4
t5
t6
Ciclos (24 h-24h)

Figura 62 - Determinao do pH da amostra de referncia 10% (25 C 2 C) e do lote de bancada 2
(45 C 2 C) na proporo de 10 %
134
6. DISCUSSO
135
6. DISCUSSO
Para a obteno de qualquer derivado de planta medicinal, podendo ser ele

um medicamento fitoterpico em qualquer uma de suas formas, o controle de
qualidade exigido desde o cultivo, manejo e colheita das espcies vegetais;
passando-se pela obteno do produto intermedirio at a obteno da formulao.
Seguindo um conjunto de critrios foi possvel caracterizar a matria-prima vegetal,
seu derivado e a formulao antimicrobiana semi-slida, designando um
planejamento adequado a ser seguido para se estabelecer os parmetros controle
de qualidade.
Aps a aquisio da matria-prima vegetal, realizou-se a identificao
botnica da espcie qual pertenciam as folhas estudas neste trabalho, cuja
exsicata (Figura 5) encontra-se depositada no herbrio do Museu Emlio Goeldi,
garantindo-se sua confirmao taxonmica e evitando a ocorrncia de qualquer
equvoco quanto utilizao errnea de outras espcies.
As caractersticas anatmicas das folhas de V. guianensis, tambm foram
fundamentais na identificao da espcie, pois trabalhos sobre microanatomia foliar
dessa espcie so escassos, sendo que os relacionados com minas foliares so os
mais estudados abordando a relao inseto plantas.
Analisando-se a Figura 8 observa-se a presena de tricomas glandulares na
superfcie abaixal do limbo da folha. O termo tricoma utilizado para designar
qualquer apndice epidrmico, seja este uni ou multicelular (FAHN, 1990). Os
tricomas, geralmente, so estruturas simples, que tm ampla variao quanto a
forma, ao tamanho, ao contedo e, principalmente, funo (MAUSETH, 1995) e os
tricomas glandulares esto envolvidos com a proteo qumica, atravs de liberao
de substncias lipoflicas (VALKAMA et al. 2003). Embora a ocorrncia de tricomas
no seja comum a famlia Clusiaceae (CRONQUIST,1981) os estudos de AlmeidaCortez e Melo-de-Pinna (2006), tambm relataram presena de tricomas na face
abaxial de V. guianensis.
Outra estrutura bastante evidenciada foram os idioblastos contendo drusas de
cristais de oxalato de clcio espalhados pela epiderme e pelo mesfilo, tanto no
colnquima quanto no parnquima fundamental corroborando aos estudos de
Almeida-Cortez e Melo-de-Pinna (2006), que tambm evidenciaram a presena de
136
idioblastos contendo drusas no mesfilo e em clulas secretrias presentes apenas
no parnquima esponjoso.
A presena de cristais de oxalato de clcio foi descrito por Metcalfe e Chalk
(1950) e por Cronquist (1981) para a famlia Clusiaceae, bem como os idioblastos
fenlicos,
que
so
associados
proteo
da
planta
contra
ataque
de
microorganismos herbvoros (BONELLO et al. 2006).

