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A N A L I T I C O S
M E T O D O S
E N
O F I C I A L E S
A L I M E N T A R I A
D E
A N A L I S I S
Leche
y productos
lcteos
A N A L I T I C O S
E N
A L I M E N T A R I A
M
Los ttulos de las 6 monografas son:
Aceites y grasas
Aguas potables
de consumo pblico
y aguas de bebida envasadas
Carne y productos crnicos
Cereales, derivados de cereales
y cerveza
Leche y productos lcteos
Productos derivados de la uva,
aguardientes y sidras
Obviamente esta edicin ha sido actualizada con las
disposiciones publicadas hasta el momento, que
establecen nuevos procedimientos o que modifican
notablemente caractersticas anteriormente establecidas.
Por ltimo, comentarles que estn a su disposicin
adems de esta coleccin, nuestros:
Catlogo General de Reactivos PANREAC
Catlogo ADITIO de Aditivos Alimentarios
Catlogo CULTIMED de Medios de Cultivo Deshidratados
Catlogo PANREAC-TLC de Placas, Folios y
Accesorios para Cromatografa en Capa Fina.
I N D I C E
8
14
16
18
19
20
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22
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27
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28
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31
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35
36
37
37
37
38
38
40
40
42
M
23a- Determinacin de leche de vaca en
leche de oveja o de cabra (por
electroforesis) ......................................
23b- Determinacin de leche de vaca
en leche de oveja o de cabra (mtodo
inmunolgico) ......................................
24a- Determinacin de leche de cabra
en leche de oveja (por electroforesis)....
24b- Determinacin de leche de cabra
en leche de oveja (mtodo
inmunolgico) ......................................
25- Determinacin de suero de quesera
en leche mediante anlisis de los
glicomacropptidos por cromatografa
lquida de alta eficacia..........................
543
6745
47
48
48
12345678-
53
54
55
56
58
61
63
64
66
Mantequilla
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 21-71977, 22-7-1977, 30-8-1979, 30-10-91)
01234-
8910-
74
76
78
80
80
84
Queso
I. ORDEN DE 29 DE NOVIEMBRE DE 1985
POR LA QUE SE APRUEBAN LAS NORMAS
DE CALIDAD PARA QUESOS Y QUESOS
FUNDIDOS DESTINADOS AL MERCADO
INTERIOR. (B.O.E. 6-12-1985)................ 86
II. METODOS DE ANALISIS (B.O.E.
30-8-1979 Y 30-10-1991)
012345678-
9-
91
92
93
95
97
98
105
108
109
Yogur
I. ORDEN DE 1 DE JULIO DE 1987 POR
LA QUE SE APRUEBA LA NORMA DE
CALIDAD PARA EL YOGUR O YOGHOURT
DESTINADO AL MERCADO INTERIOR.
(B.O.E. 3-7-1987)....................................... 111
II. METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 3-7-1987).
1-
70
71
71
72
72
2-
3-
4-
5-
6-
Determinacin de la materia seca (Mtodo por secado). Norma Chimie Ministerio de Agricultura francs XIV-2 ............ 115
Identificacin de colorantes, edulcorantes,espesantes y conservadores .......... 116
Mtodos seleccionados y recomendados por el Centro Nacional de
Alimentacin y Nutricin.
Analisis microbiolgico. Mtodos
seleccionados y recomendados por el
Centro Nacional de Alimentacin y
Nutricin .............................................. 116
Fenolftalena (Mtodo cualitativo)
(B.O.E. 30-8-1979 apartado 15(b)) ....... 116
Cuajada
ORDEN DE 14 DE JUNIO DE 1983 POR
LA QUE SE APRUEBA LA NORMA DE
CALIDAD PARA LA CUAJADA EN EL
MERCADO INTERIOR. ............................... 118
Nata
ORDEN DE 12 DE JULIO DE 1983 POR
LA QUE SE APRUEBAN LAS NORMAS
DE CALIDAD PARA LA NATA Y NATA
EN POLVO CON DESTINO AL MERCADO
INTERIOR. ..................................................... 121
Relacin de reactivos
y productos auxiliares
que se utilizan en los
mtodos analticos,
Leche y Productos
Lcteos ........................................... 127
Aditivos y coadyuvantes tecnolgicos para
uso alimentario
industrial .................................... 131
Figura 1
Agitador de lquidos para bidones y cubos
Figura 2
Agitador de lquidos adecuado para cisternas de camiones,
granjas y trenes
Una barra de no menos de dos metros de longitud, con un disco de 300 mm de dimetro, perforado con doce agujeros de 30 mm de dimetro
cada uno siguiendo una circunferencia de 230
mm de dimetro.
Para homogeneizar el contenido de recipientes
grandes, es recomendable la agitacin elctrica o
mecnica o mediante aire comprimido limpio. Se
utilizar un mnimo de presin y de volumen de
aire para evitar la formacin de malos olores.
Siempre que en este mtodo se requiera "aire
comprimido limpio", es necesario utilizar aire comprimido exento de contaminantes (incluyendo
aceite, agua y polvo).
M
0(a).4.3. Agitador.- De hoja ancha, de suficiente profundidad para alcanzar el fondo del recipiente del producto y que tenga preferentemente
un borde adaptado al contorno del recipiente (ver
figura 3).
Figura 3
Agitador adecuado para homogeneizar leche condensada en
barriles.
Figura 4
Cazo adecuado para lquidos
10
7
20 veces el nmero de toneladas de que
conste la partida, limitado a un mximo
de 40 tomas elementales.
4
Del nmero de envases que compongan
la partida, limitado a un mximo de 20
envases.
3
6
12
12+3 ms por cada fraccin de 2.500
envases (que exceda de 10.000).
Cuando la cifra obtenida sea un nmero fraccionario, se redondear ste hasta el nmero entero
inmediatamente superior.
M
evitar cualquier modificacin de la composicin de
los ejemplares de la muestra, contaminacin o
alteracin que pueda sobrevenir en el transcurso
de la toma, del transporte o del almacenamiento.
0(a).7.3.1. Productos a granel o envasados
para venta al por mayor superiores a 1 kilogramo.Mezclar con cuidado cada muestra global para
obtener una muestra homognea. Si es necesario, reducir la muestra global hasta dos kilos
(muestra reducida).
Preparar a continuacin tres ejemplares de la
muestra final que tengan la misma masa o el
mismo volumen, aproximadamente. Introducir
cada ejemplar en un recipiente apropiado.
0(a).7.3.2. Productos envasados para la venta
al detalle: La muestra final estar formada por la
totalidad de las tomas elementales, las cuales se
repartirn en tres bloques iguales, cada uno de los
cuales constituir un ejemplar de la muestra final.
0(a).7.4. Acondicionamiento de las muestras
para anlisis.- Etiquetar y precintar o sellar los
recipientes o los envases que las contenga (la etiqueta debe estar incorporada en el sello o precinto) de manera que le sea imposible abrirlos sin
deteriorar el precinto o sello, manteniendo la temperatura adecuada en cada caso.
0(a).8. Personal autorizado.
Las tomas de muestras destinadas a controles
oficiales se llevarn a cabo por personal autorizado y acreditado por los Organismos competentes.
0(a).9. Acta de la toma de muestra.
Cada muestra deber estar identificada por un
acta que permita determinar sin ambigedad la
partida controlada.
sea superior a 100 toneladas, se fraccionar, tericamente y a efectos de muestreo, en tantas partidas de hasta 100 toneladas como sea necesario.
Toma elemental: Cantidad tomada en un punto
de la partida.
Muestra global: Conjunto constituido por las
tomas elementales efectuadas en la misma partida, homogeneizada o no segn se indica ms
adelante.
Muestra reducida: Parte representativa de la
muestra global obtenida por reduccin de sta.
Muestra final: Parte de la muestra reducida o de
la muestra global, previamente homogeneizada.
0(b).4. Material y aparatos.
0(b).4.1. Condiciones generales.- Los aparatos
y utensilios destinados a la toma de muestras de
leche en polvo debern ser de acero inoxidable u
otro material idneo, no absorbente, de resistencia
adecuada, que no provoque alteracin alguna que
pudiera afectar a los resultados de los anlisis.
El equipo ser de construccin lo suficientemente fuerte para evitar que se deforme durante
su utilizacin. Todas las superficies debern estar
pulidas y exentas de grietas y todos los ngulos
debern ser redondeados.
0(b).4.2. Sondas: Larga (tipo A) y corta (tipo B)
(ver figura 1).- Las dimensiones de las sondas, ya
sean de hendidura larga o dividida en compartimentos, corta o de cualquier otro tipo, debern
adaptarse a las caractersticas de la partida (profundidad del recipiente, dimensiones del saco,
etc.) y al tamao de las partculas que componga
la leche en polvo.
11
800
1a2
12
Tipo B
corta
400
1a2
Figura 2
Dimensiones aproximadas en mm
Figura 3
Dimensiones aproximadas en cm
M
te la toma de muestras para el anlisis. El recipiente se volver a cerrar perfectamente despus
de realizar la toma de muestras.
0(b).5.2. Toma de muestras.- Se tomar una
muestra no inferior a 200 gramos.
Se pasar la sonda limpia y seca a travs del
producto; en caso necesario inclinado o poniendo
de lado el recipiente. Se orientar la ranura hacia
abajo y se adoptar un ritmo uniforme de penetracin. Cuando la sonda alcance el fondo del
recipiente se har girar 180 grados, se extraer y
se descargar el contenido en el recipiente de la
muestra. Se efectuar una o varias tomas para
obtener una muestra no inferior a 200 gramos. El
recipiente de la muestra se cerrar inmediatamente despus de tomar la misma.
En caso de productos envasados en recipientes pequeos para la venta al por menor, la muestra estar constituida por el recipiente intacto y sin
12
Cuando la cifra obtenida sea un nmero fraccionario, se redondear ste hasta el nmero entero inmediatamente superior.
13
1(a).1. Principio.
Este mtodo es aplicable a las leches naturales, certificada, higienizada y esterilizada, enteras
o parcialmente desnatadas, definidas en el Reglamento de Centrales Lecheras y otras Industrias
Lcteas.
Se entiende por contenido en materia grasa de
las leches natural, certificada, higienizada y esterilizada, el porcentaje en masa de las sustancias
determinadas por el procedimiento expuesto a
continuacin, que corresponde al descrito en la
norma FIL-1A: 1969 de la Federacin Internacional de Lechera.
El contenido en materia grasa se determina
gravimtricamente, por extraccin de la citada
materia grasa de una solucin alcohlico-amoniacal del tipo de leche de que se trate, mediante
ter tilico y ter de petrleo, evaporacin de los
disolventes y pesado del residuo, segn el principio del mtodo de Rse-Gottlieb.
14
1(a). GRASA
(Leches natural, certificada,
higienizada y esterilizada)
M
pura para anlisis y no dejar en la evaporacin
mayor cantidad de residuos que la autorizada
para el ensayo en blanco (1(a).4.2.). En caso
necesario, los reactivos podrn destilarse de
nuevo en presencia de 1 g aproximadamente de
mantequilla deshidratada por 100 ml de disolvente. El agua que se utilice deber ser destilada o,
por lo menos, de igual pureza que el agua destilada.
131074
131129
131270
131085
132770
Agua PA-ACS
Amonaco 25% (en NH3) PA
Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO
Etanol 96% v/v PA
Eter Dietlico estabilizado con ~ 6
ppm de BHT PA-ACS
131315 Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO
131542 Potasio Yoduro PA-ISO
1(a).4. Procedimiento.
1(a).4.1. Preparacin de la muestra.- Poner la
muestra a una temperatura de 20C. Mezclarla
cuidadosamente hasta obtener una distribucin
homognea de la materia grasa. No agitar muy
enrgicamente para evitar la formacin de espuma en la leche o el batido de la materia grasa.
Si resulta dificultoso dispersar la capa de nata,
calentar lentamente hasta 35-40C, mezclando cuidadosamente y teniendo la precaucin de reincorporar a la muestra la nata que pudiera haberse
adherido a las paredes del recipiente. Enfriar rpidamente la muestra hasta la temperatura ambiente. Si
se desea se puede utilizar un homogeneizador
apropiado para facilitar la dispersin de la grasa.
Si se separa la materia grasa lquida o se
observa la presencia de partculas blancas de
forma irregular adheridas a las paredes del recipiente que contiene la muestra, el anlisis no dar
los resultados correctos.
1(a).4.2. Ensayo en blanco.- Al mismo tiempo
que se determina el contenido en materia grasa
de la muestra, efectuar un ensayo en blanco con
10 ml de Agua PA-ACS en lugar de la muestra,
empleando el mismo tipo de aparato de extraccin, los mismos reactivos en las mismas cantidades y siguiendo el mismo procedimiento que se
describe a continuacin. Si el resultado del ensayo en blanco excede de 0,5 mg, habr que comprobar los reactivos, y aqul o aqullos que resulten impuros debern sustituirse o purificarse.
1(a).4.3. Determinacin.- Secar el matraz (si se
desea con algn material 1(a).2.5., que facilite una
ebullicin moderada durante la subsiguiente eliminacin de los disolventes) en la estufa durante un
intervalo de media a una hora. Dejar que se enfre
el matraz hasta la temperatura ambiente de la
balanza y, una vez enfriado, pesarlo con una aproximacin de 0,1 mg.
Invertir tres o cuatro veces el recipiente que
contiene la muestra preparada y pesar inmediatamente en el aparato de extraccin, directamente o
por diferencia de 10 a 11 g de la muestra bien
mezclada, con una aproximacin de 1 mg. Aadir
1,5 ml de la solucin de Amonaco 25% (en NH 3)
PA, o un volumen equivalente de una solucin
ms concentrada, y mezclar convenientemente.
Aadir 10 ml de Etanol 96% v/v PA y mezclar suavemente, pero de modo homogneo, manteniendo abierto el aparato de extraccin. Aadir 25 ml
de Eter Dietlico estabilizado con ~ 6 ppm de BHT
PA-ACS, cerrar el aparato y agitarlo vigorosamente, invirtindolo varias veces, durante 1 minuto. Si
es necesario, enfriar el aparato con agua corriente. Quitar el tapn cuidadosamente y aadir 25 ml
de Eter de Petrleo, utilizando los primeros ml
para enjuagar el tapn y el interior del cuello del
aparato, dejando que los lquidos de los enjuagues penetren en el ltimo. Cerrarlo, volviendo a
15
16
x 100
S
en donde
M1 = masa, en gramos, del matraz M, que contiene la materia grasa despus de desecar hasta
masa constante.
M2 = masa, en gramos, del matraz M, sin materia grasa, o en el caso de presencia de materias
insolubles, despus de extraer completamente la
materia grasa.
B1 = masa, en gramos, del matraz B, del ensayo en blanco, despus de desecar hasta masa
constante.
B2 = masa, en gramos, del matraz B, o en el
caso de presencia de materias insolubles, despus de extraer completamente la materia grasa.
S = masa, en gramos, de la cantidad de muestra utilizada en la determinacin.
La diferencia entre los resultados en dos
determinaciones repetidas (resultados obtenidos
simultneamente o uno inmediatamente despus
de otro, por el mismo analista) no debe ser
mayor de 0,03 g de materia grasa de 100 g de
producto.
1(a).6. Referencias.
1(a).6.1. Norma Internacional FIL-IDF 1A: 1969.
1(b). GRASA
(Leche desnatada)
1(b).1. Principio.
Este mtodo es aplicable a las leches lquidas,
no concentradas, y concretamente a la leche
esterilizada desnatada, definida en el Reglamento
de Centrales Lecheras y otras Industrias Lcteas.
Se entiende por contenido en materia grasa de
la leche desnatada el porcentaje en masa de la
cantidad total de lpidos y sustancias lipoides,
M
determinada por el procedimiento expuesto a
continuacin, que corresponde al descrito en la
norma FIL-22: 1968 de la Federacin Internacional de Lechera.
El contenido en materia grasa se determina
gravimtricamente por adicin de amonaco y
alcohol a una cantidad conocida de leche desnatada, extraccin por un disolvente de los lpidos y
de las sustancias lipoides, evaporacin del disolvente y pesado del residuo, obtenido por aplicacin del mtodo Rse-Gottlieb.
1(b).2. Material y aparatos.
1(b).2.1. Balanza analtica, de sensibilidad mnima 0,1 miligramos.
1(b).2.2. Probetas o matraces de extraccin
apropiados provistos de tapones para cierre hermtico (corcho o vidrio esmerilado).
1(b).2.3. Erlenmeyer o matraces de fondo
plano, de 150 a 250 ml de capacidad, con zona
esmerilada para identificacin.
1(b).2.4. Materiales que faciliten la ebullicin,
exentos de materia grasa; por ejemplo, perlas de
vidrio.
1(b).2.5. Dispositivos apropiados para la evaporacin de los disolventes.
1(b).2.6. Estufa que permita obtener una temperatura constante de 102-104C o estufa de
desecacin por vaco.
1(b).2.7. Pipetas graduadas de 10 ml.
1(b).3. Reactivos.
131074 Agua PA-ACS
131085 Etanol 96% v/v PA
131129 Amonaco 25% (en NH3) PA
132770 Eter Dietlico estabilizado con ~ 6 ppm
de BHT PA-ACS
131315 Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO
1(b).3.1. Etanol 96% v/v PA o Etanol desnaturalizado con metanol o con ter de petrleo.
1(b).3.2. Eter Dietlico estabilizado con ~ 6 ppm
de BHT PA-ACS, exento de perxidos.
1(b).3.3. Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO.
1(b).3.4. Amonaco 25% (en NH3) PA (densidad
0,91 a 20C) lmpida e incolora.
Los reactivos no deben dejar residuos despus
de la evaporacin.
1(b).4. Procedimiento.
1(b).4.1. Preparacin de la muestra.- Mezclar la
muestra cuidadosamente. En caso necesario,
calentar la muestra a 35-40C y mezclar. Enfriar a
20C antes del anlisis.
1(b).4.2. Determinacin.- Con una aproximacin de 10 miligramos, pesar alrededor de 10 g, o
introducir exactamente 10 mililitros (a 20 2C)
de leche desnatada en el aparato de extraccin.
Aadir 1 ml de la solucin Amonaco 25% (en
17
18
1(c).3. Reactivos.
Todos los reactivos deben de ser de calidad
pura para anlisis y no dejar en la evaporacin
mayor cantidad de residuos que la autorizada
para el ensayo en blanco. En caso necesario, los
reactivos podrn destilarse de nuevo en presencia
de 1 g, aproximadamente, de mantequilla deshidratada por 100 ml de disolvente. El agua que se
utilice deber ser destilada o por lo menos de
igual pureza que el agua destilada.
131074
131129
131270
131085
132770
Agua PA-ACS
Amonaco 25% (en NH 3) PA
Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO
Etanol 96% v/v PA
Eter Dietlico estabilizado con ~ 6 ppm
de BHT PA-ACS
131315 Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO
131542 Potasio Yoduro PA-ISO
M
con ~ 6 ppm de BHT PA-ACS o por Eter de Petrleo).
1(c).4. Procedimiento.
1(c).4.1. Preparacin de la muestra.
1(c).4.1.1. Leche concentrada y leche evaporada.- Agitar e invertir el recipiente que contiene la
muestra. Abrir y transvasar lentamente la leche a
un segundo recipiente (provisto de cierre hermtico). Mezclar mediante transvases sucesivos,
teniendo cuidado de incorporar a la muestra toda
la materia grasa u otro constituyente adheridos a
las paredes o al fondo del primer recipiente. Finalmente, transvasar la leche lo ms completamente
posible al segundo recipiente y cerrar ste ltimo.
En caso necesario, templar el envase original,
cerrado, en bao de Mara a 40-60C. Sacarlo y
agitar vigorosamente cada 15 minutos. Al cabo de
2 horas, retirar el envase y dejarlo enfriar hasta
temperatura ambiente. Quitar totalmente la tapadera y mezclar cuidadosamente removiendo el
contenido con una cuchara o esptula (si se separa la materia grasa no se debe efectuar el anlisis
de la muestra).
En el caso de envases flexibles, abrirlos y
transvasar el contenido a un vaso. Rasgar los
envases, despegar todas las materias adheridas a
las paredes e introducirlas en el vaso.
1(c).4.1.2. Leche condensada.- Abrir el recipiente que contiene la muestra y mezclar cuidadosamente la leche con una cuchara o una esptula.
Imprimir a este instrumento un movimiento rotativo
ascendente y descendente de manera que las
capas superiores e inferiores se mezclen bien con
el resto del contenido. Tener cuidado de reincorporar a la muestra toda la masa de leche que
pudiera haberse adherido a las paredes y a los
fondos del recipiente. Transvasar la leche lo ms
completamente posible a un segundo recipiente
(provisto de cierre hermtico) y cerrar ste ltimo.
En caso necesario, templar el bote original,
cerrado, en bao de Mara a 30-40C. Abrir el
bote, desprender toda la leche adherida a las
paredes del mismo, transvasar a una cpsula lo
suficientemente grande para permitir un manejo
cuidadoso y mezclar hasta que toda la masa sea
homognea.
En el caso de tubos flexibles abrirlos y transvasar el contenido a un vaso. Rasgar los tubos, despegar todas las materias adheridas a las paredes
e introducirlas en el vaso.
1(c).4.2. Ensayo en blanco.- Al mismo tiempo
que se determina el contenido en materia grasa
de la muestra, efectuar un ensayo en blanco con
10 ml de Agua PA-ACS en lugar de la muestra,
empleando el mismo tipo de aparato de extraccin, los mismos reactivos en las mismas cantidades y siguiendo el mismo procedimiento que se
describe a continuacin. Si el resultado del ensa-
yo en blanco excede de 0,5 mg, habr que comprobar los reactivos y aqul o aqullos que resulten impuros debern sustituirse o purificarse.
1(c).4.3. Determinacin.- Proceder como en
1(a).4.3., excepto que se pesa de 4 a 5 g de la
muestra, aadiendo a continuacin 7 ml de Agua
PA-ACS, agitando suavemente y calentando ligeramente (40-50C) hasta la dispersin total del
producto.
1(c).5. Clculo.
Como en 1(a).5.
1(c).6. Referencia.
1(c).6.1. Norma Internacional FIL-IDF 13A:
1969.
1(d). GRASA
(Leche en polvo)
1(d).1. Principio.
Este mtodo es aplicable a las leches en polvo,
entera, parcialmente desnatada y desnatada, definidas en el Reglamento de Centrales Lecheras y
otras Industrias Lcteas.
Se entiende por contenido en materia grasa de
la leche en polvo el porcentaje en masa de las
sustancias determinadas por el procedimiento
expuesto a continuacin, que corresponde al descrito en la norma FIL-9A: 1969 de la Federacin
Internacional de Lechera.
El contenido en materia grasa se determina
gravimtricamente por extraccin de la citada
materia grasa de una solucin alcohlico-amoniacal de leche en polvo mediante ter etlico y ter
de petrleo, evaporacin de los disolventes y
pesado del residuo, segn el principio del mtodo
Rse-Gottlieb.
1(d).2. Material y aparatos.
1(d).2.1., 2, 3, 4, 5 y 6, como 1(a).2.1., 2, 3, 4,
5 y 6.
1(d).3. Reactivos.
1(d).3.1., 2, 3, 4 y 5, como 1(a).3.1., 2, 3, 4
y 5.
1(d).4. Procedimiento.
1(d).4.1. Preparacin de la muestra.- Transvasar la leche en polvo a un recipiente limpio y seco
(provisto de cierre hermtico) de una capacidad
que corresponda, aproximadamente, a dos veces
el volumen del polvo. Cerrar en seguida el recipiente y mezclar cuidadosamente la leche en
polvo agitndolo e invirtindolo repetidamente.
Durante la preparacin de la muestra deber
evitarse, en la medida de lo posible, la exposicin
de la leche en polvo al aire atmosfrico con objeto de reducir al mnimo la absorcin de humedad.
19
20
1(e).3. Reactivos.
171010 Acido Sulfrico 90-91% segn Gerber RE
171865 Alcohol iso-Amlico segn Gerber mezcla de ismeros RE
1(e).3.1. Acido Sulfrico 90-91% segn Gerber
RE.
M
2. PROTEINAS (*)
2.1. Principio.
Se entiende por contenido en protenas de la
leche el contenido en nitrgeno expresado en porcentaje en peso y multiplicado por el factor de
conversin, que se determina por el mtodo
expuesto a continuacin, el cual corresponde al
descrito en la norma FIL-20: 1962 de la Federacin Internacional de Lechera.
Este mtodo es aplicable a las leches no alteradas, natural, certificada, higienizada, esterilizada
y a las reconstituidas asimismo no alteradas, posteriormente de las leches concentrada, evaporada, condensada y en polvo.
La determinacin del nitrgeno total se realiza
por aplicacin del mtodo Kjeldahl: una determinada cantidad pesada de leche se trata con cido
sulfrico en presencia de mercurio II xido como
catalizador con objeto de transformar el nitrgeno
de los compuestos orgnicos en nitrgeno amoniacal. El amonaco se libera por adicin de sodio
hidrxido, se destila y se recoge a una solucin de
cido brico. A continuacin se valora el amonaco.
2.2. Material y aparatos.
2.2.1. Balanza analtica de 1 mg de sensibilidad
mnima.
2.2.2. Aparato de digestin que permita mantener el matraz Kjeldahl en una posicin inclinada
y provisto de un sistema de calentamiento que no
afecte ms que a la parte del matraz ocupada por
el lquido.
2.2.3. Matraz Kjeldahl de 500 ml de capacidad.
2.2.4. Refrigerante Liebig de tubo interior rectilneo.
2.2.5. Un tubo de salida con bulbo de seguridad esfrico, conectado a la parte inferior del refrigerante por unin esmerilada.
2.2.6. Una alargadera conectada al matraz
Kjeldahl y al refrigerante Liebig por medio de
goma. Uniones esmeriladas.
2.2.7. Un matraz erlenmeyer de 500 ml de
capacidad.
2.2.8. Probetas graduadas de 25, 50, 100 y
150 ml.
2.2.9. Bureta de 50 ml graduados a 0,1 ml.
2.2.10. Materiales para facilitar la ebullicin. En
la digestin, pequeos trozos de porcelana dura o
perlas de vidrio, y en la destilacin, pequeos trozos de piedra pmez recin calcinados.
2.3. Reactivos.
172222 Acido Brico solucin 4% RE
181023 Acido Clorhdrico 0,1 mol/1 (0,1N) SV
131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO
131074 Agua PA-ACS
251170 Azul de Metileno (C.I. 52015) DC
21
Dejar enfriar el contenido del matraz a la temperatura ambiente, aadir alrededor de 150 ml de
Agua PA-ACS y algunos fragmentos de Piedra
Pmez grnulos QP, mezclar cuidadosamente y
dejarlo todava enfriar algo ms. Con la ayuda de
una probeta graduada, verter 50 ml de Acido Brico solucin 4% RE en el matraz erlenmeyer, aadir cuatro gotas de indicador y mezclar. Situar el
matraz erlenmeyer bajo el refrigerante, de manera
que el extremo del tubo de salida se introduzca en
la solucin de Acido Brico. Con la ayuda de una
probeta graduada aadir al contenido del matraz
Kjeldahl 80 ml de la solucin de Sodio Hidrxido
que contiene sulfuro. Durante esta operacin,
mantener el matraz inclinado, de tal manera que el
Sodio Hidrxido se deslice a lo largo de la pared
del recipiente y que los lquidos no se mezclen.
Conectar inmediatamente el matraz Kjeldahl al
refrigerante por medio de la alargadera. Mezclar el
contenido del matraz por agitacin. Calentar a
ebullicin evitando la espuma. Proseguir la destilacin hasta el momento en que el contenido del
matraz presente ebullicin a saltos. Regular el
calentamiento de manera que la destilacin dure
por lo menos 20 minutos. Enfriar bien el destilado
para evitar que se caliente la solucin de Acido
Brico. Poco tiempo antes de terminar la destilacin, bajar el matraz erlenmeyer para que el tubo
de salida no est introducido en la solucin de
Acido Brico. Detener el calentamiento, elevar el
tubo de salida y enjuagar sus paredes exteriores e
interiores con un poco de Agua PA-ACS. Valorar
el destilado con Acido Clorhdrico 0,1 mol/l (0,1N)
SV.
2.4.3. Ensayo en blanco.- Efectuar un ensayo
en blanco, aplicando el mtodo operatorio descrito, pero utilizando cinco mililitros de Agua PA-ACS
en lugar de leche.
2.5. Clculo.
2.5.1. Nitrgeno total.- Se calcula el contenido
en nitrgeno total mediante la frmula.
1,40N (V1 - V0)
Nitrgeno total % =
P
22
segn el mtodo descrito, por un factor de conversin que se fija en 6,38. En consecuencia, el
contenido en protenas viene dado por la frmula
1,40N (V1 - V0)
Protenas % = x 6,38
P
2.6. Referencia.
2.6.1. Norma Internacional FIL-IDF 20: 1962.
(*) En el Real Decreto 1679/1994, captulo I,
artculo 5, apartado 9, publicado en BOE, n 229,
de fecha 24/9/94, se indica que la leche de vaca
contiene un mnimo de 28 gramos de materia proteica por litro, obtenida al multiplicar el contenido
en nitrgeno total de la leche expresado porcentualmente por 6,38.
3. CASEINA
3.1. Principio.
Se entiende por contenido en casena de la
leche el contenido en protenas, expresado en
porcentaje en peso, obtenidas despus de una
precipitacin a pH 4,6, siguiendo el procedimiento expuesto a continuacin, que corresponde a la
norma FIL-20: 1964 de la Federacin Internacional de Lechera.
Este mtodo es aplicable a las leches no alteradas, natural, certificada, higienizada, esterilizada
y a las reconstituidas tambin, no alteradas posteriormente, de las leches concentrada, evaporada, condensada y en polvo. Asimismo puede aplicarse a las muestras de leche conservadas por
adicin de formaldehdo (1:2.500).
Se determina la cantidad total de nitrgeno de
la leche. A continuacin la casena se precipita
con un tampn actico-acetato y se filtra. Se
determina luego la cantidad de nitrgeno del filtrado.
La cantidad de casena se calcula con estas
dos determinaciones de nitrgeno, que se realizan
por el mtodo Kjeldahl, segn el mtodo 2.
3.2. Material y aparatos.
3.2.1. Pipetas de 0,5, 1 y 10 ml.
3.2.2. Probeta graduada de 100 ml.
3.2.3. Matraz graduado de 100 ml.
3.2.4. Papel filtro, lavado en cido, velocidad
media: de 11 a 12,5 cm.
3.2.5. Embudos.
3.3. Reactivos.
131008 Acido Actico glacial PA-ACS
131074 Agua PA-ACS
171634 Sodio Acetato 1 mol/1 (1M) RE
3.3.1. Solucin de Acido Actico al 10% p/v.
3.3.2. 171634 Sodio Acetato 1 mol/I (1M) RE.
M
3.4. Procedimiento.
3.4.1. Preparacin de la muestra.- Antes del
anlisis poner la muestra a 20 2C y mezclar
cuidadosamente. Si no se obtiene una dispersin
homognea de la materia grasa, calentar la muestra lentamente a 40C; mezclar suavemente y
enfriar a 20 2C.
3.4.2. Determinacin.- Determinar el contenido
total en nitrgeno (NT) de la leche utilizando el
mtodo Kjeldahl, segn el mtodo 2.
Precipitar la casena de la siguiente manera:
Llevar con pipeta 10 ml de leche a un matraz
aforado de 100 ml. Aadir 75 ml de Agua PA-ACS
a 40C; despus un ml de la solucin de Acido
Actico. Mezclar suavemente el contenido del
matraz y esperar 10 minutos. Aadir con pipeta
un ml de la solucin de Sodio Acetato 1 mol/l (1M)
RE. Mezclar de nuevo. Dejar enfriar el contenido
del matraz a unos 20C, completar hasta 10 ml
con Agua PA-ACS y mezclar invirtiendo lentamente el matraz. Cuando el precipitado de casena y
materia grasa se haya depositado, filtrar con filtro
seco y recoger el filtrado en un recipiente seco.
