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PRACTICA N2
GRUPO: MAYUJAKE
MARIA CAMILA ASSIA ORTIZ
YUCELYS CONTRERAS SINCELEJO
JAVIER RUIZ CONTRERAS
KEVIN ALMANZA HERNANDEZ
DAVID GUEVARA BENITEZ
UNIVERSIDAD DE SUCRE
FACULTAD DE INGENIERIA
PROGRAMA DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
SINCELEJO-SUCRE
2015.
Laboratorio de Microbiologa Industrial, Universidad de Sucre
RESUMEN
Esta prctica consiste en aplicar las clases y mtodos de coloracin para la
identificacin y caracterizacin de bacterias en el laboratorio de Microbiologa. La
observacin puede realizarse por diferentes procedimientos como son la
observacin directa de microorganismos in vivo o el tratamiento mediante
tinciones. Estos procesos van dirigidos a incrementar el contraste y por
consiguiente a optimizar el resultado. Se realiz tincin Simple para identificar
morfolgicamente las bacterias y tincin Diferencial para observar los dos tipos de
divisin en Gram positivas y Gram negativas y establecer diferencias entre estas;
posteriormente se describieron los pasos a seguir para una correcta tincin de las
muestras y su respectiva observacin en el microscopio.
1. INTRODUCCIN
Las bacterias se observan mediante microscopio ya que son microorganismos. Su
observacin morfolgica sin teir es confusa debido a que sus clulas y
estructuras no pueden diferenciarse.
El estudio microscpico de las bacterias se facilitara notablemente al tratarlas con
colorantes o tintes, haciendo una mejor apreciacin de la forma, estructuras
celulares y tamao relativo de los microorganismos teidos. Se recomienda antes
de la tincin fijar la muestra para que las clulas a observar no se pueden mover y
as podemos obsrvalas en un solo lugar de la placa que montamos.
Para teir los microorganismos se dispone de un gran nmero de compuestos
orgnicos coloreados (colorantes). En general son un tanto complejos en su
estructura molecular. Una clasificacin prctica de estos compuestos es de
acuerdo a su comportamiento qumico, es decir, cida, bsica y neutra, de tal
forma que los colorantes cidos tian a los componentes celulares bsicos y los
colorantes bsicos tian los componentes celulares cidos.
Las coloraciones pueden ser simples y diferenciales, debido a que la morfologa
de las bacterias es amplia y dependiendo que queramos reconocer, diferenciar
utilizarnos un tipo de tincin especifica.
2. OBJETIVO
GENERAL
Aplicar los mtodos de coloracin para el reconocimiento de bacterias.
ESPECIFICOS
Identificar las diferentes morfologas bacterianas mediante la observacin
microscpica como primer parmetro de identificacin microbiolgica
Realizar coloraciones simples y diferenciales mediante las tcnicas
convencionales de tinciones bacterianas para una caracterizacin celular
adecuada.
Adquirir destreza en la diferenciacin de bacterias Gram positivas y Gram
negativas mediante la tincin de Gram.
3. PROCEDIMIENTO
Diagrama de flujo.
Se cubri el frotis con
el colorante ,azul de
metileno, durante 2
minutos.
Se elimin el exceso
de colorante
coloracin simple ( azul
de metileno)
CLASES Y
METODOS DE
COLORACIN
realizar un frotis
de un cultivo
bacteriano y fijar
la muestra a la
llama
coloracin diferencal
(tincin de Gram)
4. RESULTADOS
Tincin simple: se observaron bacterias redondas y ovaladas (fig.1)
Morfolog
a celular
Pequeas coloraciones
azules y rojas.
5. ANALISIS DE RESULTADOS
Tincin simple
Este tipo de tincin se basa en la afinidad del colorante por los componentes
celulares. Utiliza un solo colorante (azul de metileno) usado para destacar el
microorganismo completo para que se vean las formas y las estructuras celulares
bsicas; preferentemente es de tipo bsico y contiene un cromgeno (compuesto
que da color al tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias
posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromgeno. Se
utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las clulas absorbern el
Laboratorio de Microbiologa Industrial, Universidad de Sucre
colorante y quedarn teidas del mismo color. Por tanto, la tincin simple mejora la
observacin de la clula completa. [1]
TINCION DIFERENCIAL
Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una
solucin de Cristal Violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son
lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las
clulas, tanto las Gram positivas como las Gram negativas, estn teidas de azul.
El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de Lugol (yodo-yoduro
potsico). El ingrediente activo aqu es el I2; el KI simplemente hace soluble el I2
en agua. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el
Cristal Violeta. De nuevo tanto las clulas Gram positivas como las Gram
negativas se encuentran en la misma situacin. Se lleva a cabo despus la
decoloracin, usando una mezcla de Alcohol - Cetona, sustancias en las que es
soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (Gram positivos) no se
decoloran, mientras que otros (Gram negativos) lo hacen. La diferencia esencial
entre esos dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin;
esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias
Gram negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la
membrana exterior de la pared de la clula (y tambin puede daar la membrana
citoplasmtica a la que se une peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano
es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora.
Las clulas Gram positivas, a causa de sus paredes celulares ms espesas
(tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables al disolvente,
provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la
pared celular. Despus de la decoloracin las clulas Gram positivas son todava
azules, pero las Gram negativas son incoloras. Para poner de manifiesto las
clulas Gramnegativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un
colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina bsica. Despus de la
coloracin de contraste las clulas Gram negativas son rojas, mientras que las
Gram positivas permanecen azules. [2]
6. CONCLUSINES
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
LUNA, Gilma Janeth.
Manual operativo de Anlisis Microbiolgicos para
alimentos. Fondo Editorial Fundacin Universidad de Bogot Jorge Tadeo Lozano.
Bogot-Colombia. 1994.
Microbiologa. Prescott Harley Klein. Quinta edicin. McGraw-Hill
Biologa de los microorganismos. Brock. 10a edicin. Pearson Prentice Hall.
[3] Wikipedia: the free encyclopedia [Wiki en Internet]. St. Petersburg (FL):
Wikimedia Foundation, Inc. 29 jul 2015. [Consulta 7 septiembre 2015]. Disponible
en: https://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_positiva