Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
OBTENCIN DE UN GEL A
PARTIR DE LA TINTURA DE
Murraya paniculata (L.)
(DROGA SECA)
La Habana
2015
UNIVERSIDAD DE LA HABANA
INSTITUTO DE FARMACIA Y ALIMENTOS
OBTENCIN DE UN GEL A
PARTIR DE LA TINTURA DE
Murraya paniculata (L.)
(DROGA SECA)
Autor: Lic. Wendy Snchez Martnez
Tutoras: Dra C. Yamilet I. Gutirrez Gaitn
MC. Celia M. Casado Martn
Dra C. Viviana Garca Mir
Asesores: Dr C. Adonis Bello Alarcn
MC. Adalberto Izquierdo Castro
MC. Noel Varona Torres
Lic. Arturo Snchez Faria
La Habana
2015
DEDICATORIA
A mis padres
Mi ejemplo y mi compromiso.
A mi esposo
Mi apoyo, comprensin y confianza.
AGRADECIMIENTOS
Agradecimientos
Agradecimientos
El agradecimiento es el deber que ms obliga. Marco Tulio Cicern.
La gratitud es una de las virtudes que ninguna persona, por difciles que sean
las circunstancias, debe olvidar.
Hoy es un da muy importante para m pues he logrado vencer una meta ms
en mi vida. Si los resultados han sido gratificantes no solo son atribuibles a mi
esfuerzo, sino tambin a la ayuda y apoyo incondicional de muchas personas.
A mis tutores Dr.C. Viviana Garca Mir, Dr.C. Celia M. Casado Martn y Dr.C.
Yamilet Gutirrez, les agradezco cada uno de sus consejos, orientaciones y
enseanzas. Son excelentes profesionales capaces de hacer ciencia y ms
an de inculcar el amor por la ciencia. Para ustedes gracias por su amistad, su
comprensin y ayuda, sobre todo en esos momentos en que todo lo vea
imposible por los momentos difciles que me he enfrentado a la vida.
Agradezco a la Dr.C. Irela Prez Snchez que de igual forma acept ser mi
oponente, gracias por el tiempo dedicado a revisar la tesis, as como por las
sugerencias y sealamientos realizados.
Agradezco tambin a Dr.C. Adonis Bello Alarcn por su amistad y siempre
disposicin para ayudar, que de una forma u otra se ha ocupado y preocupado
por mi superacin. Indudablemente no olvid mencionar a Arturo, quien ha sido
mi compaero en esta contienda, el cual colabor en gran parte de la obtencin
de los resultados en esta investigacin.
Finalmente el agradecimiento eterno a toda mi familia. No por ser el ltimo es el
menos importante, sino porque es constante, imperecedero e incondicional. A
mis padres, el mayor tesoro que me ha dado la vida y con los que gracias a
Dios puedo seguir contando. Gracias por su tiempo, por soportarme y por
quererme. Quiero que sepan que su presencia me da las fuerzas necesarias
para seguir adelante, para luchar por cada meta u obstculo que la vida me ha
Agradecimientos
puesto, en lo profesional y lo personal, y que para m son todo un ejemplo de
valores.
En ms de una ocasin flaquee, titubee y si hoy he llegado aqu en gran parte
se lo agradezco a mis padres. Hoy me siento complacida, s que este trabajo
no ha sido un milagro sino el fruto de mi empeo y de la ayuda de muchos.
A mi esposo Manuel que aunque est muy alejado de esta actividad siempre
tiene lista la palabra adelante.
A mi hermana, a mis 2 bellas sobrinas, a mis tos, mi primo y a mis compaeros
de batalla, pues an de los que estn lejos he tenido el apoyo espiritual.
A los que ahora empiezan solo les digo que no se dejen vencer, que todo
resultado lleva un sacrificio y todo esfuerzo es un xito.
Agradezco a todos los aqu presentes, a los que por algn descuido
imperdonable olvid mencionar y espero se sientan tan felices como yo. A
todos, muchas gracias.
RESUMEN
Resumen
RESUMEN
NDICE
ndice
NDICE
Pg.
INTRODUCCIN....
I.3. Geles......
10
I.3.1. Generalidades..........