Determinar el contenido en nitrgeno de 50 ml
del filtrado lmpido (nitrgeno no casenico: NNC),
utilizando el mtodo Kjeldahl segn el mtodo 2.
3.4.3. Ensayo en blanco.- Adems del ensayo
en blanco previsto en el mtodo 2, relativo a la
determinacin del contenido en nitrgeno total de
la leche, conviene hacer un ensayo en blanco para
comprobar los reactivos que precipitan la casena,
utilizando 50 ml de Agua PA-ACS, 0,5 ml de la
solucin de Acido Actico y 0,5 ml de la solucin
de Sodio Acetato 1 mol/l (1M) RE.
3.5. Clculo.
Calcular el porcentaje en peso de NT en la
leche y del NNC en el suero lmpido con tres cifras
significativas. Corregir la cifra obtenida para NNC
por el volumen del precipitado, multiplicando el
valor obtenido por 0,994. Calcular la cantidad de
casena mediante la frmula.
Cantidad de casena % = 6,38 (NT - NNC)
La aplicacin de este factor a todas las leches
enteras no entraa error sensible; sin embargo, si
se aplica el mtodo a leche desnatada, el factor
de correccin utilizado deber ser 0,998.
La diferencia entre dos determinaciones repetidas no debe sobrepasar el 0,04% de casena.
3.6. Referencia.
3.6.1. Norma Internacional FIL-IDF 29: 1964.
4. LACTOSA
4.1. Principio.
Se entiende por contenido en lactosa de la
leche el contenido en lactosa monohidratada
expresado en porcentaje en peso, determinado
23
24
4.6. Observaciones.
La solucin de tiosulfato se debe normalizar
peridicamente, por ejemplo, por valoracin de
10 ml de Potasio Yodato 0,04N, a los que se
habr aadido 5 ml de solucin de Potasio Yoduro PA-ISO y 5 ml de la solucin de Acido Clorhdrico 2 mol/l (2N) SV.
M
anlisis, poner la muestra a 20 2C y mezclarla
cuidadosamente. Si no se obtiene una buena
reparticin de la materia grasa, calentar lentamente a 40C, mezclarla suavemente y enfriarla, a 20
2C.
5(a).3.2. Determinacin.- Secar la cpsula y la
tapa a 102 2C durante 30 minutos. Colocar la
cpsula tapada en un desecador, dejarla enfriar a
la temperatura ambiente y pesarla. Poner aproximadamente 3 ml de la muestra en la cpsula,
tapar la cpsula con la tapa y pesarla. Poner la
cpsula destapada en bao de agua durante 30
minutos. Poner la cpsula y la tapa en una estufa
de desecacin a 102 2C durante 2 horas. La
tapa se debe poner a un lado de la cpsula.
Cubrir la cpsula con la tapa y ponerla en el desecador; dejarla enfriar y pesarla. Ponerla 1 hora
ms en la estufa de desecacin; dejarla enfriar y
pesarla. Repetir la desecacin hasta que la diferencia entre dos pesadas consecutivas no sea
mayor de 0,5 mg.
5(a).4. Clculo.
P'
Contenido en extracto seco % = x 100
P
P' = peso en gramos de la muestra despus de
la desecacin.
P = peso en gramos de la muestra antes de la
desecacin.
Si a la muestra de la leche se le han adicionado como conservadores sustancias no voltiles,
como, por ejemplo, potasio dicromato, se debe
corregir la expresin del extracto seco como
sigue:
P' C'
Contenido en extracto seco % = x 100
PC
C' = cantidad de conservante no voltil en la
muestra analizada.
P
C = porcentaje de conservante x
100
En caso de ser potasio dicromato, el contenido
porcentual de conservante se determina segn el
mtodo 7.
La diferencia entre dos determinaciones repetidas no debe ser mayor de 0,05% del extracto
seco.
5(a).5. Referencia.
5(a).5.1. Norma Internacional FIL-IDF 21: 1962.
(*) En el Real Decreto 1679/1994, captulo I,
artculo 5, apartado 9, publicado en BOE n 229,
de fecha 24/9/1994, se indica que la leche de
vaca contiene un extracto seco magro igual o
superior a 85 gramos por litro.
25
26
6.1. Principio.
Se entiende por contenido en cenizas de la
leche el producto resultante de la incineracin del
extracto seco, expresado en porcentaje en peso,
obtenido segn el procedimiento descrito a continuacin.
El extracto seco se incinera a una temperatura
determinada y en una lenta corriente de aire.
M
1 Determinar el potasio dicromato y restar su
peso del de las cenizas.
2 Determinar los cloruros en las cenizas,
expresarlos en NaCl y aadir al peso de las cenizas la diferencia entre los cloruros totales de la
leche y los cloruros resultantes.
7. POTASIO DICROMATO
7.1. Principio.
La determinacin se realiza sobre las cenizas
de la leche, por reduccin de los cromatos
mediante una solucin de sulfato ferroamnico
(sal de Mohr) Fe(NH4)2 (SO4)2. 6H2O cuyo exceso
se valora con potasio permanganato.
7.2. Reactivos.
131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO
131074 Agua PA-ACS
131368 Amonio Hierro II Sulfato 6-hidrato PAISO
182114 Potasio Permanganato 0,01 mol/l
(0,05N) SV
7.2.1. Solucin acuosa de Sal de Mohr de 8 g
por l, (Amonio Hierro II Sulfato 6-hidrato PA-ISO),
para valorar en el momento de su empleo (esta
solucin se estabiliza por adicin de 12 ml de
Acido Sulfrico 96% PA-ISO por litro).
7.2.2. Solucin valorada de Potasio Permanganato 0,02N en la cual 1 ml corresponda a 0,00098
g de Cr2O7K2.
NOTA: En un matraz aforado de 250 ml introducir 100 ml de Potasio Permanganato 0,01 mol/l
(0,05N) SV, diluir y enrasar con Agua PA-ACS.
Determinar el factor de la solucin 0,02N resultante.
7.2.3. Acido Sulfrico 96% PA-ISO (d = 1,84).
7.3. Procedimiento.
Agotar las cenizas por lavados sucesivos con
Agua PA-ACS; despus, con una solucin acuosa
de Acido Sulfrico al 5% en volumen, obtener un
total de 25 a 30 ml de lquido. Recogerlo en un
vaso para valorar. Aadir alrededor de 5 ml de
Acido Sulfrico 96% PA-ISO y 20 ml exactamente
medidos de la solucin sulfrica de Sal de Mohr
con la solucin valorada de Potasio Permanganato 0,02N hasta coloracin rosa permanente.
Por otra parte, valorar en las mismas condiciones 20 ml de la misma solucin sulfrica de Sal de
Mohr mediante la solucin valorada de Potasio
Permanganato 0,02N.
7.4. Clculo.
El contenido de la leche en potasio dicromato,
expresado en porcentaje en peso, es igual a:
(V' - V) 0,098
Potasio Dicromato % =
P
V = volumen en ml de potasio permanganato
empleados en la valoracin del exceso de sal de
Mohr.
V' = volumen en ml de potasio permanganato
empleados en la prueba en blanco.
P = peso en gramos de la leche empleada en la
determinacin de las cenizas.
8(a). ACIDEZ
(Leches natural, certificada,
higienizada y esterilizada)
8(a).1. Principio.
Se entiende por acidez en las leches natural,
certificada, higienizada y esterilizada el contenido
aparente en cidos, expresado en g de cido lctico por 100 ml de leche, determinado por el procedimiento expuesto a continuacin, que corresponde al descrito en la norma UNE 34.100 del
Instituto de Racionalizacin del Trabajo.
Un determinado volumen de leche se valora en
solucin de sodio hidrxido, empleando solucin
alcohlica de fenolftalena y luego se expresa el
resultado en peso de cido lctico, mediante la
correspondiente transformacin.
8(a).2. Material y aparatos.
Bureta graduada cada 0,05 ml, o cada 0,1 ml
que permita apreciar la semidivisin.
8(a).3. Reactivos.
171327 Fenolftalena solucin 1% RE
181694 Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) SV
Indicador: Fenolftalena
183154 Sodio Hidrxido 0,111 mol/l (0,111N)
8(a).3.1. Solucin 0,111N (N/9) o 181694
Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) SV.
8(a).3.2. Indicador: 0,5 ml de Fenolftalena
solucin 1% RE.
8(a).4. Procedimiento.
8(a).4.1. Preparacin de la muestra.- Antes del
anlisis poner la muestra a 20 2C y mezclarla
cuidadosamente. Si no se obtiene una dispersin
homognea de la materia grasa, calentar lentamente la muestra a 40C, mezclar nuevamente y
enfriarla de nuevo a 20 2C.
8(a).4.2. Determinacin.- Se determina volumtricamente operando sobre 10 ml de leche con
solucin de Sodio Hidrxido 0,111N o sobre 9 ml
de leche con solucin de Sodio Hidrxido 0,1
mol/l (0,1N) SV. Como indicador se emplean 0,5
ml de Fenolftalena solucin 1% RE (dar por terminada la valoracin cuando aparece una coloracin
rosa fcilmente perceptible por comparacin con
27
un testigo tomado de la misma leche. Dicha coloracin desaparece progresivamente, pero se considera, obtenido el viraje cuando el tinte rosa persiste durante unos segundos).
8(a).5. Expresin de los resultados.
Los resultados se expresan en peso de cido
lctico por 100 mililitros de leche, dividiendo por
10 el nmero de mililitros empleados de solucin
de sosa.
Si a la muestra de leche se le ha adicionado
potasio dicromato, es preciso tener en cuenta la
acidez debida a dicho conservador. En el caso
de leches no alteradas se puede considerar que
1 g de potasio dicromato aumenta la acidez en
las mismas proporciones que 0,6 g de cido lctico.
8(a).6. Referencia.
8(a).6.1. Instituto Nacional de Racionalizacin
del Trabajo. Una norma espaola 34.100.
8(b). ACIDEZ
(Leche en polvo)
8(b).1. Principio.
Se entiende por acidez en la leche en polvo el
contenido aparente en cidos expresado en gramos de cido lctico por 100 g de leche en polvo
determinado por el procedimiento expuesto a
continuacin, que corresponde al descrito en la
norma UNE 34.101 del Instituto Nacional de
Racionalizacin del Trabajo.
El mtodo es aplicable a las leches en polvo,
entera y desnatada.
Una determinada cantidad pesada de leche en
polvo disuelta en agua se valora con una solucin
de sosa empleando fenolftalena como indicador
hasta igualarla en color con otra cantidad igual de
leche en polvo disuelta y mezclada con rosanilina
acetato.
8(b).2. Material y aparatos.
8(b).2.1. Cpsulas de porcelana blanca de
aproximadamente 100 ml de capacidad.
28
8(b).3. Reactivos.
131008 Acido Actico glacial PA-ACS
131074 Agua PA-ACS
131085 Etanol 96% v/v PA
131325 Fenolftalena PA-ACS
181694 Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) SV
Indicador: Fenolftalena
183154 Sodio Hidrxido 0,111 mol/l (0,111N)
8(b).3.1. Solucin 0,111N (N/9) o Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) SV, exento de carbonato.
8(b).3.2. Solucin indicadora de Fenolftalena:
Se disuelve un gramo de Fenolftalena PA-ACS en
110 ml de Etanol 96% v/v PA, se aade Sodio
9. SACAROSA
(Determinacin polarimtrica en la
leche condensada)
9.1. Principio.
Se entiende por contenido en sacarosa de la
leche condensada el contenido en sacarosa no
transformada, expresado en porcentaje en peso,
determinado por el procedimiento expuesto a
continuacin, que corresponde al descrito en la
M
norma FIL-35: 1966 de la Federacin Internacional de Lechera.
Este mtodo es aplicable a la leche condensada, entera o desnatada, de composicin normal,
preparada a partir de leche y sacarosa nicamente que no contenga sacarosa transformada.
El mtodo se basa en el principio de inversin
de Clerget: Un tratamiento suave con un cido
hidroliza completamente la sacarosa. La lactosa y
los otros azcares prcticamente no se hidrolizan.
La cantidad de sacarosa se deduce del cambio
del poder rotatorio de la solucin.
Se prepara un filtrado lmpido de la muestra, sin
mutarrotacin debida a la lactosa, por tratamiento
de la solucin con amonaco seguido de netralizacin y clarificacin por adiciones sucesivas de
soluciones de zinc acetato y de potasio hexacianoferrato II.
En una parte del filtrado de sacarosa se hidroliza en las condiciones especiales que corresponden a este tipo de operacin.
Partiendo de los poderes rotatorios del filtrado,
antes y despus de la inversin, se calcula la cantidad de sacarosa.
9.2. Material y aparatos.
9.2.1. Balanza analtica de sensibilidad: 10 mg
como mnimo.
9.2.2. Vasos de precipitados de 100 ml de
vidrio.
9.2.3. Matraces graduados, de 200 y 50 ml.
9.2.4. Pipetas de 40 ml.
9.2.5. Probetas graduadas de 25 ml.
9.2.6. Pipetas graduadas de 10 ml.
9.2.7. Embudos filtrantes de dimetro entre 8 y
10 cm y filtros (plegados) de 15 cm de dimetro.
9.2.8. Tubo de polarmetro de 2 cm de longitud, exactamente calibrado.
9.2.9. Polarmetro o sacarmetro.
9.2.9.1. Polarmetro con luz de sodio o con luz
verde de mercurio (lmpara de vapor de mercurio
con prisma o pantalla Wratten nmero 77 A), permitiendo lecturas con una precisin por lo menos
igual a 0,05 grados de ngulo.
9.2.9.2. Sacarmetro con escala internacional
de azcar utilizando luz blanca que pasa a travs
de un filtro de 15 ml de una solucin al 6 por 100
de potasio dicromato, o bien luz de sodio, y permitiendo la lectura con una precisin por lo menos
igual a 0,1 grados de la escala sacarimtrica internacional.
9.2.10. Bao de agua a 60 1C.
9.3. Reactivos.
131008 Acido Actico glacial PA-ACS
182119 Acido Actico 2 mol/l (2N) SV
131019 Acido Clorhdrico 35% PA-ISO
131074 Agua PA-ACS
131129 Amonaco 25% (en NH3) PA
29
30
50 ml de Agua PA-ACS caliente (80-90C) y mezclar cuidadosamente. Transvasar cuantitativamente la mezcla a un matraz aforado de 200 ml,
enjuagar el vaso con cantidades sucesivas de
Agua PA-ACS a 60C hasta que el volumen total
sea de 120 a 150 ml. Mezclar y enfriar a temperatura ambiente. Aadir 5 ml de la solucin de Amonaco diluida. Mezclar de nuevo y dejar reposar
durante 15 minutos. Neutralizar el Amonaco aadiendo una cantidad equivalente de la solucin
diluida de Acido Actico. Determinar previamente
la cantidad exacta de mililitros por valoracin de la
solucin de Amonaco diluida empleando el Azul
de Bromotimol solucin 0,04% RE como indicador. Mezclar. Aadir, mezclando suavemente por
rotacin del matraz inclinado, 12,5 ml de solucin
de Zinc Acetato. De la misma forma que para la
solucin de acetato, aadir 12,5 ml de solucin de
Potasio Hexacianoferrato II. Poner el contenido
del matraz a 20C y aadir Agua PA-ACS (a 20C)
hasta alcanzar el enrase de 200 ml.
Hasta este momento todas las adiciones de
agua o reactivos debern haberse efectuado de
tal manera que se haya evitado la formacin de
burbujas de aire y por esa misma razn todas las
mezclas se habrn realizado por rotacin de
matraz y no por agitacin violenta. Si se observa
la presencia de burbujas de aire antes de alcanzar
los 200 ml se puede eliminar aplicando al matraz
una bomba de vaco o imprimindole un movimiento de rotacin. Tapar el matraz con un tapn
seco y mezclar ntimamente sacudiendo con energa. Dejar reposar durante algunos minutos, filtrar
a continuacin por un papel filtro seco. Despreciar
los primeros 25 ml del filtrado.
9.4.3.1. Polarizacin directa.- Determinar la
rotacin ptica del filtrado a 20 2C.
9.4.3.2. Inversin.- Introducir con la pipeta en
un matraz graduado de 50 ml, 40 ml del filtrado
obtenido de la manera indicada antes. Aadir 6 ml
de Acido Clorhdrico 6,35 N. Poner el matraz en
bao de agua a 60C durante 15 minutos, sumergindolo hasta el nacimiento del cuello. Mezclar
por rotacin durante los 5 primeros minutos, al
final de los cuales el contenido deber haber
alcanzado la temperatura del bao. Enfriar a 20C
y completar hasta 50 ml con Agua PA-ACS a
20C, mezclar y dejar reposar 1 hora a esta temperatura.
9.4.3.3. Polarizacin despus de inversin.Determinar el poder rotatorio de la solucin invertida a 20 2C (cuando la temperatura del lquido en el tubo de polarizacin difiera en ms de
0,2C de 20C durante la medida, se debe aplicar
la correccin de la temperatura indicada en el
apartado 9.5.2.).
9.5. Clculo.
9.5.1. Riqueza en sacarosa
W
I) v = (1,08E + 1,55 P)
100
5
D I
Vv
V
4
II) S = x x x 100
Q
V
LxW
S = cantidad de sacarosa.
W = peso de la muestra en gramos.
P = porcentaje de protenas (N x 0,38) de la
muestra.
F = porcentaje de materia grasa de la muestra.
V = volumen en mililitros de la muestra diluida
antes de filtrar.
D = lectura polarimtrica directa (polarizacin
antes de la inversin).
I = lectura polarimtrica despus de la inversin.
L = longitud en decmetros del tubo del polarmetro.
Q = factor de inversin cuyos valores se indican
ms adelante.
Pesando exactamente 40 g de leche condensada y utilizando un polarmetro con luz de sodio
provisto de escala en grados de ngulo y un tubo
de 2 cm de longitud, el contenido en sacarosa de
las leches condensadas normales (C = 9) a 20
0,1C se puede calcular con ayuda de la siguiente frmula:
S = ((d).5/4I) (2,833 - 0,00612 F - 0,00878 P)
Si la medida de la polarizacin despus de la
inversin se efecta a una temperatura diferente a
20C, las cifras obtenidas se deben multiplicar por:
[I + 0,0037 (T-20)]
9.5.2. Calores del factor de inversin Q.- Las
frmulas siguientes dan valores precisos de Q para
diversas clases de luz con correcciones, si es
necesario, para la concentracin y la temperatura.
Luz de sodio y polarmetro con escala en grados de ngulo.
Q = 0,8825 + 0,0006 ((c).9) - 0,0033 (T-20)
Luz verde de mercurio y polarmetro con escala en grados de ngulo:
Q = 1,0392 + 0,0007 ((c).9) - 0,0039 (T-20)
Luz blanca con filtro de dicromato y sacarmetro con escala sacarimtrica:
Q = 2,549 + 0,0017 (C-9) - 0,0095 (T-20)
En las frmulas precedentes:
C = porcentaje de azcares totales en la solucin invertida, segn lectura polarimtrica.
T = temperatura de la solucin invertida en la
lectura del polarmetro.
El porcentaje de azcares totales C en la solucin invertida se puede calcular a partir de la lectura directa y de la variacin despus de la inver-
M
sin segn el mtodo habitual, utilizando los valores usuales de rotacin especfica de sacarosa, de
lactosa y de sacarosa invertida. La correccin
0,0006 (C-9), etctera, no es exacta ms que
cuando C es aproximadamente 9; para leche concentrada normal esta correccin se puede despreciar, por ser C prximo a 9.
Variaciones en la temperatura de 20C influyen
escasamente en la lectura de la polarizacin
directa. Por el contrario, diferencias de ms de
0,2C, en la lectura de polarizacin despus de la
inversin necesitan una correccin. La correccin
0,003 (T-20), etc., no es exacta ms que para
temperaturas comprendidas entre 18C y 22C.
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultneamente o una
inmediatamente despus de la otra por el mismo
analista no debe ser mayor de 0,3 g de sacarosa
para 100 g de leche condensada.
9.6. Referencia.
9.6.1. Norma Internacional FIL-IDF 35: 1966
10. HUMEDAD
(Leche en polvo)
10.1. Principio.
Se entiende por humedad de la leche en polvo
el contenido en agua libre, es decir, la prdida de
peso, expresado en porcentaje en peso, determinado por el procedimiento expuesto a continuacin, que corresponde al descrito en la norma FIL26: 1964 de la Federacin Internacional de Lechera.
Este mtodo es aplicable a las leches en polvo,
entera y desnatada.
El agua, contenida en la leche en polvo, se elimina por calentamiento de la muestra en una
estufa de desecacin, a una temperatura de 102
2C, hasta peso constante.
10.2. Material y aparatos.
10.2.1. Balanza analtica, de sensibilidad
0,1 mg como mnimo.
10.2.2. Cpsulas apropiadas, preferentemente
en aluminio, nquel, acero inoxidable o vidrio. Las
cpsulas debern estar provistas de tapas que se
adapten convenientemente, pero que se puedan
quitar con facilidad. Las dimensiones ms convenientes son: dimetro aproximado 50 mm; profundidad aproximada, 25 mm.
10.2.3. Un desecador provisto de 211335 Gel
de Slice 3-6 mm con indicador QP de humedad.
10.2.4. Una estufa de desecacin bien ventilada, provista de termostato y regulada a 102
2C. Es importante que la temperatura sea uniforme en toda la estufa.
10.2.5. Frascos provistos de tapones hermticos para el mezclado de la leche en polvo.
10.3. Procedimiento.
10.3.1. Preparacin de la muestra.- Transvasar
toda la muestra de la leche en polvo a un frasco
seco y tapado, de un volumen igual al doble,
aproximadamente, del de la muestra, mezclar ntimamente por rotacin y agitacin (en el caso de
que no se pueda obtener una homogeneizacin
completa por este procedimiento, extraer, con
objeto de realizar determinaciones paralelas, dos
muestras en dos puntos, lo ms distantes posible
el uno del otro).
10.3.2. Determinacin.- Colocar la cpsula
destapada y la correspondiente tapa en la estufa
de desecacin durante 1 hora, a la temperatura
de 102 2C. Colocar la tapa sobre la cpsula y
pasarla de la estufa al desecador. A continuacin
enfriar a la temperatura ambiente y pesar. Introducir aproximadamente 1 g de leche en polvo en la
cpsula, tapar la cpsula y pesar rpidamente con
la mayor exactitud posible. Destapar la cpsula y
colocarla con su tapa en la estufa a una temperatura de 102 2C durante 2 horas. Volver a colocar la tapa, poner la cpsula en el desecador,
dejar enfriar a temperatura ambiente y pesar rpidamente con la mayor exactitud posible.
Calentar la cpsula abierta y su tapa a 102
2C en la estufa durante 1 hora suplementaria,
volver a tapar y dejar enfriar en el desecador a
temperatura ambiente; pesar de nuevo. Repetir la
operacin hasta que las pesadas sucesivas no
difieran en ms de 0,0005 g. La desecacin se
acaba aproximadamente en 2 horas.
10.4. Clculo.
Calcular la humedad mediante la frmula
siguiente:
M1 M2
Humedad (cantidad de agua) % = x 100
M3
M1 = la masa inicial, en gramos, de la cpsula
y su tapa ms la leche en polvo utilizada para el
anlisis.
M2 = la masa final, en gramos, de la cpsula y
su tapa ms la leche en polvo.
M3 = la masa, en gramos, de la leche en polvo
utilizada para el anlisis.
La diferencia entre dos determinaciones repetidas no debe sobrepasar el 0,06% de agua.
10.5. Referencia.
10.5.1. Norma Internacional FIL-IDF 26: 1964.
31
11. INDICE DE SOLUBILIDAD
(Leche en polvo)
11.1. Principio.
Se entiende por ndice de solubilidad de la
leche en polvo la cantidad de sedimento, expre-
Dimetro
250
300
350
400
450
500
550
600
milmetros ..............
milmetros ..............
milmetros ..............
milmetros ..............
milmetros ..............
milmetros ..............
milmetros ..............
milmetros ..............
Revoluciones
por minuto
1.083
988
916
856
807
766
730
700
32
11.3. Procedimiento.
Se aaden 10 o 13 g de la muestra, segn se
trate de leche desnatada o completa, respectivamente, a 100 ml de Agua PA-ACS, a la temperatura de 24C, en el vaso especial del mezclador
que seguidamente se pone en ste para agitar
durante 90 segundos exactos. Si hay necesidad
inmediata de volver a emplear el vaso del mezclador, puede verterse la solucin total en un vaso de
precipitacin apropiado. Se deja reposar la solucin hasta que la espuma se separe lo suficiente,
para poder quitarla completamente con una
cuchara. El periodo de reposo despus de la mezcla no ha de exceder de 15 minutos.
10,0
10,5
11,0
11,5
12,0
12,5
13,0
gramos
gramos
gramos
gramos
gramos
gramos
gramos
11.4. Referencia.
11.4.1. Instituto Nacional de Racionalizacin
del Trabajo. Una norma espaola 34.101.
12. CALCIO
12.1. Principio.
Se entiende por contenido en calcio de la leche
la cantidad total de calcio expresada en porcentaje en peso, determinada por el procedimiento
expuesto a continuacin, que corresponde a la
norma FIL-36: 1966 de la Federacin Internacional de Lechera.
Este mtodo se aplica a todas las leches lquidas normales, as como a las leches reconstituidas por dilucin o disolucin de leches concentradas o de leches desecadas.
El calcio total se lleva a disolucin por precipitacin de las materias proteicas con cido tricloroactico. El calcio contenido en el filtrado es precipitado bajo forma de calcio oxalato, que se
separa por centrifugacin y se valora con potasio
permanganato.
M
12.2. Material y aparatos.
12.2.1. Balanza analtica.
12.2.2. Matraz aforado de 50 ml.
12.2.3. Pipeta para leche de 20 ml.
12.2.4. Papel filtro sin cenizas para filtracin
lenta.
12.2.5. Centrfuga que pueda desarrollar una
aceleracin centrfuga de 1,400 g (g = aceleracin
de la gravedad).
12.2.6. Tubos de centrfuga cilndricos con
fondo redondo de 30 ml, aproximadamente, marcados a 20 ml.
12.2.7. Pipetas de 2 y 5 ml.
12.2.8. Dispositivo de sifn por succin, provisto de un tubo capilar.
12.2.9. Bao de agua, a temperatura de ebullicin.
12.2.10. Bureta graduada.
12.3. Reactivos.
131008 Acido Actico glacial PA-ACS
252373 Acido Tricloroactico solucin 20% p/v
DC
131074 Agua PA-ACS
131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO
131129 Amonaco 25% (en NH3) PA
131136 Amonio Oxalato 1-hidrato PA
131085 Etanol 96% v/v PA
182114 Potasio Permanganato 0,01 mol/l
(0,05N) SV
171617 Rojo de Metilo RE-ACS
12.3.1. Acido Tricloroactico solucin 20% p/v
DC.
12.3.2. Acido Tricloroactico solucin acuosa
al 12% p/v. Usese Acido Tricloroactico solucin
20% p/v DC y diluir convenientemente.
12.3.3. Amonio Oxalato 1-hidrato PA: Solucin
acuosa saturada en fro.
12.3.4. Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS:
solucin al 0,05% p/v en Etanol 96% v/v PA.
12.3.5. Acido Actico: solucin acuosa al 20%
v/v. Usese Acido Actico glacial PA-ACS y diluir
convenientemente.
12.3.6. Amonio Hidrxido: solucin acuosa
obtenida mezclando volmenes iguales de Amonaco 25% (en NH3) PA y de Agua PA-ACS.
12.3.8. Acido Sulfrico: solucin acuosa obtenida aadiendo 20 ml de Acido Sulfrico 96% PAISO a 80 ml de Agua PA-ACS.
12.3.9. Potasio Permanganato 0,02N:
NOTA: En un matraz aforado de 250 ml. introducir 100 ml. de Potasio Permanganato 0,01 mol/l
(0,05N) SV, diluir y enrasar con Agua PA-ACS.
Determinar el factor de la solucin 0,02N resultante.
Todos los reactivos deben ser puros para anlisis.
12.4. Procedimiento.
12.4.1. Preparacin de la muestra.- Antes del
anlisis, poner la muestra a 20 2C y mezclar
con cuidado. Si no se obtiene una dispersin
homognea de la materia grasa, calentar lentamente la muestra a 40C, mezclar suavemente y
enfriar a 20 2C.
12.4.2. Defecacin de la muestra.- En un
matraz aforado de 50 ml pesar exactamente alrededor de 20 g de leche, con una aproximacin de
10 mg. Aadir poco a poco mientras se agita una
solucin acuosa de Acido Tricloroactico 20% p/v
DC y completar hasta 50 ml con este reactivo.
Agitar fuertemente durante algunos segundos.
Dejar reposar 30 minutos. Filtrar sobre papel filtro
sin cenizas. El filtrado obtenido debe ser lmpido.
12.4.3. Precipitacin del calcio en forma de
oxalato y separacin del oxalato. En un tubo de
centrfuga cilndrica de fondo redondo, introducir
5 ml del filtrado lmpido; despus 5 ml de Acido
Tricloroactico al 12%, 2 ml de una solucin acuosa saturada de Amonio Oxalato 1 hidrato PA, dos
gotas de solucin alcohlica de Rojo de Metilo
RE-ACS y 2 ml de Acido Actico al 20%. Mezclar
mediante agitacin circular y aadir poco a poco
solucin de Amonaco (12.3.6.) hasta coloracin
amarillo plido; despus, algunas gotas de Acido
Actico al 20% hasta coloracin rosa. Dejar reposar 4 horas a la temperatura ambiente.
Diluir hasta 20 ml con Agua PA-ACS y centrifugar 10 minutos a 1.400 g (g = aceleracin de la
gravedad). Mediante un dispositivo de succin,
decantar el lquido lmpido que sobrenada. Lavar
las paredes del tubo de centrifugacin (sin remover el depsito de calcio oxalato) con 5 ml de
solucin de Amonaco diluido (12.3.7.). Centrifugar 5 minutos a 1.400 g. Decantar el lquido que
sobrenada con el dispositivo de succin. Proceder a tres lavados sucesivos.
12.4.4. Valoracin del oxalato.- Despus de
haber extrado con sifn el agua del ltimo lavado,
aadir 2 ml de solucin acuosa de Acido Sulfrico
y 5 ml de Agua sobre el precipitado de calcio oxalato. Poner el tubo en bao de agua hirviendo, y
cuando el oxalato est completamente disuelto,
valorar con solucin de Potasio Permanganato
0,02N, hasta coloracin rosa persistente. La temperatura debe permanecer superior a los 60C
durante la valoracin.
12.4.5. Ensayo en blanco.- Efectuar un ensayo
en blanco con todos los reactivos, utilizando 20
ml de Agua PA-ACS en vez de leche.
12.5. Clculo.
Contenido
1.000
en calcio% = 0,0004 x (V-v) x x K =
P
33
K
= 0,4 x (V-v) x
P
V = volumen en ml de MnO4K (0,02N) gastados
en la valoracin de la muestra.
v = volumen en ml de MnO4K (0,02N) gastados
en el ensayo blanco.
P = peso en gramos de la muestra inicial (alrededor de 20 g).
K = coeficiente de correccin del volumen del
precipitado resultante de la precipitacin tricloroactica.
Para leche entera (3,5 a 4,5 por 100
ria grasa):
K = 0,972
Para leche con 3 por 100 de materia
K = 0,976.
Para leche con 2 por 100 de materia
K = 0,980.
Para leche con 1 por 100 de materia
K = 0,985.
