UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA

PRACTICAS DE LABORATORIO

MICROSCOPIA
Maye Bernal Rivera

El MICROSCOPIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Historia
Componentes
Uso
Cuidado
Mantenimiento y Precauciones
Utilidad para el mdico

HISTORIA
La palabra microscopio viene del griego mikro,
pequeo y skop, visin. Los microscopios son
instrumentos que nos permiten observar objetos
pequesimos que no se pueden ver a simple
vista, ni con la ayuda de una lupa. La palabra
microscopio fue utilizada por primera vez por los
componentes de la "Academia dei Lincei", una
sociedad cientfica a la que perteneca Galileo y
que publicaron un trabajo sobre la observacin
microscpica del aspecto de una abeja.
El primer microscopio fue inventado, por una
casualidad en experimentos con lentes segn los
Italianos hacia 1610 por Galileo y segn los
holandeses por Zacharas Janssen (1580-1638)
quien invent un microscopio con una especie de
tubo con lentes en sus extremos, de 8 cm. de
largo soportado por tres delfines de bronce; pero
se obtena imgenes borrosas a causa de las
lentes de mala calidad. Estos primeros
microscopios aumentaban la imagen 200
veces. Sin embargo las primeras publicaciones
importantes en el campo de la microscopia
aparecen en 1660 y 1665 cuando Malpighi
prueba la teora de Harvey sobre la circulacin
sangunea al observar al microscopio los

Microscopio desarrollado por Anthony van

Leeuwenhoeks

capilares sanguneos y, el ingls Robert

Hooke (1635-1701)
publica su obra
Micrographia,
con
dibujos
de
sus
observaciones. Sus aparatos usaban lentes
relativamente grandes. A mediados del siglo
XVII
un
comerciante
holands,
Leenwenhoek,
utilizando
microscopios
simples de fabricacin propia describi por
primera
vez
protozoos,
bacterias,
espermatozoides y glbulos rojos. Durante
este siglo muchos estudiosos de las lentes y
los microscopios hicieron toda clase de
pruebas y ensayos para lograr un resultado
de mayor precisin. Entre los intentos fue el
del italiano Marcello Malpighi (1628-1694)
que en 1660 logr ver los vasos capilares de
un ala de murcilago. El holands Antonie
van Leeuwenhoek (1632-1723), perfeccion
el microscopio usando lentes pequeas,
potentes, de calidad y, su artefacto era de

menor tamao. Alrededor del 1676

logr observar la cantidad de
microorganismos que contena el
agua estancada. Tambin descubri
los espermatozoides del semen
humano y ms adelante, en 1683, las
bacterias. Durante el siglo XVIII el
microscopio sufri diversos adelantos
mecnicos que aumentaron su
estabilidad y su facilidad de uso
aunque no se desarrollaron mejoras
pticas. Las mejoras mas importantes
de la ptica surgieron en 1877 cuando
Abbe
publica
su
teora
del
microscopio y por encargo de Carl
Zeiss
mejora la microscopa de
inmersin sustituyendo el agua por
aceite de cedro lo que permite obtener
aumentos de 2.000. A principios de

Microscopio binocular de ptica avanzada. Siglo IX

los aos 30 se haba alcanzado el limite terico para los microscopios pticos no
consiguiendo estos, aumentos superiores a 500X o 1000X sin embargo exista un
deseo cientfico de observar los detalles de estructuras celulares (ncleo,
mitocondria, etc.). Los microscopios pticos actuales permiten agrandar la imagen
ms de 2.000 veces.
Pero recin en el Siglo XX lleg el gran cambio, el microscopio electrnico de
transmisin (T.E.M.) fue el primer tipo de microscopio electrnico desarrollado; este
utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo
aumentos de 100.000X. Fue desarrollada por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania
en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de barrido
(SEM). Estos microscopios podan ampliar las imgenes hasta 7.000 veces. Se
continu perfeccionando hasta llegar a aumentar unos 2 millones de veces. Y en la
actualidad los Microscopios Electrnicos de efecto tnel, amplan la imagen hasta
10 millones de veces.

PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO

oculares

revlver

objetivos
platina

cabezal

brazo
Desplazamiento
platina
condensador
macromtrico

foco

micromtrico

base

Sistema ptico
-

OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del
objetivo.

OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta.

CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin.

DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema mecnico
-

SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.

PLATINA: Lugar donde se coloca la preparacin.

CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular o

binocular

REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar

los objetivos.

TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y

Micromtrico que consigue el enfoque correcto

MANEJO DEL MICROSCOPIO PTICO

Observacin de preparaciones en fresco
1. Bajar la platina hasta el tope
2. Colocar el objetivo de menor aumento (4x) en posicin de observacin
3. Colocar la preparacin sobre la platina
4. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo
macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular,
ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose
daar alguno de ellos o ambos
5. Mirar a travs de los oculares y lentamente, ir separando el objetivo de la
preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntido la muestra,
girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.
6. Pasar al objetivo 10x La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al
cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a
enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 4.
7. Pasar al objetivo de 40x el cual enfoca a muy poca distancia de la preparacin y
por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin

si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersin

si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin.
Observacin de preparaciones con objetivo de inmersin
1. Bajar al tope la platina.
2. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos
indica la zona que se va a visualizar y donde habr que colocarse la gota de
aceite.
3. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre
ste y el de x40.
4. Dejar caer una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz, sin
permitir que el gotero toque la preparacin
5. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de 100X.
6. Mirar directamente al objetivo y lentamente subir la platina hasta que la lente
toque la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se
adosara a la lente.
7. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el
objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x
por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
8. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se
puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite.
Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la
operacin desde el paso 3.
9. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca
el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede
retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de
inmersin en posicin de observacin.
10. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para
ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.

CUIDADO
En la observacin
1. Colocar el microscopio en una mesa fija, de modo tal que pueda sentarse con
comodidad para ver el ocular sin apoyarse.

2. No bajar la lente mientras se est mirando por el microscopio. Puede golpear

el portaobjeto y romperlo o romper la lente.
3. El objeto a observar debe estar muy bien iluminado. Si los objetos son opacos
deben ser iluminados desde arriba para poder verlos en detalle.
4. Colocar el portaobjeto sobre la platina de manera tal que la parte que se
quiera observar se encuentre bajo la lente.
5. Fijar siempre el portaobjeto con los broches
Al finalizar el trabajo
1.
2.
3.
4.
5.

Bajar la preparacin
Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de observacin
Limpiar con papel suave secante la platina
Limpiar los objetivos con papel ptico
Bajar la intensidad de luz de la lmpara

6. Apagar el microscopio y desenchufarlo

7. Dejar enfriar el bombillo, antes de transportarlo a la Sala de Microscopios
8. Colocar una mano en la base y la otra en el brazo o columna y desplazarlo en
posicin erguida. No inclinarlo ya que se pueden caer los oculares.
9. Cubrir el microscopio con la funda y colocarlo en su estuche correspondiente

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico,
micromtrico, platina, revlver y condensador).
2. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la
mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra.
3. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo
mientras se est observando a travs del ocular.
4. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella
algn lquido, secarlo con un papel suave absorbente.
5. No dejar los preparados sobre la platina, y menos an si el microscopio est
encendido. Tanto en la lupa como en el microscopio ptico se destruir
6. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo
con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o etanol-ter (9:1). NUNCA utilizar
xilol para limpiar las lentes.
7. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin
prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico el ajuste y revisin
general de los mismos.
8. No extraer las lentes ni tocarlas con los dedos.
9. Apagar mientras no se est utilizando

PRACTICA DE LABORATORIO
OBJETIVOS
-

Utilizar el Microscopio de luz corriente como instrumento ptico para visualizar en

preparaciones previamente coloreadas, estructuras de diferentes grados de
complejidad biolgica que, por su tamao, no son observables con el ojo
desnudo.
Identificar el microscopio de luz, definir sus partes y especificar la funcin que
cumple cada una.
Describir los principios pticos y no pticos que rigen el poder amplificador del
microscopio y definir sus lmites de amplificacin.
Enfocar una preparacin en fresco con los objetivos de pequeo aumento (10X)
y mediano aumento (40X).
Enfocar una preparacin coloreada con los objetivos de pequeo (10X), mediano
(40X) y gran aumento (100X).
Enfocar la misma preparacin con el objetivo panormico (4x)
Verificar y calcular la ampliacin de un objeto de dimensin dado, de acuerdo al
objetivo y ocular usados.

MATERIALES
- Microscopio de luz
- Papel Arroz
- Aceite de inmersin
- Solucin limpiadora de lentes (Etanol-ter 9:1)
- Lminas y laminillas
- Muestra en fresco y gotero
- Lminas coloreadas
PROCEDIMIENTO
CONOCIMIENTO DEL MICROSCOPIO
- Ubicar en su microscopio cada una de las partes (ptica y mecnica).
- Determinar la funcin de cada una de estas partes. (Figura 1).
MANEJO DEL MICROSCOPIO
Enfoque de preparaciones en fresco en 10X
- Colocar sobre un porta objetos una gota de la preparacin en fresco y cubrir
con una laminilla
- Conectar el microscopio
- Prender la fuente de luz
- Revisar que las siguientes partes del microscopio estn en posicin:
- La platina en su tope inferior
- Objetivo 10X abajo
- El carro de transporte centrado
- El condensador en su tope inferior
- El diagrama casi cerrado
- Observar que el campo del microscopio se encuentre uniformemente iluminado.