As caractersticas morfolgicas e anatmicas das folhas de V. guianensis
ajudaram na identificao da espcie, assim como traaram aspectos da superfcie
das mesmas. Desses aspectos depende, em grande parte, a adaptao das plantas
ao seu ambiente, pois so as caractersticas qumicas e/ou morfolgicas da
superfcie foliar que condicionam, por exemplo, a quantidade de luz absorvida ou
refletida, o grau de hidrofobia do rgo, a presso de vapor do ar em contato com as
folhas, a eficincia do rgo em defender-se de parasitas e patgenos, a quantidade
de poluentes ou defensivos absorvida e, evidentemente, a magnitude da
transpirao cuticular (SALATINO et al. 1986).
Aps a confirmao da espcie, as folhas previamente selecionadas foram
lavadas com etanol 70 GL, para controlar a carga microbiolgica que possivelmente
poderiam estar presentes no material vegetal; aps essa fase a secagem das folhas
em temperatura ambiente seguida de secagem a 40 2 C em estuda de ar
circulante promoveu a estabilizao qumica e a reteno dos microorganismos, pois
a eliminao de maior parte do contedo de gua conseguiu favorecer a inativao
dos sistemas enzimticos presentes no contedo celular destruindo um timo local
para o desenvolvimento de microorganismos que a planta traz normalmente consigo
(CUNHA, 2005).
Aps secagem, as folhas foram trituradas em moinho de facas at a obteno
de um p, o qual sofreu uma caracterizao fsica de sua constituio atravs da
granulometria. A distribuio granulomtrica de drogas vegetais determina a
superfcie de contato disponvel para interao com o solvente utilizado na obteno
do derivado vegetal, visto isso, um parmetro preliminar e importante para a
escolha do processo de extrao adequado, j que uma influncia direta sobre a
eficincia do processo extrativo (SANTOS et al. 2000). A distribuio granulomtrica
do p das folhas de V. guianensis ilustrada na Figura 14 classificou-o como um p
grosso, determinante para a escolha do processo de macerao para a obteno da
tintura hidroalcolica.
137
Alm da caracterizao fsica, o p das folhas secas tambm passou por uma
caracterizao qumica atravs da determinao da perda por dessecao e do teor
de cinzas totais. A presena de quantidades excessivas de gua em drogas vegetais
propicia o desenvolvimento de microorganismos, insetos, hidrlise e consequente
deteriorao dos constituintes da droga, por isso existe a necessidade do
estabelecimento de limites de umidade para drogas vegetais (FARMACOPIA
BRASILEIRA 4. Ed., 1988). A mdia da porcentagem de perda por dessecao do
p foi de 11,600,12% (p/p) (Tabela 3), o qual se encontra dentro do limite
estabelecido por diferentes farmacopias que est entre 8 e 14%, indicando uma
boa conservao e uma secagem eficiente da matria prima vegetal (SHARAPIN,
2000).
A determinao da pureza da amostra foi realizada atravs da determinao
do teor de cinzas totais permitindo a quantificao do resduo no voltil inorgnico
presente nas drogas vegetais como integrante natural destas, sendo constitudo, em
particular, por carbonatos, cloretos e diversos tipos de xidos (COSTA, 2000). A
temperatura de 600 C pode-se encontrar o teor de cinzas que corresponde aos sais
minerais ou impurezas contidas na amostra (ARAUJO et al. 2006), que foi de
1,640,25%. A pequena variao de porcentagem obtida entre as triplicatas foi
utilizada como parmetro de controle de qualidade desse material vegetal, uma vez
que a V. guianensis no possui monografia descrita em farmacopias.
Aps a caracterizao da droga seca pulverizada, obteve-se a tintura de V.
guianensis a partir do p de suas folhas, utilizando como lquido extrator um solvente
geral: o lcool etlico e sua mistura com gua, formando uma soluo hidroalcolica
a 70 GL. A caracterizao dessa tintura foi baseada na determinao de seu pH,
densidade e perda por dessecao. A densidade da tintura foi de 0,89 g/mL, dentro
da faixa que varia de 0,87 a 0,98 g/mL, correspondente densidade de tinturas a
temperatura de 15 C a 20 C, utilizando-se o mtodo do picnmetro (PRISTA et al.
1990).
O teor de slidos indicativo do teor de gua e substncias volteis da tintura
a 105 C apresentou um valor de 9,5% (m/m) de resduo seco, correspondente a
93,330,34% de umidade, fornecendo dados acerca do rendimento de extrao, j
que a secagem influi no estado de integridade das estruturas celulares, expondo-as
mais ou menos ao contato com os solventes (HARBONE et al. 1986). Alm do mais,
sob o ponto de vista tecnolgico e de produo, importante conhecer
138
quantitativamente o contedo de gua presente na matria-prima vegetal, para que
este valor seja considerado nos clculos de rendimento que foi de 8,6% (OLIVEIRA
et al. 2001). O resultado do pH da tintura foi de 5,690,09% caracterizando-a como
cida, provavelmente devido a presena de antraquinonas encontradas na tintura;
pois os grupos hidroxilas localizados nos carbonos C-1 e C-8 das antraquinonas tm
uma acidez comparvel quela dos cidos orgnicos, por construrem uma estrutura
semelhante a de um cido carboxlico (FALKENBERG, 2007).
Vrios fatores, como radiao, luz, ar, pH e a presena de outras substncias
qumicas contaminantes podem afetar qualquer componente de uma formulao
farmacutica, influenciando na sua estabilidade. Dentre esses, a temperatura e a