Para leche desnatada: K = 0,989.
de mate-
grasa:
grasa:
grasa:
34
13.1. Principio.
Se entiende por contenido en fsforo de la
leche la cantidad total de fsforo expresada en
porcentaje en peso, determinada por el procedimiento expuesto a continuacin, que corresponde
a la norma FIL-42: 1967 de la Federacin Internacional de Lechera.
Este mtodo se aplica a todas las leches lquidas normales, as como a las leches reconstituidas por dilucin o disolucin de las leches concentradas o de las leches desecadas.
Las materias orgnicas de la leche se destruyen por mineralizacin en seco (incineracin). El
fsforo se determina colorimtricamente, reduciendo el amonio fosfomolibdato con diamonifenol
(amidol) y midiendo la densidad ptica de la solucin obtenida.
13.2. Material y aparatos.
13.2.1. Balanza analtica.
13.2.2. Cpsulas de platino o de cuarzo (de
55 mm de dimetro aproximadamente) provista
de vidrio de reloj.
M
cpsula de platino o de cuarzo pesar exactamente alrededor de 10 g de leche con una aproximacin de 10 mg. Evaporar, hasta sequedad, al bao
de agua hirviendo. Despus de la desecacin
completa, calcinar en la mufla a una temperatura
comprendida entre 500C y 550C hasta la obtencin de cenizas blancas.
13.4.3.2. Preparacin de la solucin de cenizas: Despus de enfriar la cpsula, cubrirla con
vidrio de reloj, disolver las cenizas en 2 o 3 ml de
Acido Clorhdrico 1 mol/l (1N) SV y diluir con Agua
PA-ACS. Transvasar la solucin de las cenizas a
un matraz aforado de 100 ml, lavar el vidrio de
reloj y la cpsula, recogiendo las aguas de lavado
en el matraz. Completar hasta 100 ml con Agua
PA-ACS, agitar y filtrar. Tomar 10 ml del filtrado,
introducirlos en un matraz de 100 ml. Completar
hasta 100 ml con Agua PA-ACS y agitar.
13.4.3.3. Determinacin colorimtrica del fsforo: Tomar 5 ml de la dilucin preparada en
13.4.3.2. e introducirlos en un matraz aforado de
25 ml. Aadir sucesivamente 2 ml de Acido Perclrico, 2 ml de la solucin de Amidol, 1 ml de la
solucin de Amonio Molibdato. Completar hasta
25 ml con Agua PA-ACS y mezclar. Esperar 5
minutos y medir la densidad ptica utilizando
cubeta de 1 cm en un espectrofotocolormetro a
750 nanmetros. Buscar en la curva patrn la
cantidad de Fsforo contenida en el matraz de 25
ml, expresada en microgramos y correspondiente
a la densidad ptica leda.
13.4.3.4. Determinacin de la curva patrn: En
cuatro matraces aforados de 25 ml introducir 3, 5,
7, y 10 ml de la solucin B. Las cantidades as
introducidas son iguales a 30, 50, 70 y 100 microgramos de Fsforo. Proceder a continuacin
como en 13.4.3.3. Situar sobre una grfica las
densidades pticas obtenidas en funcin de las
cantidades de Fsforo presentes en los matraces.
Trazar la curva patrn (que es una recta).
13.5. Clculo.
El contenido en fsforo de la leche expresada
en g de fsforo por 100 g de leche viene dado por
la frmula siguiente:
m - m'
Fsforo % =
50M
m = masa de fsforo, expresada en microgramos, obtenida segn 13.4.3.4. y contenida en el
matraz de 25 ml con la muestra de aproximadamente 50 mg de leche.
m' = masa de fsforo, expresada en microgramos, obtenida segn 13.4.3.4. y contenida en el
ensayo en blanco.
M = masa de leche, expresada en gramos,
empleada para la mineralizacin.
Gramos
de harina
de alfalfa
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
Porcentaje
de harina
de alfalfa
1%
1,5 %
2%
2,5 %
3%
3,5 %
4%
35
36
14(b).3. Procedimiento.
Pesar 50 g de leche desnaturalizada en un
vaso de precipitados de 250 ml y adicionar 150 ml
de Agua PA-ACS. Una vez bien impregnada la
leche desnaturalizada, formar una papilla fina por
agitacin mediante una varilla con el extremo curvado en forma de U.
Aadir a continuacin otros 100 ml de Agua
PA-ACS, agitar y pasar la papilla a travs del tamiz
14(b).2.2. (previamente desecado a 100C hasta
peso constante, con precisin de 0,01 g) coloca-
14(b).5. Referencia.
14(b).5.1. A. Lpez, M. del C. Daz-Pealver y
J. Gutirrez: "Leches desnaturalizadas". Comprobacin de la desnaturalizacin de las mismas".
M
15. FENOLFTALEINA EN LECHE
DESNATURALIZADA
(Mtodo cualitativo)
15.1. Principio.
Deteccin de fenolftalena en leche desnaturalizada en presencia de una solucin alcalina.
15.2. Material y aparatos.
Tubos de ensayo 160/60.
15.3. Reactivos.
131074 Agua PA-ACS
182158 Sodio Hidrxido 2 mol/l (2N) SV
15.4. Procedimiento.
Poner en un tubo de ensayo 160/60, aproximadamente 0,5 g de leche en polvo, aadir 10 ml
de Agua PA-ACS y agitar hasta lograr una emulsin uniforme. Aadir 2 ml de solucin de Sodio
Hidrxido 2 mol/l (2N) SV.
La presencia de Fenolftalena en la muestra se
manifiesta por la aparicin de una serie de puntos
rojo-rosados que se ensanchan, intensificando su
color hasta llegar a un mximo, para empalidecer
seguidamente y llegar a desaparecer transcurrido
un cierto tiempo.
Comparar con un patrn de leche en polvo
conteniendo Fenolftalena al 1/20.000.
16. FECULA
(Mtodo comparativo)
16.1. Principio.
Determinacin de fcula en leche desnaturalizada por comparacin con muestras patrn.
Patrn
Nm. 1 ............
Nm. 2 ............
Nm. 3 ............
(g)
Desnaturalizante patrn
(g)
85
80
75
15
20
25
16.3. Reactivos.
131074 Agua PA-ACS
181772 Yodo 0,05 mol/l (0,1N) SV
17.3. Procedimiento.
Pesar con precisin de 0,01 g, 20 g de leche y
tamizarla exhaustivamente a travs del tamiz
17.2.1. estndar. Recoger cuidadosamente la
fraccin de salvado retenida por el tamiz y pesar.
A continuacin, empastar con Agua PA-ACS la
parte tamizada, deshaciendo todos los grumos
que puedan formarse con ayuda de una varilla de
vidrio con el extremo curvado en forma de U y
diluir con Agua PA-ACS hasta completar unos 300
ml.
Verter la emulsin sobre el tamiz 17.2.2., previamente desecado a 100C hasta peso constante; lavar repetidamente el residuo que permanece
en el tamiz hasta que las aguas de lavado pasen
16.4. Procedimiento.
16.4.1. Preparacin del desnaturalizante patrn.
Mezclar ntimamente 80 g de salvado y 20 g de
fcula de la misma naturaleza que la que se pretende identificar.
16.4.2. Preparacin de patrones de leche descremada en polvo y desnaturalizante patrn.
Mezclar haciendo uso del mortero, segn las
siguientes proporciones:
37
38
18.4. Procedimiento.
Pesar con aproximacin de 0,001 g, 0,5 g de la
muestra de leche a analizar y colocarla en un tubo
de centrfuga previamente pesado con igual exactitud. Aadir 10 ml de Agua PA-ACS fra y agitar
con una varilla de vidrio hasta disolucin de la
leche. A continuacin, centrifugar a 3.000 r.p.m.
Decantar la emulsin sobrenadante y aadir
10 ml de Agua PA-ACS fra al residuo insoluble;
agitar de nuevo con una varilla, centrifugar otros
quince minutos a idnticas revoluciones y decantar. Repetir estas operaciones al menos cuatro
veces.
Los lquidos obtenidos por decantacin tras la
centrifugacin no deben dar colocacin azul con
Lquido de Lugol.
Desecar a 80C en estufa de vaco el residuo
final contenido en el tubo de centrfuga, hasta
peso constante. El peso del residuo presentar el
peso total del desnaturalizante contenido en 0,5 g
de la leche desnaturalizada.
18.5. Clculo.
El salvado contiene una humedad media que
puede cifrarse en un 10%; por ello, el peso del
residuo centrifugado debe incrementarse en la
humedad correspondiente al salvado contenido
en 0,5 g de leche, que en un producto correctamente desnaturalizado al 20% ser 0,008 g.
El peso del desnaturalizado total ser:
100 (Rs + h)
% desnaturalizado =
P
Siendo:
Rs = peso, en g, del residuo.
h = factor de correccin de humedad del salvado = 0,008 g.
P = peso, en g, de la leche desnaturalizada.
19. SUSTANCIAS PROTEICAS
REDUCTORAS (B.O.E. 14-10-1981)
19.1. Principio.
Determinacin de las sustancias proteicas
reductoras de la leche, mediante reaccin con
potasio ferricianuro y posterior valoracin colorimtrica. Este mtodo es aplicable a la deteccin
de leche en polvo reconstituida en leche cruda o
pasterizada.
19.2. Material y aparatos.
19.2.1. Espectrofotmetro que permite lecturas de 610 nm con cubetas de 1 cm.
19.2.2. Centrfuga 1.000-1.500 r.p.m.
19.2.3. Tubos de centrfuga graduados a 50 ml.
19.2.4. Bao de agua de temperatura regulable
hasta 80C.
19.3. Reactivos.
131008 Acido Actico glacial PA-ACS
131067 Acido Tricloroactico PA-ACS
131074 Agua PA-ACS
141358 Hierro III Cloruro 6-hidrato PRS
131503 Potasio Hexacianoferrato III PA-ACS
131505 Potasio Hexacianoferrato II 3-hidrato
PA-ACS
131481 Potasio Hidrgeno Ftalato PA-ISO
131687 Sodio Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO
131754 Urea PA
19.3.1. Solucin de Acido Actico 5%. Diluir
50 ml de Acido Actico glacial PA-ACS con Agua
PA-ACS a 1 litro.
19.3.2. Solucin saturada de Urea PA en Agua
PA-ACS.
19.3.3. Solucin tampn. Disolver 2 g de Sodio
Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS
y diluir a 250 ml. Disolver 10,2 g de Potasio Hidr-
M
geno Ftalato PA-ISO en Agua PA-ACS y diluir a
250 ml. Mezclar 150 ml de la solucin de Sodio
Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO con 200 ml de la
solucin de Potasio Hidrgeno Ftalato PA-ISO,
diluirlo hasta 800 ml y ajustar la solucin final a un
pH 5,6 por adicin de las soluciones de Sodio
Hidrxido o Potasio Hidrgeno Ftalato.
19.3.4. Solucin de Potasio Hexacianoferrato
III PA-ACS al 1%- Disolver 10 g de Potasio Hexacianoferrato III PA-ACS en Agua PA-ACS y diluir a
1 litro. Desechar la solucin si presenta color
verde o contiene precipitado azul. Esta solucin
debe utilizarse recin preparada.
19.3.5. Solucin de Acido Tricloroactico 10%.
Disolver 100 g de Acido Tricloroactico PA-ACS
en Agua PA-ACS y diluir a 1 litro.
19.3.6. Solucin de Hierro III Cloruro 6-hidrato
0,1%. Disolver 0,1 g de Hierro III Cloruro 6-hidrato PRS en Agua PA-ACS y diluir a 100 ml. Esta
solucin debe utilizarse recin preparada. 19.3.7.
Solucin de Potasio Hexacianoferrato II 0,05
mg/ml. Pesar 0,1147 g de Potasio Hexacianoferrato II 3-hidrato PA-ACS y diluir a 1 litro con Agua
PA-ACS. Diluir 50 ml de esta solucin a 100 ml en
matraces aforados. Cada ml contiene 0,05 mg de
Potasio Hexacianoferrato II anhidro. Debido a que
este reactivo se oxida fcilmente con el aire se
debe utilizar inmediatamente despus de su preparacin.
19.4. Procedimiento.
19.4.1. Preparacin de la curva de referencia.
Pipetear 0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5;
4,0 ml de la solucin de Potasio Hexacianoferrato (0,05 mg/ml) en tubos de ensayo. Aadir
Agua PA-ACS hasta un volumen total de 5 ml. A
todos los tubos se les aade 5 ml de la "solucin blanco" preparada como se describe a
continuacin:
Diluir 3 ml de la solucin de Urea PA a 15 ml
con Agua PA-ACS en un tubo de centrfuga, aadir 5 ml de la solucin tampn, 5 ml de la solucin
Potasio Hexacianoferrato III y 5 ml de la solucin
de Acido Tricloroactico. Mezclar bien con una
varilla de vidrio (La "solucin blanco" no necesita
ser calentada, ni filtrada para la curva de referencia. Sin embargo, cuando analizan las muestras,
el blanco se calienta y se filtra igual que en las
condiciones del ensayo).
A intervalos convenientes aadir 1 ml de la
solucin de Hierro III Cloruro 0,1%, para desarrollar el color, agitar y dejar en reposo exactamente
durante 10 minutos. Ajustar el 100% de transmitancia con la solucin control (0,0* ml de disolucin de Potasio Hexacianoferrato II) a 610 nm.
Leer a continuacin en transmitancia las distintas
preparaciones de las soluciones patrones y representar los valores obtenidos frente a concentraciones en mg de Potasio Hexacianoferrato II en
39
19.6. Observaciones.
Los anlisis deben terminarse el mismo da que
se comiencen. Es importante que las muestras no
permanezcan demasiado tiempo despus de enfriamiento o despus de la filtracin. Durante la determinacin el laboratorio debe estar libre de vapores
oxidantes o reductores (H2S, Cl2, NHO3, etc.).
19.7. Referencia.
19.7.1. "Official Methods of Analysis of The
AOAC" Ed. 1975, N 16.047-16.050.
20. RESIDUO INSOLUBLE DE SANGRE
(B.O.E. 20-1-1982)
20.1. Principio.
Mediante dilucin de la sangre en suero fisiolgico, posterior filtracin y desecacin se obtiene
el residuo insoluble, cuyo porcentaje se determina
por pesada.
Este mtodo es aplicable a leches en polvo,
que pueden contener harina de sangre de las
denominadas comercialmente solubles.
20.2. Material y aparatos.
20.2.1. Embudo cilndrico esmerilado con
placa filtrante, soldada al mismo de 65 mm de
dimetro y porosidad 1. Su peso debe ser inferior
al lmite mximo de pesada de las balanzas analticas, lo que normalmente se consigue con una
altura del cilindro igual o inferior a 4 cm.
20.2.2. Agitador electromagntico.
20.2.3. Estufa de desecacin.
20.3. Reactivos.
131007 Acetona PA-ACS-ISO
131020 Acido Clorhdrico 37% PA-ACS-ISO
131074 Agua PA-ACS
141076 Hidrgeno Perxido 30% p/v (100 vol.)
PRS
131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO
20.3.1. Suero Salino Fisiolgico. Se obtiene
disolviendo 9 g de Sodio Cloruro PA-ACS-ISO en
1.000 ml de Agua PA-ACS.
20.3.2. Acetona PA-ACS-ISO.
20.3.3. Hidrgeno Perxido 30% p/v (100 vol.)
PRS.
20.3.4. Acido Clorhdrico 37% PA-ACS-ISO.
40
20.4. Procedimiento.
20.4.1. Tomar aproximadamente un gramo de
muestra, medida con la precisin del miligramo, y
diluir en un vaso de precipitados de 250 ml con
50 ml de Suero Salino Fisiolgico agitando con un
agitador electromagntico durante cinco minutos.
A continuacin verter y filtrar el lquido poco a
poco en el embudo cilndrico con placa filtrante,
M
21.2.6. Material de uso corriente en laboratorio
de pipetas, tubos, micropipetas, etc.
21.3. Reactivos.
131008 Acido Actico glacial PA-ACS
181009 Acido Actico 1 mol/l (1N) SV
181021 Acido Clorhdrico 1 mol/l (1N) SV
253309 Acrilamida DC
131074 Agua PA-ACS
131138 Amonio Peroxodisulfato PA
171165 Azul de Bromofenol RE-ACS
131340 Glicina PA
131091 Metanol PA-ACS-ISO
252036 Negro Amido 10B DC
181691 Sodio Hidrxido 1 mol/l (1N) indicador:
Azul de Bromofenol SV
131940 Tris (Hidroximetil) Aminometano
PA-ACS
131754 Urea PA
21.3.1. Acido Actico 1 mol/l (1N) SV o diluir
Acido Actico glacial PA-ACS en Agua PA-ACS
hasta la concentracin indicada.
21.3.2. Sodio Hidrxido 1 mol/l (1N) indicador:
Azul de Bromofenol SV.
21.3.3. Solucin de urea 7M. Disolver Urea PA
en Agua PA-ACS y diluir hasta la concentracin
indicada.
21.3.4. Solucin A. Tampn pH 8,9. Disolver
48 ml de Acido Clorhdrico 1 mol/l (1N) SV, 36,3 g
de Tris (Hidroximetil) Aminometano PA-ACS y 0,46
ml de TEMED en Agua PA-ACS hasta 100 ml.
21.3.5. Solucin B de Acrilamina. Disolver 60 g
de Acrilamida DC y 1,6 g de NN' Metilenbisacrilamida (Bis) en Agua PA-ACS hasta 200 ml.
21.3.6. Solucin tampn para depsitos de los
electrodos pH 8,4. Disolver 0,60 g de Tris (Hidroximetil) Aminometano PA-ACS y 2,88 g de Glicina
PA en Agua PA-ACS hasta 100 ml. Se puede preparar un tampn concentrado 10 veces y guardar
en nevera diluyndolo en el momento de su utilizacin.
21.3.7. Solucin de Amonio Peroxodisulfato.
Disolver 0,56 g de Amonio Peroxodisulfato PA en
Agua PA-ACS hasta 100 ml. Este reactivo debe
prepararse nuevo cada semana.
21.3.8. Solucin de tincin. Disolver 0,56 g de
Negro Amido 10B DC en una mezcla de 250 ml de
Metanol PA-ACS-ISO, 650 ml de Agua PA-ACS y
100 ml de Acido Actico glacial PA-ACS.
21.3.9. Solucin de lavado. Mezclar 400 ml de
Metanol PA-ACS-ISO, 50 ml de Acido Actico glacial PA-ACS y 550 ml de Agua PA-ACS.
21.3.10. Solucin de Azul de Bromofenol RE.
Disolver 1 mg de 171165 Azul de Bromofenol REACS en 100 ml de 131074 Agua PA-ACS.
21.4. Procedimiento.
21.4.1. Preparacin de la muestra: Diluir la
41
21.5. Clculos.
21.5.1. Identificacin de las bandas: El diagrama electrofortico de las casenas de leche de
oveja contiene dos grupos de bandas de protenas. El primer grupo, de dos bandas, corresponde a las b casenas, y el segundo, consistente en
tres bandas, a las aS casenas, que se designan
como aS1, aS2 y aS3.
La leche de vaca se puede detectar en mezclas
con leche de oveja o cabra, debido a la mayor
migracin eletrofortica de la casena aS1 de vaca,
que se hace visible por encima de las bandas de
casena de oveja o cabra.
La intensidad de la banda aS1 de vaca aumenta cuando es mayor el porcentaje de mezcla.
21.5.2. Determinacin cuantitativa: La determinacin cuantitativa de la proporcin de leche de
vaca aadida a la leche de oveja o cabra se puede
realizar por el anlisis densitomtrico de las bandas obtenidas en las electroforesis, midiendo en la
mezcla el contenido de casena aS1 de leche de
vaca y comparando este valor con el contenido
medio de casena aS de leche de vaca pura. Es
necesario efectuar una curva patrn.
21.5.3. Lmite de deteccin: La tcnica descrita permite detectar un 2% de leche de vaca en
leche de oveja o en leche de cabra.
21.6. Observaciones.
21.6.1. La electroforesis en gel de acrilamida
se puede efectuar tambin en un equipo para
electroforesis en gel plano.
21.6.2. Todas las soluciones se deben preparar
con agua destilada reciente o hervida, ya que el
oxgeno inhibe la polimerizacin y se pueden formar burbujas en el gel.
21.6.3. Todas las soluciones se deben almacenar en botellas oscuras en el frigorfico.
21.6.4. La acrilamida es neurotxica, por lo
que se debe manejar con cuidado.
21.7. Bibliografa.
21.7.1. Pierre, A., y Portmann, A., 1970. Ann
Teechnol. Ag. 19, 107-130.
21.7.2. Ramos, M.: Martnez-Castro, I., y Jurez, M. 1977. J. of Dairy Sci. 60, 870-877.
21.7.3. Adroid, P. (1968) "Separation of milk
proteins", en Smith "Chromatographic and electrophoretic tecniques". Vol. II, pg. 399. William
Heineimann Medical Books, Ltd. London.
42
Siendo:
S = Porcentaje de sangre soluble presente en
la muestra.
A = Absorbancia leda de la muestra.
P = Peso en gramos de la leche o suero de
leche en polvo.
E 11 = Absorbancia especfica de la sangre.
22.6. Observaciones.
22.6.1. En el caso de disponer de la harina de
sangre utilizada como desnaturalizante, el valor de
E1 se obtendr como se indica a continuacin:
Pesar con precisin de 0,0001 g 100 mg de harina de sangre, e introducirla en un vaso de precipitados de 250 ml. Aadir 150 ml de Agua PA-ACS,
agitar durante cinco minutos la solucin, transferir
M
a un matraz aforado de 250 ml. A continuacin,
tomar 20 ml de esta solucin, llevar a un matraz
aforado de 100 ml y enrasar con la mezcla de
cido actico glacial-agua. Centrifugar 10 ml de
esta solucin y medir su absorbancia en cubeta
de 1 cm a 396 nanmetros usando como blanco
la solucin actico-agua.
1
1
A
= 12,5 x
P
Siendo:
E 11 = Absorbancia especfica.
A = Absorbancia leda.
P = Peso en gramos de la harina de sangre.
1
La absorbancia especfica E 1 no deber ser
inferior a 50. En caso contrario, la harina de sangre no debe ser utilizada como desnaturalizante.
22.6.2. Si no se ha podido determinar este
valor previamente a la adicin de la harina de sangre a la leche o suero se tomar como valor medio
1
de referencia E 1 = 52,4.
23(a). DETERMINACION DE LECHE DE
VACA EN LECHE DE OVEJA O DE
CABRA
(Por electroforesis)
23(a).1. Principio.
La fraccin srica de la muestra se extrae por
adicin de solucin tampn a pH 4,6 y posterior
centrifugacin. Las protenas de suero son separadas por electroforesis en gel de poliacrilamida a
pH 8,3.
Las b lactoglobulinas de leche de vaca presentan una mayor movilidad electrofortica que las a
lactoalbminas y las b lactoglobulinas de la leche
de oveja y de la leche de cabra. El mtodo es aplicable a la leche cruda o pasterizada a una temperatura mxima de 90C, durante treinta segundos,
fresca o conservada mediante congelacin o adicin de dicromato potsico.
23(a).2. Material y aparatos.
23(a).2.1. Material de uso corriente en laboratorio.
23(a).2.2. Microjeringa.
23(a).2.3. pHmetro.
23(a).2.4. Centrfuga.
23(a).2.5. Equipo de electroforesis.
23(a).2.6. Fuente de alimentacin.
23(a).2.7. Densitmetro.
23(a).3. Reactivos
131008 Acido Actico glacial PA-ACS
131019 Acido Clorhdrico 35% PA-ISO
43
44
23(a).4. Procedimiento.
23(a).4.1. Obtencin de la fraccin soluble a pH
4,6. Aadir a 10 ml de leche 5 ml de solucin de
Acido Actico glacial PA-ACS al 10% y 5 ml de
solucin de Sodio Acetato 1 mol/l (1M) RE, mezclar
y comprobar con pHmetro que el pH de la mezcla
es exactamente 4,6. Centrifugar a 3.000 r.p.m.
durante diez minutos y filtrar el sobrenadante a travs de un papel de filtro de velocidad media.
23(a).4.2. Preparacin de la curva patrn.
Dependiendo del tipo de muestra que desee analizar, preparar patrones puros de leche de oveja o
de leche de cabra y de leche de vaca y mezclas
de leche de vaca en leche de oveja o de leche de
vaca en leche de cabra en concentraciones del
5%, 10% y 20%. La leche utilizada para la preparacin de estos patrones podr ser cruda o pasterizada, en este ltimo caso la leche deber ser
pasterizada a una temperatura mxima de 74C
durante un tiempo mximo de treinta segundos.
La fraccin soluble de los patrones se obtiene
siguiendo el procedimiento descrito en 23(a).4.1.
23(a).4.3. Inmediatamente antes de su aplicacin en el gel mezclar:
M
+
F
E
D
C
B
A
1
BSA
obtenido para la muestra.
23(a).6. Expresin de los resultados.
45
46
23(b).4. Procedimiento.
23(b).4.1. Obtencin de la fraccin srica. Aadir a 10 ml de leche una gota de cuajo de ttulo
1/10.000 (23(b).3.1.), mezclar, incubar a 37C
durante cinco a diez minutos y centrifugar a 3.000
r.p.m. durante diez minutos. Tomar con cuidado el
lactosuero evitando arrastrar materia grasa.
23(b).4.2. Preparacin de la curva patrn. Preparar mezclas de leche de vaca en leche de oveja
o en leche de cabra a concentraciones del 2%,
5%, 10% y 20%. La fraccin srica de los patrones se obtiene siguiendo el procedimiento descrito en 23(b).4.1.
23(b).4.3. Inmunodifusin. Depositar con la
ayuda de una microjeringa, 10 ml de la fraccin
srica preparada segn 23(b).4.1. de cada uno de
los patrones y de la muestra a analizar en los pocillos de una misma placa. Dejar difundir de doce a
veinticuatro horas a 37C en una cmara hmeda
(estufa hermtica regulada a 37C en cuyo fondo
se coloca un pliego de papel de filtro humedecido
con agua). Para una valoracin rpida, transcurrido este tiempo, se puede proceder a la lectura
segn 23(b).4.5.
23(b).4.4 Tratamiento de la placa. Lavar la
placa dentro de la solucin de Sodio Cloruro al
9/1000 (23(b).3.2.) bajo agitacin durante ocho a
doce horas.
Llenar la placa con la solucin acuosa de Glicerina al 5% (V/V) (23(b).3.3.) y mantenerla llena diez
minutos. Depositar en la superficie de la solucin
un disco de papel de filtro del mismo dimetro que
el de la placa, dejndolo deslizar hasta el fondo.
Mantener el disco de papel de filtro contra el agar
mientras se elimina la solucin de Glicerina. Verificar que no haya presencia de burbujas de aire.
Dejar secar veinticuatro horas o acelerar el proceso con la ayuda de un secador de aire, manteniendo la distancia que permita no sobrepasar los
45C a 50C al nivel de la placa.
Cuando la placa est perfectamente seca,
recubrirla con agua durante algunos minutos para
permitir que el papel de filtro se despegue progresivamente. Una vez despegado, retirarlo con unas
pinzas. Teir durante quince minutos, con la solucin de tincin 23(b).3.5. Lavar, durante unos
minutos cada vez, tres o cuatro veces, con la
solucin de Acido Actico glacial al 2%
(23(b).3.4.) para eliminar el fondo. Enjuagar durante cinco minutos en la solucin actica de Glicerina (23(b).3.6.). Vaciar y dejar secar.
23(b).4.5. Lectura de los resultados. Medir los
dimetros de los halos con la ayuda de un doble
decmetro graduado al medio milmetro o mejor
con una lupa equipada con micrmetro o con un
retroproyector.
23(b).5. Interpretacin de los resultados.
23(b).5.1. Curva de calibrado. En un papel milimetrado trazar la curva, llevando en ordenadas los
dimetros de los halos obtenidos con las mezclas
preparadas para la curva patrn y en abcisas las
races cuadradas de las concentraciones en leche
de vaca.
23(b).5.2. Determinacin del porcentaje de
leche de vaca en la muestra. Llevar sobre la curva
de calibrado el dimetro medido para la muestra.
Elevar al cuadrado el dato obtenido para expresar
el resultado en porcentaje de leche de vaca.
M
23(b).5.3. Lmite de deteccin. La tcnica descrita permite detectar un 1% de leche de vaca en
leche de oveja o en leche de cabra.
23(b).6. Observaciones.
23(b).6.1. Una reaccin negativa debe obligatoriamente ser confirmada por la tcnica electrofortica de las casenas (21. Deteccin de leche
de vaca en mezclas con leche de oveja y cabra).
23(b).6.2. En el caso de una reaccin positiva, se
tendr en cuenta que el resultado obtenido puede
ser inferior al valor real, dado el efecto de un tratamiento trmico efectuado en condiciones de
temperatura y/o de tiempo superiores a los fijados
en 23(b).1.
23(b).7. Referencia.
23(b).7.1. Journal Officiel de la Republique
Franaise (1 de junio de 1978).
D
C
B
A
BSA
obtenido por la muestra.
24(a).6. Expresin de los resultados.
Expresar el contenido en leche de cabra segn
los siguientes intervalos:
-Menor del 5 por 100.
-Entre el 5 y el 10 por 100.
47
48
M
25.2.2. c) Detector ultravioleta que permita
efectuar lecturas a 205 nm.
25.2.2. d) Integrador que pueda integrar de
valle a valle.
25.3. Reactivos
131881 Acetonitrilo PA
131032 Acido orto-Fosfrico PA-ACS-ISO
131067 Acido Tricloroactico PA-ACS
131074 Agua PA-ACS
131512 di-Potasio Hidrgeno Fosfato anhidro
PA
131509 Potasio di-Hidrgeno Fosfato PA
131515 Potasio Hidrxido lentejas PA
131716 Sodio Sulfato PA
25.3.1. Solucin de Acido Tricloroactico.
Disolver 240 g de Acido Tricloroactico PAACS en agua PA-ACS hasta 1.000 ml.
25.3.2. Solucin eluyente pH 6,0.
Disolver 1,74 g de di-Potasio Hidrgeno Fosfato anhidro PA, 12,37 de Potasio di-Hidrgeno
Fosfato PA y 21,41 g de Sodio Sulfato anhidro PA
en 700 ml de agua aproximadamente.
Ajustar, si es necesario, a pH 6,0 con ayuda de
una solucin de cido fosfrico o de hidrxido
potsico. Completar hasta 1.000 ml con agua y
homogeneizar.
En caso de utilizar una columna diferente a la
TSK 2000 SW emplear una solucin eluyente adecuada.
Esta solucin se debe filtrar antes de su utilizacin a travs de una membrana filtrante de
0,45 mm de dimetro de poro.
25.3.3. Solucin de lavado y de conservacin
de columnas.
Mezclar un volumen de acetonitrilo en nueve
volmenes de agua.
Filtrar la mezcla, antes de su utilizacin, a travs de una membrana filtrante de 0,45 mm de dimetro de poro.
Puede utilizarse cualquier otra solucin de lavado que tenga efecto bactericida y que no altere la
eficacia de resolucin de las columnas.
25.3.4. Muestras patrn.
25.3.4. a) Leche desnatada en polvo que responda a las exigencias del Reglamento CEE
nmero 625/78, exenta de suero de quesera.
25.3.4. b) La misma leche anterior adicionada
con un 5 por 100 m/m de suero de quesera de
composicin media.
25.4. Procedimiento.
25.4.1. Preparacin de la muestra.
25.4.1. a) Leche en polvo.
Trasvasar la leche en polvo a un recipiente de
capacidad aproximadamente doble del volumen
de sta, provisto de cierre hermtico. Cerrar el
recipiente inmediatamente y mezclar bien.
49
donde:
R: es el coeficiente de respuesta.
A(5): es el rea del pico III obtenido en el anlisis cromatogrfico del patrn de leche en polvo
adicionada con 5 por 100 (m/m) de suero de quesera 25.3.4.b.