10
11
13
13
15
15
II.2.
Parmetros
de
calidad
del
material
vegetal
de
Murraya
paniculata..
II.1.1. Estudio de secado...
II.3.2. Parmetros fsico-qumicos de la droga cruda de M.
paniculata........
15
15
15
18
18
19
19
19
20
20
22
ndice
II.4.3. Estudio fitoqumico de la tintura..
22
22
23
23
24
25
lquida de alta
resolucin (CLAR)..
26
27
27
27
28
28
28
29
29
29
30
31
31
31
33
35
35
36
ndice
III.1.3.3. Control microbiolgico..
37
39
39
39
42
43
43
45
III.3.3.3.
Anlisis
por
cromatografa
lquida
de
alta
resolucin (CLAR)..
46
49
51
Anlisis
por
cromatografa
lquida
de
alta
resolucin (CLAR)..
53
54
54
55
56
57
58
60
60
61
63
CONCLUSIONES
65
RECOMENDACIONES.
66
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
ANEXOS
INTRODUCCIN
Introduccin
INTRODUCCIN
El tema de las plantas medicinales es quizs tan antiguo como el hombre
mismo, sin embargo, los conocimientos al respecto siempre han estado
diseminados. A pesar de la invasin farmacolgica mundial, las personas
siguen recurriendo a los remedios vegetales para aliviar sus enfermedades
comunes, por ello un esfuerzo por regresar a los productos naturales
representa un aporte muy significativo ya que son un recurso que debe
conocerse, usarse y cuidarse como parte del rico patrimonio natural de cada
pas (Quesada, 2008).
Introduccin
fin de
Introduccin
contienen aceites esenciales o sustancias voltiles, es recomendable secarlas
con temperaturas inferiores a 40 oC y con una adecuada circulacin de aire
(Sharapin, 2000; Acosta y Rodrguez, 2006).
Tomando en consideracin los elementos expuestos, se establece como
problema cientfico para esta investigacin:
La tintura de M. paniculata y sus fricciones, se encuentran reportadas en el
Formulario Nacional de Fitofrmacos y Apifrmacos del Ministerio de Salud
Pblica de Cuba, con una norma provisional que contempla algunos
parmetros fsico-qumicos y referencias que avalan su actividad biolgica,
sobre la base del empleo de la droga vegetal en estado fresco, lo que limita la
extensin de su utilizacin, ya que no se cuenta con estudios que avalen la
factibilidad del empleo de la droga seca con garanta de su calidad, seguridad y
eficacia.
Teniendo en cuenta estos antecedentes, se plantea la hiptesis siguiente:
La calidad de la droga seca de M. paniculata y su tintura, permite obtener un
fitomedicamento con garantas de seguridad y eficacia.
Para demostrar dicha hiptesis se proponen como objetivos de trabajo:
OBJETIVO GENERAL:
Obtener un gel a partir de la tintura M. paniculata (droga seca).
OBJETIVOS ESPECFICOS:
Evaluar la calidad y estabilidad de la droga seca de M. paniculata y su
tintura a travs de la determinacin de sus ndices fsico-qumicos.
Elaborar un gel a partir de la tintura de M. paniculata, garantizando su
calidad, aceptabilidad y estabilidad.
Estimar desde el punto de vista preclnico, la seguridad y efectividad de
la tintura y la formulacin obtenida.
CAPTULO I
REVISIN
BIBLIOGRFICA
Revisin Bibliogrfica
Reino: Plantae
Subreino: Tracheobionta (planta vascular)
Superdivisin: Spermatophyta (planta con semillas)
Divisin: Magnoliophyta (plantas con flores)
Clase: Magnoliopsida (dicotiledneas)
Subclase: Rosidae
Orden: Sapindales
Familia: Rutaceae (Comprende plantas leosas o raramente herbceas,
provistas de glndulas secretoras oleferas).
Subfamilia: Citroideae
Tribu:Clauseneae
Gnero: Murraya (comprende alrededor de 35 especies de plantas con flores)
Especie: Murraya paniculata (L.) Jack
Revisin Bibliogrfica
ptalos de 1-2,5 cm; los frutos (figura 1D) son de color rojo, subglobosos, de 11,6cm (Roig, 1988).