umidade so os principais fatores que podem causar instabilidade nas formulaes,
pois podem facilmente induzir a degradao das substncias, mesmo em curto
prazo. Os resultados contidos na Tabela 8 para a tintura hidroalcolica, o produto
intermedirio, so de relevncia para a obteno da formulao, uma vez que os
mesmos influenciam na escolha dos adjuvantes farmacuticos que iro compor a
nossa formulao semi-slida fitoterpica.
A pesquisa qumica iniciou-se com da triagem fitoqumica, onde se pode
determinar qualitativamente os principais grupos de constituintes qumicos da
espcie vegetal, atravs de simples testes de reao de cor e precipitao; a partir
da direcionou-se o fracionamento do extrato para o isolamento dos grupos de maior
interesse (SHARAPIN, 2000). A prospeco qumica da tintura mostrou resultado
positivo para: saponinas espumdicas, acares redutores, catequinas, esterides e
triterpenides, alcalides, dpsidos e dpsonas, e resultado indicativo para: flavonis,
flavanonas, flavanonis e xantonas, flavononis.
O primeiro passo para o controle de qualidade de determinado medicamento
fitoterpico a caracterizao botnica do material vegetal e posteriormente a
definio de qual ou quais substncias marcadoras devem estar presentes, de modo
a assegurar a identidade da planta. No caso da espcie em estudo a literatura cita
diferentes tipos de metablitos secundrios fazendo parte de sua constituio.
Sendo a classe das antraquinonas preniladas o metablito secundrio restrito ao
gnero Vismia (MIRAGLIA et al. 1981; BOTTA et al. 1983; BOTTA et al. 1985; BILIA
et al. 2000).
O estudo de Politi e colaboradores (2004) cita diferentes metablitos
secundrios presentes nas folhas V. guianensis; sendo a classe das antraquinonas
139
tidas como componentes majoritrios, cujo seu esqueleto base a emodina. Apesar
de o screening fitoqumico visualizado na Tabela 9, ter resultado negativo para a
presena desse metablito realizou-se as anlises cromatogrficas para a
determinao da presena de antraquinonas na tintura hidroalcolica. Tal fato
provavelmente ocorreu devido tratar-se de uma anlise cujo mtodo qualitativo,
baseado em reativos de cores e precipitao; portanto a presena de inmeras
substncias na tintura das folhas como gorduras, ceras, carotenides e clorofila,
pode ter mascarado o resultado falso negativo.
Aps a CCD analtica realizada com o extrato seco da tintura, a frao acetato
de etila e as sub-fraes A e B, observou-se que a mancha caracterstica da subfrao A (Rf 0,83) e a mancha caracterstica da sub-frao B (Rf 0,72) podem ser
visualizadas nas demais amostras. Indicando que tais sub-fraes so provenientes
da tintura hidroalcolica, sendo elas ento utilizadas para traar o perfil de
composio da tintura das folhas de V. guianensis.
O isolamento e a purificao de quinonas so realizados geralmente atravs
da cromatografia em coluna (usando gel de slica ou alternativamente resinas como
o Sephadex LH-20 e/ou Amberlite XAD-2) e cromatografia em camada delgada
preparativa (VAN DEN BERG e LEBADIE, 1989). A anlise cromatogrfica das
diferentes fraes obtidas da tintura apresentou compostos que desenvolvem bem
com gua, metanol e acetato de etila e reagem com a soluo de KOH a 10%,
revelando a presena de componentes antraquinnicos. A frao acetato de etila a
que demonstra melhor separao das substncias, apresentando manchas com Rfs
bem definidos. Essa frao foi ento submetida a uma CCD preparativa da qual
obtivemos duas sub-fraes A e B.
As sub-fraes A e B foram analisadas por cromatografia lquida de alta
eficincia e nos forneceram um perfil da composio da tintura de Vismia
guianensis. Analisando-se as Figuras 18 e 19 visualizamos os cromatogramas
correspondentes as duas sub-fraes, comparando-se esses cromatogramas aos
cromatogramas de Politi e colaboradores (2004), pode-se visualizar os mesmos
tempos de reteno, nos quais podemos identificar a presena de compostos
fenlicos, um possvel derivado de xantona e diferentes tipos de antraquinonas.
Alm de traar o perfil de composio das sub-fraes a cromatografia lquida
de alta eficincia serviu para determinar os mximos de absoro da tintura e da
frao acetato de etila. Analisando-se a Figura 20 pode-se notar que a tintura, por se
140
apresentar constituda por diferentes componentes, apresentou diferentes mximos
de absoro. J a frao acetato de etila, livre de certos interferentes como a
clorofila, apresentou apenas um mximo de absoro em 289,6 nm, semelhante ao
mximo de absoro da emodina (290 nm). Comprimento de onda ento utilizado
para a validao do mtodo de quantificao das antraquinonas totais com
equivalentes em emodina, o marcador externo de V. guianensis.
O presente trabalho utilizou alm das metodologias clssicas contidas em
farmacopias, outras metodologias para a caracterizao preliminar da matriaprima vegetal, do produto intermedirio e da formulao. A escolha da anlise
trmica e da espectrometria no infravermelho para o desenvolvimento deste trabalho
reside no fato de este grupo de tcnicas ter despertado, nos ltimos anos, um
grande interesse de muitos pesquisadores para estudos que envolvam a
caracterizao
preliminar
de
produtos
fitoterpicos
utilizando-se
pequenas
quantidades da matria-prima vegetal e reduzindo-se o tempo gasto com a obteno