A(0): es el rea del pico III, obtenido en el anlisis cromatogrfico del patrn de leche en polvo
exenta de suero de quesera 25.3.4.a.
P: es el porcentaje de suero de quesera presente en el patrn 25.3.4.b, en este caso 5.
25.5.3. Clculo del rea relativa del pico III obtenido en el anlisis cromatogrfico de la muestra (E).
S(E) = R x A(E)
donde:
S(E): rea relativa del pico III en la muestra (E).
A(E): rea correspondiente al pico III obtenida
en el anlisis cromatogrfico de la muestra.
R: Coeficiente de respuesta calculado segn
(25.5.2.).
25.5.4. Clculo del rea relativa del pico III
obtenido en el anlisis cromatogrfico del patrn
de leche en polvo exento de suero de quesera
(25.3.4.a).
S(O) = R x A(O)
donde:
S(O): rea relativa del pico III en el patrn de
leche en polvo exenta de suero de quesera
(25.3.4.a).
A(O): rea correspondiente al pico III obtenido
en el anlisis cromatogrfico del patrn de leche
en polvo exenta de suero de quesera (25.3.4.a).
R: coeficiente de respuesta calculado segn
(25.5.2.).
25.5.5. Clculo del tiempo de retencin relativo
del pico III en la muestra (E).
TR(E)
TRR(E) =
TR(5)
50
donde:
TRR(E): tiempo de retencin relativo del pico III
de la muestra (E).
TR(E): tiempo de retencin del pico III obtenido
en el anlisis cromatogrfico de la muestra (E).
TR(5): tiempo de retencin del pico III obtenido
en el anlisis cromatogrfico del patrn de leche
en polvo adicionada con 5 por 100 (m/m) de suero
de quesera (25.3.4.b).
25.5.6. Por la experimentacin, est demostrado que existe una relacin lineal entre el tiempo
relativo del pico III en la muestra y el porcentaje de
suero de quesera en polvo aadido hasta el 10
por 100:
-Con un contenido < 5 por 100, el TRR(E) es
> 1,000.
-Con un contenido 5 por 100, el TRR(E) es
1,000.
INYECCION
INYECCION
FIGURA 1
FIGURA 2
51
M
METODOS DE ANALISIS (B.O.E. 4-2-1989)
0. PREPARACION DE LA MUESTRA
PARA EL ANALISIS QUIMICO Y
CONSIDERACIONES GENERALES
0.1. Preparacin de la muestra:
0.1.1. Leche evaporada rica en grasa.
Leche evaporada entera o leche evaporada.
Leche evaporada semidesnatada o parcialmente desnatada.
Leche evaporada desnatada.
Agitar el bote cerrado dndole la vuelta. Abrir el
bote y transvasar la leche lentamente a un segundo recipiente que pueda cerrarse hermticamente, mezclndola mediante sucesivos transvases;
asegrese de que todos los restos de grasa y de
leche adheridos al casco y al fondo del bote se
han mezclado con la muestra. Cierre el recipiente.
Si el contenido no apareciera homogneo, pngalo a calentar al bao Mara a 40C. Agitar vigorosamente cada 15 minutos. Dos horas ms tarde,
saque el recipiente del bao Mara y deje que se
enfre a temperatura ambiente. Levante la tapa y
mezcle cuidadosamente el contenido con la
ayuda de una cuchara o de una esptula (si la
grasa se ha desemulsionado no es conveniente
proceder al anlisis de la muestra). Consrvese en
lugar fresco.
0.1.2. Leche condensada o leche entera condensada.
Leche condensada semidesnatada.
Leche condensada desnatada.
Botes:
Calentar el bote cerrado al bao Mara de 30 a
40C durante unos treinta minutos. Abrir el bote y
mezclar cuidadosamente su contenido con una
esptula o con una cuchara, efectuando movimientos ascendentes, descendentes y circulares,
con el fin de obtener una ntima mezcla de las
capas superiores e inferiores con el conjunto del
contenido. Asegurarse de que los restos de leche
adheridos al casco y al fondo del bote se han
mezclado con la muestra. Siempre que sea posible, transvasar el contenido a un segundo recipiente dotado de un sistema de cierre estanco.
Cerrar el recipiente y conservar en lugar fresco.
Tubos:
Cortar el fondo y transvasar el contenido a un
recipiente dotado de cierre estanco. Despus cortar el tubo en el sentido de su longitud, despegar
todas las materias adheridas al interior del tubo y
mezclarlas cuidadosamente con el resto del contenido. Conservar el recipiente en lugar fresco.
0.1.3. Leche en polvo rica en grasa o extragrasa.
Leche en polvo entera o leche entera en polvo.
Leche en polvo parcialmente desnatada o
semidesnatada.
53
54
1.3. Reactivos.
131019 Acido Clorhdrico 35% PA-ISO
131074 Agua PA-ACS
211160 Arena de Mar lavada, grano fino QP
Arena de cuarzo o Arena de Mar lavada gr. fino
QP (tamao de los granos: 0,18-0,5 mm, tratada
con Acido Clorhdrico 35% PA-ISO, pasada a tra-
M
1.5. Clculos.
El contenido en extracto seco, expresado en
porcentaje de la masa de muestra, se indica
segn la frmula:
M2 - M0
x 100
M1 - M0
en donde:
M0 = masa, en gramos, de la cpsula, de su
tapa, de la arena y de la varilla tras la operacin
del punto 1.4.3.
M1 = masa, en gramos, de la tapa, de la cpsula, de la arena, de la varilla y de la muestra tras
la operacin del punto 1.4.4.
M2 = masa, en gramos, de la tapa, de la cpsula, de la arena, de la varilla y de la muestra
desecada, tras la operacin del punto 1.4.11.
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas, efectuadas simultnea o
inmediatamente una despus de otra por el
mismo analista de la misma muestra y en las mismas condiciones, no ha de exceder 0,2 gramos
de extracto seco por 100 gramos de producto.
1.5.1. Clculo del contenido en extracto seco
total y del contenido en extracto seco no graso en
la leche.
El contenido en extracto seco lcteo de los distintos tipos de leche condensada viene dado por
a - b, siendo:
a = el contenido en extracto seco total (obtenido segn el mtodo 1).
b = el contenido en sacarosa (obtenido segn
el mtodo 5).
El contenido en extracto seco lcteo no graso,
de los distintos tipos de leche condensada viene
dado por a-b-c, siendo:
a = el contenido en extracto seco total (obtenido segn el mtodo 1).
b = el contenido en sacarosa (obtenido segn
el mtodo 5).
c = el contenido en materia grasa (obtenido
segn el mtodo 3).
El contenido en extracto seco no graso de los
distintos tipos de leche evaporada y concentrada
viene dado por a - c, siendo:
a = el contenido en extracto seco total (obtenido segn el mtodo 1).
c = el contenido en materia grasa (obtenido
segn el mtodo 3).
1.6. Referencias.
Primera Directiva de la Comisin de 13 de
Noviembre de 1979 (79/1067/CEE); "Diario Oficial
de las Comunidades Europeas" nmero L 327/29,
de 24 de Diciembre.
METODO 2: HUMEDAD
(Estufa)
2.1. Principio.
Se entiende por humedad la prdida de masa
durante el proceso de desecacin determinado
por el mtodo descrito a continuacin.
La masa residual de la muestra se determina
tras desecacin a presin atmosfrica en una
estufa a 102 1C hasta obtencin de una masa
constante. La prdida de masa se calcula en porcentaje de la masa de muestra.
Este mtodo permite determinar la prdida de
masa durante el proceso de desecado de los
tipos de leche citados a continuacin:
Leche en polvo rica en grasas o extragrasa.
Leche en polvo entera o leche entera en polvo.
Leche en polvo parcialmente desnatada o
semidesnatada.
Leche en polvo desnatada o leche desnatada
en polvo.
2.2. Material y aparatos.
2.2.1. Balanza analtica.
2.2.2. Cpsulas, preferentemente de vidrio, de
nquel, de aluminio o de acero inoxidable.
Las cpsulas han de estar dotadas de tapas
que se adapten perfectamente pero que puedan
ser fcilmente levantadas.
Las dimensiones ms idneas son: Dimetro,
de 60 a 80 ml; profundidad, de unos 25 cm.
2.2.3. Estufa a presin atmosfrica, bien ventilada y controlada por termostato, con la temperatura regulada a 102 1C. Es muy importante que
la temperatura del conjunto de la estufa sea uniforme.
2.2.4. Desecador, lleno con gel de slice activado recientemente o de un desecante equivalente.
2.2.5. Frascos provistos de tapones hermticos para el mezclado de la leche en polvo.
2.3. Procedimiento
2.3.1. Quitar la tapa de la cpsula (punto
2.2.2.) y colocar tapa y cpsula en la estufa (punto
2.2.3.) durante una hora.
2.3.2. Volver a poner la tapa, transferir la cpsula al desecador (punto 2.2.4.) y dejar enfriar
hasta alcanzar la temperatura ambiente; pesar
con una precisin de 0,1 mg (M0).
2.3.3. Colocar en la cpsula unos dos gramos
de muestra de leche en polvo, poner la tapa sobre
la cpsula y proceder rpidamente a pesar la cpsula equipada de su tapa con una precisin de
0,1 mg (M1).
2.3.4. Retirar la tapa y colocar cpsula y tapa
durante dos horas en la estufa.
2.3.5. Poner de nuevo la tapa, transferir la cpsula tapada al desecador y dejar enfriar hasta
55
alcanzar la temperatura ambiente; pesar rpidamente con una precisin de 0,1 mg.
2.3.6. Destapar la cpsula y calentar, junto con
su tapa, durante una hora en la estufa.
2.3.7. Repita la operacin del punto 2.3.5.
2.3.8. Repetir las operaciones de los puntos
2.3.6. y 2.3.5. hasta que dos pesadas no difieran
en ms de 0,5 mg o aumente la masa. En el punto
2.4. utilizar la pesada ms baja (M 2).
2.4. Clculos
Calcular la prdida de masa de la muestra
durante el proceso de desecacin, expresada en
porcentaje de la masa, utilizando la frmula:
M1 - M2
x 100
M1 - M0
en donde
M0 = masa, en gramos, de la cpsula y de su
tapa, tras la operacin del punto 2.3.2.
M1 = masa, en gramos, de la cpsula, de su
tapa y de la muestra, tras la operacin del punto
2.3.3.
M2 = masa, en gramos, de la cpsula, de la
tapa y de la muestra final, tras la operacin del
punto 2.3.5.
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas, efectuadas simultneamente o inmediatamente una despus de la otra por el
mismo analista de la misma muestra y en las mismas condiciones, no ha de exceder 0,1 g de agua
por 100 g de producto.
2.5. Referencias.
Primera Directiva de la Comisin de 13 de
Noviembre de 1979 (79/1067/CEE); "Diario Oficial
de las Comunidades Europeas" nmero L 327/29,
de 24 de Diciembre).
METODO 3: MATERIA GRASA
(Mtodo Rose-Gottlieb)
56
3.1. Principio.
Se entiende por contenido en materia grasa de
los distintos tipos de leche evaporada, leche concentrada o de leche condensada, al contenido en
materia grasa determinado por el mtodo descrito a continuacin.
El contenido en materia grasa se determina por
extraccin de la materia grasa de una solucin
amoniacal-alcohlica de la muestra con ayuda de
Eter Etlico y de Eter de Petrleo, evaporacin de
los disolventes, pesada de los residuos y clculo
en porcentaje de la muestra, segn el mtodo
Rose-Gottlieb.
Este mtodo permite determinar el contenido
en materia grasa de los siguientes tipos de leche:
Agua PA-ACS
Amonaco 25% (en NH 3) PA
Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO
Etanol 96% v/v PA
Eter Ditlico estabilizado con 6 ppm
de BHT PA-ACS
131315 Eter Petrleo 40-60C PA-ISO
131542 Potasio Yoduro PA-ISO
M
Dietlico contenidos en una pequea probeta con
tapn, de vidrio, enjuagada previamente con un
poco de Eter Dietlico, 1 ml de una solucin con
un 10% de Potasio Yoduro PA-ISO, recientemente preparada. Agitar y dejar reposar durante un
minuto. No ha de aparecer coloracin amarilla
alguna en ninguna de las dos capas.
Nota 2: Eter Ditlico estabilizado con ~ 6 ppm
de BHT PA-ACS puede ser mantenido exento de
perxidos adicionando una hoja de cinc hmeda
previamente sumergida durante un minuto en una
solucin cida diluida de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO y posteriormente lavada con Agua
PA-ACS. Para un litro de Eter Dietlico, utilizar
unos 8.000 mm cuadrados de hoja de cinc, cortada en bandas suficientemente largas para llegar
a la mitad del recipiente, como mnimo.
3.3.4. Eter de Petrleo, de punto de ebullicin
entre 30 y 60C. En su defecto usar Eter Petrleo
40-60C PA-ISO.
3.3.5. Mezcla de disolventes, preparada inmediatamente antes de su empleo y mediante la
mezcla de igual volumen de Eter Dietlico (punto
3.3.3.) y de Eter de Petrleo (punto 3.3.4.). (Se
puede sustituir la mezcla de disolventes, siempre
que sea indicado, por el Eter Dietlico o por el Eter
de Petrleo).
3.4. Procedimiento.
3.4.1. Prueba en blanco:
Al tiempo que se efecta la determinacin de la
materia grasa de la muestra, efectuar una prueba
en blanco con 10 ml de Agua PA-ACS utilizando
el mismo tipo de aparato de extraccin, los mismos reactivos en las mismas proporciones y el
mismo procedimiento que el descrito a continuacin, salvo el punto 3.4.2.2. Si el valor de la prueba en blanco es superior a 0,5 mg, habr que
comprobar la pureza de los reactivos y en el caso
de que sean impuros habrn de ser purificados o
sustituidos.
3.4.2. Determinacin:
3.4.2.1. Secar el matraz (punto 3.2.3.) despus
de haber depositado los grnulos (punto 3.2.5.),
para facilitar una ebullicin moderada durante la
evaporacin de los disolventes en la estufa (punto
3.2.4.) durante una media hora a una hora. Dejar
enfriar el matraz hasta que adquiera la temperatura ambiente y pesar el matraz ya enfriado, con una
precisin de 0,1 mg.
3.4.2.2. Agitar la muestra preparada de 5 grs.
y pesar inmediatamente despus con una precisin de 1 mg, directamente o por diferencia, 4 grs.
de leche evaporada o de leche concentrada o 2 a
2,5 g de leche condensada en el tubo de extraccin (punto 3.2.2.). Aadir agua hasta un volumen
de 10,5 ml y agitar suavemente calentando al
mismo tiempo ligeramente (40 a 50C), hasta la
total dispersin del producto. La muestra ha de
57
3.4.2.11. Efectuar una tercera extraccin procediendo tal como se indica en el punto 2.4.2.10,
pero sin realizar el enjuague final (punto 3.4.2.9.).
Nota: En el caso de la leche desnatada evaporada, de la leche desnatada concentrada y de la
leche desnatada condensada, no es necesario
efectuar esta tercera extraccin.
3.4.2.12. Eliminar con cuidado por evaporacin
o destilacin el mximo de disolvente (incluido el
Etanol). Si el matraz fuera de pequea capacidad,
habr que eliminar un poco de disolvente de la
manera anteriormente indicada tras cada extraccin.
3.4.2.13. Cuando ya no exista olor alguno de
disolvente, calentar el matraz inclinado, durante
una hora, en la estufa.
3.4.2.14. Retirar el matraz de la estufa, dejar
enfriar hasta que adquiera la temperatura ambiente y pesar con precisin de 0,1 mg.
3.4.2.15. Repetir las operaciones de los puntos
3.4.2.13. y 3.4.2.14. calentando a intervalos de
treinta a sesenta minutos hasta que dos pesadas
consecutivas no difieran en ms de 0,5 mg o que
aumente la masa. En el punto 3.5. utilizar la pesada tomando el valor ms bajo (M 1).
3.4.2.16. Aadir de 15 a 25 ml de Eter de
Petrleo para verificar si la materia extrada es
totalmente soluble. Calentar ligeramente y agitar
el disolvente mediante un movimiento circular
hasta que se disuelva toda la materia grasa.
3.4.2.16.1. Si la materia extrada es totalmente
soluble en Eter de Petrleo, la masa de materia
grasa es la diferencia entre la pesada del punto
3.4.2.1. y la pesada del punto 3.4.2.15.
3.4.2.16.2. Si aparecieran materias insolubles
o siempre en caso de duda, extraer completamente la materia grasa contenida en los matraces
mediante repetidos lavados con Eter de Petrleo
caliente, dejando que la materia no disuelta se
deposite antes de cada decantacin. Enjuagar
tres veces el exterior del cuello del matraz. Calentar el matraz inclinado, durante una hora, en la
estufa y dejar enfriar tal como se indic anteriormente (punto 3.4.2.1.) hasta que adquiera la temperatura ambiente; pesar con una precisin de
0,1 mg. La masa de la materia grasa es la diferencia entre la pesada del punto 3.4.2.15. y esta
pesada final.
58
3.5. Clculos.
La masa expresada en gramos de la materia
grasa extrada viene dada por la siguiente frmula:
(M1 - M2) - (B1 - B2)
y el contenido en materia grasa de la muestra,
expresado en porcentaje, por la frmula:
M
4.2.2. Tubos de extraccin apropiados, dotados de tapones de vidrio esmerilado o de otro tipo
de cierre insensible a la accin de los disolventes
empleados.
4.2.3. Matraces de fondo plano y pared delgada, de 150 a 250 ml de capacidad.
4.2.4. Estufa de desecacin a presin atmosfrica, bien ventilada, controlada por termostato
(temperatura a 102 1C).
4.2.5. Grnulos destinados a facilitar la ebullicin, exentos de materia grasa, no porosos, no
desmenuzables, como por ejemplo perlas de
vidrio trocitos de carburo de silicio (el empleo de
estos grnulos es facultativo; ver al respecto el
punto 4.4.2.1.).
4.2.6. Bao de agua a 60-70C.
4.2.7. Sifn correspondiente a los tubos de
extraccin.
4.2.8. Centrfuga.
4.3. Reactivos.
131074 Agua PA-ACS
131129 Amonaco 25% (en NH3) PA
131085 Etanol 96% v/v PA
132770 Eter Ditlico estabilizado con ~ 6 ppm
de BHT PA-ACS
131315 Eter Petrleo 40-60C PA-ISO
131542 Potasio Yoduro PA-ISO
Todos los reactivos han de conformarse con las
condiciones requeridas en la prueba en blanco
(punto 4.4.1.). Llegado el caso, podrn destilarse
de nuevo los reactivos en presencia de 1 g de
grasa de mantequilla por 100 ml de disolvente.
4.3.1. Solucin de Amonaco 25% (en NH 3) PA
(densidad a 20C, unos 0,91 g/ml) una solucin
ms concentrada de una concentracin conocida.
4.3.2. Etanol 96% v/v PA o, en su ausencia,
153973 Etanol 96 totalmente desnaturalizado
PR.
4.3.3. Eter Ditlico estabilizado con ~ 6 ppm
de BHT PA-ACS, exento de perxidos.
Nota 1: Para asegurarse de que el Eter Dietlico
est exento de perxidos, aadir a 10 ml de Eter
Dietlico contenidos en una pequea probeta con
tapn de vidrio, enjuagada previamente con un
poco de Eter Dietlico, 1 ml de una solucin con
un 10% de Potasio Yoduro PA-ISO, recientemente preparada. Agitar y dejar reposar durante un
minuto. No ha de aparecer coloracin amarilla
alguna en ninguna de las dos capas.
Nota 2: El Eter Ditlico estabilizado con ~ 6
ppm de BHT PA-ACS puede ser mantenido exento de perxidos adicionando una hoja de cinc
hmeda previamente sumergida durante un minuto en una solucin cida diluida de Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO y posteriormente lavada
con Agua PA-ACS. Para 1 litro de Eter Dietlico,
utilizar unos 8.000 mm2 de hoja de cinc, cortada
59
60
enfriar hasta que adquiera la temperatura ambiente y pesar con precisin de 0,1 mg.
4.4.2.15. Repetir las operaciones de los puntos
4.4.2.13. y 4.4.2.14. calentando a intervalos de
treinta a sesenta minutos hasta que dos pesadas
no difieran en ms de 0,5 mg o que aumente la
masa. En el punto 4.5. utilizar la pesada tomando
el valor ms bajo (M1).
4.4.2.16. Aadir de 15 a 25 ml de Eter de
Petrleo para verificar si la materia extrada es
totalmente soluble. Calentar ligeramente y agitar
el disolvente mediante un movimiento circular
hasta que se disuelva toda la materia grasa.
4.4.2.16.1. Si la materia extrada es totalmente
soluble en Eter de Petrleo, la masa de materia
grasa es la diferencia entre la pesada del punto
4.4.2.1. y la pesada del punto 4.4.2.15.
4.4.2.16.2. Si aparecieran materias insolubles o
siempre en caso de duda, extraer completamente
la materia grasa contenida en los matraces
mediante repetidos lavados con Eter de Petrleo
caliente, dejando que la materia no disuelta se
deposite antes de cada decantacin. Enjuagar tres
veces el exterior del cuello del matraz. Calentar el
matraz, inclinado, durante una hora en la estufa y
dejar enfriar tal como se indic anteriormente
(punto 4.4.2.1.) hasta que adquiera la temperatura
ambiente; pesar con una precisin de 0,1 mg. La
masa de la materia grasa es la diferencia entre la
pesada del punto 4.4.2.15. y esta pesada final.
4.5. Clculos
La masa expresada en gramos de la materia
grasa extrada viene dada por la siguiente frmula:
(M1-M2) - (B1 - B2)
y el contenido en materia grasa de la muestra,
expresado en porcentaje, por la frmula:
(M1 - M2) - (B1 - B2)
x 100
S
en donde:
M1 = masa, en gramos, del matraz M conteniendo
la materia grasa tras la operacin del punto 4.4.2.15.
M2 = masa, en gramos, del matraz M tras la
operacin del punto 4.4.2.1. o, en caso de que
aparezcan materias insolubles o en caso de duda,
tras la operacin del punto 4.4.2.16.2.
B1 = masa, en gramos, del matraz B de la
prueba en blanco tras la operacin del punto
4.4.2.15.
B2 = masa, en gramos, del matraz B, tras la
operacin del punto 4.4.2.1. o, en el caso de que
aparezcan materias insolubles o en caso de duda,
tras la operacin del punto 4.4.2.16.2.
S = masa, en gramos, de la muestra utilizada.
M
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultneamente o inmediatamente una despus de la otra por el mismo
analista sobre la misma muestra y en las mismas
condiciones, no ha de exceder 0,2 g de materia
grasa por 100 g de producto, salvo en el caso de
la leche desnatada en polvo, en donde la diferencia no ha de exceder 0,1 g de materia grasa por
100 g de producto.
3.6. Referencias
Primera Directiva de la Comisin de 13 de
Noviembre de 1979 (79/1067/CEE); "Diario Oficial
de las Comunidades Europeas" nmero L 327/29,
de 24 de Diciembre de 1979.
METODO 5: SACAROSA
(Mtodo polarimtrico)
5.1. Principio.
El contenido en sacarosa de los distintos tipos
de leche condensada es el determinado por el
mtodo que se describe a continuacin.
El mtodo se basa en el principio de inversin
de Clerget: un tratamiento suave con un cido
hidroliza completamente la sacarosa. La lactosa y
los restantes azcares no son prcticamente
hidrolizados. El contenido en sacarosa se deduce
del cambio de poder rotatorio de la solucin.
Para ellos se prepara un filtrado lmpido de
solucin de muestra, sin mutarrotacin debida a la
lactosa, por tratamiento con amonaco seguido de
neutralizacin y posterior clarificacin mediante
adiciones consecutivas de soluciones de acetato
de cinc y Potasio Hexacianoferrato II.
En una parte del lquido filtrado la sacarosa se
hidroliza en condiciones determinadas.
Partiendo de los poderes rotatorios del lquido
filtrado antes y despus de la inversin, se calcula el contenido en sacarosa aplicando las frmulas
que se indican.
Este mtodo permite determinar el contenido
en sacarosa de los siguientes tipos de leche:
-Leche condensada o leche entera condensada.
-Leche condensada semidesnatada.
-Leche condensada desnatada.
Las muestras no han de contener azcar invertido.
5.2. Material y aparatos.
5.2.1. Balanza analtica, sensibilidad 10 mg.
5.2.2. Tubo de polarmetro de 2 dm de longitud, calibrado exactamente.
5.2.3. Polarmetro o sacarmetro.
5.2.3.1. Polarmetro con luz de sodio o luz
verde mercurio (lmpara de vapor de mercurio
con prisma o pantalla Wraten especial, nmero 77
A), que permita lecturas con una precisin, como
mnimo, igual a 0,05 grados de ngulo.
61
62
5.4.2. Determinacin.
En un vaso de vidrio, pesar exactamente, con
aproximacin de 10 mg, unos 40 g de la muestra
convenientemente mezclada.
Aadir 50 ml de agua caliente (80 a 90C) y
mezclar cuidadosamente.
Trasvasar cuantitativamente la mezcla a un
matraz aforado de 200 ml, enjuagar el vaso con
sucesivas cantidades de agua a 60C hasta que el
volumen total sea de 120 a 150 ml. Mezclar y
dejar enfriar a temperatura ambiente.
Aadir 5 ml de la solucin de Amonaco diluida
(5.3.4.). Mezclar de nuevo y dejar reposar durante
quince minutos.
Neutralizar el amonaco aadiendo una cantidad equivalente de la solucin diluida de Acido
Actico (5.3.5.). Determinar previamente el volumen exacto necesario mediante valoracin de
solucin de Amonaco diluida utilizando Azul de
Bromotimol como indicador (5.3.6.). Mezclar a
continuacin.
Aadir, mezclando suavemente por rotacin del
matraz inclinado, 12,5 ml de solucin de Zinc
Acetato (5.3.1.).
De la misma manera que para la solucin de
Acetato, aadir 12,5 ml de solucin de Potasio
Hexacianoferrato II (5.3.2.).
Llevar el contenido del matraz a 20C y aadir
agua (a 20C) hasta el enrase.
Hasta este momento, todas las adiciones de
agua o de reactivos debern haberse realizado
evitando que se formen burbujas y, por esta
razn, todas las mezclas se habrn efectuado
mediante rotacin del matraz en vez de por agitacin violenta. Si se observa la presencia de burbujas antes de enrasar a 200 ml, pueden ser eliminadas conectando el matraz con una bomba de
vaco e imprimindole un movimiento de rotacin.
Tapar el matraz con un tapn seco y mezclar
ntimamente por agitacin intensa.
Dejar reposar durante unos minutos, y a continuacin filtrar a travs del papel de filtro seco.
Desechar los 25 primeros mililitros del lquido filtrado.
5.4.2.1. Polarizacin directa: Determinar la
rotacin ptica del lquido filtrado a 20 1C.
5.4.2.2. Inversin: Pipetear en un matraz aforado de 50 ml, 40 ml del lquido filtrado obtenido de
la manera indicada anteriormente. Aadir 6,0 ml
de Acido Clorhdrico 6,35 M o 7,6 ml de Acido
Clorhdrico 5,00M. Colocar el matraz en un bao
de agua a 60C durante quince minutos, estando
sumergido el matraz hasta el nacimiento del cuello. Mezclar por rotacin durante los cinco primeros minutos, durante los cuales el contenido
deber haber alcanzado la temperatura del bao.
Enfriar hasta 20C y enrasar con agua a 20C;
mezclar y dejar reposar durante una hora a esta
temperatura.
M
de Q para diversas fuentes de luz con correcciones, dado el caso, para la concentracin y la temperatura:
Luz de sodio y polarmetro con escala en grados de ngulo:
Q = 0,8825 + 0,0006 (C-9)-0,0033(T-20)
Luz verde de mercurio y polarmetro con escala en grados de ngulo:
Q = 1,0392 + 0,0007 (C-9)-0,0039 (T-20)
Luz blanca con filtro de dicromato y sacarmetro con escala sacarimtrica internacional:
Q = 2,549 + 0,0017 (C-9)-0,0095 (T-20)
En las frmulas anteriores:
C = Porcentaje de azcares totales en la solucin invertida segn la lectura polarimtrica.
T = Temperatura de la solucin invertida durante la lectura en el polarmetro.
El porcentaje de azcares totales C en la solucin invertida puede calcularse a partir de la lectura directa y de la variacin posterior a la inversin segn el mtodo habitual, utilizando los valores usuales de rotacin especfica de la sacarosa,
de la lactosa y del azcar invertido.
La correccin 0,006 (C-9) etc., slo es exacta si
C es aproximadamente igual a 9; dado que el caso
de la leche condensada normal C es aproximadamente 9, se puede despreciar esta correccin.
Variaciones de temperatura de 1C respecto a
20C influencian slo ligeramente la lectura directa. En cambio, en caso de existir variaciones de
ms de 0,2C durante la lectura tras inversin,
ser necesario proceder a una correccin, La
correccin -0,0033 (T-20), etc., slo es exacta
para temperaturas comprendidas entre 18 y 22C.
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultnea o inmediatamente una despus de la otra por el mismo analista, sobre la misma muestra y en las mismas
condiciones, no debe ser superior a 0,3 grs. de
sacarosa por 100 grs. de leche condensada.
5.6. Referencia.
Primera Directiva de la Comisin de 13 de
Noviembre de 1979 (79/1067/CEE), "Diario Oficial
de las Comunidades Europeas" nmero 327/29,
de 24 de Diciembre de 1979.
METODO 6: ACIDO LACTICO Y
LACTATOS
6.1. Principio.
Se define como contenido en cido lctico y
lactatos de los distintos tipos de leche en polvo, el
contenido en cido lctico y lactatos determinado
por el mtodo especificado.
El mtodo se basa en que previa eliminacin de
la materia grasa, las protenas y la lactosa, el
cido lctico y los lactatos se transforman en ace-
63
64
6.4. Procedimiento.
6.4.1. Prueba en blanco.
Efectuar una prueba en blanco con 30 ml de
Agua PA-ACS como muestra y siguiendo el procedimiento descrito en 6.4.2. Si el resultado de la
prueba en blanco frente a agua sobrepasa el equivalente de 20 mg de Acido Lctico por 100 g de
materia seca desgrasada, ser necesario comprobar los reactivos y sustituir los que se encuentren
alterados. Llevar a cabo la prueba en blanco al
mismo tiempo que el anlisis de las muestras.
6.4.2. Determinacin.
6.4.2.1. Determinar el porcentaje de materia
seca desgrasada de la muestra (a) y pesar 1.000
g/a-10 con precisin de 0,1 g. Aadir esta cantidad de muestra a 100 ml de Agua PA-ACS y mezclar cuidadosamente.
6.4.2.2. Pipetear 5 ml de la solucin obtenida a
un matraz aforado de 50 ml y diluir con agua
hasta 30 ml aproximadamente. Aadir lentamente
y agitando 5 ml de la solucin de Cobre Sulfato
(6.3.1.) y dejar reposar diez minutos. Aadir lentamente y agitando 5 ml de la suspensin de Calcio
Hidrxido (6.3.2.) y diluir a 50 ml con Agua PAACS. Agitar vigorosamente, dejar reposar diez
minutos y filtrar, desechando las primeras gotas
del filtrado.
6.4.2.3. Pipetear 1 ml del filtrado a un tubo de
ensayo. Aadir 6 ml de la solucin de Acido Sulfrico-Cobre Sulfato (6.3.3.) y mezclar. Calentar en
bao de agua hirviendo durante cinco minutos y
enfriar hasta temperatura ambiente bajo corriente
de agua. Aadir dos gotas de reactivo de p-hidroxidifenilo (6.3.4.) y agitar vigorosamente. Sumergir
el tubo en bao de agua a 30 2C y mantenerlo
durante quince minutos agitando de vez en cuando. Sumergir el tubo en bao de agua hirviendo
durante noventa segundos y enfriar hasta temperatura ambiente bajo corriente de agua.