A
B
C
D
Figura 1: Detalles macromorfolgicos de M. paniculata
A: Arbusto; B: Hojas; C: Flores; D: Frutos
M. paniculata es nativa de China, India, Sri Lanka, Viet Nam, Laos, Noreste de
Australia y Taiwn, adicionalmente, puede adaptarse a pases tropicales
(Parrotta 2001). Es una de las plantas ms comunes en patios y jardines, muy
empleada para formar setos y podarlas. A causa de su fcil propagacin por
semillas, se ha hecho espontnea en muchos lugares, cultivndose en las
Antillas y en Amrica tropical continental (Roig, 1988).
Esta especie se adapta a un amplio rango de condiciones. Crece en lugares
desde el nivel del mar, hasta elevaciones de 1300m. Se desarrolla en suelos
bien drenados, sedimentarios. Resiste temperaturas de -4
C y puede
Revisin Bibliogrfica
empleadas para el tratamiento de diarrea, disentera, reumatismo, erupciones
en la piel y picazn. Las flores son empleadas en la fabricacin de cosmticos
(Roig, 1988; Ghani, 2003; Rout y col., 2007; Casado y col., 2011).
I.1.4. FITOQUMICA, FARMACOLOGA Y TOXICOLOGA
Datos de la literatura referentes a estudios fitoqumicos revelan la presencia en
esta especie de alcaloides indlicos como el yuehchukeno y el paniculol en las
races (Kong y col., 1985; Ito y Furikawa, 1990); en las hojas han sido
encontrados isoflavonoides (Lapcik y col., 2004), flavonas e flavanonas (o
chalconas) polimetoxiladas (Zhang y col., 2011). En la corteza y pulpa de los
frutos frescos fueron encontrados los flavonoides siguientes: 5,7,3',4',5'pentametoxiflavanonol,
heptametoxiflavona,
heptametoxiflavona,
pentametoxiflavona,
5,6,7,3',4',5'-hexametoxiflavona,
5,7,8,3',4',5'-hexametoxiflavona,
3,5,7,8,3',4'-hexametoxiflavona,
3,5,6,7,3',4',5'3,5,7,8,3',4',5'-
5-hidrxi-3,7,8,3',4'-
5-hidrxi-3,7,8,3',4',5'-hexametoxiflavona
8-hidrxi-
Revisin Bibliogrfica
aceite esencial obtenido a partir de las hojas de la especie, cultivada en zonas
montaosas del centro de Cuba, mostr la presencia de -cariofileno, cubebeno, -cadineno e germacreno D, entre otros (Jorge y col., 2012).
Desde el punto de vista de las actividades biolgicas, el aceite esencial de M.
paniculata demostr actividad insecticida (Qing y col., 2010), antibacteriana
contra Escherichia coli, Proteus mirabilis, Salmonella typha, Enterobacter
aerogenes y Shigella flexineri, as como propiedades antifngicas (Sundaram y
col., 2011), antiinflamatoria y analgsica (Dash y col., 2004). Otros estudios
revelan la actividad antioxidante de un extracto etanlico obtenido a partir de la
planta (Sundaram y col., 2011), antinociceptiva, antiinflamatoria (Narkhede y
col., 2012; Rodanant y col., 2012), y antidiarreica (Rahman y col., 2010).
Mientras tanto, Kumar y col. (2011) demostraron la accin analgsica del
extracto de ter de petrleo/acetato de etilo/metanol (1:1:1), de la corteza del
tallo de la especie. El extracto clorofrmico de las hojas present accin contra
Entamoeba histolytica (Sawangjaroen y col., 2006).