dos resultados. Apesar de tais metodologias necessitarem de mais investimentos
com material tecnolgico, o resultado final compensador, pois geram resultados
comprovadamente de maior credibilidade (SILVA JNIOR et al. 2006a; SILVA
JNIOR, 2006b; ALVES, 2008; NUNES, 2008; NUNES et al. 2009).
Na Figura 15 pode-se observar a variao de perda de massa do p das
folhas de V. guianensis em funo da temperatura, enquanto essa amostra foi
submetida a uma programao controlada at 600 C. O primeiro evento trmico
(Tabela 4) registra uma perda de massa de 12%, correspondente a perda de gua
superficial ou de umidade, semelhante ao teor de perda de massa ocorrido na perda
por dessecao do p 11,600,12% (Tabela 3) aproximadamente 12%
temperatura de 105 C. Aps a desidratao do material, os prximos eventos acima
de 200 C registraram a decomposio dos componentes orgnicos do p,
culminado na obteno de suas cinzas, acima de 600 C (ARAUJO et al. 2006);
resultados confirmados com os seus eventos correspondentes na curva DTA
(Tabela 5).
A curva DSC do p (Figura 16) demonstrou inicialmente um evento
endotrmico consumindo uma energia de 268,77 J/g, caracterstico dos processos
de liberao de gua e umidade. Os processos de decomposio trmica do
material tiveram incio temperatura de 200 C, sendo evidenciado por dois eventos
consecutivos: endotrmico e exotrmico (Tabela 6).
141
Analisando-se o perfil termoanaltico do extrato liofilizado da tintura de V.
guianensis, sua perda de massa em funo da temperatura, visualizada na Figura
21, inicia-se por dois eventos correspondentes perda de gua e substncias
volteis (Tabela. 10), aps essa perda, outros eventos trmicos foram evidenciados,
correspondentes decomposio trmica dos carboidratos e formao dos
compostos carbonceos culminando na formao de cinzas temperatura de 600
C, eventos confirmados tambm pela curva DTA (Tabela 11). E para a curva DSC
(Figura
22)
evidenciaram-se
dois
processos
endotrmicos
(Tabela
12),
caractersticos do processo de liberao de gua. Sendo que a decomposio

trmica do extrato ocorreu com um evento exotrmico temperatura de 368,47 C.
Os resultados dos perfis trmicos atravs da termogravimetria, da anlise
trmica diferencial e da calorimetria exploratria diferencial quando comparados aos
mtodos convencionais: determinao da perda por dessecao e teor de cinzas
totais, preconizados pela Farmacopia Brasileira 4. Ed. (1988) mostram-se
satisfatrios, possuindo resultados semelhantes, obtidos em um curto perodo de
tempo.
O espectro obtido no infravermelho forneceu um agregado muito rico de
bandas de absoro. A anlise das bandas caractersticas de determinados grupos
funcionais de uma molcula fornece, atravs de um simples exame do espectro e
consulta a tabelas de dados, um conjunto valioso de informaes sobre a estrutura
da molcula (BARBETTA e MAGINI, 2006). Ao se analisar os espectros na regio do
infravermelho para o p das folhas e para o extrato liofilizado da tintura (Figuras 17 e
23 e Tabelas 7 e 12) notou-se que as regies de absoro so bastante
semelhantes entre elas. Observou-se tambm uma intensificao das bandas de
absoro com relao aos resultados da droga seca e seu produto intermedirio,
comprovando que o processo extrativo foi eficaz, capaz de extrair os componentes
ativos presentes na matria-prima vegetal. Provavelmente a substncia em questo
apresenta-se formada por hidroxilas provenientes de alcois ou fenis, carbonilas e
compostos
aromticos,
identificados
pelas
suas
regies
de
absoro
correspondentes a deformao axial de vrios tipos de ligao (SILVERSTEIN et al.