6.4.2.4. Medir la absorbancia a 570 nm con
relacin a la prueba en blanco durante las tres
horas siguientes. Si la absorbancia es superior a
la del punto ms alto de la curva de calibrado,
repetir la prueba utilizando una dilucin adecuada
del filtrado obtenido en (6.4.2.2.).
6.4.3. Curva de calibrado.
6.4.3.1. Pipetear 5 ml de leche constituida
(6.3.6.) en cinco matraces aforados de 50 ml.
Aadir a cada uno de los matraces 0, 1, 2, 3 y
4 ml de la solucin patrn de lactato (6.3.5.)
correspondientes a 0, 20, 40, 60 y 80 mg de
Acido Lctico aadido por 100 g de materia seca
desgrasada de leche en polvo. Diluir con agua
hasta unos 30 ml y proceder segn lo establecido
en los apartados 6.4.2.2. y 6.4.2.4.
M
7.2. Material y aparatos
7.2.1. Balanza analtica.
7.2.2. Bao de agua con termostato a 37C
1C.
7.2.3. Espectrofotmetro que permita la lectura a longitud de onda de 610 nm.
7.2.4. Papel de filtro (Shcleicher y Schull 597,
Whatman 42 o similar).
7.2.5. Bao de agua hirviendo.
7.2.6. Hoja de aluminio.
7.3. Reactivos.
131015 Acido Brico PA-ACS-ISO
131074 Agua PA-ACS
131188 Bario Hidrxido 8-hidrato PA
131082 1-Butanol PA
131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO
Dibromo-2, 6 Quinona Cloro-1,4 Imida
131085 Etanol 96% v/v PA
141322 Fenol (USP, BP, F, Eur.) PRS-CODEX
Sodio meta-Borato
131659 Sodio Cloruro PA-ACS-ISO
171674 di-Sodio Fenilfosfato 2-hidrato RE
131787 Zinc Sulfato 7-hidrato PA
7.3.1. Solucin A
Tampn de Borato y de Bario Hidrxido:
pH 10,6 0,1 a 20C.
Disolver 25 g de Bario Hidrxido 8-hidrato PA
(Ba (OH)2.8H2O) en Agua PA-ACS y diluir hasta
500 ml.
Disolver 11 g de Acido Brico PA-ACS-ISO
(H3BO3) en Agua PA-ACS y diluir hasta 500 ml.
Calentar las dos soluciones a una temperatura
de 50C y mezclar.
Agitar y enfriar la mezcla a temperatura
ambiente. Ajustar el pH a 10,6 0,1 con la solucin de Bario Hidrxido y filtrar.
Conservar la solucin en recipiente bien cerrado. Antes de su uso, diluir la solucin tampn con
la misma cantidad de agua.
7.3.2. Solucin B.
Tampn para el desarrollo del color.
Disolver 6 g de Socio meta-Borato (NaBO2) (o 12,6 g
de NaBO2.4H2O) y 20 g de Sodio Cloruro PA-ACSISO (NaCl) en Agua PA-ACS y diluir hasta 1.000 ml.
7.3.3. Solucin C.
Sustrato tamponado.
7.3.3.1. Disolver 0,5 g de di-Sodio Fenilfosfato
2-hidrato RE (Na2C6H3PO4.2H2O) en 4,5 ml de
solucin B (7.3.2.). Aadir dos gotas de solucin
E (7.3.5.) y dejar reposar durante 30 minutos. Extraer el color formado con 2,5 ml de 1-Butanol PA
(7.3.10.) Si fuese necesario, repetir la extraccin
del color. Tras separacin, tirar el 1-Butanol. Esta
solucin puede conservarse algunos das en refrigerador. Desarrollar y extraer el color, una vez ms
antes de su empleo.
65
7.4.3.2. Calentar uno de los tubos en agua hirviendo durante dos minutos. Cubrir el tubo y el
bao de agua (7.2.5.) o, por ejemplo, un vaso de
precipitados, con una hoja de aluminio (7.2.6.)
para que se caliente todo el tubo. Enfriar en agua
fra a temperatura ambiente. Este tuvo servir
para la prueba en blanco. A partir de este punto,
tratar los dos tubos de idntica manera.
7.4.3.3. Aadir 10 ml de la solucin C (7.3.3.)
Mezclar y colocar los tubos en el bao de agua
(7.2.2.) a 37C.
7.4.3.4. Incubar durante sesenta minutos en el
bao de agua, agitando de vez en cuando.
7.4.3.5. Inmediatamente despus introducir los
dos tubos en el bao de agua hirviendo y calentar
durante dos minutos, y enfriar a temperatura
ambiente con agua fra.
7.4.3.6. Aadir 1 ml de la solucin D (7.3.4.)
mezclar y filtrar con papel de filtro seco; tirar las
primeras porciones del filtrado hasta obtener un
lquido ntido.
7.4.3.7. Introducir 5 ml de cada filtrado en
tubos de ensayo, agregar 5 ml de solucin B
(7.3.2.) y 0,1 ml de solucin E (7.3.5.). Mezclar.
7.4.3.8. Dejar que se desarrolle el color a temperatura ambiente y al abrigo de la luz solar
durante treinta minutos.
7.4.3.9. Medir la absorbancia de la solucin de
la muestra por referencia a la prueba en blanco a
610 nm.
7.4.3.10. Repetir la determinacin si la absorbancia de la solucin es superior a la de la solucin patrn de 20 microgramos de Fenol preparada segn el punto (7.5.).
Si dicho lmite es sobrepasado, diluir un volumen conveniente de leche reconstituida, segn
7.4.2.1., con un volumen apropiado de esta misma
leche cuidadosamente hervida, como se indica en
7.4.3.2., para inactivar la fosfatosa presente.
66
M
-Leche en polvo desnatada o leche desnatada
en polvo.
8.2. Material y aparatos.
8.2.1. Balanza analtica.
8.2.2. Bao de agua a 37C 1C, controlado
por termostato.
8.2.3. Comparador colorimtrico, con disco
especial conteniendo cristales de color patrones
calibrados en microgramos de p-nitrofenol por ml
de leche y dos clulas de 25 mm cada una.
7.3. Reactivos.
131074 Agua PA-ACS
131505 Potasio Hexacianoferrato II 3-hidrato
PA-ACS
131648 Sodio Carbonato anhidro PA
Sodio Nitrofenilfosfato
131638 Sodio Hidrgeno Carbonato PA
131788 Zinc Sulfato 1-hidrato PA
8.3.1. Solucin tampn de Sodio Carbonato y
Sodio Hidrgeno Carbonato.
Disolver 3,5 g de Sodio Carbonato anhidro PA
y 1,5 g de Sodio Hidrgeno Carbonato PA en
Agua PA-ACS y diluir hasta 1.000 ml en un matraz
aforado.
8.3.2. Substrato en solucin tampn.
Disolver 1,5 g de p-Nitrofenilfosfato disdico en
la solucin tampn de Sodio Carbonato anhidro
PA y de Sodio Hidrgeno Carbonato PA (8.3.1.) y
diluir hasta 1.000 ml en un matraz aforado. Esta
solucin se mantiene estable durante un mes en
el refrigerador (<4C) pero habr que efectuar
antes un test de control de color en las soluciones
conservadas de esta forma (8.4.1.3.).
8.3.3. Precipitantes.
8.3.3.1. Zinc Sulfato.
Disolver 30 g de Zinc Sulfato PA (ZnSO4) en
Agua PA-ACS y completar hasta 100 ml en un
matraz aforado.
8.3.3.2. Potasio Ferrocianuro en solucin.
Disolver 17,2 g de Potasio Hexacianoferrato II
3-hidrato PA-ACS (K4Fe(CN)6.3H2O) en Agua PAACS y completar hasta 100 ml en un matraz aforado.
8.4. Procedimiento.
8.4.1. Precauciones a observar.
8.4.1.1. Tras su utilizacin, vaciar los tubos,
enjuagarlos con agua, lavarlos con agua caliente
con un detergente alcalino, enjuagarlos cuidadosamente luego con agua del grifo caliente y clara.
Finalmente, enjuagarlos con agua; secarlos antes
de su empleo.
8.4.1.2. Los tapones de los tubos de anlisis
han de ser enjuagados cuidadosamente con agua
del grifo caliente inmediatamente despus de su
67
68
Mantequilla
70
M
1. INDICE DE ACIDEZ DE LA GRASA
1.1. Principio.
El ndice de acidez de la materia grasa en la
mantequilla es el nmero de mg de potasio hidrxido que se necesita para neutralizar 1 g de materia grasa.
La materia grasa, despus de separarla por
fusin de la mantequilla, se disuelve en una mezcla de alcohol-ter, y luego se titula con una solucin alcalina valorada.
1.2. Material y aparatos.
1.2.1. Balanza analtica.
1.2.2. Matraces erlenmeyer de 300 ml.
1.2.3. Bureta graduada contrastada en divisiones de 0,1 ml.
1.3. Reactivos.
Los reactivos que se utilicen deben ser de calidad pura para anlisis.
131086
131085
131091
131313
Etanol absoluto PA
Etanol 96% v/v PA
Metanol PA-ACS-ISO
Eter Dietlico estabilizado con ~ 6 ppm
de BHT PA-ACS
131325 Fenolftalena PA-ACS
182146 Potasio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) etanlica SV
1.3.1. Potasio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) etanlica SV.
1.3.2. Mezcla de volmenes iguales de Etanol
96% v/v PA y de Eter Dietlico estabilizado con ~
6 ppm de BHT PA-ACS.
1.3.3. Solucin neutra de Fenolftalena PA-ACS
al 1% (m/v) en Etanol 96% v/v PA desnaturalizado
con Metanol PA-ACS-ISO.
NOTA: Alcohol desnaturalizado con Metanol
PA-ACS-ISO: 100 partes Etanol absoluto PA y
5 Metanol PA-ACS-ISO.
1.4. Procedimiento.
Para separar la materia grasa, fundir la muestra, dejarla reposar a 50-60 2 o 3 horas, decantar y filtrar con papel de filtro seco. Filtrar nuevamente si el primer filtro no est claro. Utilizar la
materia grasa fundida, clarificada, bien mezclada.
En un matraz erlenmeyer pesar con precisin
de 1 miligramo 5-10 g de materia grasa. Aadir
50-100 ml de la mezcla de Etanol 96% v/v PA y
Eter Dietlico est. con ~ 6 ppm de BHT y disolver
en esta mezcla la materia grasa. Aadir 0,1 ml de
la solucin de Fenolftalena PA-ACS. Valorar con
la solucin alcalina hasta que aparezca una coloracin rosa plido que persista al menos 10 segundos.
1.5. Clculo.
V t 56,1
Indice de acidez =
A
V = volumen, en ml, de la solucin alcalina
empleada.
t = normalidad de la solucin alcalina.
A = masa, en gramos, de la porcin ensayada.
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas no debe ser mayor de 0,1 mg
de potasio hidrxido por 1 g de materia grasa.
1.6. Referencia.
1.6.1. Norma FIL-IDF - G A - 1969.
71
72
3.4. Procedimiento.
Ablandar la muestra en un recipiente cerrado,
calentndola en bao de agua a la temperatura
ms baja posible, con objeto de no romper la
emulsin. Frecuentemente es adecuada una temperatura comprendida entre 23 y 28C y en ningn caso la temperatura podr exceder de 39C.
Agitar el recipiente que contiene la muestra a
intervalos frecuentes durante el proceso de ablandamiento con objeto de que la muestra se mezcle
homogneamente. Sacar el recipiente del bao de
agua y agitarlo vigorosamente a intervalos frecuentes hasta que la muestra se haya enfriado
adquiriendo una consistencia espesa y cremosa.
Esta operacin puede realizarse con un agitador
mecnico.
Efectuar una determinacin en blanco, empleando los mismos reactivos, en las mismas can-
a
t = normalidad de la solucin de plata nitrato.
v1 = volumen, en ml, de solucin de plata nitrato, utilizados en la valoracin.
ve = volumen, en ml, de solucin de plata nitrato en el ensayo en blanco.
a = masa, en gramos, de la muestra utilizada.
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas no deber ser mayor de 0,02
g de sodio cloruro por 100 g de producto.
3.6. Referencia.
3.6.1. Norma FIL-12A - 1969.
4. AGUA, EXTRACTO SECO MAGRO
Y GRASA EN UNA SOLA MUESTRA
4.1. Principio.
Se define el contenido de agua en la mantequilla como la prdida de masa, expresado como
porcentaje, en masa, segn se determina por el
procedimiento descrito.
Se define el contenido de extracto seco magro
en la mantequilla como el porcentaje, en masa, de
sustancias, segn se determina.
Se define el contenido de materia grasa en la
mantequilla como el porcentaje, en masa, que se
obtiene restando de 100 el contenido de agua y el
del extracto seco magro.
El contenido de agua se determina gravimtricamente secando una cantidad conocida de mantequilla a 102 2C.
El contenido de extracto seco magro se determina gravimtricamente despus de extraer con
ter de petrleo la grasa de la mantequilla secada.
4.2. Material y aparatos.
4.2.1. Balanza analtica con una tolerancia de
0,1 mg.
M
4.2.2. Estufa de desecacin bien ventilada y
controlada con termostato, ajustada para que funcione a una temperatura de 102 2C.
4.2.3. Cpsulas metlicas, de porcelana o de
vidrio, resistentes a la corrosin, que tengan por lo
menos 25 mm de altura y 50 mm de dimetro.
4.2.4. Crisoles filtrantes de vidrio sintetizado
(porosidad nmero 3) con matraces de filtracin a
la trompa.
4.2.5. Varilla con pieza final de material adecuado.
4.3. Reactivos.
Eter de Petrleo con lmites de ebullicin entre
30 y 60C. En su defecto usar 131315 Eter de
Petrleo 40-60C PA-ISO.
Este reactivo no debe dejar ningn residuo por
evaporacin.
4.4. Procedimiento.
4.4.1. Preparacin de la muestra.- Excepto
cuando el mezclado no se considere necesario, la
muestra debe mezclarse agitando con una varilla
o con un agitador mecnico, lo ms rpidamente
posible, sin exceder de 1 minuto. La temperatura
del mezclado deber estar comprendida normalmente entre 23C y 28C, pero en ningn caso
deber exceder de 35C. Antes de pesar, la
muestra deber ponerse siempre a la temperatura ambiente.
4.4.2. Determinacin de agua.- Secar la cpsula en la estufa hasta masa constante. Dejar enfriar
la cpsula en desecador hasta la temperatura
ambiente (30-35 min.) y pesar. Pesar en la cpsula, de 5 a 10 g de la muestra de mantequilla. Mantener la cpsula en la estufa durante una hora, por
lo menos. Dejar que se enfre la cpsula en desecador a la temperatura ambiente (de 30-35 min.) y
pesar. Repetir el secado a intervalos de media
hora hasta masa constante (variacin igual o inferior a 0,5 miligramos). Todas las pesadas se harn
con una precisin de 0,1 miligramo. En el caso de
que aumente la masa, se toma la masa mnima
para el clculo. No deben emplearse en esta
determinacin materiales absorbentes.
4.4.3. Determinacin del extracto seco magro.Secar el crisol de vidrio filtrante en la estufa hasta
masa constante. Dejar enfriar el crisol a temperatura ambiente (30-35 min.) y pesar. Aadir de 10 a
15 ml de Eter de Petrleo caliente a la cpsula,
que contiene el extracto seco procedente de la
determinacin de agua, de manera que se disuelva la grasa.
Separar la mayor cantidad posible del sedimento adherido a la cpsula utilizando una varilla
y pasar cuantitativamente la solucin sobre la
punta de la varilla al crisol. Repetir las operaciones
cinco veces. Lavar el sedimento que queda en el
crisol con 25 ml de Eter de Petrleo caliente.
Secar la cpsula y el crisol en la estufa durante 2
73
74
M
5.4.3. Condiciones de la cromatografa de
gases.- Temperatura de la columna 220-250C.
Temperatura del sistema de inyeccin, si puede
calentarse por separado, 20-40C por encima de la
temperatura de la columna. Gasto de nitrgeno
30/60 ml/min. Desconectar el detector y equilibrar
las columnas nuevas en estas condiciones durante
16-24 horas. Conectar el detector, encender la llama
y regular el gasto de hidrgeno y oxgeno o aire para
obtener una altura de llama y una sensibilidad adecuada. Poner en marcha el registrador y dejar que el
papel se desenrolle a una velocidad adecuada, ajustar el cero y el atenuador. Si la lnea de base es estable, el aparato est listo para usarse.
5.4.4. Ensayo de sensibilidad.- Inyectar 3 a 5 l
de la solucin para el ensayo de sensibilidad
(5.3.4.). Slo aparecer un pico de colesterol en el
cromatograma (fig. 5.I.). Ajustar el atenuador de
modo que se utilice aproximadamente toda la
escala del registrador.
5.4.5. Ensayo de resolucin de los picos.- Inyectar 3 a 5 l de la solucin para el ensayo de resolucin de los picos (5.3.5.). Aparecern en el cromatograma los picos de colesterol, brasicosterol,
camposterol) (fig. 5.II.). Medir las distancias de
retencin (distancia desde el punto de inyeccin
hasta el punto de altura mxima del pico) de los
picos, dch para el colesterol, db para el brasicosterol, dc para el camposterol y el ds para el beta-sitosterol y las anchuras de la base de los picos (dimensin de retencin entre las intersecciones con la
lnea de base de las tangentes en los puntos de
inflexin situados en la parte anterior y posterior del
pico) Wch para el colesterol y Wb para el brasicosterol. La resolucin de los picos, expresada por la
frmula.
PR = 2(db - dch) (Wb + Wch)
debe ser por lo menos igual a 1.
Calcular los tiempos de retencin relativos
(colesterol 1,00) para el brasicosterol, el camposterol y el beta-sitosterol.
5.4.6. Ensayo de referencia.- Inyectar 3 a 5 l
de la solucin para el ensayo de referencia
(5.3.6.). Los picos de camposterol, estigmasterol
y de beta-sitosterol deben aparecer sobre el cromatograma (fig. 5.III.). Medir las distancias de
retencin de los picos, dc para el camposterol, dst
para el estigmasterol y ds para el beta-sitosterol.
Calcular los tiempos de retencin relativos, que
son, aproximadamente:
5.5. Clculo.
Si en el cromatograma un pico tiene un tiempo
de retencin relativo igual al de beta-sitosterol y
una altura que corresponde al menos a un 2% de
la escala, se concluye la presencia de beta-sitosterol y la muestra de grasa examinada, a partir de
la cual se han aislado los esteroles, se considera
que contiene grasa vegetal. La presencia en el
Fig. 5.I
Esteroles de la materia grasa de la leche
Fig. 5.II
Esteroles del aceite de colza adicionados de colesterol
75
Fig. 5.III
Esteroles del aceite de soja
76
M
BQC guardado en botella en la estantera de reactivos). Comprobar los nuevos lotes de BQC antes
de usarlo, preparando una curva patrn con Fenol
y comparando la curva obtenida con la de BQC
que se sabe es satisfactorio. Repetir la prueba al
menos semestralmente.
6.3.6. Solucin Cobre II Sulfato 5-hidrato PAACS-ISO para los patrones: Disolver 0,05 g Cobre
II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS
y diluir a 100 ml.
6.3.7. 1-Butanol PA: Usar 1-Butanol PA, punto
de ebullicin 116-118C. Para ajustar el pH, mezclar 1 litro con 50 ml de tampn de desarrollo de
color. Guardar en recipiente con tapn de vidrio.
6.3.8. Solucin patrn de Fenol:
6.3.8.1. Solucin madre: Pesar exactamente
1,000 g de Fenol PA-ACS puro, llevarlo a un
matraz aforado de 1 litro, diluirlo con Agua PA-ACS
hasta 1 litro y mezclar (1 ml = 1 mg de Fenol). La
solucin es estable varios meses en refrigerador.
6.3.8.2. Patrones de trabajo: Diluir 10,0 ml de la
solucin madre con Agua PA-ACS hasta 1 litro y
mezclar (1 ml = 10/g, 0,00001 g o 10 unidades de
Fenol). Usar esta solucin patrn para preparar
soluciones patrn ms diluidas: p. e., diluir 5, 10,
30, 50 ml con Agua PA-ACS hasta 100 ml para preparar soluciones patrn, que contenga 0,5; 1,0; 3,0
y 5,0 g o unidades de Fenol/ml, respectivamente.
Guardar estas soluciones patrn en refrigerador no
ms de una semana. Anlogamente preparar, a partir de la solucin madre (6.3.8.1.), soluciones patrn
que contengan 20, 30 y 40 unidades/ml.
Medir las cantidades adecuadas de las soluciones patrn de trabajo en una serie de tubos (preferiblemente graduados a 5,0 y 10,0 ml) para conseguir un intervalo adecuado de patrones, segn
se necesite, que contengan 0 (control o prueba en
blanco), 0,5; 1,0; 3,0; 5,0; 10,0; 20,0; 30,0 y 40,0
unidades. Para aumentar el brillo de las soluciones azules y mejorar la estabilidad de los patrones, aadir 1,0 ml de solucin de Cobre II Sulfato
(6.3.6.) a cada tubo. Luego aadir 5,0 ml de tampn de solucin de color (6.3.3.) y diluir con
131074 Agua PA-ACS hasta 10,0 ml, aadir 4
gotas (0,08 ml) de la solucin BQC (6.3.5.), mezclar y dejar desarrollar el color azul 30 minutos a
temperatura ambiente.
Leer las intensidades de color en el fotmetro
con filtro de 610 nm, restar el valor de la prueba
en blanco del color de cada patrn de Fenol y preparar la curva patrn (debe ser una lnea recta).
Si los patrones han de usarse para comparacin visual, guardar en refrigerador. Preparar
semanalmente una serie nueva.
6.4. Procedimiento.
Tomar la muestra por debajo de la superficie
con cuchillo y esptula limpios y proceder como
sigue:
77
APARATO DE DESTILACION
6.5. Clculo.
Cuando se utilice 1,0 g de mantequilla y se
aadan 11,0 ml de lquido, multiplicar el valor de
la lectura por 1,1 para convertir el resultado en
equivalentes de fenol/0,5 g de mantequilla (valores mayores de 2 equivalentes/0,5 g de mantequilla indican pasterizacin insuficiente).
6.6. Referencia.
6.6.1. A.O.A.C. Official Methods of Analysis, lla.
Ed. (1970).
78
Figura 7.I
Determinacin de los ndices de Reichert y de Polenske
M
7.2. Material y aparatos (figura 7.I).
7.2.1. Matraz de fondo plano de vidrio al borosilicato de 300 ml de capacidad (A).
7.2.2. Cabeza de destilacin (E).
7.2.3. Refrigerante (C).
7.2.4. Receptor, que consiste en un matraz
aforado con las rayas circulares de aforo a 100 y
110 ml (D).
7.2.5. Lmina de asbesto de 120 mm de dimetro, 6 mm de espesor con una abertura central
circular de 40 a 50 mm de dimetro, para sostener el matraz durante el calentamiento (E).
7.2.6. Piedra pmez triturada que pasa a travs de un tamiz de malla circular de 1,44 mm.
En la figura se representan las dimensiones en
mm y el montaje del aparato de destilacin; para
las conexiones se puede utilizar tapones de caucho, neopreno o silicona, o juntas de vidrio esmerilado "estndar" 24/40.
7.3. Reactivos.
181059 Acido Sulfrico 0,5 mol/l (1N) SV
131074 Agua PA-ACS
131085 Etanol 96% v/v PA
171327 Fenolftalena solucin 1% RE
141339 Glicerina (USP, BP, F, Eur.) PRSCODEX
211456 Piedra Pomez grnulos QP
131687 Sodio Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO
181694 Sodio Hidrxido 0,1 mol/l (0,1N) SV
7.3.1. Glicerina (USP, BP, F, Eur.) PRS-CODEX
(d = 1,26; 98% p/p).
7.3.2. Solucin acuosa de Sodio Hidrxido
(44% p/p). Usese Sodio Hidrxido lentejas PAACS-ISO y disolver convenientemente con Agua
PA-ACS. Conservar en botella protegida del dixido de carbono. Usar la porcin limpia libre de precipitado de carbonatos.
7.3.3. Agua PA-ACS, hervida durante 15 minutos, para eliminar el dixido de carbono.
7.3.4. Solucin de Acido Sulfrico 0,5 mol/l
(1N) SV.
7.3.5. Solucin acuosa de Sodio Hidrxido 0,1
mol/l (0,1N) SV (o Potasio Hidrxido 0,1N), exactamente normalizada.
7.3.6. Solucin indicadora de Fenolftalena
solucin 1% RE.
7.3.7. Etanol 96% v/v PA neutro a la Fenolftalena. El agua usada debe ser destilada o de una
pureza por lo menos equivalente.
7.4. Procedimiento.
7.4.1. Preparacin de la muestra. Como en
5.4.1.
7.4.2. Determinacin del ndice de cidos grasos voltiles solubles: Pesar 5 g con aproximacin
de 0,01 g de grasa en el matraz A. Aadir 20 g (16
ml) de Glicerina (USP, BP, F, Eur.) PRS-CODEX y 2
79
80
8. INDICE DE KIRSCHNER
Reactivos.
131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO
131074 Agua PA-ACS
131188 Bario Hidrxido 8-hidrato PA
171327 Fenolftalena solucin 1% RE
A 121 (100 + B)
Valor de Kirschner =
10.000
A = titulacin de la muestra - titulacin en blanco.
B = volumen, en ml, de bario hidrxido 0,1N,
requeridos para neutralizar los 100 ml originales
del destilado de Reichert-Meissl.
8.3. Referencia.
8.3.1. Norma Internacional AOCS 5-40.
9. ACIDOS GRASOS DE CADENA CORTA
9.1. Principio.
Obtencin de los steres metlicos de los cidos grasos mediante reaccin con una solucin
de potasio hidrxido en alcohol metlico y subsiguiente inyeccin directamente de la disolucin de
steres metlicos en el cromatgrafo.
El mtodo es aplicable a las grasas de mantequillas u otras que contengan cidos grasos de
M
longitud de cadena inferior al C 14 y siempre que el
contenido de cidos libres no exceda de 1%
expresados en cido oleico.
9.2. Material y aparatos
9.2.1. Matraces con boca esmerilada y fondo
redondo de 50 y 100 ml de capacidad.
9.2.2. Pipetas aforadas de 1,2 y 10 ml.
9.2.3. Matraces aforados de 50 y 100 ml de
capacidad.
9.2.4. Probeta graduada de 10 ml.
9.2.5. Jeringa de caractersticas adecuadas
para la inyeccin de la muestra, graduada en dcimas de ml, con una capacidad total de 1 a 10 ml.
9.2.6. Cromatgrafo apto para trabajar en fase
gaseosa, provisto de horno capaz de ser calentado hasta 250-300C y sistema de regulacin que
permita controlar la temperatura con un error de
1,0C. Equipado con programador de temperatura capaz de llevar la temperatura del horno de
60C a 180C a una velocidad de 4C/min. Provisto de regulacin independiente de la temperatura del inyector, que podr ser calentado a una
temperatura superior por lo menos en 50 a la
mxima alcanzable por el horno provisto de un
sistema de deteccin sensible, de ionizacin de
llama de hidrgeno, que pueda ser mantenido a la
temperatura de la columna, a unos 50C por encima de la del horno.
9.2.7. Registrador con una tensin de entrada
adecuada a la salida del amplificador del cromatgrafo, con una velocidad de respuesta mnima
capaz de producir la deflexin completa de la
escala en un segundo; y una velocidad de desplazamiento del papel de 5 mm/min, que permita la
posibilidad de variar esta velocidad, acelerando o
retardando el desplazamiento.
9.2.8. Tubo de nitrgeno a presin, utilizable
como gas portador, debiendo tener una riqueza
mnima del 99,8%.
9.2.9. Tubos de hidrgeno y aire a presin
necesarios para el caso en que se utilice detector
de llama de hidrgeno. El hidrgeno deber tener
una riqueza mnima del 99,8%, debiendo estar
seco. Como medida de seguridad, es muy conveniente colocar a la entrada de los gases en el cromatgrafo, sendos tubos de desecacin, provistos de tamiz molecular 13X.
9.2.10. Columna cromatogrfica.
9.2.10.1. Columna que satisfaga las condiciones que se indican en 9.6.1.
9.2.10.2. Columna de vidrio con dimetro interior de 4 mm y una longitud aproximada de 2 mm.
Rellenada con Chromosorb G, W o Q (80-100
mallas), conteniendo de 2,5 a 5 por 100 de un
polister, recomendndose cualquiera de los tres
siguientes: dietilenglicolsuccinato (DEGS); etilenglicolsuccinato o adipato (EGS o EGA); polietilenglicoladipato (PEGA).
81
82
9.4. Procedimiento.
9.4.1. Preparacin de los steres metlicos.
En un matraz de fondo redondo de 50 ml,
pesar con exactitud de 0,1 mg, 1 g de grasa.
Aadir 10 ml de Eter de Petrleo 40-60C PA-ISO
o n-Hexano PA y agitar suavemente hasta disolucin de la grasa.
En el caso de que se quiera efectuar una determinacin cuantitativa de los Acidos Butrico y
Caproico en la muestra, agregar a la disolucin en
Eter de Petrleo de la grasa 1 ml, exactamente
medido, de la solucin de referencia ms adecuada; para muestras conteniendo de 1-4% de Acido
Butrico se utilizar la solucin de referencia I; para
muestras conteniendo menos de 1% de Acido
Butrico se utilizar la solucin de referencia II.
Si se desea efectuar solamente un anlisis
completo de la fraccin de cidos grasos, para lo
que se aplica el mtodo de normalizacin interna,
no ser necesario el empleo de solucin de referencia.
A la solucin de Eter de Petrleo de la muestra,
adicionada o no de solucin de referencia, agregar 0,5 ml de disolucin de Potasio Hidrxido 2N.
Agitar suavemente la mezcla hasta que se ponga
transparente, para lo cual son suficientes unos
veinte a treinta segundos. Casi inmediatamente
despus de observar la clarificacin de la solucin
suele apreciarse un enturbiamiento debido a la
separacin de glicerol, que se sedimenta rpidamente.
Inmediatamente despus de terminada la reaccin y observada la sedimentacin, tomar la cantidad necesaria con la jeringa e inyectar en el cromatgrafo; una demora en la inyeccin de los
steres metlicos dara lugar a la formacin de
jabones, con error en la determinacin.
9.4.2. Determinacin cromatogrfica.
9.4.2.1. Condiciones de trabajo.
Temperatura de la columna: Temperatura programada de 60C a 160C, con una velocidad de
4C/minuto.
Temperatura de inyector: 200C.
Temperatura del detector: 200C.
Gas portador: Nitrgeno (o helio) con un flujo
de 60 ml/min.
Flujo de hidrgeno y aire para la alimentacin
del detector: Los flujos dependern del tipo de
detector utilizado, debiendo determinarse previamente para optimizar la respuesta.
El registro obtenido del cromatograma debe
satisfacer las condiciones que se indican a continuacin; caso contrario, se repite la inyeccin
modificando la cantidad inyectada o la sensibili-
M
la solucin anterior con n-Heptano en la relacin
necesaria para poder ajustarse a las prescripciones fijadas. Efectuar, cuando menos, tres determinaciones consecutivas, que no deben discrepar
entre s ms del 1%.
9.4.4. Anlisis cuantitativo de la totalidad de los
componentes de la fraccin de cidos grasos,
comprendiendo del C4 al C20 y C18:3.
9.4.4.1. Preparacin de la mezcla de calibracin.- Determinar previamente el factor de correccin para cada cido componente de la mezcla,
referido a uno cualquiera de ellos que se toma
como patrn, eligindose normalmente para este
fin el Acido Palmtico, y, debiendo tener la mezcla
de calibracin una composicin anloga a la de la
mezcla problema.
