Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Generalidades
Curso Introduccin al Cultivo de Clulas
Eucariotas
Ao 2015
Dra. Romina Manarin
Y as comenz todo
Wilhem Roux
1885
Ross Harrison
1907
Alexis Carrel
1913
Cultivo celular
Abarca al conjunto de tcnicas que permiten el
mantenimiento de las clulas in vitro,
vitro,
conservando al mximo sus propiedades
fisiolgicas, bioqumicas y genticas.
CULTIVO DE
RGANOS
EXPLANTES
PRIMARIOS
CLULAS
DISGREGADAS
Cultivo de rganos
El tejido se coloca sobre una
rejilla situada en la interfase
lquido-gas de un medio del que
obtiene los nutrientes.
Representa una buena rplica
del tejido de origen ya que se
conservan las interacciones
histolgicas.
El crecimiento es limitado.
Se necesita un nuevo explante
para cada experimento.
Explantes primarios
Constituidos por fragmentos pequeos de
tejidos u rganos que se adhieren a una
superficie en la que generalmente crecen
las clulas de la periferia del explante.
til para pequeas cantidades de tejidos,
como biopsias de piel.
Cultivo de un Explante primario de
carcinoma de piel de ratn
explante
crecimiento temprano de
clulas (3 dpe)
Mecanismos de disgregacin
Enzimtica
1.tripsina fra
2.tripsina caliente
3.colagenasa
Mecnica
Tripsina caliente
Pequeas porciones
de tejido se incuban
con tripsina a 37C y
las clulas disociadas
deben recolectarse
por centrifugacin
cada media hora. La
tripsina se neutraliza
con suero en medio
de cultivo.
Tripsina fra
Las porciones de
tejido se incuban en
tripsina a 4C
durante 6-18 hs
permitiendo la
penetracin con una
mnima actividad
trptica y la digestin
se puede hacer en
un tiempo corto de
20-30 min a 37C.
Disgregacin mecnica
SCRAPING O RASCADO
DISGREGACIN CON LA
JERINGA
TAMIZADO
PIPETEO
SUSPENSIN
Cultivos primarios
CULTIVO PRIMARIO
Cuando las clulas o tejidos
procedentes de un ser vivo crecen
sin haber pasado previamente por
una fase de crecimiento in vitro.
CULTIVO
SECUNDARIO
Cuando el cultivo procede
de una fase previa de
crecimiento in vitro
LNEA CELULAR
Subcultivos en monocapas
Tripsinizacin
Algunos Conceptos
LINEA CELULAR- CEPAS
Con los sucesivos pasajes o subcultivos, un cultivo
primario forma una lnea celular. Este trmino
implica la presencia de varios linajes celulares de
fenotipos similares o distintos.
As, al seleccionar uno de los linajes celulares por
clonado o por separacin celular fsica o por
cualquier otra tcnica de seleccin, para tener
ciertas propiedades especficas que han sido
identificadas en la masa de clulas del cultivo, esta
lnea celular se transforma en lo que se conoce
como cepa celular (o cell strain).
Clulas en cultivo
fibroblastos
mioblastos
Clulas de tabaco
Epimastigotes de T. cruzi
Clulas VERO
Servicios de ABAC
Venta de lneas celulares
Control de Micoplasma en Muestras de
Clulas
Depsito de Ampollas en Nitrgeno Lquido
Manual de ATCC
Muchas gracias