Revisin Bibliogrfica
vasorelajante de la fraccin clorofrmica del extracto metanlico de la planta
tambin fue demostrado. Dos coumarinas fueron aisladas a partir de esta
fraccin: la nueva sustancia kimcuongina y la ya conocida murracarpina, ambas
mostraron actividad vasorelajante con valores de CI50 de 37,7 M e 139,3 M,
respectivamente (Nguyen y col., 2014). Otro estudio fitoqumico llev al
aislamiento del alcaloide isomurrayafolina B, que mostro actividad analgsica
profunda en modelos de dolor perifrico y central (Fazal y col., 2014). Es
tambin muy importante realzar la presencia de trigonelina en esta especie
vegetal. Adems de las semillas de las leguminosas y el caf (Coffea arabica
L.), apenas algunas pocas especies acumulan altas concentraciones de
trigonelina y resultados recientes muestran a M. paniculata entre estas. La
trigonelina fue encontrada en todas las partes de la planta y ms del 70 % del
total, se encontraba en las hojas (Ashihara y Watanabe, 2014). Este compuesto
bioactivo tiene actividad hipoglucmica, hipolipidmica, neuroprotectora,
sedativa, contribuye a la mejora de la memoria y tambin presenta actividad
antibacteriana, antiviral y antitumoral, y demostr reducir a neuropata diabtica
auditiva y la agregacin plaquetaria (Zhou y col., 2012).
Gautam y col. (2012) en estudios de toxicidad aguda y sub-aguda por va oral,
de un extracto etanlico al 50% obtenido de las hojas de M. paniculata,
demostraron que dicho extracto era seguro, al no encontrar signos de toxicidad
por esta va en los animales de experimentacin.
I.2. MEDICAMENTOS HERBARIOS. GENERALIDADES
El concepto de medicamentos herbarios abarca hierbas, material herbario,
preparaciones herbarias y productos herbarios acabados, que contienen como
principios activos partes de plantas, u otros materiales vegetales, o
combinaciones de esos elementos (WHO, 2000a; 200b; Morales M. y Morales
J., 2009; Neeraj y Bhupinder, 2011).
En los medicamentos herbarios se rene el conocimiento ancestral
etnobotnico y etnomdico, as como, los aspectos farmacolgicos preclnico y
clnico. De esta forma, se contina el uso de la planta medicinal, ahora en
forma de extracto estandarizado y con el respaldo de toda la tecnologa
Revisin Bibliogrfica
farmacutica actual, logrndose un medicamento que no guarda diferencia en
su aspecto y calidad con los medicamentos alopticos, pero presenta
generalmente un elevado rango teraputico, es decir, condiciones de mayor
seguridad que hacen confiable su uso (Morales M. y Morales J., 2009).
Los medicamentos herbarios tienen una considerable importancia en el
comercio internacional. Sigue en aumento el reconocimiento de su valor clnico,
farmacutico y econmico, pero solo una cantidad relativamente pequea de
especies de plantas han sido estudiadas para posibles aplicaciones mdicas y
los datos sobre seguridad y eficacia estn disponibles para un nmero reducido
de ellas en algunas farmacopeas; este inconveniente limita el desarrollo,
produccin y comercializacin de fitomedicamentos, tanto en los mercados
nacionales como internacionales. Por ello, se hace necesario enfatizar en la
necesidad de garantizar su control de la calidad, con la aplicacin de tcnicas
modernas y el empleo de patrones apropiados (Busse, 2000; Osorio, 2009;
Neeraj y Bhupinder, 2011).
La calidad de un producto herbario es un estado determinado por su identidad,
pureza,
volumen,
marcadores
qumicos,
propiedades
fsico-qumicas,
Revisin Bibliogrfica
para, esencialmente, garantizar una composicin consistente de todas las
drogas vegetales, incluyendo operaciones analticas para sus marcadores de
identificacin y ensayos para sus principios activos. El control de calidad al
producto terminado debe conducir a la produccin de formulaciones herbarias
estandarizadas y teraputicamente efectivas. Cada pas necesita explorar sus
plantas medicinales ms relevantes, pero esto solo podr lograrse si los
medicamentos herbarios son evaluados y analizados usando tcnicas
modernas de estandarizacin (Choudhary y Singh, 2011; Garg y col., 2012).
I.3. GELES
I.3.1. GENERALIDADES
Los geles son sistemas dispersos, por lo general transparentes o traslcidos,
formados por lquidos (hidrfilos o hidrfobos) a los que se adicionan
sustancias de naturaleza coloidal capaces de formar una estructura continua,
cuya naturaleza y caractersticas definen las propiedades reolgicas del
conjunto. Otro modo de definir los geles es a partir de su mtodo de obtencin;
en este sentido, stos se obtienen a partir de soluciones coloidales que, por
diferentes modificaciones en su entorno, adquieren una estructura ordenada
tridimensional que fija las partculas de soluto alrededor de las del coloide (Juv
y col., 2007).