Para ello, si no se conoce previamente el orden
de composicin del problema, se realizar una
determinacin cromatogrfica de orientacin, realizndose en el registro la cuantificacin de los
componentes suponiendo el mismo factor de respuesta para todos ellos, efectuando un reparto
proporcional entre las reas medias.
En un matraz aforado de 50 ml, pesar, con una
exactitud de 0,1 mg, cantidades de los steres
metlicos patrones que se indican a continuacin
proporcionales a las cifras de composicin encontradas en el anlisis de orientacin anteriormente
aludido, o previstas con anterioridad para la
muestra. Los patrones que deben pesarse son los
siguientes: metilo butanoato, metilo hexanoato,
metilo octanoato, metilo decanoato, metilo dodecanoato, metilo tetradecanoato; metilo hexadecanoato, metilo octadecanoato, metilo oleato, metilo linoleato y metilo eicosanoato. Se disuelve la
mezcla de n-Heptano agregando la cantidad adecuada de disolvente en relacin al peso total de
steres metlicos que se hayan pesado; para unos
500 mg en total, se deben emplear, como orientacin, unos 50 ml de n-Heptano PA. A continuacin, inyectar 0,2-0,4 l para que, trabajando a la
sensibilidad media del aparato, se consiga situar
el mximo del pico correspondiente al componente mayoritario, en una posicin del 70-80% del
recorrido total de la pluma del registrador. Todos
los picos deben registrarse a la misma sensibilidad, lo cual suele ser perfectamente factible en la
grasa de leche; en aquellos casos en que la relacin entre el pico mayoritario y el pico minoritario
no permita registrar ste ltimo con las dimensiones adecuadas para efectuar una cuantificacin
correcta de su rea, se podr efectuar el cambio
necesario en la atenuacin del registro, procurando que sta no sobrepase la relacin de 4:1. Si
fuese necesario, se diluir la solucin con n-Heptano en la relacin necesaria para poder ajustarse
a las prescripciones fijadas. Efectuar, cuando
menos, tres determinaciones consecutivas, que
no deben discrepar entre s ms del 1%.
9.5. Clculo.
9.5.1. Clculo de los factores de correccin
para los cidos butrico y caproico. Se determinan
las reas de los tres picos, siguiendo las normas
que se contienen en el apartado 5.4., y se calculan los dos factores correspondientes al C 4 y C6,
con la frmula siguiente:
x Ap
fx =
P Ax
Siendo:
f = factor de correccin del cido x.
x = cantidad pesada del cido x.
Ap = rea medida en el registro para el patrn
de pentanoato.
Ax = rea medida en el registro para el cido x.
P = peso del patrn pentanoato.
9.5.2. Clculo del contenido de cidos.- Los
contenidos de cido butrico y cido caproico en
la muestra de grasa se calculan por la frmula
siguiente:
fx Ax P
Porcentaje de cido = 100
Ap M
fx = factor de correccin determinado para
cada cido, segn se indica en el prrafo anterior.
Ax = rea medida en el registro para el cido.
P = peso del patrn interno (pentanoato).
Ap = rea medida en registro para el patrn
interno.
M = peso de la muestra de grasa.
9.5.3. Clculo de los factores de correccin.Una vez determinadas las reas de todos los
picos, siguiendo las normas que se contienen en
el apartado 9.4.2.2., se calcula el factor de cada
cido, referido al cido palmtico tomado como
unidad, utilizando la frmula que se incluye en el
apartado 9.5.1., sustituyendo el rea Ap y el paso
P del compuesto patrn por los valores correspondientes al metilo palmitato.
9.5.4. Clculo de composicin de la fraccin
de cidos grasos.- Se calcularn las reas corregidas de cada uno de los componentes de la fraccin multiplicando el rea medida en el registro
por el factor de correccin determinado segn se
indica en el apartado anterior. El contenido de
cada componente vendr dado por la expresin:
83
fx Ax
Porcentaje X = 100
S (fx Ax)
Siendo:
fx = factor de correccin del componente x.
Ax = rea medida en el registro para el componente x.
S (fx Ax) = suma de todas las reas corregidas
correspondientes a los componentes de la fraccin.
9.6. Observaciones.
9.6.1. La puesta a punto de la columna se
determina obteniendo la resolucin de dos productos crticos como son el metilo oleato y el estearato. La resolucin viene determinada por la
expresin:
2D
Resolucin =
O+E
84
Siendo:
D = distancia entre los dos mximos de los
picos del oleato y el estearato.
O = ancho de la base del pico correspondiente
al oleato.
E = ancho de la base del pico correspondiente
al estearato.
Estos valores se determinan sobre el cromatograma obtenido con una muestra conteniendo
cantidades aproximadamente iguales de metilo
estearato y oleato, inyectando una cantidad tal
que la altura de estos picos alcance al 25-50% del
ancho del papel de registro. Si la resolucin calculada es igual o mayor que 1,0 la columna y el
instrumento se encuentran en condiciones satisfactorias. Todas las columnas en el transcurso de
su utilizacin sufren una prdida gradual en la
resolucin de los picos; cuando el valor llegue a
ser inferior a 1,0, deber instalarse una nueva
columna.
9.6.2. Para la identificacin de los picos se
pueden seguir dos criterios:
9.6.2.1. Criterio basado en los tiempos de
retencin.- Refirindose exclusivamente a los cidos que entran normalmente en la composicin
de las grasas naturales, sus steres aparecen en
el cromatograma en orden creciente de sus tomos de carbono y a su insaturacin. Esto es, el
palmtico (C16) aparece delante del estarico (C 18),
y los steres en C18 aparecen en el orden estearato, oleato, linoleato y linolenato. El ster del
cido arquico (C20:0), usualmente, aparece antes
del linolnico (C18:3), pero puede ocurrir lo contrario en algunos casos, dependiendo del tipo de
columna y de las condiciones de su utilizacin, o
incluso superponerse el uno al otro.
Operando en condiciones constantes, los tiempos de retencin son reproductibles en cada
especie qumica, siendo el criterio ms frecuente
empleado para su identificacin.
El tiempo de retencin viene dado por la distancia, medida en el cromatograma, entre el mximo del pico del aire y la posicin del mximo de la
banda. Trabajando con detector de llama de
hidrgeno, la salida del aire no se detecta, pudindose tomar, en este caso, el momento en que se
inicia la salida del disolvente, acusada por una
fuerte deflexin de la pluma del registrador.
9.6.2.2. Criterio basado en los tiempos de
retencin relativos. Los tiempos de retencin relativos son ms reproductibles. Las retenciones
relativas vienen determinadas por el cociente de
dividir el tiempo de retencin de cada pico por el
tiempo registrado para el pico del metilo palmitado, o bien por otro ster que se tome como comparacin, determinados todos ellos segn el criterio expuesto en el prrafo anterior.
9.7. Referencia.
9.7.1. Instituto de Racionalizacin y Normalizacin del Trabajo. Una Norma Espaola 55.118.
10. EXTRACCION DE LA GRASA EN
MANTEQUILLA
10.1. Principio.
Separacin de las fases acuosa y grasa
mediante fusin, decantacin y filtracin.
10.2. Material y aparatos.
10.2.1. Estufa de desecacin.
10.3. Procedimiento.
Tomar aproximadamente 50 g de la muestra de
mantequilla en una cpsula de porcelana e introducirla en una estufa de desecacin a una temperatura entre 45C y 50C hasta separacin de las
fases acuosa y grasa. Separar la capa grasa por
decantacin y filtrar a travs de papel de filtro
seco, evitando que pase la fase acuosa, manteniendo una temperatura de unos 40C.
10.4. Referencias.
1. Norma Internacional FIL-IDF 32: 1965.
Queso
I ORDEN DE 29 DE NOVIEMBRE DE
1985 POR LA QUE SE APRUEBAN LAS
NORMAS DE CALIDAD PARA QUESOS Y
QUESOS FUNDIDOS DESTINADOS AL
MERCADO INTERIOR (B.O.E. 6-12-1985).
Excelentsimos seores:
De conformidad con lo establecido en el Decreto 1043/1973, de 17 de mayo por la que se regula la normalizacin de productos ganaderos en el
mercado interior, y teniendo en cuenta los Decretos de Presidencia del Gobierno 2481/1967, de
21 de septiembre, por el que se aprueba el texto
del Cdigo Alimentario Espaol y el 2519/1974,
de 9 de agosto, sobre su entrada en vigor, aplicacin y desarrollo, parece oportuno dictar las presentes Normas Generales de Calidad para Quesos y Quesos Fundidos.
En su virtud, previo informe de la Comisin
Interministerial para la Ordenacin Alimentaria, de
conformidad con los acuerdos del FORPPA y a
propuesta de los Ministros de Economa y Hacienda, de Agricultura, Pesca y Alimentacin y de
Sanidad y Consumo, esta Presidencia del Gobierno dispone:
Artculo nico: Se aprueban las Normas Generales de Calidad para Quesos y Quesos Fundidos
con destino al mercado interior, que se recogen,
respectivamente, en los anejos 1 y 2 de esta
Orden.
Disposicin final.
La presente Orden entrar en vigor en todo el
territorio del Estado espaol el 1 de enero de
1986.
Disposiciones adicionales
Primera.- Las determinaciones analticas se
realizarn de acuerdo con los mtodos oficiales
vigentes.
Segunda.- Los Departamentos competentes
velarn por el cumplimiento de lo dispuesto en la
presente Orden a travs de sus rganos administrativos encargados, que coordinarn sus actuaciones; en todo caso, sin perjuicio de las competencias que correspondan a las Comunidades
Autnomas y a las Corporaciones Locales.
86
Disposicin derogatoria
A la entrada en vigor de la presente Orden quedan derogadas cuantas disposiciones de igual o
inferior rango se opongan a los aspectos que la
misma regula y, de forma especfica, los incluidos
en las siguientes disposiciones:
Ordenes del Ministerio de Agricultura, de 27 de
julio de 1970 ("Boletn Oficial del Estado" de 5 de
agosto); de 9 de abril de 1975 ("Boletn Oficial del
Estado" del 18); de 24 de noviembre de 1975
("Boletn Oficial del Estado" de 2 de diciembre); de
DEL
PRADO
MUOZ
M
rias obtenidas de la leche y que den un producto
final que posea las mismas caractersticas del producto definido en el prrafo anterior y siempre que
la relacin entre la casena y las proteinas sricas
sea igual o superior a la de la leche.
5. DENOMINACIONES
5.1. Todos los productos denominados
"queso" o que utilicen el nombre de alguna variedad de queso debern ajustarse a las disposiciones de esta norma general.
Los quesos que no tengan una denominacin
concreta o aqullos que aun tenindola no estn
protegidos por una norma individual de composicin y caractersticas especficas, que se fabriquen con leche de oveja, leche de cabra o con
mezclas de ambas entre s y con la de vaca,
debern incluir en su denominacin, despus de
la palabra "queso" o del nombre de la variedad de
que se trate, la indicacin de la especie o especies animales de las que proceda la leche empleada por orden descendente de proporciones, en
caracteres claros y legibles, de las mismas dimensiones que las utilizadas en el resto de la denominacin.
Para que un queso pueda ostentar una denominacin distinta habr de hacerlo al amparo de la
correspondiente norma individual de calidad; tras
su aprobacin y publicacin en el "Boletn Oficial
del Estado".
5.2. Atendiendo a su maduracin, los quesos
se denominarn de la siguiente forma:
5.2.1. Queso curado o madurado: Es el que,
tras el proceso de fabricacin, requiere mantenerse durante cierto tiempo a una temperatura y en
condiciones tales que se produzcan los cambios
fsicos y/o qumicos necesarios y caractersticos
del mismo.
5.2.2. Queso curado o madurado con mohos:
Es aqul en el que el curado se ha producido principalmente como consecuencia del desarrollo
caracterstico de mohos en su interior y/o sobre la
superficie del mismo.
5.2.3. Queso fresco: Es el que est dispuesto
para el consumo al finalizar el proceso de fabricacin.
5.2.4. Queso blanco pasterizado: Es aquel
queso fresco en el que el cogulo obtenido se
somete a un proceso de pasterizacin de "72C"
durante diecisis segundos u otras combinaciones de temperatura y tiempo de efecto equivalente, quedando dispuesto para el consumo al finalizar su proceso de fabricacin.
5.3. De acuerdo con su contenido en grasa lctea, expresado en porcentaje masa/masa sobre el
extracto seco lcteo, los quesos se denominarn:
-Extragraso: El que contenga un mnimo de
60%.
87
Enterobactericeas
totales/g ..................
1x103 1x104
E. coli/g .....................
1x102 1x103
Staph. aureus
enterotoxignico/g ...
1x102 1x103
Salmonella o
8. NORMA MICROBIOLOGICA Y
CONTAMINANTES
88
Shigella/25 g ...........
1x104
1x103
1x103
Ausencia
M
8.2. Contaminantes.
Las tolerancias de productos contaminantes y
sustancias txicas no debern sobrepasar los
lmites contenidos en la legislacin vigente y, en su
defecto, en las normas internacionales aceptadas
por el Estado espaol, que velar por su cumplimiento como garante de las mismas, con la determinacin y exigencia de responsabilidades en
este punto por el rgano del Estado correspondiente. El contenido mximo en nisina procedente
exclusivamente de cepas nisingenas ser de 100
mg/kg de queso.
ANEJO 2
Norma General de Calidad para los
Quesos Fundidos con destino al
mercado interior
1. NOMBRE DE LA NORMA
Norma General de Calidad para los Quesos
Fundidos.
2. OBJETO DE LA NORMA
La presente norma tiene por objeto definir
aquellas condiciones y caractersticas que deben
reunir los quesos fundidos para su comercializacin y consumo en el mercado interior.
3. AMBITO DE APLICACION
La presente norma abarca a todos los quesos
fundidos destinados a su comercializacin en el
mercado interior.
4. DEFINICION
Se entiende por queso fundido el producto
obtenido por molturacin y/o mezcla, fusin y
emulsin con tratamiento trmico de una o ms
variedades de queso con o sin adicin de agentes
emulgentes, de leche y productos lcteos y de
otros productos alimenticios.
5. DENOMINACIONES
En las denominaciones utilizadas para designar
los distintos quesos fundidos se cumplirn las
condiciones que se fijan a continuacin, en el bien
entendido que en todos los apartados de este
punto la expresin "extracto seco total" se refiere
al producto terminado, descontando los ingredientes contemplados en 6.2.3.
89
6. FACTORES ESENCIALES DE
COMPOSICION Y CALIDAD
6.1. Ingredientes esenciales: Queso.
6.2. Ingredientes facultativos:
6.2.1. Nata, mantequilla y grasa de mantequilla
deshidratada, as como leche en polvo y, en general, slidos lcteos. En cualquier caso la adicin
en todas estas materias primas viene limitada por
el porcentaje de lactosa, que no exceder del 6%
expresado en masa/masa sobre el producto terminado, descontando los ingredientes contemplados en 6.2.3.
6.2.2. Sodio cloruro en cantidades limitadas
por la prctica normal de fabricacin.
6.2.3. Sustancias aromticas naturales e idnticas naturales, especias, aderezos vegetales y
otros ingredientes naturales no lcteos, autorizados, con incidencia organolptica apreciable,
siempre que el extracto seco incorporado no
exceda del 30% en masa del extracto seco total
expresado sobre el producto terminado.
En la denominacin del producto se declarar
la presencia de la sustancia o sustancias aadidas, agregando las palabras "con..." (aqu, el
nombre de dichas sustancias).
90
Enterobactericeas
totales/g ..................
E. coli/g .................
Staph. aureus
enterotoxignico/g ...
1x101
1x101
1x102 1x103
Salmonella o
Shigella/25 g ...........
M
m
Enterobactericeas
totales/g ..................
1x102 1x103
E. coli/g ...................
1x101 1x102
II METODOS DE ANALISIS
(B.O.E. 30-8-1979 Y 30-10-1991)
Staph. aureus
enterotoxignico/g ...
1x102 1x103
Salmonella o
Shigella/25 g ...........
91
92
Para los quesos fundidos en porciones o lonchas, en tubos o vasos, en polvo o rallados, as
como para los quesos preenvasados y los de
pequeo tamao, se utilizar el tercer procedimiento.
a) Toma de muestra mediante cuchillo.
Con ayuda de un cuchillo de hoja puntiaguda,
se darn dos cortes radiales desde el centro del
queso, si ste tiene base circular, o paralelo a los
lados, si la base del queso o del queso fundido es
rectangular o cuadrangular.
El tamao del trozo as obtenido deber ser tal,
que despus de haber retirado la capa superficial
no comestible, la parte restante no tenga un peso
inferior a 50 gramos.
b) Toma de muestras mediante sonda.
Segn el tamao, peso y clase del queso, se
emplear una de las tcnicas siguientes:
La sonda podr introducirse oblicuamente en
direccin al centro del queso una o varias veces
en una de las caras planas, en un punto situado a
una distancia mnima de 10 a 20 centmetros del
borde.
La sonda podr introducirse horizontalmente
en la pared vertical del queso, a igual distancia
entre las dos superficies planas hasta el centro del
queso.
La sonda podr introducirse perpendicularmente por una de las caras del queso, para alcanzar la zona opuesta pasando por el centro.
Cuando se trate de quesos transportados en
barriles, cajas u otros recipientes a granel, o de
quesos que formen grandes bloques compactos,
la toma de muestras, podr realizarse haciendo
pasar la sonda oblicuamente de arriba a abajo,
atravesando todo el contenido del recipiente.
En los quesos grandes la parte externa del
cilindro, por lo menos 2 centmetros, tomados de
muestra por la sonda y comprendiendo la corteza,
podr utilizarse para tapar el agujero hecho en el
queso. Los agujeros dejados por la sonda, debern taparse con gran cuidado, y si es posible, se
recubrirn con un producto obturador aprobado.
El resto de cilindro o cilindros, constituir la muestra.
c) Toma de muestras utilizando una pieza entera.
Este mtodo deber reservarse normalmente
para los quesos de tamao pequeo preenvasado
o no, y para los quesos y quesos fundidos presentados en cajitas conteniendo porciones envasadas o lonchas, en polvo o rallados y quesos
fundidos en tubos o vasos.
Deber tomarse un nmero suficiente de porciones, de lonchas o de piezas en general para
obtener una muestra cuyo peso sea de 50 gramos
como mnimo.
d) Toma de muestras de quesos en salmuera.
M
1.4. Procedimiento.
Moler la muestra en un mortero con Sodio Sulfato anhidro PA hasta obtener una masa granulosa. Extraer la masa con n-Pentano PA o Eter de
Petrleo 40-60C PA-ISO (se puede usar un aparato de extraccin continuo) y evaporar el disolvente al bao de agua o a presin reducida.
1.5. Referencia.
1.5.1. Norma internacional FIL-IDF 32: 1965.
2.4. Procedimiento.
2.4.1. Preparacin de la muestra.- Antes de
efectuar el anlisis, eliminar la corteza, capa o
superficie mohosa que recubre el queso, con
objeto de obtener una muestra representativa del
queso tal como se consume normalmente. Triturar
la muestra con 2.2.8., mezclar la masa triturada
rpidamente, y si es posible triturarla por segunda
vez y mezclarla de nuevo concienzudamente
(2.6.4.). Pasar la muestra preparada a un recipiente cerrado hermticamente hasta el momento del
anlisis, que se efectuar en el mismo da (2.6.5.).
2.4.2. Determinacin.- Secar el matraz 2.2.3.
con 2.2.5. en la estufa durante un intervalo de
media hora. Dejar que se enfre el matraz a la temperatura ambiente de la balanza y pesar el matraz
enfriado con aproximacin de 0,1 mg.
Pesar, con aproximacin de 1 mg en el aparato de extraccin 2.2.2. o en un vaso o matraz de
100 ml, de 1 a 3 g de la muestra de queso preparada. La muestra del ensayo podr tambin
pesarse utilizando una lmina de celulosa 2.2.7.,
que posteriormente se plegar e introducir en el
tipo de vasija seleccionada.
Aadir de 8 a 10 ml de Acido Clorhdrico
(segn la forma del aparato de extraccin) y agitar
la vasija ligeramente en un bao de agua hirviendo o sobre una llama hasta que el queso est
completamente disuelto. Dejar la vasija en reposo
durante veinte minutos en el bao de agua hirviendo y despus enfriar, por ejemplo, en agua
corriente.
Si la digestin del queso se ha hecho en el aparato de extraccin, aadir 10 ml de Etanol 96%
v/v PA y mezclar el contenido, removindolo ligeramente, pero de un modo homogneo en el aparato sin cerrar.
Si la digestin del queso se ha hecho en una
vasija distinta del matraz de extraccin, verter el
93
94
M
2.6.2. Para el ensayo de los perxidos verter
10 ml de Eter Dietlico estabilizado con ~ 6 ppm
de BHT PA-ACS en una pequea probeta tapada
con tapn de vidrio, previamente enjuagada con
Eter Dietlico estabilizado con ~ 6 ppm de BHT
PA-ACS, aadir 1 ml de solucin al 10% de Potasio Yoduro PA-ISO, recin preparada. Agitar y
dejar reposar durante un minuto. No debe aparecer ningn color amarillo en ninguna de las capas.
El Eter Dietlico estabilizado con ~ 6 ppm de BHT
PA-ACS podr mantenerse exento de perxidos,
aadiendo una lmina de zinc hmeda, que deber sumergirse completamente en una solucin
cida diluida de Cobre II Sulfato 5-hidrato PAACS-ISO durante un minuto y despus lavar con
agua. Utilizar por litro una superficie de 80 cm2
aproximadamente de lmina de zinc, cortarla en
bandas suficientemente largas para que lleguen
por lo menos hasta la mitad del recipiente.
2.6.3. La mezcla de disolventes podr sustituirse en aquellos casos en que su utilizacin se haya
previsto por Eter Dietlico estabilizado con ~6 ppm
de BHT PA-ACS o Eter de Petrleo.
2.6.4. Si la muestra no se pudiera triturar mezclarla cuidadosamente mediante un amasado
intenso.
2.6.5. En caso de que haya que retrasar inevitablemente esta operacin, tomar las precauciones necesarias para asegurar la conservacin
adecuada de la muestra e impedir la condensacin de la humedad en la superficie interior.
2.6.6. Cuando se utilice una centrfuga que no
est provista de un motor trifsico pueden producirse chispas y entonces habr que tomar las
debidas precauciones para evitar explosiones o
incendios debido a la presencia de los vapores de
ter, por ejemplo, en el caso de una rotura de un
tubo.
2.6.7. Si el trasvase no se efecta mediante un
sifn, quiz sea necesario tener que aadir un
poco de agua para elevar el plano intermedio
entre las dos capas, con objeto de facilitar la
decantacin.
2.7.. Referencia.
2.7.1. Cdigo de Principios referente a la leche
y a los Productos Lcteos. Norma B-3. FIL-IDF
5A: 1969.
3.5. Referencias.
3.5.1. Federacin Internacional de Lechera.
Norma FIL-IDF 4: 1958.
3.1. Principio.
El extracto seco del queso y de los quesos
fundidos es la masa, expresada en porcentaje
ponderal, que queda despus del proceso de
desecacin.
La precisin del mtodo es de 0,1%.
4.1. Principio.
Mineralizacin de determinada cantidad de
muestra con ayuda de cido sulfrico en presencia de hidrgeno perxido. El fosfato se trata con
sodio molibdato e hidracina sulfato como agente
reductor. El azul de molibdeno as formado se
95
96
4.3. Reactivos.
131058 Acido Sulfrico 96% PA-ISO
131074 Agua PA-ACS
131350 Hidracinio Sulfato PA
141076 Hidrgeno Perxido 30% p/v (100 vol.)
PRS
131509 Potasio di-Hidrgeno Fosfato PA
131701 Sodio Molibdato 2-hidrato PA
4.3.1. Acido Sulfrico 96% PA-ISO.
4.3.2. Hidrgeno Perxido 30% p/v (100 vol.)
PRS.
4.3.3. Reactivo de Molibdato y de Hidracina
Sulfato.
4.3.3.1. Solucin 2,5% de Sodio Molibdato.Disolver 12,5 g de Sodio Molibdato 2-hidrato PA
en Acido Sulfrico 10N (usar Acido Sulfrico 96%
PA-ISO y diluir convenientemente con Agua PAACS), completando hasta 500 ml.
4.3.3.2. Solucin 0,15% de Hidracinio Sulfato.Disolver 0,30 g de Hidracinio Sulfato PA, en Agua
PA-ACS, completando hasta 200 ml.
4.3.3.3. Inmediatamente antes de su empleo,
mezclar 25 ml. de 4.3.3.1. con 10 ml de 4.3.3.2.
y diluir la mezcla hasta 100 ml con Agua PA-ACS
para preparar el reactivo de Molibdato y de Hidracinio Sulfato. Esta solucin no puede conservarse.
4.3.3.4. Solucin normalizada de fosfato.Disolver 0,4390 g. de Potasio di-Hidrgeno Fosfato PA en Agua PA-ACS hasta obtener una solucin de 1.000 ml. Esta solucin contiene 100 g.
de fsforo en 1 ml. El Potasio di-Hidrgeno Fosfato PA debe haber sido secado durante cuarenta y
ocho horas en presencia de un agente de desecacin eficaz, por ejemplo, el Acido Sulfrico 96%
M
Aadir Agua PA-ACS a los matraces para obtener un volumen aproximado de 25 ml, aadir
20 ml del reactivo de Molibdato y de Hidracinio
Sulfato, llenar hasta el aforo con Agua PA-ACS,
mezclar, colocar el matraz con agua hirviendo y
dejar que se forme el color durante quince minutos.
Enfriar a la temperatura ambiente en agua fra y
medir la densidad ptica de los testigos con respecto al de valor cero, a una longitud de onda de
700 nm.
Determinar la curva patrn sealando las diferencias de densidad ptica con respecto a las
cantidades de microgramos de fsforo.
4.4.4. Ensayo en blanco.
Efectuar un ensayo en blanco siguiendo el procedimiento expresado en 4.4.2., pero sin queso.
4.5. Clculo.
Calcular el contenido en fsforo de la muestra
por medio de la frmula:
P
Contenido en fsforo (%) =
100 W
Siendo:
P = peso, en mg, de fsforo obtenido al convertir la medida obtenida en el colormetro utilizando la curva patrn.
W = peso, en g, de la muestra tomada para el
anlisis.
4.6. Referencia.
4.6.1. Federacin Internacional de Lechera.
Norma FIL-IDF 33A: 1971.
5. DETERMINACION DEL CONTENIDO
EN ACIDO CITRICO
5.1. Principio.
Obtencin de un filtrado claro por dispersin de
la muestra en agua y clarificacin por la adicin de
cido tricloroactico. El filtrado se trata con piridina y anhdrido actico y se forma con el cido
ctrico un compuesto de color amarillo. El color
obtenido se mide por fotometra.
La precisin del mtodo es de 0,1 g de cido
ctrico anhidro por 100 g de producto.
5.2. Material y aparatos.
5.2.1. Balanza analtica, con precisin que permita de 0,001 g.
5.2.2. Colormetro fotoelctrico que permita
lecturas a una longitud de onda de 428 nm.
5.2.3. Bao de agua con control termosttico
que permita una regulacin a 32 1C.
5.2.4. Aparato apropiado para triturar la muestra.
97
98
Siendo:
C = peso, en g., de cido ctrico obtenido al
convertir la medida obtenida en el colormetro utilizando la curva patrn.
W = peso, en g., de la muestra tomada para el
anlisis.
5.6. Referencia.
5.6.1. Federacin Internacional de Lechera.
Norma FIL-IDF 34B: 1971.
6. DETERMINACION DEL CONTENIDO
EN LACTOSA
6.1. Principio.
Preparacin de un filtrado claro del queso por
dispersin de la muestra en agua y defecacin por
zinc ferrocianuro. A una parte del filtrado se le
aade una solucin que contiene un complejo
cprico. Se determina gravimtricamente el precipitado de cobre I xido, formado por la accin
reductora de la lactosa y los resultados obtenidos
se convierten, con la ayuda de tablas, en lactosa
anhidra o hidratada.
La precisin del mtodo es de 0,15 g de lactosa anhidra por 100 g de producto.
6.2. Material y aparatos.
6.2.1. Balanza analtica. Sensibilidad 0,1 mg.
6.2.2. Estufa regulable a 103C 2C.
6.2.3. Mortero de porcelana de un contenido
aproximado de 300 ml, de un dimetro interior de
unos 110 nm, con una mano apropiada.
6.2.4. Vaso de precipitados de 400 ml
6.2.5. Crisol filtrante de porcelana de un contenido aproximado de 35 ml y de una porosidad
media de 3-15 micras, cuyo peso no debe variar
ms de 1,0 mg cuando se le aplica el mtodo
operatorio descrito ms adelante, sin utilizar el
queso.
6.2.6. Desecador provisto de un agente de
desecacin eficaz, como el Gel de Slice con indicador QP.
6.2.7. Matraz aforado de 500 ml.
6.2.8. Matraz erlenmeyer de 500 ml.
6.2.9. Pipetas de 25 y 100 ml.
6.2.10. Probeta graduada de 20 o 25 ml.
6.2.11. Embudo de vidrio de unos 150 mm de
dimetro.
6.2.12. Vidrio de reloj destinado a cubrir el vaso
de precipitados de 400 ml.
6.2.13. Varilla de vidrio con proteccin de
goma en la punta.
6.2.14. Dispositivo de aspiracin de una seccin media.
6.2.15. Matraz de vaco con portacrisol.
6.2.16. Filtro plegado o filtro plano de porosidad media, de dimensin correspondiente al
embudo 6.2.11.
6.3. Reactivos.
131036 Acido Ntrico 60% PA-ISO
131074 Agua PA-ACS
131085 Etanol 96% v/v PA
131270 Cobre II Sulfato 5-hidrato PA-ACS-ISO
211335 Gel de Slice 3-6 mm con indicador QP
M
211456 Piedra Pmez grnulos QP
131505 Potasio Hexacianoferrato II 3-hidrato
PA-ACS
131729 Potasio Sodio Tartrato 4-hidrato PAACS-ISO
131687 Sodio Hidrxido lentejas PA-ACS-ISO
131787 Zinc Sulfato 7-hidrato PA
6.3.1. Solucin de Zinc Sulfato.
Disolver 30 g de Zinc Sulfato 7-hidrato PA en
Agua PA-ACS, completando hasta 100 ml.
6.3.2. Solucin de Potasio Hexacianoferrato II.
Disolver 15 g de Potasio Hexacianoferrato II
3-hidrato PA-ACS en Agua PA-ACS completando
hasta 100 ml
6.3.3. Solucin de Cobre II Sulfato.
Disolver 70 g de Cobre II Sulfato 5-hidrato PAACS-ISO en Agua PA-ACS, completando hasta
1.000 ml y filtrando si es necesario.
6.3.4. Solucin de Tartrato Alcalino.
Disolver 350 g de Potasio Sodio Tartrato
4-hidrato PA-ACS-ISO en Agua PA-ACS, completando hasta 1.000 ml Dejar reposar dos das en
un frasco tapado y filtrar. La solucin se deteriorar al cabo de un cierto tiempo, lo que puede falsear el ensayo en blanco (resultados ms elevados).
6.3.5. Acido Ntrico diluido: Acido Ntrico 60%
PA-ISO diluyendo a 15-20% en peso.
6.3.6. Etanol 96% v/v PA. Puede ser desnaturalizado con un desnaturalizante apropiado que
no deje residuos despus de la evaporacin.
Los reactivos deben ser de calidad analtica.
