Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
ESTIMACIN DE INCERTIDUMBRE
Septiembre 2005
Proceso de validacin
Etapas :
Declaracin final
Conservacin de documentacin y registros
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 . Validacin
Demostracin y confirmacin mediante los correspondientes exmenes y obtencin de
evidencias que los requisitos particulares de un sistema para un uso especfico son
satisfechos ( ISO 8402 1994).
2 . Validacin de mtodos analticos
2.1 Proceso en el cual se establece mediante el desarrollo de estudios
sistemticos :
- que las caractersticas de un mtodo analtico ( en cuanto a desempeo y
limitaciones ) cumplen las especificaciones relativas al uso previsto de los
resultados analticos obtenidos
- la identificacin de influencias que pueden modificar las caractersticas del
mtodo y a que grado. (1)
2.2 Proceso de definicin de las necesidades analticas y la confirmacin de que
el mtodo ha considerado capacidades consistentes con las que la aplicacin
requiere. (1)
3 . Por qu es necesaria la validacin de un mtodo? (1)
3.1 Por la importancia de la mediciones analticas, prcticamente cada aspecto de
la sociedad est apoyada de algn modo por las mediciones analticas.
o comercio
o salud.
o Calidad del agua
o Caracterizacin de materiales... etc
Es importante determinar el resultado correcto y ser capaz de demostrar que lo es.
3.2 Por la confiabilidad del resultado obtenido de una prueba. El laboratorio y el
personal tienen una clara responsabilidad para justificar la confianza del solicitante
proporcionando la respuesta correcta en toda etapa analtica. Esto implica que las
pruebas deben ser las adecuadas para el tipo de muestra y el propsito con que
ser usados los resultados.
La validacin del mtodo permite demostrar que el mtodo es adecuado para su
propsito.
3.3 Asimismo para que un resultado analtico concuerde con el propsito
requerido debe ser lo suficientemente confiable para que cualquier decisin
basada en l pueda tomarse con confianza. As, el desempeo del mtodo debe
ser validado y la incertidumbre del resultado , a un nivel de confianza dado,
estimada.
Estrategias de validacin
Terminologa
Estadstica aplicada y su interpretacin
distorsionar la seal
contribuir a la seal del analito produciendo un aparente incremento
en su concentracin.
suprimir la seal del analito.
IUPAC
A partir de la seal del blanco ms diez veces su desviacin estndar
EPA
A partir de la determinacin de LDM , establecer una relacin entre el LDM
y LOQ de 3 a 10 .
4.5.4 Intervalo de trabajo e intervalo lineal
Intervalo de trabajo : Conjunto de valores del mensurando para los cuales el
error de una instrumento de medicin esta supuestamente comprendido dentro de
ciertos lmites (IUPAC Orange Book)
Intervalo de las concentraciones analticas sobre los cuales el mtodo va a ser
aplicado.
o
o
Intervalo lineal : dentro del intervalo de trabajo puede existir un intervalo donde la
seal de respuesta tendr una relacin lineal con la concentracin del analito.
Se establece durante la evaluacin del intervalo de trabajo mediante clculos de
regresin lineal , inspeccin visual adems de su confirmacin mediante revisiones
de linealidad empleando al menos 10 diferentes concentraciones.
Obtencin
Graficar la respuesta de la medida ( eje y) contra la concentracin del mensurando
( eje x) examinar e identificar el intervalo lineal aproximado y los lmites inferior y
superior. Calcular el coeficiente de regresin apropiado. Calcular y graficar valores
residuales ( diferencia entre el valor actual de y y el valor predicho por la lnea
recta para cada valor de x. La distribucin aleatoria confirma la linealidad,
tendencias sistemticas indican no-linealidad.
La relacin entre la respuesta del instrumento a la concentracin del analito no
tiene que ser perfectamente lineal para que un mtodo sea efectivo pero la curva
debe ser repetitiva. El intervalo de trabajo y el lineal puede no ser el mismo para
diferentes tipos de matrices de acuerdo con el efecto de las interferencias que
aparezcan de la matriz de la muestra.
