Pruebas Cualitativas para Aminocidos y Protenas

Resumen

Por la estructura peptdica y la presencia de determinados grupos (grupos R), las

protenas pueden reaccionar con una variedad de agentes originndose productos
coloreados. Estas reacciones son la base para la determinacin cuantitativa y
cualitativa de las protenas. Por presentarse variaciones en la composicin de los
aminocidos de las diferentes protenas, se manifiestan diferentes colores y
grados de intensidad para una misma reaccin, ntimamente relacionado con la
naturaleza de la protena analizada.
Objetivos
Aplicar pruebas cualitativas generales y especficas que permitan reconocer grupos qumicos de los
aminocidos y protenas.
Someter soluciones de protenas a desnaturalizacin con agentes fsicos y qumicos.

Marco Terico
La Ninhidrina
La ninhidrina es un poderoso agente y reactivo comn para visualizar las bandas de separacin
de aminocidos por cromatografa o electroforesis, tambin es utilizada con fines cuantitativos
para la determinacin de aminocidos.
Reacciona con todos los aminocidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una
coloracin que vara de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado prpura de
Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloracin producida por la ninhidrina es
independiente de la coloracin original del aminocido
Esta prueba es positiva tanto para protenas como para aminocidos. en aquellos casos donde no
da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteinas, pero si
hay aminoacidos libres.
La Reaccin Xantoproteica
Los aminocidos, que contienen un ncleo aromtico forman nitroderivados de color amarillo
cuando se calientan con cido ntrico concentrado. Las sales de estos derivados son de color
naranja intenso en medio alcalino. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali, se
torna color amarillo oscuro. La fenilalanina, la tirosina y en cierto grado el Triptfano, as como
todas las protenas que los contienen, dan positiva la prueba.
Segn las guas qumicas es una reaccin cualitativa, ms no cuantitativa. Por ende
determina la presencia o no de protenas. Para cuantificar se usa otra reaccin, como la
de Biuret, y se hace un anlisis espectro fotomtrico.
Reaccin para el triptfano [
Este aminocido se condensa fcilmente con varios aldehdos en presencia de cidos fuertes
para dar compuestos coloreados. En la reaccin se utiliza el reactivo de Ehrlich (pdimetilaminobenzaldehdo al 10% en HCL concentrado.) que reacciona con un buen nmero de
compuestos orgnicos tales como ndoles, aminas aromticas y compuestos ureicos para dar
complejos coloreados.
Reacciones para cistena y cistina
Cuando los aminocidos y las protenas que contienen grupos tilicos se calientan en medio
fuertemente alcalino, el azufre presente reacciona para formar sulfuros. Este sulfuro puede

detectarse por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adicin de acetato
de plomo. Los grupos tioles tambin reaccionan con el nitroprusiato de sodio en presencia de un
exceso de amonaco para dar un complejo de color rojo.
Prueba para Arginina
El aminocido Arginina contiene un grupo guanidino en la cadena lateral, este grupo reacciona
con el reactivo de Sakaguchi (a-naftol/agua de Bromo) en medio alcalino para dar un compuesto
de color rojo.
Prueba de Biureth
es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos con dos o
ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin desconocida. El reactivo, de color azul,
cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina con polipptidos de
cadena corta. El Hidrxido de Potasio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio
alcalino necesario para que tenga lugar.
Desnaturalizacin por calor y pH extremos
Una prdida de la estructura tridimensional suficiente para causar prdida de la funcin se llama
desnaturalizacin. Se forma un conjunto de cadenas polipeptdicas con distinto grado de
plegamiento. La desnaturalizacin no significa que siempre se obtenga la cadena polipptidica
totalmente desplegada. Los productos de desnaturalizacin en solucin se agregan fsicamente y
segn las condiciones de pH y fuerza inica, precipitan.
El objetivo de elegir un paso de purificacin desnaturalizante es crear las condiciones donde la
protena de inters no se desnaturalice mientras que los otros componentes se desnaturalicen y
precipiten.
Precipitacin con cationes y aniones pesados y sales concentradas
Los cationes de metales pesados y los aniones de elevado peso molecular son muy usados en la
separacin de protenas y en la preparacin de filtrados libres de protenas. A pH neutro por lo
general las protenas tienen carga neta negativa y se combinan fcilmente con iones de metales
pesados que, al neutralizar la carga producen la precipitacin. A pH por debajo del punto
isoelctrico en cambio, se combinan con aniones porque presentan carga neta positiva.
Soluciones concentradas de sales, de sulfato de amonio.

Materiales y Reactivos
Materiales:

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Tubos de Ensayo: Consiste en un pequeo
tubo de vidrio con una punta abierta (que
puede poseer una tapa) y la otra cerrada y
redondeada, que se utiliza en los laboratorios
para contener pequeas muestras lquidas,
realizar reacciones en pequea escala, entre
otras cosas.