6.4. Procedimiento.
6.4.1. Preparacin de la muestra para el ensayo.
Antes del anlisis se quitar la corteza o capa
superficial mohosa del queso, a fin de obtener una
muestra representativa del queso tal como habitualmente se consume. La muestra ser triturada
a continuacin en un triturador u otro aparato
apropiado y mezclada ntimamente, evitando las
prdidas por evaporacin. La muestra as preparada ser conservada en un recipiente cerrado
hasta su anlisis, que deber efectuarse el mismo
da.
6.4.2. Determinacin.
Lavar el crisol filtrante con Acido Ntrico diluido,
enjuagarlo perfectamente con Agua PA-ACS
caliente y despus con 10 ml de Etanol 96% v/v
PA. Secar el crisol a 103C. 2C durante treinta
minutos, enfriar en un desecador y pesar.
Colocar, aproximadamente, 10 g de la muestra,
pesados exactamente, en un mortero de porcelana. Dispersar la muestra machacndola con la
mano del mortero, aadiendo pequeas cantidades de Agua PA-ACS caliente (60 - 70C) Trasvasar el contenido del mortero a un matraz aforado
de 500 ml Diluir en 400 ml, aproximadamente.
Aadir 5 ml de la solucin de Zinc Sulfato, mezclando suavemente por rotacin del matraz alrededor de su eje, mantenindolo inclinado. Aadir
del mismo modo 5 ml de la solucin de Potasio
Hexacianoferrato II.
Enfriar el contenido del matraz a 20C. y completar con Agua PA-ACS (a 20C.) hasta el aforo.
Cerrar el matraz con un tapn seco y mezclar ntimamente su contenido mediante una agitacin
enrgica. Filtrar con un papel de filtro seco, desechando los primeros ml filtrados.
Tomar con una pipeta 25 ml de la solucin de
Cobre II Sulfato (6.3.3.) y 25 ml de la solucin
de Tartrato Alcalino (6.3.4.) y llevarlo a un
vaso de precipitado de 400 ml Mezclar por movimiento de rotacin. Calentar la muestra hasta
ebullicin. Aadir 100 ml del filtrado de la muestra
con ayuda de una pipeta. Cubrir el vaso con
un vidrio de reloj y calentar de nuevo. Detener
el calentamiento exactamente seis minutos despus de alcanzar nuevamente el punto de ebullicin.
Para asegurar una ebullicin ms regular y para
evitar las proyecciones del lquido, se podrn aadir pequeos trozos de Piedra Pmez 4 a 8 mm
QP tratados previamente de la misma manera que
el crisol y pesados con ste ltimo.
Enjuagar el vidrio de reloj con un poco de Agua
PA-ACS caliente encima del vaso. Trasvasar todo
el contenido del vaso a un crisol filtrante preparado previamente (segn se indica con anterioridad). Para efectuar este trasvase ayudarse de
chorros de Agua PA-ACS caliente y de una varilla
de vidrio con proteccin de goma en la punta. El
filtrado debe ser de color azul. Si es incoloro,
repetir el anlisis utilizando una cantidad ms
pequea de filtrado diluida en 100 ml.
Enjuagar cuidadosamente el crisol filtrante con
Agua PA-ACS caliente y despus con 10 ml de
Etanol 96% v/v PA. Secar el crisol durante treinta
minutos a 103C 2C, enfriar en un desecador y
pesar.
6.4.3. Ensayo en blanco.
Efectuar un ensayo en blanco siguiendo el procedimiento descrito pero utilizando 10 ml de agua
destilada en lugar de 10 g de queso.
6.5. Clculos.
Corregir la masa de cobre I xido encontrada en el anlisis de la muestra restndole el resultado del ensayo en blanco. Buscar en las tablas
la cantidad de lactosa anhidra o hidratada correspondiente a la masa corregida de cobre I
xido.
Calcular el contenido en lactosa anhidra o
hidratada de la muestra con ayuda de la frmula
siguiente:
99
100
M
TABLA PARA DETERMINAR LA CANTIDAD DE LACTOSA (MONOHIDRATADA Y ANHIDRA) EN
MILIGRAMOS, SEGUN LA CANTIDAD DE COBRE I OXIDO EN MILIGRAMOS
Cobre I
Oxido
(Cu2O)
en mg
Lactosa
1-hidrato
(C12H22O11.H2O)
en mg
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
5,1
5,8
6,4
7,1
7,7
8,4
9,0
9,7
10,3
11,0
11,6
12,3
12,9
13,6
14,2
14,8
15,5
16,2
16,8
17,5
18,1
18,7
19,4
20,0
20,7
21,3
22,0
22,6
23,3
23,9
24,6
25,2
25,9
26,5
27,2
27,8
28,5
29,1
29,8
30,4
31,4
31,7
32,4
33,0
33,7
34,3
34,9
35,3
36,2
36,9
37,5
Lactosa
anhidra
(C12H22O11)
en mg
4,8
5,5
6,1
6,7
7,3
8,0
8,6
9,2
9,8
10,5
11,0
11,7
12,3
12,9
13,5
14,1
14,7
15,4
16,0
16,6
17,2
17,8
18,4
19,0
19,7
20,2
20,9
21,5
22,1
22,7
23,4
23,9
24,6
25,2
25,8
26,4
27,1
27,6
28,3
28,9
29,5
30,1
30,8
31,4
32,0
32,6
33,2
33,8
34,4
35,1
35,6
Cobre I
Oxido
(Cu2O)
en mg
Lactosa
1-hidrato
(C12H22O11.H2O)
en mg
Lactosa
anhidra
(C12H22O11)
en mg
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
38,2
38,8
39,4
40,1
40,8
41,4
42,0
42,7
43,3
44,0
44,6
45,3
45,9
46,6
47,2
47,9
48,5
49,2
49,8
50,4
51,1
51,8
52,4
53,1
53,7
54,4
55,0
55,7
56,3
57,0
57,6
58,2
58,9
59,5
60,2
60,8
61,4
62,1
62,8
63,4
64,0
64,6
65,3
66,0
66,6
67,2
67,9
68,6
69,2
69,9
70,5
36,3
36,9
37,4
38,1
38,8
39,3
39,9
40,6
41,1
41,8
42,4
43,0
43,6
44,3
44,8
45,5
46,1
46,7
47,3
47,9
48,5
49,2
49,8
50,4
51,0
51,7
52,3
52,9
53,5
54,2
54,7
55,3
56,0
56,5
57,2
57,8
58,3
59,0
59,7
60,2
60,8
61,4
62,0
62,7
63,3
63,8
64,5
65,2
65,7
66,4
67,0
101
102
Cobre I
Oxido
(Cu2O)
en mg
Lactosa
1-hidrato
(C12H22O11.H2O)
en mg
112
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
123
124
125
126
127
128
129
130
131
132
133
134
135
136
137
138
139
140
141
142
143
144
145
146
147
148
149
150
151
152
153
154
155
156
157
158
159
160
161
162
163
164
71,2
71,9
72,5
73,2
73,8
74,5
75,1
75,8
76,5
77,1
77,7
78,4
79,1
79,8
80,4
81,0
81,7
82,3
83,0
83,7
84,4
85,0
85,6
86,3
87,0
87,7
88,3
89,0
89,6
90,3
91,0
91,6
92,2
92,9
93,6
94,3
94,9
95,6
96,2
96,9
97,6
98,2
98,8
99,5
100,2
100,8
101,5
102,2
102,8
103,5
104,2
104,9
105,6
Lactosa
anhidra
(C12H22O11)
en mg
67,6
68,3
68,9
69,5
70,1
70,8
71,3
72,0
72,7
73,2
73,8
74,5
75,1
75,8
76,4
77,0
77,6
78,2
78,9
79,5
80,2
80,8
81,3
82,0
82,7
83,3
83,9
84,6
85,1
85,8
86,5
87,0
87,6
88,3
88,9
89,6
90,2
90,8
91,4
92,1
92,7
93,3
93,9
94,5
95,2
95,8
96,4
97,1
97,7
98,3
99,0
99,7
100,3
Cobre I
Oxido
(Cu2O)
en mg
Lactosa
1-hidrato
(C12H22O11.H2O)
en mg
165
166
167
168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
198
199
200
201
202
203
204
205
206
207
208
209
210
211
212
213
214
215
216
217
106,2
106,9
107,6
108,2
108,9
109,6
110,2
110,9
111,6
112,3
113,0
113,6
114,3
115,0
115,6
116,3
117,0
117,6
118,3
119,0
119,7
120,3
121,0
121,7
122,4
123,0
123,7
124,3
125,0
125,6
126,3
127,0
127,7
128,4
129,1
129,7
130,4
131,1
131,8
132,4
133,1
133,8
134,5
135,2
135,8
136,5
137,2
137,9
138,6
139,3
140,0
140,6
141,3
Lactosa
anhidra
(C12H22O11)
en mg
100,9
101,6
102,2
102,8
103,5
104,4
104,7
105,4
106,0
106,7
107,4
107,9
108,6
109,3
109,8
110,5
111,2
111,7
112,4
113,1
113,7
114,3
115,0
115,6
116,3
116,9
117,5
118,1
118,8
119,3
120,0
120,7
121,3
122,0
122,6
123,2
123,9
124,5
125,2
125,8
126,4
127,1
127,8
128,4
129,0
129,7
130,3
131,0
131,7
132,3
133,0
133,6
134,2
M
Cobre I
Oxido
(Cu2O)
en mg
Lactosa
1-hidrato
(C12H22O11.H2O)
en mg
Lactosa
anhidra
(C12H22O11)
en mg
Cobre I
Oxido
(Cu2O)
en mg
218
219
220
221
222
223
224
225
226
227
228
229
230
231
232
233
234
235
236
237
238
239
240
241
242
243
244
245
246
247
248
249
250
251
252
253
254
255
256
257
258
259
260
261
262
263
264
265
266
267
268
269
270
142,0
142,6
143,3
144,0
144,7
145,4
146,1
146,8
147,5
148,1
148,8
149,4
150,1
150,8
151,4
152,1
152,8
153,4
154,1
154,8
155,4
156,1
156,9
157,4
158,1
158,7
159,4
160,1
160,7
161,4
162,0
162,7
163,4
164,0
164,7
165,4
166,0
166,7
167,3
168,0
168,7
169,4
170,0
170,7
171,3
172,0
172,6
173,3
174,0
174,7
175,4
176,1
176,8
134,9
135,5
136,1
136,8
137,5
138,1
138,7
139,5
140,1
140,7
141,4
141,9
142,6
143,3
143,8
144,5
145,2
145,7
146,4
147,1
147,6
148,3
149,1
149,5
150,2
150,8
151,4
152,1
152,7
153,3
153,9
154,6
155,2
155,8
156,5
157,4
157,7
158,4
158,9
159,6
160,3
160,9
161,5
162,2
162,7
163,4
164,0
164,6
165,3
166,0
166,6
167,3
168,0
271
272
273
274
275
276
277
278
279
280
281
282
283
284
285
286
287
288
289
290
291
292
293
294
295
296
297
298
299
300
301
302
303
304
305
306
307
308
309
310
311
312
313
314
315
316
317
318
319
320
321
322
323
Lactosa
1-hidrato
(C12H22O11.H2O)
en mg
177,5
178,2
178,8
179,5
180,2
180,9
181,6
182,3
183,0
183,6
184,3
185,0
185,7
186,4
187,1
187,8
188,5
189,1
189,8
190,5
191,2
191,9
192,6
193,3
194,0
194,7
195,4
196,0
196,7
197,4
198,1
198,8
199,5
200,2
200,9
201,6
202,3
203,0
203,7
204,4
205,2
205,9
206,6
207,3
208,0
208,7
209,5
210,2
210,9
211,6
212,3
213,0
213,7
Lactosa
anhidra
(C12H22O11)
en mg
168,6
169,3
169,9
170,5
171,2
171,9
172,5
173,2
173,9
174,4
175,1
175,8
176,4
177,1
177,7
178,4
179,1
179,6
180,3
181,0
181,6
182,3
183,0
183,6
184,3
185,0
185,6
186,2
186,9
187,5
188,2
188,9
189,5
190,2
190,9
191,5
192,2
192,9
193,5
194,2
194,9
195,6
196,3
196,9
197,6
198,3
199,0
199,7
200,4
201,0
201,7
202,4
203,0
103
104
Cobre I
Oxido
(Cu2O)
en mg
Lactosa
1-hidrato
(C12H22O11.H2O)
en mg
Lactosa
anhidra
(C12H22O11)
en mg
Cobre I
Oxido
(Cu2O)
en mg
324
325
326
327
328
329
330
331
332
333
334
335
336
337
338
339
340
341
342
343
344
345
346
347
348
349
350
351
352
353
354
355
356
357
358
359
360
361
362
363
364
365
366
367
368
369
370
371
372
373
374
375
376
377
214,4
215,2
215,9
216,6
217,3
218,0
218,8
219,5
220,2
220,9
221,6
222,4
223,1
223,8
224,5
225,2
225,9
226,6
227,2
227,9
228,6
229,3
230,0
230,7
231,4
232,1
232,8
233,5
234,2
234,9
235,6
236,2
237,0
237,7
238,4
239,1
239,8
240,5
241,2
241,8
242,5
243,2
243,9
244,6
245,2
245,9
246,6
247,3
248,0
248,7
249,4
250,1
250,8
251,6
203,7
204,4
205,1
205,8
206,4
207,1
207,9
208,5
209,2
209,9
210,5
211,3
211,9
212,6
213,3
213,9
214,6
215,3
215,8
216,5
217,2
217,8
218,5
219,2
219,8
220,5
221,2
221,8
222,5
223,2
223,8
224,4
225,2
225,8
226,5
227,1
227,8
228,5
229,1
229,7
230,4
231,0
231,7
232,4
232,9
233,6
234,3
234,9
235,6
236,3
236,9
237,6
238,3
239,0
378
379
380
381
382
383
384
385
386
387
388
389
390
391
392
393
394
395
396
397
398
399
400
401
402
403
404
405
406
407
408
409
410
411
412
413
414
415
416
417
418
419
420
421
422
423
424
425
426
427
428
429
430
431
Lactosa
1-hidrato
(C12H22O11.H2O)
en mg
252,3
253,0
253,7
254,4
255,1
255,8
256,6
257,3
258,0
258,7
259,5
260,2
260,9
261,6
262,3
263,1
263,8
264,5
265,2
265,9
266,7
267,4
268,1
268,8
269,6
270,3
271,0
271,8
272,5
273,2
274,0
274,7
275,5
276,2
276,9
277,7
278,4
279,1
279,9
280,6
281,4
282,2
283,0
283,7
284,5
285,2
286,0
286,8
287,6
288,3
289,1
289,9
290,7
291,4
Lactosa
anhidra
(C12H22O11)
en mg
239,7
240,4
241,0
241,7
242,3
243,0
243,8
244,4
245,1
245,8
246,5
247,2
247,9
248,5
249,2
249,9
250,6
251,3
251,9
252,6
253,4
254,0
254,7
255,4
256,1
256,8
257,5
258,2
258,9
259,5
260,3
261,0
261,7
262,4
263,1
263,8
264,5
265,1
265,9
266,6
267,3
268,1
268,9
269,5
270,3
270,9
271,7
272,5
273,2
273,9
274,6
275,4
276,2
276,8
M
Cobre I
Oxido
(Cu2O)
en mg
Lactosa
1-hidrato
(C12H22O11.H2O)
en mg
432
433
434
435
436
437
438
439
440
441
442
443
444
445
446
447
448
449
450
292,2
293,0
293,8
294,5
295,3
296,0
296,8
297,6
298,4
299,2
299,9
300,7
301,4
302,2
303,0
303,7
304,5
305,2
306,0
Lactosa
anhidra
(C12H22O11)
en mg
277,6
278,4
279,1
279,8
280,5
281,2
282,0
282,7
283,5
284,2
284,9
285,7
286,3
287,1
287,9
288,5
289,3
289,9
290,7
7. NITRATOS Y NITRITOS
7.1. Principio.
Tratamiento de la muestra con agua caliente,
precipitacin de la grasa y protena y filtracin.
Reduccin en una porcin del filtrado del nitrato a nitrito, por medio de una columna de cadmio.
Desarrollo de una reaccin coloreada en alcuotas
del filtrado no reducida, por adicin de sulfanilamida y cloruro de N-1-Naftiletilendiamina. Medicin
de la absorbancia de la solucin obtenida a
538 nm
7.2. Material y aparatos.
7.2.1. Aparato apropiado para triturar la muestra.
7.2.2. Mezclador-homogeneizador con recipiente de vidrio de 250 y 400 ml.
7.2.3. Papel de filtro de poro medio, de 15 cm
de dimetro, exento de nitratos y nitritos.
7.2.4. Columna de reduccin similar a la de la
figura (ver pgina siguiente).
7.2.5. Colormetro fotoelctrico o espectrofotmetro que permita lecturas a una longitud de
onda de 538 nm.
7.3. Reactivos.
131020 Acido Clorhdrico 37% PA-ACS-ISO
182108 Acido Clorhdrico 2 mol/l (2N) SV
181023 Acido Clorhdrico 0,1 mol/l (0,1N) SV
131669 Acido Etilendiaminotetraactico Sal
Disdica 2-hidrato PA-ACS-ISO
Sal Disdica 2-hidrato
Pinza de
Hoffman
105
Conector
lana de
vidrio
Figura
Columna de reduccin de nitrato
106
7.4. Procedimiento.
7.4.1. Preparacin de la columna de cadmio.
7.4.1.1. Llevar los grnulos de cadmio (aproximadamente 40-60 g para cada columna) a un
erlenmeyer de 250 ml. Aadir suficiente solucin
de Acido Clorhdrico 2 mol/l (2N) SV (7.3.4.) para
cubrir el cadmio. Agitar durante unos minutos.
Decantar la solucin y lavar el cadmio en el matraz
M
na con Agua PA-ACS, solucin de Acido Clorhdrico 0,1 mol/l (0,1N) SV y Agua PA-ACS sucesivamente.
Si la columna no muestra todava una eficacia
satisfactoria, repetir el procedimiento especificado
en 7.4.1.3.
7.4.4. Preparacin de la muestra: Antes del
anlisis quitar la corteza o la capa superficial, de
modo que se obtenga una muestra representativa
del queso tal y como se consume habitualmente.
Triturar la muestra con un triturador u otro aparato apropiado y mezclar cuidadosamente, evitando
las prdidas por evaporacin.
La muestra as preparada se conservar en un
recipiente cerrado hasta el momento del anlisis,
que se realizar tan pronto como sea posible. Si el
retraso es inevitable se deben tomar todas las
precauciones para asegurar la conservacin de la
muestra y para prevenir la condensacin de
humedad en la superficie interior del recipiente.
7.4.5. Extraccin y desproteinizacin.
Pesar con precisin de 1 mg, 10 g de muestra
y llevarlos al recipiente de vidrio del mezcladorhomogeneizador. Aadir gradualmente 164 ml de
Agua PA-ACS a 50-55C. Mezclar hasta que el
queso est bien suspendido. Aadir en el siguiente orden: 6 ml de solucin de Zinc Sulfato 7-hidrato PA (7.3.6.), 6 ml de solucin de Potasio Hexacianoferrato II 3-hidrato PA-ACS (7.3.7.) y 20 ml
de solucin tampn (7.3.3.) a la suspensin de
queso, agitando cuidadosamente despus de
cada adicin. Despus de tres minutos filtrar a travs del papel de filtro, recogiendo el filtrado en un
Erlenmeyer de 250 ml.
Es necesario obtener un filtrado transparente.
Por esta razn, en algunos quesos puede ser necesario aadir una cantidad mayor de reactivos de
precipitacin, disminuyendo en este caso la cantidad de Agua PA-ACS en la misma proporcin.
7.4.6. Reduccin de nitrato a nitrito.
Pipetear 20 ml del filtrado obtenido en el apartado anterior y operar de la misma forma que en
el apartado (7.4.2.1.)
7.4.7. Preparacin de la solucin para la determinacin de nitrito en la muestra.
Pipetear 20 ml de filtrado del apartado 7.4.5.
en un matraz aforado de 100 ml y completar con
Agua PA-ACS. Mezclar bien.
7.4.8. Determinacin colorimtrica.
Pipetear alcuotas iguales dependiendo del
contenido probable en nitritos, de la solucin
7.4.7. y del eluido del apartado 7.4.6. en matraces
aforados de 100 ml. Aadir Agua PA-ACS hasta
un volumen aproximado de 60 ml. Aadir 5 ml de
solucin I (7.4.9.) y 5 ml de solucin II (7.3.10.).
Mezclar cuidadosamente y dejar reposar la solucin durante cinco minutos a temperatura ambiente protegindola de la luz solar directa.
Aadir 2 ml de solucin III. Mezclar cuidadosamente y dejar reposar cinco minutos a temperatura ambiente al abrigo de la luz solar directa. Completar hasta 100 ml con Agua PA-ACS y mezclar
bien. Medir en el plazo de quince minutos
la absorbancia de la solucin frente al ensayo
en blanco (7.4.10.) a una longitud de onda de
538 nm.
7.4.9. Curva de calibracin.
Pipetear 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 16 y 20 ml de la
solucin patrn de Sodio Nitrito PA (7.3.12.) en
matraces aforados de 100 ml. Aadir Agua PAACS hasta un volumen aproximado de 60 ml. Llevar a cabo el procedimiento descrito en (7.4.8.).
Representar las absorbancias obtenidas frente a
las concentraciones de nitrito, en microgramos
por mililitro.
7.4.10. Ensayo en blanco.
Llevar a cabo un ensayo en blanco usando
todos los reactivos, pero sustituyendo los 10 g de
muestra por 4 ml de Agua PA-ACS.
7.5. Clculo.
7.5.1. Contenido en nitritos:
100.000 x c1
Contenido en NO2- (mg/kg) =
mxV
Siendo:
m = Peso en gramos de la muestra.
c1 = Concentracin en microgramos de NO2por ml, obtenidos a partir de la curva de calibracin, correspondiente a la absorbancia de la solucin obtenida usando el filtrado diluido (7.4.7.).
V = Volumen en ml de la alcuota tomada en
(7.4.8.) sobre el filtrado diluido (7.4.7.).
7.5.2. Contenido en nitrato:
Contenido en NO3- (mg/kg) =
100.000 x c2 x r
= 1,35
NO2mxV
Siendo:
m = Peso en gramos de la muestra.
c2 = Concentracin en microgramos de NO2por ml, obtenidos a partir de la curva de calibracin, correspondiente a la absorbancia de la solucin obtenida del eluido de la columna.
V = Volumen en ml de la alcuota tomada del
eluido.
r = 100/rendimiento de la columna.
7.6. Referencias.
7.6.1. Norma Internacional L FIL-IDF 84 A:
1984.
107
108
8.4. Procedimiento.
8.4.1 Obtencin de la fraccin soluble a pH
4,6. Pesar 15 g de queso previamente triturado,
aadir 5 ml de solucin de Acido Actico glacial
PA-ACS al 10% (8.3.1.) y 5 ml de solucin de
Sodio Acetato 1 mol/l (1M) RE, homogeneizar y
comprobar con pH metro que el pH de la mezcla
es exactamente 4,6. Centrifugar a 3.000 r.p.m.
durante diez minutos y filtrar el sobrenadante a
travs de un papel de filtro de velocidad media.
8.4.2. Preparacin de la curva patrn.
Dependiendo del tipo de muestra que se desea
analizar, partir de patrones de quesos puros de
oveja o de cabra y de vaca, as como patrones de
quesos de mezcla de vaca en oveja o de vaca en
cabra, en concentraciones del 5 por 100, 10 por
100 y 20 por 100. La leche utilizada para la fabricacin de estos quesos patrn podr ser cruda o
pasterizada, en este ltimo caso la leche deber
ser pasterizada a una temperatura mxima de
74C durante un tiempo mximo de treinta segundos. La fraccin soluble de los patrones se obtiene siguiendo el procedimiento descrito en 8.4.1.
8.4.3. Inmediatamente antes de su aplicacin
en gel mezclar:
-Un volumen de la fraccin soluble obtenida
segn 8.4.1.
-Un volumen de la solucin de Glicerina (USP,
BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX al 40% (8.3.2.7.).
F
E
D
C
B
1
M
A) Seroalbmina (BSA).
B) b Lactoglobulina de cabra.
C) a Lactoalbmina (cabra y oveja).
D) a Lactoalbmina de vaca y b Lactoglobulina
de oveja.
E) b Lactoglobulina B de vaca.
F) b Lactoglobulina A de vaca.
8.5.2. y 8.5.3. coinciden con los apartados 23(a)5.2. y 23(a)- 5.3. de los Mtodos de Anlisis de la
Leche (ver pgina 45).
8.6. Expresin de los resultados.
Expresar el contenido en leche de vaca segn
los siguientes intervalos:
-Menor del 5 por 100.
-Entre el 5 y el 10 por 100.
-Entre el 10 y el 20 por 100.
-Mayor del 20 por 100.
Siendo el lmite de deteccin prctico del 3 por
100 en leche de vaca, en queso de oveja o en
queso de cabra.
8.7. Referencias.
8.7.1., 2, 3 y 4 coinciden con los apartados 23(a)
8.1., 2, 3 y 4 de los Mtodos de Anlisis de la
Leche (ver pgina 45).
9. DETERMINACION DE LECHE DE
CABRA EN QUESO DE OVEJA
(Por electroforesis)
9.1. Principio.
La fraccin srica de la muestra se extrae por
adicin de solucin tampn a pH 4,6 y posterior
centrifugacin. Las protenas de suero son separadas por electroforesis en gel de poliacrilamida a pH
8,3.
La b lactoglobulina de leche de cabra presenta
una menor movilidad electrofortica que la a lactoalbmina y la b lactoglobulina de la leche de
oveja.
9.2. Material y aparatos.
9.2.1., 2, 3, 4, 5, 6 y 7 coinciden con los apartados 23(a) 2.1., 2, 3, 4, 5, 6 y 7 de los Mtodos
de Anlisis de la Leche (ver pgina 43).
9.3. Reactivos.
9.3.1., 2 y 3, coinciden con los apartados
23(a)- 3.1., 2 y 3 de los Mtodos de Anlisis de la
Leche (ver pgina 43).
9.4. Procedimiento.
9.4.1. como 8.4.1.
9.4.2. Preparacin de la curva patrn.
Partir de patrones de quesos puros de oveja y
de cabra, as como de patrones de quesos de
mezcla de cabra en oveja, en concentraciones del
5%, 10% y 20%. La leche utilizada para la fabricacin de estos quesos patrn podr ser cruda o
D
C
B
A
109
Yogur
M
I ORDEN DE 1 DE JULIO DE 1987 POR
LA QUE SE APRUEBA LA NORMA DE
CALIDAD PARA EL YOGUR O YOGHOURT
DESTINADO AL MERCADO INTERIOR.
(B.O.E. 3-7-1987).
De conformidad con lo establecido en el Decreto 1043/1973, de 17 de mayo, por el que se regula la normalizacin de productos ganaderos en el
mercado interior, y teniendo en cuenta los Decretos de Presidencia del Gobierno 2484/1967, de
21 de septiembre, por el que se aprueba el texto
del Cdigo Alimentario Espaol y el 2519/1974,
de 9 de agosto, sobre su entrada en vigor, aplicacin y desarrollo, parece oportuno dictar la presente Norma de Calidad para yogur o yoghourt.
En su virtud, previo informe de la Comisin Interministerial para la Ordenacin Alimentaria, de
conformidad con los acuerdos del FORPPA y a
propuesta de los Ministros de Economa y Hacienda, de Agricultura, Pesca y Alimentacin y de
Sanidad y Consumo,
Este Ministerio de Relaciones con las Cortes y
de la Secretara del Gobierno dispone:
Artculo nico.- Se aprueba la Norma de Calidad para el yogur o yoghurt destinado al mercado
interior que se recoge en el anejo nico de esta
Orden.
DISPOSICIONES ADICIONALES
Primera.- Las determinaciones analticas se
realizarn de acuerdo con los mtodos oficiales
vigentes.
Cuando no existan mtodos oficiales para
determinados anlisis y hasta tanto los mismos no
sean propuestos por el rgano competente y previamente informados por la Comisin Interministerial para la Ordenacin Alimentaria, podrn ser utilizados los adoptados por los Organismos nacionales e internacionales de reconocida solvencia.
Segunda.- Los Departamentos competentes
velarn por el cumplimiento de lo dispuesto en la
presente Orden a travs de sus rganos administrativos encargados, que coordinarn sus actuaciones, en todo caso, sin perjuicio de las competencias que correspondan a las Comunidades
Autnomas y a las Corporaciones Locales.
DISPOSICION FINAL
La presente Orden entrar en vigor en todo el
territorio espaol a los treinta das de su publicacin en el Boletn Oficial del Estado.
DISPOSICION TRANSITORIA
El apartado 11 - Etiquetado y Rotulacin del
anejo nico no ser de obligado cumplimiento,
hasta transcurridos seis meses a partir de la fecha
de su publicacin en el Boletn Oficial del Estado, teniendo hasta entonces el carcter de recomendado, sin perjuicio de lo dispuesto en el Real
Decreto 2058/1982, de 12 de agosto.
Madrid, 1 de julio de 1987.
ZAPATERO GMEZ
Excmos. Sres. Ministros de Agricultura, Pesca
y Alimentacin, de Economa y Hacienda y de
Sanidad y Consumo.
ANEJO UNICO
Norma de Calidad para el yogur o yoghourt
1. NOMBRE DE LA NORMA
Norma de Calidad para el yogur o yoghourt.
2. OBJETO DE LA NORMA
La presente Norma tiene por objeto definir las
caractersticas de calidad, envasado y presentacin que deben reunir los yogures para su adecuada comercializacin en el mercado interior.
3. AMBITO DE APLICACIN
La presente Norma se aplicar a todos los
yogures comercializados en todo el territorio espaol.
4. DEFINICIN
Se entiende por yogur o yoghourt el producto de leche coagulada obtenida por fermentacin lctica mediante la accin de lactobacillus
bulgaricus y streptococcus thermophilus a partir
de leche pasterizada, leche concentrada pasterizada, leche total o parcialmente desnatada pasterizada, leche concentrada pasterizada total o parcialmente desnatada, con o sin adicin de nata
pasterizada, leche en polvo entera, semidesnatada o desnatada, suero en polvo, protenas de
leche y/u otros productos procedentes del fraccionamiento de la leche.
Los microorganismos productores de la fermentacin lctica deben ser viables y estar presentes en el producto terminado en cantidad mnima de 1 por 107 colonias por gramo o mililitro.
111
5. TIPOS DE YOGUR
Segn los productos aadidos, antes o despus de la fermentacin, los yogures pueden clasificarse de la siguiente forma:
5.1. Yogur natural.- Es el definido en el punto 4.
5.2. Yogur azucarado.- Es el yogur definido en
el punto 4 al que se han aadido azcar o azcares comestibles.
5.3. Yogur edulcorado.- Es el yogur definido en
el punto 4 al que se han aadido los edulcorantes
autorizados en esta Norma.
5.4. Yogur con fruta, zumos y/u otros productos naturales.- Es el yogur definido en el punto 4
al que se han aadido frutas, zumos y/u otros productos naturales.
5.5. Yogur aromatizado.- Es el yogur definido
en el punto 4 al que se han aadido agentes aromticos autorizados.
6. FACTORES ESENCIALES DE
COMPOSICION Y CALIDAD
6.1. pH.- Todos los yogures debern tener un
pH igual o inferior a 4,6.
6.2. Materia grasa de leche.- Todos los yogures
definidos en el punto 5, tendrn en su parte lctea, un contenido mnimo de materia grasa de
leche de 2 por 100 m/m. Los yogures definidos en
el punto 5 que tengan en su parte lctea un contenido mximo de materia grasa lctea de 0,5 por
100 m/m debern llevar adems la mencin desnatado.
6.3. Extracto seco magro de leche.- Todos los
yogures definidos en el punto 5 tendrn en su
parte lctea, un contenido mnimo de extracto
seco magro de leche de 8,5 por 100 m/m.
Asimismo, los yogures desnatados, cumplirn este requisito.