Es importante destacar que los geles con el tiempo pierden su condicin y su
estructura puede llegar a romperse, su estabilidad depende en gran medida de
una correcta formulacin, por lo que deben tomarse en consideracin en este
proceso las incompatibilidades que se puedan presentar, en la forma
farmacutica en s y otras especficas del polmero utilizado. Igualmente es
preciso considerar algunos factores desencadenantes de su inestabilidad como
son la temperatura, los cambios de pH, la agitacin violenta, la presencia de
electrlitos, etc. (Le Hir, 1995).
10
Revisin Bibliogrfica
I.3.2. CLASIFICACIN DE LOS GELES
Revisin Bibliogrfica
hidrfilos, capaces de formar micelas, un cosolvente que facilita la
micelacin del lpido y un lpido (o mezcla de lpidos fluidos y agua).
TAS geles (Transparents Aqua Silicone emulsions): son geles
transparentes basados en emulsiones de siliconas. Se consideran
como cremas transparentes de agua en silicona. Para prepararlos se
incorpora la fase acuosa sobre la fase oleosa lentamente y con
agitacin media-alta. Se elaboran en fro y pueden incorporar
diferentes activos cosmticos tales como clorhidrato de aluminio,
filtros solares, etctera.
Segn su viscosidad:
-
Geles fluidos
Geles semislidos
Segn su estructura:
-
12
Revisin Bibliogrfica
Segn la naturaleza de la fase interna:
-
Orgnicos:
Naturales: como la goma arbica y la gelatina.
Sintticos:
como
la
carboximetlcelulosa
sdica
hidroxiproplcelulosa.
13
Revisin Bibliogrfica
conformidad del producto y unas caractersticas sensoriales aceptables es
cada vez ms importante a la hora de desarrollar un producto. Por ejemplo, en
el caso de los productos farmacuticos los consumidores se ven obligados a
tomar un medicamento o aplicar algunos por va externa y soportar
caractersticas tales como: sabores amargos, una sensacin astringente, o el
excesivo tamao de las cpsulas o tabletas que dificultan la ingesta, as como
una textura arenosa en la piel, entre otras (Ainia, 2011).
14
CAPTULO II
MATERIALES Y
MTODOS
Materiales y Mtodos
15
Materiales y Mtodos
a) Humedad residual
Se emple el mtodo azeotrpico por triplicado, a partir de 10 g de muestra, se
utiliz tolueno como disolvente, un equipo Dean Star, una plancha de
calentamiento elctrica marca IKA-C-MAG-HP7, de fabricacin China y para las
pesadas se us una balanza analtica marca Sartorius.
Los resultados se obtuvieron a partir de la expresin:
Hr =
Vf
Vi
x 100
Donde:
Hr: humedad residual (%)
Vf: volumen final de agua (mL)
Vi: volumen inicial de agua (mL)
M: masa de la muestra (g)
100: factor matemtico para el clculo.
Ss =
R.500.100
M (100-H)
Donde:
Ss: sustancias solubles (%)
R: residuo de la muestra (g)
M: masa de la muestra (g)
H: humedad residual (%)
500 y 100: factores matemticos para el clculo.
16
Materiales y Mtodos
c) Cenizas totales, cenizas solubles en agua y cenizas insolubles en cido
clorhdrico al 10 %
Para las determinaciones se emple una mufla modelo MLW VEB
ELEKTROBAD FRANKENHAUSEN. Las pesadas se realizaron en balanza
analtica marca SARTORIUS. Cada determinacin se efectu 6 veces a partir
de 2 g de material.
Cenizas totales
Los clculos se efectuaron por la expresin siguiente:
CT =
M2 - M
x 100
M1 - M
Donde:
Ct: cenizas totales (%)
M: masa del crisol vaco (g)
M1: masa del crisol con la muestra (g)
M2: masa del crisol con la ceniza (g)
100: factor matemtico para el clculo.