4.5.5 Exactitud
Grado de concordancia entre el resultado de la medicin y el valor de referencia
aceptado. ( Gua para la expresin de la Incertidumbre de la medicin 1999
)(3)
Veracidad
[c u (x )] + c
uc ( y ) =
i =1
i, j =
c j u ( xi ) u (x j ) R (X i , X j )
Donde :
uc(y) : incertidumbre estndar combinada
u(xi) : incertidumbre estndar de la magnitud de influencia i
ci : coeficiente de sensibilidad de la magnitud de influencia i
_
R( X i X ) : coeficiente de correlacin
Coeficiente de sensibilidad ( ci ) : describen como la estimacin de la
magnitud de salida ( y ) vara con los cambios de las estimaciones de las
magnitudes de entrada ( xi )
Se obtiene mediante la siguiente expresin
ci =
f (Y )
X i
X 1 = x1 ,..., X N = x N
y Up Y y + Up
que tiene una alta probabilidad de cobertura especificada o nivel de
confianza p. Se debe determinar entonces kp que produce un intervalo
alrededor del resultado de la medicin ( y ) que se espera incluya una
fraccin suficientemente grande especificada p de la distribucin de valores
que pueden atribuirse razonablemente al mensurando Y.
Para obtener el valor del factor de cobertura kp se requiere del
conocimiento detallado de la distribucin de probabilidad que caracteriza al
resultado de la medicin y su incertidumbre estndar combinada.
Para calcular una incertidumbre expandida Up = kp uc (y) que proporcione
un intervalo con un nivel de confianza p, se utiliza un valor obtenido de una
distribucin normal para kp., en los casos que el tipo de distribucin
asignada a la magnitud de salida ( y ) sea una distribucin normal
En los otros casos, cuando la distribucin asignada a la magnitud de salida
no es la normal, se puede emplean una distribucin t, asumiendo que la
distribucin de probabilidad sigue una funcin t y determinando kp mediante
la expresin
kp = tp (eff)
donde eff es el nmero efectivo de grados de libertad obtenido a partir de la
frmula de Welch Sattwethwaite
ef
ui ( y )
uc ( y )
i =1
donde:
i : nmeros de grados de libertad para la magnitud i
ui(y) : incertidumbres estndar individuales
uc(y) : incertidumbre combinada
ef : nmeros efectivo de grados de libertad
4.5.8.8 Calcular la incertidumbre expandida
De manera rigurosa la incertidumbre expandida se calcula como
U(y) = k.uc(y) = tp.(ef).uc(y) = kp .uc(y)
Donde tp.(ef) es el factor derivado de la distribucin t de Student a un nivel
de confianza p ( aprox 95%) y ef los grados de libertad
4.5.9 Sensibilidad
Sensibilidad : el cambio en la respuesta de un instrumento de medicin dividido
por el correspondiente cambio del estmulo ( ej . cantidad del mensurando
presente).( VIM 1984 y IUPAC Orange Book)
La definicin se puede aplicar el instrumento de medicin o a todo el mtodo
analtico tomando en cuenta otros factores.
Es el gradiente de la respuesta de la curva, si la respuesta es lineal con respecto a
la concentracin puede ser un parmetro til y ser empleado en la cuantificacin
del analito.
4.5.10 Robustez
Robustez : es una medida de la capacidad de un procedimiento analtico de
permanecer inalterado por variaciones pequeas pero deliberadas en los
parmetros del mtodo y proporciona una indicacin de su confiabilidad durante su
uso normal. (ICH Q2A, CPMP/ICH/381/95)
Es una medida de la efectividad del mtodo analtico.
Deben identificarse aquellas etapas del mtodo donde los cambios implicarn
efectos severos en el desempeo analtico, y evaluar su influencia mediante el uso
de pruebas de robustez.
La pruebas de robustez involucran realizar variaciones deliberadas al mtodo y
estudiar el efecto en el desempeo, as es posible identificar a aquellas variables
cuyo efecto ser ms significativo y en base a ello controlarlas. Con consecuencia
mejorar el mtodo , si es posible, sobre aquellas partes que se conocen como
crticas.