2007).
A inteno inicial do presente estudo seria a obteno de uma formulao
fitoterpica antimicrobiana, baseada em relatos da medicina popular tradicional.
Portanto fez-se necessria a avaliao da atividade antimicrobiana do extrato seco
142
da tintura de V. guianensis realizada atravs do mtodo de difuso em disco em
meio slido. Dentre as tcnicas de difuso, esse mtodo o mais adequado para se
trabalhar com extratos vegetais coloridos e ou extrados com solventes orgnicos,
pois possvel evaporar o solvente do disco, antes da colocao deste no meio de
cultura (RIOS et al. 1988) e a cor no interfere na leitura dos resultados. Nesse
mtodo, entretanto, a presena de matria particulada na amostra pode interferir na
difuso da substncia antimicrobiana no gar, mas o pequeno volume necessrio e
a possibilidade de testar de quatro a cinco compostos por placa (Figura 24) frente a
um nico microrganismo foram vantagens observadas quando esse foi empregado
(VANDENBERGHE e VLIETINCK, 1991).
Todas as concentraes do extrato seco da tintura das folhas de V.
guianensis foram sensveis apenas a bactria gram-positiva: Staphylococcus aureus
(ATCC 25923) (Tabela 14), corroborando aos resultados obtidos nos estudos de
Santos e colaboradores (2007).
Segundo a RDC n 48 o melhor marcador aquele que preferencialmente
tenha correlao com o efeito teraputico (BRASIL, 2004). E o marcador utilizado
como padro externo foi a emodina (1,3,8-trihidroxi-6-metilantraquinona); uma
antraquinona purgativa encontrada em muitas plantas, especialmente na Cassia
occidentalis L., possuindo atividades inibitrias da monoaminooxidase e da
tirosinaquinase (JAYASURIYA et al. 1992; KUMAR, et al. 1998) apresentando
tambm atividade antioxidante (CHOI et al. 2000). Foi relatado tambm seu uso
como antimicrobiano, antineoplsico e agente carttico, alm de possuir um notvel
efeito
bacteriosttico
sobre
bactrias
gram-positivas,
especialmente
os
Staphylococcus. aureus (CHUKWUJEKWU et al. 2005).

A
emodina
tambm tem sido
mencionada
por
exibir
propriedades
antiinflamatrias, pela reduo da produo de citocinas em linfcitos T humanos e

clulas endoteliais (KUMAR et al. 1998; KUO et al. 2001). Ela demonstra efeitos
antiproliferativos em vrias linhagens celulares de cncer ao promover a apoptose
via caspases (SRINIVAS et al. 2003), ou ainda por meio da inibio da protena
tirosina quinase. Os efeitos antibacterianos da emodina em Escherichia coli so
explicados em razo de esta interferir na respirao e tambm no transporte de
solutos nas membranas (CHAN et al. 1993).
A caracterizao desse marcador foi realizada pelos mtodos analticos
presentes nesse trabalho, inicialmente as anlises trmicas revelaram seu
143
comportamento em atmosfera dinmica inerte de nitrognio. O padro externo
apresentou estabilidade trmica at a temperatura de aproximadamente 90 C
(Tabela 15), temperatura de 94 C evidenciou-se um pico endotrmico marcando o
incio da perda de massa por desidratao da amostra. Na faixa de temperatura de
291 a 322 C existe uma perda de massa intensa de 74% da amostra. Acima de 305
C visualizaram-se trs eventos exotrmicos responsveis pela formao dos
componentes carbonceos, at a perda de massa final a temperatura de 600 C de
aproximadamente 99%.
A curva DSC da emodina apresenta-se formada por dois eventos
endotrmicos, o inicial correspondente a perda de gua e o final correspondente
ao seu ponto de fuso ocorrido a temperatura de 261 C onde no se observam
eventos de perda de massa correspondentes na curva TG (Figura 25).
Os laboratrios de medicamentos fitoterpicos precisam de metodologias que
assegurem o controle de qualidade de seus produtos quando os mesmos no
constam em farmacopias ou monografias oficiais, por isso fez-se necessrio validar
a metodologia analtica que assegurasse o seu contedo qualitativamente ou
quantitativamente. Por isso a Resoluo Especfica n 899, de 29 de maio de 2003,
Guia para validao de mtodos analticos e bioanliticos da ANVISA determina
que para validar uma metodologia diferentes tipos de testes podem ser realizados de
acordo com a sua finalidade. No presente trabalho a finalidade do teste seria a
quantificao para a determinao do princpio ativo em produtos farmacuticos ou
matrias-primas, sendo necessrio avaliar os seguintes parmetros: seletividade,
linearidade, intervalo, preciso (repetibilidade), exatido e robustez (BRASIL, 2003).
A validao teve incio com a determinao da seletividade, capacidade que o
mtodo possui de medir exatamente um composto em presena de outros
componentes tais como impurezas, produtos de degradao e componentes da
matriz (BRASIL, 2003). Ao se analisar a Figura 28 observa-se que na faixa analisada
de 240 a 400 nm, existe apenas um mximo de absoro em 290 nm, confirmando
que nesse comprimento de onda possvel quantificar especificamente a emodina e
a frao mesmo na presena de outras substncias interferentes. Alm de constatar
que o solvente utilizado na dissoluo das amostras no se apresenta como
interferente, pois o mesmo no apresentou picos de alcance mximos nessa faixa
de leitura.
144
O mtodo espectrofotomtrico apresentou linearidade, os resultados obtidos
(Figura 29) so diretamente proporcionais em 290 nm concentrao do analito na
amostra, correspondente a um coeficiente de correlao de 0,9955, cujo mnimo
aceitvel de 0,99 (BRASIL, 2003). No entanto, apenas o valor do coeficiente de
correlao no suficiente para garantir a adequao do ajuste linear curva de
calibrao, sendo necessria a realizao da anlise de resduos que pode ser
visualizada na Figura 30, onde observamos que os resduos mostram-se
normalmente distribudos indicando que a curva esta bem ajustada apresentando
erros
com
distribuio
uniforme,
mdia
zero
varincia
constante
(homocedastidade) e ausncia de amostras atpicas (PIMENTEL e NETO, 1996).