6.4. Contenido en yogur.- Para los yogures con
frutas, zumos y/u otros productos naturales definidos en el punto 5.4., la cantidad mnima de
yogur en el producto terminado sern del 70 por
100 m/m.
Para los yogures aromatizados definidos en el
punto 5.5., la cantidad mnima de yogur en el producto terminado ser del 80 por 100 m/m.
Enterobactericeae
lactosa positivo
colonias/g ................
1.101 1.102
Enterobactericeae
lactosa positivo
colonias/g ................
5.101 5.102
5 10 5.101
1.101
Salmonella
-Shigella/25 g............
5.4.
m
Salmonella
9. NORMA MICROBIOLOGICA Y
CONTAMINANTES
112
-Shigella/25 g............
M
Se admite para este nivel una variabilidad:
3 m para medio slido.
10 m para medio lquido.
M: Nivel lmite de aceptabilidad. Los valores
superiores a M no son satisfactorios.
Los valores M se fijan en:
M = 10 m para medios slidos.
M = 30 m para medios lquidos.
Para las muestras tomadas segn el procedimiento b) del apartado 9.1.1., las tolerancias
sern las indicadas a continuacin:
Yogures definidos en:
5.1., 5.2., 5.3. y 5.5.
5.4.
Enterobactericeae
lactosa positivo
colonias/g...........
1.102
5.102
E. coli colonias/g ..
1.101
5.101
Salmonella
-Shigella/25 g ......
113
2.3. Reactivos.
171010 Acido Sulfrico 90-91% segn Gerber
RE
131074 Agua PA-ACS
171865 Alcohol iso-Amlico segn Gerber mezcla de ismeros RE
2.3.1. Acido Sulfrico 90-91% segn Gerber RE.
2.3.2. Alcohol iso-Amlico segn Gerber mezcla
de ismeros RE (exento de furfural d ~ 0,811).
2.4. Aparatos.
Material corriente de laboratorio y especialmente:
2.4.1. Butirmetro para leche 0-4%, norma NF
B 35521 provisto de tapn apropiado.
2.4.2. Pipeta para leche de 11 ml de descarga
nica, norma NF B 35523.
2.4.3. Medidor de cido sulfrico (descarga
10 ml) o pipeta de seguridad de 10 ml.
2.4.4. Medidor de alcohol iso-amlico (descarga
1 ml) o pipeta de seguridad de 1 ml.
2.4.5. Bao de agua a 65-70C para butirmetros.
2.4.6. Centrfuga elctrica para butirmetros de
leche. Esta centrfuga estando enteramente cargada, debe alcanzar en dos minutos una velocidad tal que produzca una aceleracin radial en el
extremo exterior del tapn del butirmetro de 350
50 veces a la aceleracin debida a la gravedad.
Una aceleracin as, es producida, por ejemplo,
por una centrfuga de dimetro 52 1 cm (distancia entre las extremidades exteriores de los tapones de los butirmetros opuestos diametralmente)
operando a 1.100 50 revoluciones por minuto.
La frmula para calcular otras combinaciones
entre el dimetro y la velocidad es la siguiente:
a = 11,81 x n2 x R
a es la aceleracin radial, expresada en g, es
decir en mltiplos de la aceleracin debida a la
gravedad.
n es el nmero de revoluciones por minuto
dividido por 1.000.
R es el radio expresado en centmetros.
114
M
b) Estando el butirmetro en posicin vertical,
mover el tapn de tal forma que al examinar el
plano inferior de la columna grasa, este plano
coincida con una divisin. En principio es preferible hacer descender la columna grasa que no
hacerla subir. Asegurarse de que no se ha proyectado materia grasa dentro de la ampolla terminal, en el curso de esta manipulacin.
c) Obtenida esta coincidencia, asegurar la
inmobilidad de la columna de grasa al propio tiempo que la del tapn.
d) Desplazar el butirmetro a la altura del ojo y
leer el nivel por la parte ms inferior del menisco
superior de la columna de grasa;
e) Verificar inmediatamente el plano de separacin inferior de la columna grasa para asegurar
que no se ha movido.
Si se ha desplazado, corregir la posicin
moviendo adecuadamente el tapn.
f) Releer de la misma manera el nivel del menisco superior. Si el plano inferior no se ha desplazado, esta segunda lectura debe coincidir con la primera. Si este segundo valor difiere del primero,
verificar nuevamente la posicin del plano horizontal inferior y proceder a una tercera lectura. Es
del todo necesario llegar a este resultado: dos lecturas consecutivas del menisco superior deben
dar el mismo valor. Esto prueba la constancia de
posicin del plano horizontal inferior.
g) Si el resultado no se obtiene en 10 segundos, sumergir el butirmetro en el bao de agua y
rehacer la lectura al cabo de 2 o 3 minutos.
2.6. Expresion de resultados.
2.6.1. Modo de clculo.
El contenido en materia grasa del producto
examinado, expresado en porcentaje en masa se
obtiene aplicando la frmula:
100
(n' - n)
M
donde:
n' representa el valor alcanzado por el nivel
superior de la columna grasa.
n representa el valor alcanzado por el nivel
inferior de la columna grasa.
M la masa en g del producto pesado en la
operacin (2.5.1.)
2.6.2. Precisin.
La desviacin mxima entre los resultados
obtenidos de determinaciones paralelas efectuadas por dos operadores debe ser de 0,05 g por
100 g de producto.
3. DETERMINACION DE LA MATERIA
SECA
(Mtodo por secado, Norma Chimie
Ministerio de Agricultura francs
XIV-2)
3.1. Objeto.
Este mtodo describe la tcnica de determinacin de materia seca en las leches fermentadas.
3.2. Principio.
Desecacin a 103 2C y pesado del residuo.
3.3. Reactivos.
131019 Acido Clorhdrico 35% PA-ISO
131074 Agua PA-ACS
211160 Arena de mar lavada, grano fino QP
211335 Gel de Slice 3-6 mm con indicador QP
3.3.1. Purificar la Arena de mar lavada, grano
fino QP con Acido Clorhdrico diluido a 25%, lavado con Agua PA-ACS y calcinar a alrededor de
500C.
La arena debe atravesar el tamiz AFNOR n. 28
y ser retenida por el tamiz AFNOR n. 23.
NOTA: Tamiz AFNOR n. 28 equivale a 0,500
mm B interior malla.
Tamiz AFNOR n. 23 equivale a 0,160 mm B
interior malla.
3.4. Aparatos.
3.4.1. Balanza analtica.
3.4.2. Estufa provista de ventilacin y de sistema de regulacin termosttica que permita obtener una temperatura de 103 2C en todos los
puntos de su interior.
3.4.3. Desecador provisto de deshidratante eficaz (Gel de Slice 3-6 mm con indicador QP).
3.4.4. Cpsulas cilndricas de metal inoxidable
o de vidrio, de alrededor 25 mm de altura.
3.4.5. Varilla de vidrio con una extremidad
aplastada, cuya longitud no debe sobrepasar en
ms de 1 cm el dimetro de la cpsula.
3.5. Modo operatorio.
3.5.1. En la cpsula (3.4.4.) introducir 20 g de
arena lavada y una varilla de vidrio.
3.5.2. Colocar en la estufa durante 1 hora.
3.5.3. Dejar enfriar en el desecador y pesar.
3.5.4. Introducir rpidamente dentro de la cpsula alrededor de 5 g, pesados con precisin de
1 mg, de muestra preparada segn (1.).
3.5.5. Mezclar cuidadosa e ntimamente la
toma de ensayo y la arena con la ayuda de la varilla de vidrio.
3.5.6. Colocar la cpsula en la estufa durante 5
horas.
3.5.7. Dejar enfriar en el desecador y pesar.
3.5.8. Repetir este secado a periodos de 1
hora hasta peso constante (las desviaciones no
deben sobrepasar los 2 mg).
115
6. FENOLFTALEINA
(Mtodo cualitativo)
116
6.1. Principio.
Extraccin y concentracin de la fenolftalena
presente en el alimento e identificacin por viraje a
color rojo en medio alcalino que desaparece en
medio cido. La separacin y concentracin de la
fenolftalena se realiza por extraccin etrea y
soluciones alcalinas.
Cuajada
DEL
PRADO
MUOZ
118
ANEJO UNICO
Norma de Calidad para la Cuajada
1. NOMBRE DE LA NORMA
Norma de Calidad para la Cuajada.
2. OBJETO DE LA NORMA
Esta Norma tiene por objeto definir las condiciones y caractersticas que debe reunir el producto cuajada para su adecuada comercializacin
y consumo en el mercado interior.
3. AMBITO DE APLICACION
La presente Norma se aplicar a la cuajada
destinada a su comercializacin en el mercado
interior.
4. DEFINICION
Se entiende por cuajada el producto semislido obtenido de la leche sometida a tratamiento
trmico adecuado para conseguir las caractersticas bacteriolgicas que se fijan posteriormente,
entera o desnatada total o parcialmente, coagulada por la accin del cuajo u otros enzimas coagulantes autorizados, sin adicin de fermentos lcticos y sin proceso de desuerado.
5. DENOMINACIONES
5.1. En la denominacin, despus de la palabra
"cuajada" debera figurar la indicacin de la especie
o especies animales de las que proceda la leche
empleada por orden descendente de proporciones, en caracteres perfectamente claros y legibles.
5.2. Segn el contenido en materia grasa,
expresado en porcentaje en masa de la materia
grasa sobre la masa del producto final, las cuajadas se denominarn:
- Extragrasa: La que contenga ms del 5,5%
de materia grasa.
- Grasa: La que contenga ms del 3,5% y un
mximo del 5,5% de materia grasa.
- Magra: La que contenga ms del 1,5% y un
mximo del 3,5% de materia grasa.
- Desnatada: La que contenga un mximo del
1,5% de materia grasa.
6. FACTORES ESENCIALES DE
COMPOSICION Y CALIDAD
6.1. Ingredientes esenciales:
Uno.- Leche pasterizada o U.H.T. entera, semidesnatada o desnatada concentrada o no de
oveja, cabra, vaca o sus mezclas.
Dos.- Cuajo animal o coagulante vegetal.
6.2. Ingredientes facultativos:
6.2.1. Leche en polvo entera, semidesnatada o
desnatada en cantidad que permita ajustar el
extracto seco total.
M
6.2.2. Nata, para poder satisfacer los requisitos
del contenido en materia grasa.
6.2.3. Gelatina, en dosis mxima de 7 g por
kilogramo de cuajada.
6.3. Extracto seco total mnimo: 15% expresado en masa/masa sobre el producto terminado.
6.4 Indices.
Las caractersticas fisicoqumicas de la grasa
estarn comprendidas entre los siguientes valores:
6.4.1. Para la cuajada de vaca:
Indice de refraccin a 40C: De 1,4540 a
1,4557.
Indice de Reichert: De 26 a 32.
Indice de Polenske: De 1 a 4.
Indice de Kirchner: De 19 a 27.
6.4.2. Para la cuajada de cabra:
Indice de refraccin a 40C: De 1,4520 a
1,4545.
Indice de Reichert: De 21 a 28.
Indice de Polenske: De 5 a 9.
Indice de Kirchner: De 14 a 21.
6.4.3. Para la cuajada de oveja:
Indice de refraccin a 40C: De 1,4530 a
1,4557.
Indice de Reichert: De 26 a 32.
Indice de Polenske: De 5 a 8.
Indice de Kirchner: De 19 a 27.
119
Nata
M
ORDEN DE 12 DE JULIO DE 1983 POR
LA QUE SE APRUEBAN LAS NORMAS
GENERALES DE CALIDAD PARA LA
NATA Y NATA EN POLVO CON DESTINO
AL MERCADO INTERIOR.
Excelentsimos seores:
De conformidad con lo dispuesto en el Decreto
1043/1973, de 17 de mayo, por el que se regula
la normalizacin de productos ganaderos en el
mercado exterior, y teniendo en cuenta los Decretos de Presidencia del Gobierno 2484/1967, de
21 de septiembre, por el que se aprueba el texto
del Cdigo Alimentario Espaol, y el 2519/1974,
de 9 de agosto, sobre su aplicacin, desarrollo y
entrada en vigor, parece oportuno dictar las presentes normas de calidad, visto el informe de la
Comisin Interministerial para la Ordenacin alimentaria y de conformidad con los acuerdos del
FORPPA.
En su virtud, a propuesta de los Ministros de
Agricultura, Pesca y Alimentacin, de Economa y
Hacienda y de Sanidad y Consumo, esta Presidencia del Gobierno dispone:
Primero.- Se aprueban las Normas Generales
de Calidad para la nata y nata en polvo con destino al mercado interior, recogidas, respectivamente, en los anejos 1 y 2 de esta Orden.
Segundo.- La toma de muestras, as como las
determinaciones analticas, se realizarn de
acuerdo con los mtodos oficiales vigentes.
Tercero.- Los departamentos competentes
velarn por el cumplimiento de lo dispuesto en la
presente Orden a travs de sus rganos administrativos encargados, que coordinarn sus actuaciones; en todo caso, sin perjuicio de las competencias que correspondan a las Comunidades
Autnomas y a las Corporaciones Locales.
Cuarto.- Las presentes Normas entrarn en
vigor en todo el territorio del Estado espaol a los
doce meses de su publicacin en el "Boletn Oficial del Estado", excepto lo dispuesto en los apartados 12. "Etiquetado y rotulacin" de las mismas,
que lo harn en las fechas previstas para el ttulo
IV del Real Decreto 2058/1982, de 12 de agosto,
por el que se aprueba la Norma General de Etiquetado, Presentacin y Publicidad de los Productos Alimenticios Envasados.
Quinto.- A la entrada en vigor de las presentes
normas quedan derogadas cuantas disposiciones
de igual o inferior rango se opongan a la presente
Orden en los aspectos que regula.
Lo que comunico a VV. EE. para su conocimiento y efectos.
Dios guarde a VV. EE. muchos aos.
Madrid, 12 de julio de 1983.
MOSCOSO
DEL
PRADO
MUOZ
121
122
45 minutos
25 "
20 "
M
6.3. Caractersticas fisicoqumicas.
6.3.1. Organolpticas: La nata dispuesta para
su venta deber presentar las siguientes caractersticas: Consistencia lquida ms o menos viscosa, excepto la "nata batida" o "montada" que presentar consistencia semislida.
Color blanco amarillento.
Sabor u olor caractersticos.
6.3.2. Intrnsecas.
Contenido mnimo en materia grasa de leche,
12%. La composicin del extracto seco de la fraccin no grasa de las distintas natas, descontando
el correspondiente al de los ingredientes facultativos y aditivos aadidos, ser la misma que la del
extracto seco magro de la leche natural de partida.
Acidez, expresada en peso de cido lctico por
100 de nata en volumen de la parte no grasa,
0,25% como mximo, excepto para la nata acidificada, que podr ser del 0,65% como mximo.
Impurezas macroscpicas, grado 0.
Las caractersticas fisicoqumicas de la grasa
estarn comprendidas entre los siguientes valores:
a) Para la nata de vaca:
Indice de refraccin a 40C: De 1,4540 a
1,4557.
Indice de Reichert: De 26 a 32.
Indice de Polenske: De 1 a 4.
Indice de Kirchner: De 19 a 27.
b) Para la nata de oveja:
Indice de refraccin a 40C: De 1,4530 a
1,4557.
Indice de Reichert: De 26 a 32.
Indice de Polenske: De 5 a 8.
Indice de Kirchner: De 19 a 27.
c) Para la nata de cabra:
Indice de refraccin a 40C: De 1,4520 a
1,4545.
Indice de Reichert: De 21 a 28.
Indice de Polenske: De 5 a 9.
Indice de Kirchner: De 14 a 21.
Tanto para la nata de vaca como para las de
oveja y cabra el lmite mnimo de colesterol, dentro de los esteroles, ser del 98% de la fraccin
esterlica del insaponificable, determinados por
cromatografa gaseosa.
8. NORMA MICROBIOLOGICA Y
CONTAMINANTES
8.1. Norma microbiolgica.
Las siguientes normas microbiolgicas, relativas a la higiene alimentaria de estos productos,
han sido aprobadas por la Subsecretara de Sanidad del Ministerio de Sanidad y Consumo.
123
3. AMBITO DE APLICACION
La presente Norma General abarca a la nata en
polvo destinada a su comercializacin en el mercado interior.
4. DEFINICION
Se entiende por nata en polvo el producto seco
y pulverulento que se obtiene mediante la deshidratacin de la nata, pasterizada al estado lquido,
antes o durante el proceso de fabricacin.
5. DENOMINACIONES
5.1. Por su origen.
5.1.1. Nata en polvo o nata en polvo de vaca:
Cuando procede exclusivamente de leche de
vaca.
5.1.2. La nata en polvo que se fabrique con
leche de oveja, leche de cabra, o mezcla de
ambas entre s y con la de vaca, deber incluir en
su denominacin, despus de la palabra "nata", la
indicacin de la especie o especies animales de
las que procede la leche empleada por orden descendente de proporciones, en caracteres claros y
legibles.
5.2. Por su composicin.
Segn el contenido de materia grasa, expresado en porcentaje en masa de materia grasa sobre
masa del producto final, las natas se denominarn:
5.2.1. Nata en polvo: La que contenga un mnimo de materia grasa de la leche del 65% y un
mximo de agua del 5%.
5.2.2. Nata delgada o ligera en polvo: La que
contenga un mnimo de materia grasa de la leche
del 50% y menos del 65%, as como un contenido mximo de agua del 5%.
6. FACTORES ESENCIALES DE
COMPOSICION Y CALIDAD
6.1. Ingredientes esenciales.
Nata de vaca, oveja, cabra o sus mezclas.
124
M
Otros grmenes patgenos: Ausencia.
Prueba de la fosfatasa: Negativa.
8.2. Contaminantes.
Las tolerancias de productos contaminantes y
sustancias txicas no debern sobrepasar las
contenidas en la legislacin vigente, y en su
defecto, las contenidas en las normas internacionales aceptadas por el Estado espaol.
NOTA: Los apartados, 7. Aditivos autorizados,
9. Prohibiciones, 10. Higiene, 11. Envasado, 12.
Etiquetado y Rotulacin, 13. Pas de origen y 14.
Responsabilidades, publicados en este mismo
B.O.E., no se han incluido en esta recopilacin
por carecer de inters analtico.
125
Relacin de reactivos
y productos auxiliares
que se utilizan en los
mtodos analticos,
Leche y Productos
Lcteos
M
REACTIVOS Y PRODUCTOS AUXILIARES QUE HAN CAMBIADO DE CDIGO
ANTERIOR
172222
171010
253309
171865
171096
131129
171165
171168
251274
131086
131085
171327
132062
172430
132006
171498
131512
131509
131515
171617
171634
171674
131638
132823
131788
Acido Brico 4% RE
Acido Slfurico 90-91% segn Gerber RE
Acrilamida DC
Alcohol iso-Amlico segn Gerber mezcla
de ismeros RE
Almidn soluble RE
Amonaco 25% (en NH3) PA
Azul de Bromofenol RE-ACS
Azul de Bromotimol solucin 0,04% RE
Colesterol DC
Etanol absoluto PA
Etanol 96% v/v PA
Fenolftalena solucin 1% RE
n-Heptano PA
Indicador mixto (Rojo de Metilo-Azul
de Metileno) RV
n-Pentano PA
Potasio Dicromato solucin 5% p/v RE
di-Potasio Hidrgeno Fosfato anhidro PA
Potasio di-Hidrgeno Fosfato PA
Potasio Hidrxido 85% lentejas PA
Rojo de Metilo (C.I. 13020) RE-ACS
Sodio Acetato 1 mol/l (1M) RE
di-Sodio Fenilfosfato 2-hidrato RE
Sodio Hidrgeno Carbonato PA
Sulfanilamida PA
Zinc Sulfato 1-hidrato PA
ACTUAL
282222 Acido Brico solucin 4% RV
121010 Acido Slfurico 90-91% segn Gerber PA
373309 Acrilamida PB
121079
121096
121129
131165
281168
371274
121086
121085
281327
122062
282430
122006
281498
121512
121509
121515
131617
281634
121674
121638
122823
121788
127
131007
131881
131008
181009
131015
282222
131020
131019
181023
181021
182108
131669
131032
131036
132175
132838
131058
121010
181059
182105
131067
252373
373309
131074
212236
121079
121096
121129
131368
131134
131136
128
131138
131147
211160
211161
ACETONA
PA-ACS-ISO
ACETONITRILO
PA-ACS
ACIDO ACETICO
GLACIAL
PA-ACS-ISO
ACIDO ACETICO 1 mol/l (1N)
SV
ACIDO ACETICO 2 mol/l (2N)
ACIDO BORICO
PA-ACS-ISO
ACIDO BORICO solucin 4%
RV
ACIDO CLORHIDRICO
37%
PA-ACS-ISO
ACIDO CLORHIDRICO 35% PA-ISO
ACIDO CLORHIDRICO
0,1 mol/l (0,1N)
SV
ACIDO CLORHIDRICO
1 mol/l (1N)
SV
ACIDO CLORHIDRICO
2 mol/l (2N)
SV
ACIDO ETILENDIAMINOTETRAACETICO SAL
DISODICA 2-hidrato
PA-ACS
ACIDO ORTO-FOSFORICO
85%
PA-ACS-ISO
ACIDO NITRICO 60%
PA-ISO
ACIDO PERCLORICO
70%
PA-ACS-ISO
ACIDO 5-SULFOSALICILICO
2-hidrato
PA-ACS
ACIDO SULFURICO 96%
PA-ISO
ACIDO SULFURICO
90-91% segn Gerber
PA
ACIDO SULFURICO
0,5 mol/l (1N)
SV
ACIDO SULFURICO
1 mol/l (2N)
SV
ACIDO TRICLOROACETICO PA-ACS
ACIDO TRICLOROACETICO
solucin 20% p/v
DC
ACRILAMIDA
PB
AGUA
PA-ACS
AGUA DESIONIZADA
QP
3-METIL-1-BUTANOL
segn Gerber
PA
ALMIDON DE PATATA
SOLUBLE
PA
PA
AMONIACO 25% (en NH3)
AMONIO HIERRO (II)
SULFATO 6-hidrato
PA-ISO
AMONIO MOLIBDATO
4-hidrato
PA-ACS-ISO
di-AMONIO OXALATO
1-hidrato
PA-ACS
AMONIO PEROXODISULFATO
PA-ACS
ANHIDRIDO ACETICO PA-ACS-ISO
ARENA DE MAR lavada,
grano fino
QP
ARENA DE MAR lavada,
grano grueso
QP
131165
281168
254932
251170
131188
131082
141206
141219
142400
142323
131270
371274
A17697
A12207
A16044
131785
121086
121085
132770
131315
134852
144852
131325
281327
141956
211335
141339
131340
122062
131350
141076
A10817
AZUL DE BROMOFENOL
PA-ACS
AZUL DE BROMOTIMOL
solucin 0,04%
RV
AZUL BRILLANTE COOMASSIE
R-250 (C.I. 42660)
DC
AZUL COOMASSIE G-250
AZUL DE METILENO
(C.I. 52015)
DC
BARIO HIDROXIDO
8-hidrato
PA-ACS-ISO
1-BUTANOL
PA-ACS-ISO
CADMIO METAL,
lminas
PRS
CALCIO CLORURO
ANHIDRO escoriforme
PRS
CALCIO HIDROXIDO, polvo
(RFE, USP, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX
CLORAMINA T 3-hidrato
(RFE, BP, Ph. Eur.)
PRS-CODEX
COBRE (II) SULFATO
5-hidrato
PA-ACS-ISO
COLESTEROL
PB
CUAJO DE TITULO 1/10.000
2,4 - DIAMINOFENOL
DICLORHIDRATO, 98%
2,6 - DIBROMOQUINONA4- CLORIMIDA, 98%
DIGITONINA
N,N-DIMETILFORMAMIDA
PA-ACS-ISO
ETANOL ABSOLUTO
PA
ETANOL 96% v/v
PA
ETER DIETILICO ESTABILIZADO
con ~6 ppm de BHT
PA-ACS-ISO
ETER DE PETROLEO 40-60C
PA-ISO
FENOL CRISTALIZADO
(cristales sueltos)
PA-ACS
FENOL CRISTALIZADO
(critales sueltos)
(RFE, USP, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX
FENOLFTALEINA
PA-ACS
FENOLFTALEINA
solucin 1%
RV
FITOSTEROL DE ACEITE DE COLZA
FITOSTEROL DE ACEITE DE SOJA
FORMAMIDA
PRS
GEL DE SILICE 3-6 mm
con indicador
QP
GLICERINA
(RFE, USP, BP, Ph. Eur.) PRS-CODEX
GLICINA
PA-ACS
n-HEPTANO
PA
HIDRACINIO SULFATO
PA-ACS
HIDROGENO PEROXIDO
30% p/v (100 vol.) estabillizado PRS
4-HIDROXIBIFENILO, 98%
M
141358
282430
251774
A11818
141427
131091
132751
252036
122006
211835
131457
181464
141801
281498
131505
131503
121512
121509
131481
121515
182146
131524
182114
131729
131532
131542
131617
281634
A11803
131644
131648
131655
131659
131698
121674
121638
131687
181694
183154
182415
181691
182158
131701
131703
131716
211682
182160
131724
122823
A12536
131940
131754
181772
131775
121788
131787
129
Aditio
Aditivos y
coadyuvantes
tecnolgicos para
uso alimentario
industrial
PANREAC QUIMICA, S.A., fabrica adems de
los reactivos para anlisis PANREAC, una lnea de
aditivos y coadyuvantes tecnolgicos para uso alimentario industrial, que cumplen las especificaciones de pureza prescritas por The Food Chemicals Codex 3 ed., complementadas con las exigencias especficas fijadas por la legislacin espaola y comunitaria de la CEE.
En la relacin que sigue se indica denominacin del producto, frmula y nmero de identificacin. Para mayor informacin, solicite nuestro
catlogo ADITIO 1995.
130
M
Cdigo Producto
Sinnimos
201007 ACETONA
Frmula
N. de
identificacin
CH3COCH3
CH3COOH
E-260
(CH2CH2COOH)2
E-355
C6H8O6
E-300
C6H5COOH
E-210
C6H8O7
E-330
C6H8O7.H2O
E-330
HCl
E-507
HCI
E-507
C18H36O2
Na2H2C10H12N2O8.2H2O
HCOOH
HCOOH
E-236
E-236
H3PO4
E-338
HOOCCHCHCOOH
E-297
CH3CHOHCOOH
E-270
C4H6O5
E-296
CH3(CH2)12COOH
CH3CH2COOH
E-280
C6H8O2
E-200
HOOCCH2CH2COOH
E-363
H2SO4
E-513
(CHOH)2(COOH)2
E-334
E-406
C6H5CH2OH
E-522
NH4OH
E-527
NH4OH
E-527
~(NH4)3(CO3)2H+NH2COONH4 E-503i
12-hidrato
NH4CI
NH4HCO3
E-510
(NH4)2HPO4
E-342ii
NH4H2PO4
E-342i
(NH4)2SO4
E-517
203464 L-ARGININA
C6H4N4O2
C4H8N2O3
E-503ii
C11H16O2
E-320
Ca(CH3COO)2.xH2O
E-263
CaCO3
Ca3(C6H5O7)2.4H2O
E-170i
E-333iii
CaCl2
E-509
131
Cdigo Producto
Sinnimos
Frmula
N. de
identificacin
CaCl2
E-509
E-509
CaCl2.2H2O
E-509
CaCl2.6H2O
E-509
escoriforme
E-509
~Ca(C18H35O2)2
~Ca3(PO4)2
E-341iii
E-470a
CaHPO4
E-341ii
CaHPO4.2H2O
E-341ii
E-341i
Ca(OH)2
E-526
Ca(CH3CHOHCOO)2.5H2O
E-327
CaSO4.2H2O
E-516
C6H12N2O4S2
E-921
C15H24O
E-321
ClCH2ClCH2
FOSFATO) 1-hidrato
(Calcio Difosfato)
E-466
203645 L-CISTINA
Cl2CH2
SnCl2.2H2O
CH3CH2OH
CH3CH2OH
CH3CH2OH
CH3COOC2H5
C5H10O3
202728 D(-)-FRUCTOSA
E-512
C6H12O6
201339 GLICERINA
(Glicerol)
C3H8O3
(Glicerol)
C3H8O3
E-422
C9H14O6
E-1518
H2NCH2COOH
201341 D(+)-GLUCOSA
C6H12O6
C6H12O6.H2O
E-422
E-640
E-414
132
H2O2
FeSO4.7H2O
MgCl2.6H2O
~Mg(C18H35O2)2
(Magnesio
orto-fosfato)
Mg3(PO4)2.5H2O
E-511
E-470b
M
Cdigo Producto
Sinnimos
Frmula
N. de
identificacin
MgHPO4.3H2O
E-343ii
(Magnesio Carbonato)
E-504ii
MgSO4.7H2O
MnSO4.H2O
202067 D(-)-MANITA
(Manitol)
C6H14O6
E-518
E-421
201091 METANOL
CH3OH
C8H8O3
CH3COOK
E-261
KBrO3
E-924
K2CO3
E-501i
K3C6H5O7.H2O
E-332ii
E-228
KCl
E-508
K2S2O5
E-224
K3PO4. 11/2H2O
E-340iii
E-536
E-501ii
(di-Potasio orto-
K2HPO4
E-340ii
K2HPO4.3H2O
E-340ii
Fosfato)
202333 di-POTASIO HIDROGENO FOSFATO
3-hidrato
201509 POTASIO di-HIDROGENO FOSFATO
(mono-Potasio
KH2PO4
E-340i
(COO)2KH(CHOH)2
E-336i
KOH
E-525
KNO3
E-252
KNO2
E-249
orto-Fosfato)
E-337
CH3(CHCH)2COOK
E-202
K2SO3
K2(COO)2(CHOH)2.1/2H2O
KI
4-hidrato
E-336ii
201545 1,2-PROPANODIOL
CH2OHCHOHCH3
201090 2-PROPANOL
CH3CH2CH2OH
CH3COONa
E-262i
CH3COONa.3H2O
E-262i
C6H7NaO6
E-301
C6H5COONa
E-211
Na2CO3
E-500i
Na2CO3.H2O
E-500i
Na2CO3.10H2O
Na3C6H5O7.2H2O
E-500i
E-331iii
133
Cdigo Producto
Sinnimos
Frmula
N. de
identificacin
E-331iii
Na3C6H5O7.51/2H2O
NaCl
Na2S2O5
C12H25NaO4S
E-223
Na3PO4.H2O
E-339iii
Na3PO4.12H2O
E-339iii
(NaPO3)6
E-452i
(Sodio Diacetato)
CH3COONaCH3COOH
E-262ii
(Sodio Bicarbonato)
NaHCO3
E-500ii
(di-Sodio
Na2HPO4
E-339ii
Na2HPO4.12H2O
E-339ii
NaH2PO4.H2O
E-339i
anhidro
orto-Fosfato)
(mono-Sodio
orto-Fosfato)
E-339i
NaOH
E-524
NaOH
E-524
NaNO3
E-251
2-hidrato
NaNO2
(tetra-Sodio
E-250
Na4P2O7
E-450iii
Na4P2O7.10H2O
E-450iii
Difosfato)
201710 tetra-SODIO PIROFOSFATO
10-hidrato
(tetra-Sodio
Difosfato)
(NaPO3)n
Na2SO4
E-514i
Na2SO4.10H2O
E-514i
Na2SO3
Na2(COO)2(CHOH)2
E-335ii
Na(COO)2(CHOH)2.2H2O
E-335ii
Na2S2O3.5H2O
203064 D(-)-SORBITA
(Sorbitol)
C6H14O6
134
E-452i
E-221
E-420i
E-553b
TiO2
ZnO
ZnSO4.H2O
ZnSO4.7H2O
E-171
M
NOTAS
Editado por:
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