Las pruebas de robustez se aplican normalmente para investigar su efecto en la
precisin y en la exactitud del mtodo.
4.5.11 Recuperacin
La fraccin de analito adicionada a una muestra de prueba fortificada previa al
anlisis , muestras fortificadas y sin fortificar , el porcentaje de recuperacin (%R)
se calcula de la siguiente manera :
% R = (( CF CU)/CA) x 100
Donde :
CF : concentracin de analito medida en la muestra fortificada
CU : concentracin de analito medida en la muestra sin fortificar
CA : concentracin de analito adicionada en la muestra fortificada
(fortificacin) (AOAC PVMC)
Es necesario asegurar la eficiencia del mtodo al determinar todo el analito
presente, puede existir fallas para dicha determinacin que sea consecuencia de
un problema inherente del mtodo.
Es difcil estar seguros que tan exitoso ha sido el mtodo al extraer el analito de la
matriz y una forma de determinar esta eficiencia es adicionar porciones de prueba
del analito a varias concentraciones, luego se extraen las porciones fortificadas y
se mide la concentracin del analito. Existen diferencias inherentes de
comportamiento qumico entre el analito adicionado y aquel que naturalmente se
encuentra en la muestra pudiendo obtenerse resultados irreales de eficiencia ,
pero es una tcnica aceptable y muy difundida de determinar la eficiencia
mencionada.
5. Utilizacin de mtodos validados
Si un mtodo , dentro del laboratorio, por otro laboratorio o es un mtodo de referencia, se
encuentra validado en condiciones de operacin extremas un nuevo analista competente
operar satisfactoriamente dentro de los datos de desempeo existentes, sin embargo
debera verificarse dicho nivel de desempeo
Se asume que los mtodos de referencia pueden usarse sin previa realizacin de pruebas
para obtener datos de desempeo , est afirmacin no es segura.
Reglas recomendadas al usar mtodos validados
5.1 El analista debe estar completamente familiarizado con el mtodo y con la base
cientfica del mismo antes de usarlo por primera vez, y trabajar en principio bajo
supervisin.
5.2 El analista de alcanzar los niveles de desempeo establecidos por el mtodo.
5.2 Optimizar el nmero de muestras que puede ser analizadas a un tiempo
determinado.
5.4 Asegurar que se cuenta con todos los elementos establecidos en el mtodo y
bajo sus especificaciones para su ptimo desarrollo antes de iniciar el trabajo. Esto
involucra equipos, materiales de referencia , reactivos, instalaciones, infraestructura,
condiciones ambientales etc bajo especificacin y debidamente controlados.
5.5 Si es necesario adaptar el mtodo o realizar algn cambio el proceso de
revalidacin ser necesario.
6. Utilizacin de datos de validacin para designar el control de calidad
6.1 Aseguramiento de la calidad : mediciones prcticas realizadas para segurar y
regular la calidad
6.2 Control de calidad : tcnicas operacionales y actividades que son usadas para
satisfacer los requisitos de calidad. Mediciones individuales que se relacionan
al monitoreo y control de operaciones particulares.
Relacin entre validacin y aseguramiento y control de calidad :
La validacin de un mtodo da una idea de las capacidades de desempeo
y las limitaciones del mtodo que son experimentadas al emplearse
rutinariamente cuando el mtodo se encuentra en control. En el uso
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
Ttulo
Alcance
Precauciones de advertencia y seguridad
Definiciones
Principio
Reactivos y Materiales
Aparatos y equipos
Muestreo y muestras
Calibracin
Control de calidad
Procedimiento
Clculos
Reporte de procedimientos incluyendo la expresin de resultados
14
15
16
Referencias normativas
Apndice en validacin del mtodo
Apndice en incertidumbre de la medicin
Los mtodos documentados forman una parte importante del sistema de calidad
de un laboratorio y deben ser objeto de un grado de control de documentacin
apropiado. El propsito de esto es asegurar que slo los mtodos y
procedimientos que han sido autorizados como convenientes para su uso son de
hecho utilizados.