Gradilla: es utilizada para sostener y

almacenar gran cantidad de tubos de ensayo,
de todos los dimetros y formas.

Gotero: Consiste en un pequeo tubo de

vidrio y en uno de sus extremos tiene un
capuchn de hule, que permite succionar o
aadir soluciones.

Bao Mara: es un mtodo empleado en las

industrias, en laboratorio de qumica y en la
cocina, para conferir temperatura uniforme a
una sustancia lquida o slida o para calentarla
lentamente, sumergiendo el recipiente que la
contiene en otro mayor con agua que se lleva
a o est en ebullicin.

Reactivos
HCl: Es muy corrosivo y cido. Se emplea comnmente como reactivo qumico y se trata de un
cido fuerte que se disocia completamente en disolucin acuosa. A temperatura ambiente, el
cloruro de hidrgenoes un gas ligeramente amarillo, corrosivo, no inflamable, ms pesado que el
aire, de olor fuertemente irritante. Cuando se expone al aire, el cloruro de hidrgeno forma
vapores corrosivos densos de color blanco. El cloruro de hidrgeno puede ser liberado por
volcanes. Por ingestin puede producir gastritis, quemaduras, gastritis hemorrgica, edema,
necrosis. Se recomienda beber agua o leche y NO inducir el vmito. Por inhalacin Puede
producir irritacin, edema y corrosin del tracto respiratorio, bronquitis crnica. Se recomienda
llevar a la persona a un lugar con aire fresco, mantenerla caliente y quieta. Si se detiene la
respiracin practicar reanimacin cardio pulmonar. Al contacto con la piel Puede producir
quemaduras, lceras, irritacin. Retirar de la zona afectada toda la vestimenta y calzados y lavar
con agua abundante durante al menos 20 minutos. Y al contacto con la piel puede producir
necrosis en la crnea, inflamacin en el ojo, irritacin ocular y nasal, lcera nasal. Lavar el o los
ojos expuestos con abundante agua durante al menos 15 minutos.
Tirosina: es uno de los 20 aminocidos que forman las protenas. Se clasifica como un
aminocido no esencial en los mamferos ya que su sntesis se produce a partir de la
hidroxilacin de otro aminocido: la fenilalanina, es un slido que forma cristales y que

generalmente presenta un color blanquecino, aunque tambin puede ser incoloro. Se considera
un aminocido polar y protonable. Aunque normalmente se clasifica como aminocido
hidrofbico a causa de su anillo aromtico. Hay que tener en cuenta que tambin contiene un
grupo hidroxilo. Normalmente se encuentra sin carga, aunque a pH muy bsico presenta carga
negativa.Por lo que respecta a su solubilidad sabemos que es soluble en agua y ligeramente
soluble en alcohol. Tambin conocemos su insolubilidad en ter.
Triptfano: es un aminocido esencial en la nutricin humana. Es uno de los 20 aminocidos
incluidos en el cdigo gentico. Se clasifica entre los aminocidos apolares, tambin llamados
hidrfobos. Es esencial para promover la liberacin del neurotransmisor serotonina, involucrado
en la regulacin del sueo y el placer. Su punto isoelctrico se ubica a pH=5.89. La ansiedad, el
insomnio y el estrs se benefician de un mejor equilibrio gracias al triptfano.
Cistena: es un -aminocido con la frmula qumica HO2CCH(NH2)CH2SH. Se trata de un
aminocido no esencial, lo que significa que puede ser sintetizado por los humanos. Los codones
que codifican a la cistena son UGU y UGC. La parte de la cadena donde se encuentra la cistena
es el tiol que es no polar y por esto la cistena se clasifica normalmente como un aminocido
hidrofbico.
Cistina: La cistina es un dmero de dos cistenas a travs de un puente disulfuro. Tiene un punto
de ebullicin entre 247 y 249 C.
Prolina: es uno de los aminocidos que forman las protenas de los seres vivos. La prolina est
involucrada en la produccin del colgeno. Est tambin relacionada con la reparacin y
mantenimiento de los msculos y huesos. Se trata del nico aminocido proteinognico cuya amina es una amina secundaria en lugar de una amina primaria. Aunque no posee un grupo
imino, en ocasiones es referida errneamente como un iminocido. Se forma directamente a
partir de la cadena pentacarbonada del cido glutmico, y por tanto no es un aminocido
esencial.
Hidroxiprolina: es un aminocido no esencial constituyente de protenas y derivado de la
prolina. Para esta hidroxilacin, existe una protena llamada prolinhidroxilasa, que reconoce a la
prolina como su sustrato.
Arginina: es uno de los 20 aminocidos que se encuentran formando parte de las protenas. En
el tejido heptico, la arginina puede ser sintetizada en el ciclo de la ornitina (o ciclo de la urea).
Se clasifica, en poblacin peditrica, como un aminocido esencial. Este aminocido se
encuentra involucrado en muchas de las actividades de las glndulas endocrinas
Fenilalanina: es un aminocido. Se encuentra en las protenas como L-fenilalanina (LFA),
siendo uno de los diez aminocidos esenciales para humanos. La fenilalanina es parte tambin
de muchos psicoactivos. Posee un pK de 8.5, un pH de 8 Tiene un peso molecular de 69.000, un
pI de 4,9.
Casena: es una fosfoprotena (un tipo de heteroprotena) presente en la leche y en algunos de
sus derivados (productos fermentados como el yogur o el queso). En la leche, se encuentra en la
fase