Ca =
M2 - Ma
x 100
M1 - M
Donde:
Ca: cenizas solubles en agua en base hidratada (%)
M2: masa del crisol con las cenizas totales (g)
Ma: masa del crisol con las cenizas insolubles en agua (g)
M1: masa del crisol con la muestra de ensayo (g)
M: masa del crisol vaco (g)
100: factor matemtico para el clculo.
17
Materiales y Mtodos
Cenizas insolubles en cido clorhdrico al 10 %
Se determinaron a partir de las cenizas totales, despus de tratar las mismas
con cido clorhdrico al 10 %. Los resultados se obtuvieron por la frmula
siguiente:
B=
M2 - M
x 100
M1 - M
Donde:
B: cenizas insolubles en cido clorhdrico en base hidratada (%)
M2: masa del crisol con la ceniza (g)
M: masa del crisol vaco (g)
M1: masa del crisol con la porcin de ensayo (g)
100: factor matemtico para el clculo.
18
Materiales y Mtodos
II.2.3.2. ESTUDIO QUMICO CUALITATIVO
Se realiz un anlisis por cromatografa en capa delgada dirigido a la deteccin
de L-prolina, uno de los marcadores qumicos de la planta. Se usaron placas
de gel de slice (F 254 nm de la Merck) de 10 x 5 cm sobre soporte de vidrio.
Se emple como sustancia de referencia L-prolina (99 % pureza, procedente
de la Merck). El desarrollo cromatogrfico fue de forma ascendente. Las
condiciones de trabajo fueron las siguientes:
Fase mvil: n-butanol: cido actico: agua (4:1:1)
Revelado: Rociado con solucin de ninhidrina modificada (0,2 g de
ninhidrina en 5 mL de cido actico y 95 mL de n-butanol) y calor hasta
la aparicin de manchas.
19
Materiales y Mtodos
II.4. PARMETROS DE CALIDAD DE LA TINTURA DE M. paniculata
II.4.1. PARMETROS FSICO-QUMICOS
Para las determinaciones de calidad se sigui el procedimiento descrito en la
NRSP 312, 1992 y por Miranda y Cullar, 2000, se realizaron cinco rplicas
para cada experimento, siendo evaluados los parmetros siguientes:
a) Requisitos organolpticos
a.2) Determinacin del color. Se toma un tubo para ensayos, bien limpio y
seco, se llena hasta las tres cuartas partes con la muestra de ensayo y se
observa el color, la transparencia, la presencia de partculas y la separacin en
capas. Se informa el resultado.
b) pH
Para la determinacin del pH se utiliz un pH-metro modelo Basic 20 Crizon,
previamente ajustado con soluciones buffer a pH = 4,01 y 7.
c) Slidos totales
Se emple una balanza de peso seco marca Sartorious. Los slidos totales St
(%) se calcularon mediante la frmula siguiente:
St
Pr P
100
V
Donde:
Pr = masa de la cpsula ms el residuo (g)
P = masa de la cpsula vaca (g)
V = volumen de la porcin de ensayo (mL)
100 = factor matemtico
20
Materiales y Mtodos
d) Densidad relativa
Se realiz por picnometra y se utiliz una balanza analtica monoplato marca
Metttler H10T. De la muestra de ensayo se tom la cantidad necesaria de
acuerdo con la capacidad del picnmetro y se enfri a 25 oC.
La densidad relativa a 25 oC se calcul mediante la frmula siguiente:
D25
M1 - M
M2 - M
Donde:
M = masa del picnmetro vaco (g)
M1= masa del picnmetro con la muestra de ensayo (g)
M2= masa del picnmetro con agua (g)
D= densidad relativa (g/mL)
e) ndice de refraccin
Se utiliz un refractmetro ABBE de la marca Carlzeiss Jena.
f) Contenido alcohlico
Se desarroll mediante un proceso de destilacin a partir de 25 mL de la
muestra de anlisis, hasta garantizar que todo el alcohol presente en la misma
fuera arrastrado hacia el destilado. Con la posterior determinacin del peso
especfico de dicho destilado se obtuvo el porcentaje de alcohol de la muestra
segn datos tabulados (NRSP 312, 1992 y Miranda, 2000).