O estudo de linearidade evidenciou tambm o intervalo especificado entre os
limites de quantificao superior e inferior, determinando-se as concentraes
estudas (0,0076, 0,0083, 0,0090, 0,0100, 0,0111, 0,0125 e 0,0143 mg/mL) das quais
se escolheram 5 pontos para a determinao da curva de calibrao (Figura 31).
Os dados da repetibilidade (intra-corrida), preciso intermediria (intercorridas) e exatido do mtodo encontram-se nas Tabelas 19 e 20, cujos valores
encontram-se compreendidos entre 1,19 e 4,92% para a preciso e 95,46 a 101,6%
para os valores da exatido; dentro dos parmetros regulamentados pela ANVISA
onde os resultados da preciso no podem ultrapassar 5% e, para a exatido no
devem ser inferiores a 95% (BRASIL, 2003). Os valores do limite de deteco e
quantificao foram de 0,005 mg/mL e 0,016 mg/mL respectivamente, com esses
resultados verificamos que o mtodo possui alta sensibilidade para detectar e
quantificar o padro, sem sofrer alterao de fatores intrnsecos do equipamento.
Nas Figuras 32 e 33 esto os grficos que serviram de parmetros para a
determinao da robustez do nosso mtodo, o scan de varredura traado tanto para
a soluo de emodina em diferentes valores de pH como para essa soluo em
diferentes fabricantes do solvente (etanol 70 GL), determinaram que mesmo na
presena de pequenas e deliberadas variaes dos parmetros analticos mostrouse capaz de ser resistente elas (BRASIL, 2003), uma vez que mximo de
absoro no variou, permanecendo em 290 nm, como especificado durante a
seletividade. Esses dois fatores posteriormente sofreram anlise varincia ANOVA
seguida de teste de Tukey para verificar a diferena entre as mdias que foram
realizadas, o mtodo mostrou que no h diferena estatstica significante uma vez
que o p<0,05, demonstrando assim ser um mtodo robusto.
145
Aps a validao do mtodo de quantificao foi possvel quantificar a
quantidade de antraquinonas totais para a frao acetato de etila proveniente da
tintura hidroalcolica de V. guianensis, onde obtivemos a seguinte correlao:
exatamente 1 g da tintura seca atravs de uma partio slido-lquido nos fornece
54,4 mg da frao acetato de etila dos quais 42,85 mg so de antraquinonas totais
com correspondentes em emodina, os valores da porcentagem podem ser
visualizados na Tabela 21.
Nos ltimos anos, tem-se dado ateno influncia do veculo na
movimentao do frmaco atravs da pele. A composio da preparao
farmacutica tem um papel dominante na terapia tpica, porque se encontra no local
de ao. As formulaes so constitudas por excipientes, nos quais so dissolvidos
ou dispersos, geralmente um ou vrios componentes ativos; onde a composio dos
excipientes pode influenciar sobre os efeitos de liberao do frmaco (STORPIRTIS
et al. 2009).
Os adjuvantes farmacuticos so normalmente considerados inertes,
entretanto, interaes fsicas e qumicas com a substncia ativa podem vir a ocorrer.
Em uma formulao farmacutica ou cosmtica, principalmente fitoterpicas,
dificilmente ser encontrada apenas uma nica substncia; em geral mais princpios
ativos esto presentes, bem como adjuvantes. A escolha dos excipientes adequados
para qualquer formulao deve se basear nas caractersticas do principio ativo, bem
como na sua compatibilidade com os demais componentes da formulao, pois de
fato, interaes entre princpio ativo e excipientes podem afetar a natureza qumica e
estabilidade da formulao, e, consequentemente, sua eficcia e segurana
(TAGLIARI et al. 2008).
Com o intuito de vencer a barreira que a pele representa, surge a
necessidade para obteno de novos veculos e tecnologias que promovam o efeito
desejado, seguro e controlado do ativo pela via cutnea (SILVA JNIOR, 2006b). A
escolha de se usar um gel base de hidroxietilcelulose para incorporar o extrato
liofilizado, deveu-se ao fato do mesmo ser de natureza no inica, possuir
estabilidade em ampla faixa de pH e apresentar facilidade de aplicao e fcil
espalhabilidade sobre a pele (CORRA et al. 2005).
O ponto de partida para a obteno de um novo medicamento denominado
formulao. Esta fase do desenvolvimento caracterizada como a avaliao das
propriedades fsicas e qumicas fundamentais de um determinado componente ativo
146
associado a diversos excipientes (FIESE e HAGEN, 2001). As tcnicas
termoanalticas tm sido utilizadas para a avaliao de possveis incompatibilidades
entre os componentes da formulao; as anlises so realizadas por intermdio da
comparao das curvas termoanalticas das substncias puras com aquelas obtidas
da mistura fsica na proporo de 1:1 em peso, propores no utilizadas na prtica
farmacutica. Em caso de no ocorrncia de incompatibilidade, a curva da mistura
mostra-se como um somatrio das curvas relativas aos componentes em separado
(MATOS et al. 2009).
Analisando-se as curva TG da mistura binria da HEC com o extrato liofilizado
(1:1p/p) e os dois separadamente (Figura 38), detectou-se que a estabilidade
trmica da mistura binria permaneceu a mesma, com uma variao de no mximo
2 C. Pode-se observar tambm que as curvas se somam e suas perdas so
semelhantes at aproximadamente a temperatura de 400 C. A partir de 407 C h
uma forte reao provocada possivelmente pela degradao do extrato liofilizado,
uma vez que at a temperatura de 318 C o HEC j sofreu perda de massa quase
que total de aproximadamente 93,5%. O extrato liofilizado sozinho, portanto, sofreu
uma combusto e o calor gerado por essa atmosfera oxidante somou-se ao calor do
forno, aquecendo o termopar, causando um abaulamento na curva TG (PEREIRA et
al. 2005).
Na Figura 40 pode-se notar que o extrato liofilizado alterou a estabilidade
trmica da mistura binria, sendo essa antecipada temperatura de 53 C, pois o
propilenoglicol separadamente possua sua estabilidade trmica at a temperatura
de 65 C. O evento de perda de massa que se inicia temperatura de 204 C
caracteriza-se pelo incio da decomposio trmica do extrato liofilizado, uma vez
que o propilenoglicol j sofreu sua combusto quase que total at a temperatura de
134 C.
Ao se analisar a Figura 42, observam-se as curvas TG do extrato liofilizado,
do metilparabeno e sua mistura binria (1:1p/p), traando-se uma comparao entre
elas, o evento de perda de massa que se inicia em 40 C at 188 C caracteriza-se
pela perda de aproximadamente 97% do metilparabeno. A sua carbonizao
mxima at a temperatura de 214 C. Portanto o evento que se segue, seria o incio
da formao dos compostos carbonceos somente do extrato liofilizado, uma vez
que esse evento ocorreu a uma temperatura acima de 217 C, quando existia uma
concentrao abaixo do limite de deteco.
147
Ao se analisar-se a Figura 46, nota-se que o primeiro evento endotrmico na
curva DSC da mistura, sofreu antecipao para a temperatura de 33 C, o segundo
evento endotrmico evidenciado na curva DSC da HEC desapareceu quando esse
se encontrava compondo a mistura binria. O ultimo evento endotrmico registrado
em ambas as curvas, mostrou-se com reduo de pico e de entalpia (Tabela 34)
(STORPITIS et al. 2009)
Ao se analisar a Figura 49, onde esto sobrepostas as curvas DSC do
propilenoglicol, do extrato liofilizado e da mistura binria (2:1p/p), traou-se uma
comparao entre elas e detectou-se que o ponto de fuso do propilenoglicol que
ocorria na faixa de temperatura de 230 C a 235 C quando este se encontrava
isolado foi antecipado para a faixa de temperatura de 163 C a 167 C quando o
umectante foi misturado ao extrato liofilizado na proporo de 2:1 em massa;
podendo caracterizar uma incompatibilidade componente ativo/excipiente ou alguma
interao de origem fsica (RODANTE et al. 2002)
Analisando-se a Figura 51 e comparando-se as curvas DSC do metilparabeno
isolado e da sua mistura binria com estrato liofilizado (1:1p/p), nota-se que o seu
ponto de fuso permaneceu na mesma faixa de temperatura. Analisando-se a curva
DSC do metilparabeno (Figura 45) nota-se que aps a sua fuso ocorrida
temperatura de 126,5 C; existem posteriormente mais dois eventos endotrmicos e
ao se analisar a curva da mistura nota-se que um dos eventos desapareceu,
provavelmente alguma interao fsica do excipiente com o extrato liofilizado fez
esses dois eventos se somarem (RODANTE et al. 2002).
O infravermelho, aliado as outras tcnicas importante para monitorar os
estudos de formulao auxiliando na seleo de componentes da formulao. A
aplicao
dessa
tcnica
analtica
teve
por
finalidade
avaliar
possveis
incompatibilidades do extrato liofilizado com os outros componentes da formulao

