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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)


FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
Escuela Acadmico Profesional de Microbiologa y Parasitologa

LABORATORIO DE FISIOLOGA MICROBIANA


PRACTICA 2: DETERMINACION DE LOS
REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES PARA EL
CRECIMIENTO DE DIFERENTES GRUPOS
BACTERIANOS
Profesora

Dra. Susana Gutirrez Moreno

Alumno

Gonzalez Dahua, Jean Patrick

13100037

Ciudad Universitaria, Setiembre del 2015

Introduccin
Los requerimientos nutricionales de cada grupo microbiano estn dados por la
composicin qumica de las clulas que los constituyen y por sus
caractersticas genticas las que determinan sus propiedades fisiolgicas y su
capacidad para utilizar y transformar los compuestos que se encuentran en el
ambiente en que se desarrollan.
Son debido a estas caractersticas que se habla de una gigantesca versatilidad
metablica de uso de nutrientes: desde organismos auttrofos capaces de
obtener compuestos carbonados orgnicos a partir de la reduccin del CO2,
hasta hetertrofos quienes son capaces de usar amplia gama de fuentes
orgnicas de carbono y fuentes de nitrgeno. Son estos requerimientos
nutricionales para cada microorganismo el reflejo del medio en donde viven y
por ende es primordial el uso de medios de cultivo apropiado para las dichas
pruebas.
Algunos nutrientes constituyen los bloques a partir de los cuales la clula
elabora macromolculas estructurales y funcionales, mientras que otros sirven
como donadores de electrones (fuente de energa) y algunos ms como
aceptores finales de electrones sin ser incorporados directamente al material
celular. A veces un mismo nutriente puede desempear todas las funciones, lo
que depender del tipo de microorganismo y de las condiciones ambientales.
A los compuestos orgnicos que actan como precursores o como
constituyentes de material celular y que no pueden ser sintetizados a partir de
compuestos de carbono ms sencillos se les llama colectivamente factores de
crecimiento; stos, por su estructura qumica y accin metablica, se dividen
en tres clases:

Aminocidos, requeridos como constituyentes de protenas.


Purinas y pirimidinas, requeridos como constituyentes de los cidos
nucleicos.
Vitaminas, representadas por diversos compuestos orgnicos que forman
parte de grupos prostticos o centros activos de numerosas enzimas.

Con base en las necesidades de factores de crecimiento, se emplean otros dos


trminos:

Prottrofos, microorganismos capaces de cubrir todas sus necesidades a


partir de la fuente principal de carbono, por lo tanto no requieren factores
de crecimiento.
Auxtrofos, son aquellos que requieren, de uno o ms nutrientes
orgnicos adems de la principal fuente de carbono.

Resumen del procedimiento


En el siguiente experimento se puso en manifiesto las necesidades
nutricionales de diferentes cepas bacterianas adems de recalcar las
diferencias metablicas entre ciertos tipos de microorganismos (comparacin
entre organismos auttrofos y hetertrofos). Para la presentacin de las
premisas anteriores se realizaron 3 pruebas las cuales sern nombradas:
1. Evaluacin del crecimiento en medio con fuente de carbono
orgnico y en medio con fuente de carbono inorgnico.
El objetivo de esta prueba fue el de demostrar la diferencia metablica
entre 2 cepas: E. coli prototrofica (hetertrofa) y una cepa de
Acidiothiobacillus ferrooxidans (Autotrofa y dependiente de Fe)
Se usaron 2 medios distintos: Caldo nutricio y un caldo 9K. En total 4
tubos (2 tubos de cada medio) y la siembra fue de una cepa en 2 tubos
siendo estos medios diferentes (un tubo con caldo nutricio y otro con
caldo 9k).
2. Evaluacin del crecimiento en un medio mnimo y en un medio
completo
El objetivo aqu fue el de demostrar las diferencias entre 2 cepas de la
misma especia (E. coli), siendo la diferencia en que una era prototrfica
y la otra auxotrfica.
La prueba consiste en sembrar ambas sepas en un medio mnimo (se
us una sola placa Petri, esa fue dividida en 2 cuadrantes siento uno
para cada cepa). El medio minimo consiste en un medio con una sola
fuente de carbono.
La cepa de E. coli era auxtrfica para el triptfano.
3. Determinacin
crecimiento.

de

los

requerimientos

mnimos

para

el

Como el nombre de esta prueba sugiere, el objetivo fue la


determinacionde requerimientos nutricionales en diferentes cepas en un
medio minimo, en esta seccin se usaron 4 microorganismos diferentes
diferentes: E. coli auxotrofica para el aminocido triptfano, E. coli
prototrofica, Saccharomyces cerevisiae y Acidiotiobacillus ferrooxidans.
Se usaron 4 placas Petri diferentes con un medio preparado con una
diferente composicin, siendo estos:

Medio de Agar + Agua


Medio de Agar + Sales
Medio de Agar + Sales + Azucar

Medio de Agar + Sales + Fuente nitrogenada

Las placas usadas fueron divididas en 4 y en cada cuadran se sembr


una diferente cepa para observar mejor as el crecimiento de cada una
de estas en las placas.