Colocar la preparacin en fresco, sobre la platina del microscopio.

Sujetar la lmina con la palanca del carro de transporte.
Centrar la preparacin sobre la fuente de luz en la apertura circular de la platina.
Mirar la platina por el lado y mover el botn de ajuste, subir, hasta llegar al tope.
La distancia que queda del objetivo 10X es de aproximadamente 0.5 cm.
Mirar ahora por el ocular y bajar suavemente la platina hasta lograr captar la
imagen del objeto en observacin.
Hacer el ajuste de las lentes oculares a su distancia interpupilar desplazando los
tubos porta-oculares con ambas manos hasta que en el campo microscpico
aparezca solamente una imagen.
Ajustar la nitidez de la imagen moviendo lentamente el tornillo micromtrico de
ajuste.
NOTA: En algunos microscopios antiguos se mueve el tubo del ocular hasta
colocar el objetivo a esta distancia de la platina.
Obtener el contraste ptimo de la imagen regulando:

La intensidad de la lmpara
La posicin del condensador y la apertura del diafragma.
Podemos afirmar que a menos luz, mayor contraste de tal modo que este se
obtiene bsicamente cerrado el diafragma y colocando el condensador en su
tope inferior. Con el diafragma podemos graduar la magnitud del cono de luz que
sale del condensador, aumentando la profundidad de foco de la imagen.

Dibujar los hallazgos

Enfoque con el objetivo 40X

-

Sealar con una flecha en el esquema que acaba de realizar, la clula, o la

estructura que desea estudiar con el objetivo 40X
Centrar sobre la parte iluminada de la platina la clula o estructura sealada.
Este paso es muy importante pues de no quedar centrado podra salirse del
campo microscpico ya que al cambiar el objetivo 10X a 40X el campo queda
reducido en la misma proporcin.
Sin mover la posicin de la platina, girar el revolver hasta colocar el objetivo 40X
en posicin.
Abrir un poco el diafragma
Subir a la mitad el condensador
La imagen aparecer en el microscopio con aspecto borroso.
Ajustar la nitidez de la imagen moviendo lentamente el tornillo micromtrico de
ajuste.
Dibujar los hallazgos.
Bajar la lmina de la platina y descartarla en el recipiente de descarte que
contiene hipoclorito

Enfoque con el objetivo 100X.

-

Revisar que las siguientes partes del microscopio estn en posicin:

La platina en su tope inferior
Objetivo 10X abajo
El carro de transporte centrado
El condensador en su tope inferior
El diagrama casi cerrado

Observar que el campo del microscopio se encuentre uniformemente iluminado.

Colocar la lmina coloreada sobre la platina
Enfocar en 10X
Por la parte posterior dejar caer sobre la preparacin una gota de aceite de
inmersin, teniendo el cuidado de no tocar la lmina.
Sin mover la posicin de la platina, girar el revolver hasta dejar el objetivo 100X
en su tope
Subir el condensador
Abrir completamente el diafragma
Bajar el objetivo de 100X hasta que quede en contacto con el aceite.
NOTA: El aceite de inmersin tiene el mismo ndice de refraccin del vidrio
(1.5) e impide la refraccin de los rayos de luz que salen de la preparacin antes
de entrar al objetivo. Al no utilizar el aceite y dejar la capa de aire que tienen un
ndice de refraccin 1, parte de los rayos luminosos no penetran al objetivo que
por su alta curvatura tiene un dimetro muy pequeo y la imagen aparece
borrosa.
Mirar ahora por el ocular y observar la imagen de nuevo en el campo.
Obtener la nitidez de la imagen con el tormillo micromtrico.
Dibujar los hallazgos.
Bajar la lmina y limpiarla suavemente con papel de arroz
Colocar la lmina en la bandeja destinada para ello.

Devolucin del microscopio

Antes de abandonar su mesa de trabajo limpiar perfectamente su microscopio como
se indica a continuacin:
-

Apagar el microscopio
Colocar la platina en su tope inferior
Colocar el objetivo 10X en posicin.
Con el papel arroz limpiar la parte ptica del microscopio empezando por los
objetivos 10X y 40X:
Retirar ahora el aceite del objetivo 100X.
Nota: Al no retirar el aceite, este se seca sobre la lente objetivo
formando una capa espesa que interfiere con la funcin de la lente.
Limpiar la platina completamente y centrar el carro de transporte
Dejar enfriar completamente la lmpara, antes de transportarlo a la sala de
Microscopios y revisar todas las partes, antes de entregarlo al responsable.