Los mtodos deben ser actualizados con el tiempo. El control de la documentacin
permite el retiro de los mtodos obsoletos y la edicin de mtodos revisados. Los
cambios pueden realizarse con la correspondiente autorizacin y esto debe ser
debidamente controlado.
Cartas de control
Los grficos de control constituyen la forma ms cmoda y verstil de llevar a cabo el
control de calidad interno en los laboratorios. El origen de estos grficos hay que situarlo
en los aos 30, cuando el Dr. Shewhart los dise a partir de ah se fueron incorporando
en numerosos mbitos productivos as como en laboratorios de diferente tipo.
Un grafico de control representa los valores de una muestra de control introducida en
anlisis de rutina con una frecuencia preestablecida para evidenciar deficiencias en el
proceso analtico de medida e imponer las acciones correctivas pertinentes tan pronto
comosea posible ( Seminario sobre Trazabilidad, Incertidumbre y Validacin, Dr. Angel
Ros Castro Universidad de Crdoba (Espaa))
Grficos de Shewhart
Utilizados con distintas finalidades
_
Parmetro medido
12
10
8
6
Serie1
Serie2
Serie3
0
-2 0
20
40
60
80
100
Serie4
-4
-6
-8
Grficos de blancos
Permiten el control de los blancos reactivo, es decir de las condiciones de trabajo,
los reactivos y sistema de medida empleados en el proceso analtico. Se emplean n
valores independientes e individuales del blanco por cada serie de anlisis , los lmites se
establecen a partir de la desviacin estndar de la media
smedia = s / n
y los lmites siguen los mismos principios de los grficos de valor central.
Grficos de porcentajes de recuperacin
Detectan variaciones debida a la matriz de las muestras cuando estos errores son
proporcionales puesto que si son aditivos no son detectados.
Se emplean muestras fortificadas y se realiza el clculo de porcentaje de recuperacin
(%R)
%R = (( x fortificada x )/ f ) * 100
donde f : es el valor de fortificacin empleada, que debe ser aadida sin exceder el lmite
superior de determinacin del analito.
La sustancia aadida debe contener al analito
- y tener solubilidad parecida
- reaccionar en forma similar
- estar en las mismas condiciones de estado de oxidacin
que en la muestra
el volumen aadido debe ser mnimo y realizar los clculos de correccin
correspondientes.
120,0000
115,0000
110,0000
105,0000
Serie1
100,0000
Serie2
95,0000
Serie4
Serie3
90,0000
85,0000
80,0000
0
10
20
30
40
50
Grficos de recorrido
Son grficos de control para evaluar precisin. Se trabaja con el rango o recorrido que se
define como la diferencia entre el mximo y el mnimo valor de las rplicas realizadas.
Para la construccin de este tipo de grficos se debe tener la siguiente informacin:
-
= DWup *
= DWlow*
R
_
0,0035
0,0030
0,0025
0,0020
0,0015
0,0010
0,0005
0,0000
-0,0005
10
20
30
40
50
-0,0010
Bibliografa
El presente documento se encuentra basado en la informacin extraida de los siguientes
documentos
(1)
The Fitness for Purpose of Analytical Methods: A Laboratory Guide to
Method Validation and Related Topics - EURACHEM Guide 1998
( en los temas de validacin)
(2)
Seminario sobre Trazabilidad, Incertidumbre y Validacin Su aplicacin a
Laboratorios de Ensayos Qumicos Dr Angel Ros Castro Universidad de
Cordoba ( Espaa)
( en los temas de cartas de control )
(3)
Gua para la Expresin de la Incertidumbre en la Medicin
BIPM, IEC, IFCC, ISO, IUPAC, IUPAP, OIML 1999
( en los temas de estimacin de la incertidumbre de la medicin )
adems de ser , cada uno de ellos, valioso material para el desarrollo de cada
tema involucrado en este texto.
Y como material bibliogrfico de consulta adicional, el siguiente:
(4)
Guide Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement
EURACHEM Guide 2000
(5)
Guidelines for Evaluating and Expressing the Uncertainty of NIST
Measurement Result Taylor, B ; Kuyatt, C 1994.