Resultados
Tras observar las siguientes pruebas, se obtuvo en la primera la siguiente
tabla:

La segunda prueba resulto con como se esperaba: La E. coli prototrofica logr


crecer en el medio mnimo de Davies. Sin embargo se observ contaminacin
en la placa, esta contaminacin se observ en el cuadrante donde debera
haber crecido la cepa de E. coli auxotrofica. Todo se describe en la siguiente
tabla:

La tercera y ltima prueba tuvo un resultado no esperado con la teora, la cual


ser discutida ms adelante, debido al crecimiento de la cepa Saccharomyces
cerevisiae en todas las placas sembradas, resultado que de acuerdo al
requerimiento nutricional de la cepa no debera haber pasado. Fuera de este
resultado inesperado, el resto de las cepas tomo un desarrollo pronosticado.
Los resultados del experimento se muestran en la siguiente tabla:

Discusin
La tabla de la primera prueba son bastantes concordantes con lo aprendido en
teora y posee su respuesta en el medio usado. La primera cepa fue la de E.
coli la cual es hetertrofa por naturaleza, esto se traducira en que para su
crecimiento la presencia de una fuente carbonada de naturaleza orgnica es
fundamental puesto q los necesita para formar sus nutrientes adems como
ATP. Al hablar de la otra cepa, A. ferrooxidans es de naturaleza muy diferente a
E. coli esto se debe a que esta cepa es auttrofa y solo necesita el CO 2 del
ambiente como fuente carbonada, sin embargo cabe mencionar que esta cepa
adems requiere de Fe para la elaboracin de ATP, esta bacteria tiene las rutas
de ATP y compuestos carbonados orgnicos completamente separadas.
El resultado fue el esperado en la prueba, pues se mostr un crecimiento
adecuado de acuerdo a la cepa sembrada. El medio 9K es completamente
inorgnico y con Fe en su contenido, lo que favorecera el crecimiento de A.
ferrooxidans.
Al igual que en la primera prueba, la segunda fue exitosa. La cepa de E. coli no
logro su crecimiento en el medio usado, esto se deba a su no capacidad de
poder metabolizar el aminocido triptfano. La cepa E. coli prototrofica logro
crecer pues no tena ningn problema metabolizando el triptfano. Sin
embargo la placa se contamino con una bacteria evidenciando un crecimiento
algo desordenado y completamente diferente a la de las cepas de E. coli. La
contaminacin se podra deber a una mala manipulacin de los instrumentos (a
una incorrecta esterilizacin de estos) o al trabajar en un ambiente no estril.
En la ltima prueba se observ un repentino crecimiento de S. cerevisiae en 2
placas, en las cuales no debera haber crecido. Estas placas era: Agar + Sales
+ Azcar y Agar + Sales. Esto puede deberse a que al momento de sembrar

del caldo al medio de cultivo podamos haber jalado parte del caldo al medio y
con este todos sus componentes nutricionales. De esta manera se explicara el
tenue, pero presente, crecimiento de la cepa. Fuera de este suceso el
experimento sali como era esperado puesto que ninguna cepa puede vivir sin
metabolizar compuestos nitrogenados los cuales ayudaran a la formacin de
futuros aminocidos y futuras protenas.

Conclusiones
La diferencia fundamental entre organismos auttrofos y hetertrofos puede
ser corroborada experimentalmente mediante el uso del medio correcto y de
las condiciones apropiadas.
Al tratarse de un laboratorio con uso de microorganismos la completa
esterilizacin y correcto manejo de los implementos es necesario. De no ser asi
algunos reactivos de la prueba podran estar contaminados y dar resultados
errneos.

Cuestionario
1. Establezca semejanzas y diferencias ente los organismos
auttrofos y hetertrofos

2. De dos ejemplos de microorganismos auxotrficos y


prototrficos.
Podramos nombrar muchas especies bacterianas, puesto que por
definicin una cepa auxotrofa tiene la secuencia de DNA afectada y no
puede metabolizar un compuesto. Ej E. coli auxotrofica para el
triptfano, o Pseudomona auxotrofica para valina.
3. Cules son los componentes mnimos que sostienen el
crecimiento bacteriano?

De acuerdo a la prctica realizada, en especial a la tercera prueba,


podemos asegurar que toda cepa bacteriana requiere al menos una
fuente carbonada como un azcar y adems una fuente nitrogenada
para su metabolizacin y transformacin a diferentes compuestos como
protenas y otros. De no ser as la bacteria no podra conseguir un ATP
suficiente o nutrientes necesarios para su desarrollo y proliferacin.

Anexos

Bibliografa

Univesidad Nacional Autonoma de Mexico, Nutricion Microbiana y


Requerimiento
de
Oxigeno:http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Protocolodenutricio
nyrequerimientosdeO_19571.pdf

ZUIGA, L.; Necesidades Nutricionales de los microorganismos ,


Noviembre
2012:
https://prezi.com/5pachiuqptnk/necesidadesnutricionales-de-los-microorganismos/

BASAURE, P.; Microorganismos/ Nutricin y Crecimiento. Febrero 2006


Santiago

Chile:
http://www.manualdelombricultura.com/foro/mensajes/24224.html

R. Garca, D. Alvarado. Manual de prcticas de Fundamentos de


Microbiologia 2014, Lima Per.