proposta. Os espectros na regio do infravermelho dos adjuvantes puros, quando
comparados com os espectros obtidos pelas suas mistura binrias com o extrato
liofilizado da tintura de V. guianensis (Figuras 58, 59 e 60), no apresentaram
qualquer indicao de incompatibilidade entre os componentes da formulao, uma
vez que os espectros correspondes as misturas seriam a soma dos espectros das
substncias isoladas. Permanecendo todas as bandas caractersticas de absoro
dos respectivos grupos funcionais de ambos (Tabelas 40, 41 e 42).
148
Aps
seleo
dos
excipientes
que
iriam
compor
formulao
antimicrobiana semi-slida fitoterpica, decidiu-se a quantidade de ativo, ou seja, da

tintura de V. guianensis, que iria ser incorporada a base gelificante. Duas propores
foram testadas: 5% e 10%, pode-se notar que visualmente o gel obtido na proporo
de 5% da tintura hidroalcolica apresentou uma aparncia mais fluida e menos
heterognea. Uma vez que desejvel a aparncia homognea, pois os pacientes
geralmente preferem formulaes tpicas que sejam fceis de serem transferidas de
recipiente, espalhadas prontamente e com suavidade; que no deixem resduos
detectveis e sejam aderentes rea tratada sem tornar-se pegajosa ou de difcil
remoo (BARRY, 2002).
Apesar de possuir uma aparncia bem mais aceitvel, o gel na proporo de
5% da tintura hidroalcolica ainda apresentou-se constitudo por partculas que no
incorporaram totalmente base gelificante, isso provavelmente devido presena
de inmeras substncias encontradas na espcie como clorofila, diferentes
metablitos secundrios como compostos fenlicos, acares, protenas, etc. A
presena de polifenis em produtos cosmticos e alimentcios pode induzir ao
turvamento e ao surgimento de precipitados, devido interao protena-polifenol,
produzindo a precipitao de protenas e influenciando na aparncia ou no sabor de
medicamentos, alimentos ou bebidas (SIEBERT et al. 1996). Os estudos de Luck e
colaboradores (1994) relataram que a presena de polissacardeos mudou o grau de
precipitao de protenas por polifenis, alterando os sabores dos alimentos .
Como o interesse pelos polifenis tem aumentado, devido a sua ao
benfica sobre o organismo, muitos estudos tm sido realizados a fim de intervir
nessa precipitao. Muitos autores tm optado pela utilizao de polissacardeos,
polmeros naturais como as xantanas, galactomananas e xiloglucanas na obteno
de formulaes com boas caractersticas de estabilidade (MURAMOTO et al. 1999;
VIANNA FILHO, 2009). Em soluo aquosa, as xiloglucanas de sementes formam
solues viscosas estveis a alteraes de pH e cisalhamento (NITTA et al. 2004).
As xiloglucanas formam gel na presena de grandes quantidades de etanol,
sacarose e da epigalocatequina galato que o polifenol mais abundante encontrado
nas folhas do ch verde (YAMANAKA et al. 2000). Portanto a interao polissardeopolifenol ajudaria no controle de qualidade dos produtos finais obtidos.
Outro fator colaborador dessa no total incorporao pode ser devido
constituio do produto intermedirio utilizado na veiculao dos componentes
149
ativos, a tintura hidroalcolica a 70 GL. A presena do lquido extrator pode ter
influenciado na estrutura polimrica do gel. Devido a isso que os extratos vegetais
secos por nebulizao tm sido utilizados como produtos finais e intermedirios na
obteno de diferentes formas farmacuticas (VASCONCELOS et al. 2005; SILVA
JNIOR et al. 2006b), as indstrias farmacuticas tambm vm optando por utilizar
somente esses extratos facilitando o seu escoamento e incorporao base semisolida.
A falta de homogeneidade poderia ser solucionada atravs da obteno de
uma formulao que se adque ao controle de qualidade; podendo ser testada
atravs da variao dos excipientes: modificando-se o polmero, ou modificando a
forma farmacutica, testando-se outras formas semi-slidas. Avaliando-se a
obteno de uma pomada, uma vez que existem relatos da comercializao das
razes de V. guianensis, a 1% na forma de pomadas de vaselina ou de manteiga de
Karit em Mali (frica) para tratamento de enfermidades tpicas (BILIA et al 2000).
Ou a obteno de um creme, pois o mesmo possui em sua constituio agentes
emulsificantes e capazes de lhe conferir estabilidade (PRISTA, 1990).
Aps a obteno da pr-formulao testes foram realizados para a
determinao de sua estabilidade. Iniciando-se pelos testes de avaliao preliminar
realizados em 24 h aps a incorporao da tintura base semi-slida. O primeiro
teste foi o de centrifugao, onde a fora da gravidade atuou sobre o produto
fazendo com que as partculas se movessem no seu interior. A centrifugao
promoveu estresse na amostra, simulando aumento na fora da gravidade,
aumentando a mobilidade das partculas e antecipando possveis sinais de
instabilidade, como precipitao, separao de fases, formao de sedimento
compacto e coalescncia (ANVISA, 2007). Aps a centrifugao o gel apresentou
sua cadeia polimrica intacta, somente visualizou-se a deposio de partculas no
incorporadas ao gel no fundo do tubo, que sedimentaram devido fora centrpeta.
A no ocorrncia de separao de fases no assegura sua estabilidade, somente
indica que o produto pode ser submetido, sem necessidade de reformulao, aos
demais testes de estabilidade (QUEIROZ, 2008).
Os restantes dos testes de estabilidade preliminar utilizados foram a
determinao dos valores de pH e a caracterizao macroscpica do gel atravs da
anlise direta de suas caractersticas organolpticas (aspecto, cor e odor).
Aparentemente as caractersticas organolpticas permaneceram as mesmas, apesar
150
do tempo passado e da elevao da temperatura, a cor apresentou-se amarelo
escura, aspecto lmpido sem turvao ou separao de fases e odor caracterstico
da tintura de lacre. Para os valores de pH os mesmos permaneceram em uma
mesma faixa sem muitas alteraes tanto para as amostras de referncia como para
as amostras que foram levadas a aquecimento (45 C 2 C), resultados que podem
ser visualizados na Figura 60 para o gel a 5% e na Figura 61 para o gel a 10% da
tintura, representando a manuteno do parmetro pH, uma vez que no houve
alterao maior que 0,5%, portanto as matrias-primas no esto sofrendo
degradao com o armazenamento e nem formando compostos de degradao
cidos ou bsicos.
A determinao do pH muito importante no estudo de estabilidade, pois
alteraes nesse valor podem ocorrer em funo de impurezas, hidrlise,
decomposio e erro no processo. Esta instabilidade pode ocorrer tambm devido
ao
tempo
de
estocagem
e/ou
condies
inadequadas
de
transporte
armazenamento (FERREIRA, 2000; ANSEL at al. 2000). O valor do pH das

formulaes permaneceu dentro da faixa limite de 4,6 a 5,8 compatveis com o pH
cutneo, devendo ser utilizado como critrio de estabilidade, contribuindo para que
ocorra proteo bactericida e fungicida em sua superfcie (LEONARDI, et al. 2002).
151
7. CONCLUSES
152
7. CONCLUSES
Com a realizao de nosso trabalho podemos concluir que a anlise