soluble

asociada

al

calcio

(fosfato

de

calcio)

en

un

complejo

que

se

ha

denominado caseingeno. Precipitan cuando se acidifica la leche a pH 4,6. Por ello, a la casena
tambin se le suele denominar protena insoluble de la leche.

Gelatina: es una mezcla coloide (sustancia semislida), incolora, translcida, quebradiza y casi
inspida que se obtiene a partir del colgeno procedente del tejido conectivo de despojos
animales hervidos con agua. Tambin existe una gelatina vegetal conocida como agar-agar.
La gelatina es una protena compleja, es decir, un polmerocompuesto poraminocidos. Como
sucede con los polisacridos, el grado de polimerizacin, la naturaleza de los monmerosy la
secuencia en la cadena proteica determinan sus propiedades generales. Una notable propiedad
de esta molcula es su comportamiento frente a temperaturas diferentes: se derrite con el agua
caliente y se solidifica nuevamente y se hincha con el agua fra.
Reactivo de Biureth: es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros
compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin desconocida.
cido Ntrico concentrado, HNO3: es un liquido incoloro que se descompone lentamente por
la accin de la luz, adoptando una coloracin amarilla por el NO2 que se produce en la reaccin.
En el aire hmedo despide humos blancos, su punto de fusin es de -43C y su punto de
ebullicin es de 83 C pero a esa temperatura se acenta su descomposicin. Es soluble en agua
en cualquier proporcin y cantidad y su densidad es de 1,5 g/ml.
Hidrxido de Sodio, NaOH: el hidrxido de sodio es un slido blanco cristalino sin olor que
absorbe humedad del aire (higroscpico). Es una sustancia manufacturada. Cuando se disuelve
en agua o se neutraliza con un cido libera una gran cantidad de calor que puede ser suficiente
como para encender materiales combustibles. El hidrxido de sodio es muy corrosivo.
Generalmente se usa en forma slida o como una solucin de 50%.
cido Actico Glacial: Inflamable. Provoca quemaduras graves.
Acetato de Plomo II: es un compuesto qumico cristalino de color blanco con un sabor
ligeramente dulce. Se obtiene tratando litargirio (xido de plomo (II) PbO) con cido actico.
Al igual que otros compuestos plmbeos, es una sustancia muy txica. El acetato de plomo es
soluble en agua y glicerina. Con agua, forma el trihidrato, Pb(CH 3COO)23H2O, una sustancia
cristalina monoclnica eflorescente de color blanco o incoloro.
cido Pcrico: slido, cristales amarillos, inflamable, de frmula qumica C 6H2OH(NO2)3, es un
explosivo que se utiliza como carga aumentadora para hacer explotar algn otro explosivo
menos sensible como el TNT.
cido Tricloroactico: Sustancia custica y corrosiva, hemosttica eficaz, que aplicadas sobre
la piel, mucosas o tejidos patolgicos- heridas, ulceraciones, provocan destruccin de la clulas
por accin qumica originando una masa o tejido muerto, alrededor acta como irritante, dando
lugar a una zona inflamada ocasionada por el medicamento. Se puede emplear para destruir
lesiones intraepiteliales, cervicales, uterinas o displasias cervicales.

Procedimiento
a. Reaccin de la ninhidrina

b. Reaccin xantoproteica

c. Prueba del cido glioxlico

d. Prueba de Ehrlich para triptfano

e. Reacciones para cistena y cistina

f. Reaccin para la arginina

g. Ensayo de Biureth para protenas:

h. Desnaturalizacin por calor y pH extremos

Actividades

Confeccione un cuadro de resultados para cada prueba e ilustre los colores

obtenidos en los resultados positivos o negativos de las pruebas. Anote
comentarios y posibles explicaciones en los resultados negativos.
Describa la reaccin de la ninhidrina con cido asprtico, lisina y glutamina.
Se tienen cuatro frascos sin rotular, que se sabe contienen soluciones de los
siguientes aminocidos: glicina, arginina y tirosina y otro con el tripptido Gli-ArgGli. Cmo los identificara?
Enumere cuatro agentes fsicos y cuatro agentes qumicos que pueden
desnaturalizar las protenas.
Investigue cmo afecta la fuerza inica del medio la solubilidad de las protenas.