Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Laboratorio de Biologa Celular

PRCTICA N9: ESTRUCTURA DE TRANSCRIPCIN

I. Marco terico:
Durante el ciclo celular, las cuatro bases A, G, T y C del ADN son transcriptas al lenguaje de ARN para la
expresin de genes codificadores de protenas, las cuales constituyen el llamado mRNA que posteriormente ser
traducido al lenguaje de 20 aminocidos de las protenas.
El primer proceso, es decir, el de la trascripcin, ocurre en el ncleo de las clulas eucariotas, el cual alberga,
adems, al nuclolo, que es el sitio donde tiene lugar la transcripicin y el procesamiento del rARN y el
ensamblaje de los ribosomas, por lo que es considerado como el centro de produccin de estos ltimos.
Cuando en el ciclo de divisin celular se modifica la sucesin normal entre las fases S y M de manera que
despus de una mitosis se producen dos periodos de sntesis sucesivos, tiene lugar el fenmeno de la
endorreduplicacin o endomitosis. Un caso extremo de este es el de la politenia (Koltoff, 1934) en el cual se
produce un nmero elevado de rondas sucesivas de replicacin, el cual aumenta exponencialmente, dando lugar a
los cromosomas gigantes o politnicos. Debido a que los cromomeros de las muchas cromtidas presentes estn
yuxtapuestas, es tpico la forma en bandas (de regular grosor) de los cromosomas poltenicos.
Los cromosomas politnicos funcionan como un mecanismo de amplificacin gnica, lo cual implica que
pueden formarse en clulas de tejidos con gran actividad metablic, es por esto que no son exclusivos de las
glndulas salivales de los dpteros (donde fueron observados por primera vez)
Los grandes engrosamientos cromosmicos ("puffs") inducidos en este momento del desarrollo son regiones
donde el genoma se transcribe muy activamente. Los pufs son puntos donde el ARN est siendo sintetizado; la
expansin que se observa es una consecuencia de la necesidad de raelajar la estructura de la fibra para sintetizar
ARN, por ello el puff es considerado una consecuencia de la transcripcin.
Las clulas de la glndula salival de la larva Drosophila contienen cromosomas casi 100 veces ms grandes
que los observados en la mayor parte de otras clulas del organismo. Durante el desarrollo de la larva, estas
clulas dejan de dividirse, pero mantienen su crecimiento. La replicacin del DNA contina y provee el material
gentico adicional necesario para conservar los altos niveles de actividad secretora de estas clulas gigantes. Las
cadenas de DNA duplicado permanecen unidas en un ordenamiento perfecto lado con lado y crean un cromosoma
gigante, de hasta 1 024 veces el nmero de cadenas de DNA de los cromosomas normales. (Karp, 2014, p.385)

II. Objetivos
Reconocer cromosomas politnicos en las clulas de larvas de Drosophila melanogaster
Reconocer los puntos de alta transcripcin o puffs en estos cromosomas.
III. Materiales
Del alumno:
- Lminas portaobjetos
- Lminas cubreobjetos
- Estiletes entomolgicos
Del laboratorio
- Suero fisiolgico

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Laboratorio de Biologa Celular

Orcena aceto-clorhdrica
Larvas de Drosophila melanogaster
Solucin Targa
Estereoscopio
Carnoy
Microscopio

IV. Procedimiento
1. Verter 2 gotas de solucin salina en un portaobjeto
2. Colocar una larva de Drosophila melanogaster en la lmina
3. Llevar la muestra a un estereoscopio y disecar la larva con la ayuda de una pinza y estiletes separando la
regin ceflica del cuerpo larval, de tal manera que se obtengan las glndulas salivales.
4. Colocar las glndulas salivales en otra lamina
5. Aadir en el orden siguiente:
Solcin Carnoy de 3 a 5 min
Solucin Targa de 5 a 8 min y
Orcena aceto-clorhdrica de 10 a 15 min
6. Realizar el squash con una laminilla
7. Observar al microscopio

IV. Cuestionario
1. Cules son las caractersticas de un cromosoma politnico?
2. En qu organismos y estructuras podemos encontrar cromosomas

politnicos?

3. Qu nos indicara una gran presencia de puffs?

Desarrollo
1. Los cromosomas politenicos tienen las siguientes caractersticas:
a) Su ADN se encuentra en constante replicacin permaneciendo en el periodo S de la Interfase, fenmeno
conocido como endomitosis. Estn constituidos por 2n cromtidas (512, 1024 o incluso 8192)
b) Presentan zonas de alta transcripcin de ADN, denominados puffs, por lo cual representa uno de los
mejores sistemas disponibles para la visualizacin directa de la expresin de genes
c) Tienen detalles visuales abundantes y en ellos se reconocen alrededor de 5000 bandas (crommeros)
cuando se tien y examinan al microscopio. Las bandas se han identificado como los loci de genes
particulares. (Painter)

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Laboratorio de Biologa Celular

d) Los cromosomas homlogos estn asociados entre s en toda su extensin. Esta condicin, denominada
apareamiento somtico es propia de la mitosis de la mayora de los Dpteros.
e) Permiten el crecimiento de una clula en volumen sin la necesidad de duplicacin.
f) El patrn de bandeo es esencialmente constante de un individuo al prximo, pero se observan diferencias
entre los cromosomas de las moscas de diferentes especies del gnero de Drosophila; el largo total de los
cromosomas en un ncleo de las glndulas salivares es de alrededor de 2.000 (2mm)

2. Se encuentran en las glndulas salivales, epitelio intestinal, cuerpo graso de larvas de dpteros del gnero
Chironomus, Rhynchosciara, Simulium, Drosophila, Telmatoscopus, entre otros, pero adems en otros organismos
tales como en los macroncleos de protozoos ciliados, glndulas salivales de insectos colmbolos, glndulas de
seda de Bombyx mori (lepidptero), trofoblasto de roedores y tambin en distintos tejidos de plantas (clulas
antpodas y sinrgicas del saco embrionario, suspensor del embrin, haustorios del endospermo, pelos
estaminales....

3. Nos indicara la presencia de una alta actividad transcripcional del ADN, ya que se est produciendo una
expansin de la fibra para poder sintetizar ARN

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Laboratorio de Biologa Celular

Conclusiones:

Los cromosomas politnicos son elaborados en ciertos tejidos cuya demanda proteica es
elevada ya que se encuentran en un ciclo constante de duplicacin y transcripcin del ADN

Los llamados puffs nos indican la presencia de una alta actividad transcripcional en estos tipos
de cromosomas.