morfoanatmica do limbo foliar foi de extrema relevncia para a identificao da
espcie estudada no presente trabalho, a V. guianensis.
O processamento aps a obteno da espcie vegetal foi satisfatrio, uma
vez que ao se analisar os resultados obtidos atravs das caracterizaes fsicas,
qumicas e fsico-qumicas tanto do p das folhas quanto da tintura de V. guianensis,
os mesmos atingiram parmetros aceitveis segundo a literatura especfica para
plantas medicinais.
O perfil trmico e o perfil espectroscpico na regio do IV traados para a
matria-prima vegetal (em p) e seu derivado (o extrato liofilizado da tintura), foram
de relevncia para a caracterizao e controle de qualidade, servindo de parmetros
formulao fitoterpica.
Os resultados obtidos atravs da avaliao da atividade antimicrobiana
corroboraram a hiptese da ao antimicrobiana do extrato seco da tintura
hidroalcolica das folhas de V. guianensis, relatando sua eficcia sobre os
Staphylococcus aureus (ATCC 25923), e permitindo a continuidade do trabalho, uma
vez que nosso objetivo seria a obteno de uma formulao semi-slida fitoterpica
antimicrobiana.
A cromatografia lquida de alta eficincia alm de traar o perfil de
composio da tintura hidroalcolica de V. guianensis, tambm determinou o
mximo de absoro da frao acetato de etila. Comprimento de onda esse
semelhante ao da emodina, o padro externo utilizado na quantificao das
antraquinonas totais.
A validao do mtodo de quantificao realizado segundo a Resoluo
Especfica n 899 de maio de 2003, para o padro de referncia externo emodina
mostrou-se seletivo, linear, repetitivo e robusto para a frao acetato de etila
proveniente da tintura hidroalcolica das folhas de V. guianensis.
Os ensaios preliminares de avaliao dos excipientes da formulao e suas
misturas binrias com o extrato liofilizado da tintura de V. guianensis por
termogravimetria, anlise trmica diferencial, calorimetria exploratria diferencial e
espectroscopia na regio do IV, foram de suma importncia para identificar uma
153
possvel incompatibilidade dos adjuvantes farmacotcnicos utilizados na formulao,
uma vez que a termogravimetria evidenciou um abaulamento na curva da mistura
binria entre a hidroxietilcelulose e o extrato liofilizado evidenciando uma possvel
incompatibilidade gerada em elevadas temperaturas. A Calorimetria exploratria
diferencial evidenciou uma possvel incompatibilidade ou uma interao fsica entre
a mistura binria do extrato liofilizado da tintura com o propilenoglicol, devido
antecipao do ponto de fuso do umectante.
A formulao semi-slida fitoterpica atingiu parmetros aceitveis anlise
de estabilidade preliminar, permanecendo intacta ao teste de centrifugao, suas
caractersticas organolpticas permaneceram dentro do limiar prvio e sua variao
de pH foi tal que inferiu um limite de variao aceitvel dentro da faixa de
temperatura ao qual foi exposta.
A anlise da formulao antimicrobiana fitoterpica semi-slida evidenciou
que a base gelificante composta pelos respectivos adjuvantes: hidroxietilcelulose,
propilenoglicol e metilparabeno no foi adequada a incorporao da tintura de V.
guianensis uma vez que sua aparncia no era homognea, apresentando
partculas no incorporadas base semi-slida. Portanto at que se faa a anlise
trmica da formulao no recomendada a utilizao desses componentes.
Fazendo-se necessrio a elaborao de uma nova formulao, utilizando-se outros
veculos semi-slidos ou a obteno de novas formas semi-slidas a fim de se
melhor incorporar a tintura; apresentando-se uma formulao dentro de parmetros
de controle de qualidade aceitveis.
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8. REFERNCIAS
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medicamentos. ISSN 1810-0791 v. 3, n. 12 Braslia: nov. 2006.
Uso
racional
de

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PAR

INSTITUTO DE CINCIAS DA SADE

ESTUDOS DE PR-FORMULAO E FORMULAO DE

Sarah Regina Pereira Camelo

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ESTUDOS DE PR-FORMULAO E FORMULAO DE

Autora: Sarah Regina Pereira Camelo

Dados Internacionais de Catalogao-na-Publicao (CIP)

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PAR

ESTUDOS DE PR-FORMULAO E FORMULAO DE

Autora: Sarah Regina Pereira Camelo

concentrao: Frmacos e Medicamentos, do Instituto

de Cincias da Sade da Universidade Federal do Par

Trabalho defendido e aprovado em: 15/01/2010.

Deus por tudo o que Ele fez e faz em minha vida.

Ao meu co-orientador Prof. Dr. Flvio Vasconcelos, pelo direcionamento nesses

Prof. Dr. Janaina Gell, pela relevante colaborao cientfica durante a

Prof. Dr. Eliana Ozela por disponibilizar o laboratrio de Bromatologia para

Prof. Dr. Roseane Maria por disponibilizar o laboratrio de Controle de qualidade

Ao Prof. Dr. Jos Luiz Vieira e pela ateno, apoio e amizade.

Ao tcnico Jos Luiz do laboratrio de qumica pela liofilizao da tintura.

Ao estagirio do LCO Charles Negro pelas anlises trmicas e pela pacincia.

A todos os ex-integrantes, integrantes e agregados do Programa de Ps-Graduao

As meninas do Laboratrio de Fitoqumica Ndia e Mirth, pelo apoio durante todo o

As funcionrias do PPGCF, Braslia e Cliciane, pelo apoio.

Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES) pelo

A Universidade Federal do Par e ao Programa de Ps-Graduao em Cincias

Ao meu amigo Jaime Jr. pelo primeiro incentivo carreira de pesquisadora.

Pelo carinho, amizade e apoio permanentes do meu grande amigo Abner.

Enfim, a todas as pessoas que de alguma forma contriburam para a realizao

CAMELO, S. R. P. Estudos de pr-formulao e formulao de Vismia

A obteno e a avaliao da formulao fitoterpica foi traada atravs de

Palavras-chave: antraquinonas; controle de qualidade; fitoterpicos; formulao

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Figura 22- Curva DSC do extrato liofilizado da tintura de Vismia guianensis

Figura 23- Espectro na regio do infravermelho do extrato liofilizado da

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Figura 25- Curvas TG e DTA do padro externo emodina...............................

Figura 26- Curva DSC do padro externo emodina.........................................

Figura 27- Espectro na regio do infravermelho do padro externo emodina

Figura 28- Seletividade com varredura em espectrofotmetro de 240 a 400

Figura 29- Curva de linearidade do padro externo emodina entre as

normalmente distribudos e com homocedastidade........................