P.E = M 1 - M
M2 - M
21
Materiales y Mtodos
Donde:
M1 = peso del picnmetro con la muestra a 20 C (g)
M2 = peso del picnmetro con agua a 20 C (g)
M = peso del picnmetro vaco (g)
P.E= Peso especfico (g/mL)
g) Anlisis capilar
Este ensayo se desarroll segn lo descrito en la NRSP 312, 1992, empleando
papel Whatman # 1. Para el anlisis e interpretacin de la imagen se tuvieron
en cuenta los aspectos siguientes:
Color
Altura
Descripcin de las diferentes partes
Examen bajo la luz ultravioleta
Cambios de coloracin con vapores de amonaco
Las tinturas obtenidas fueron sometidas a diferentes ensayos (figura 2), segn
lo establecido en la NRSP 312, 1992 y por Miranda y Cullar, 2000, para
extractos alcohlicos.
22
Materiales y Mtodos
EXTRACTO ALCOHLICO
O TINTURA
Dividir en fracciones
ENSAYO
BALJET
(Lactonas y
Coumarinas)
ENSAYO
RESINAS
(Resinas)
ENSAYO
FEHLING
(Sustancias reductoras)
ENSAYOS
ENSAYO
TRICLORURO
FRRICO
(Fenoles)
ENSAYO
ESPUMA
(Saponinas)
DRAGENDORFF
MAYER
(Alcaloides)
ENSAYO
NINHIDRINA
(Aminocidos)
ENSAYO
LIEBERMANN-BURCHARD
(Triterpenos y/o esteroides)
ENSAYO
SHINODA
(Flavonoides)
ENSAYO
BORNTRAGER
(Quinonas)
ENSAYO
ANTOCIANIDINAS
(Antocianidinas)
CROMATOGRAFA
LQUIDA
DE
ALTA
23
Materiales y Mtodos
Fase mvil: Solucin buffer fosfato pH=2,4: acetonitrilo (70:30)
Detector UV: 440 nm
Flujo: 0,6 mL/min., modo isocrtico
Volumen de inyeccin: 20 L
Columna: C-18 No. de parte UP5ODB-150/046, No de serie 1105333,
lote A-5-7130, fabricante (Interchim, FRANCIA).
Temperatura de la columna: 25 C
24
Materiales y Mtodos
Se dio seguimiento al comportamiento de los parmetros fsico-qumicos de
calidad, determinacin del contenido de L-prolina por CLAR y control
microbiolgico, reflejados en los acpites II.4.1, II.4.3.3 y II.2.3.3.
La frecuencia de los anlisis fue determinada a partir de la Regulacin No. 23 2000 del CECMED, que establece los requerimientos de los estudios de
estabilidad para el registro de productos farmacuticos nuevos y conocidos, y
fue de 0, 3, 6, 9 y 12 meses.
Agitacin manual
25
Materiales y Mtodos
Se emple la tintura al 20 % de M. paniculata (droga seca) como ingrediente
farmacutico activo y la misma se utiliz al 30 % en la formulacin. El resto de
los componentes fueron de calidad farmacutica y se listan a continuacin:
Mentol
Propilenglicol
Carbopol 940
NaOH al 10 %
Metilparabeno
Propilparabeno
Agua destilada
II.5.1.
EVALUACIN
DE
LOS
PARMETROS
FSICO-QUMICOS
b) Determinacin del pH
Se determin el pH de cada una de las muestras utilizando un pH-metro
modelo Basic 20 Crizon, previamente ajustado con soluciones buffer a pH =
4,01 y 7. Para hacer la medicin se transfirieron aproximadamente 20 g de
muestra a un vaso de precipitados de 50 mL.
26
Materiales y Mtodos
cuidadosamente la otra lmina de vidrio; esta ltima con un peso de 250 g.
Transcurridos 5 minutos, se determin la distancia desde el punto de aplicacin
hasta donde se extendi el semislido. Se midi la extensibilidad en cuatro
direcciones perpendiculares entre s (PNO-LAB 12-002, 2002; Prez y col.,
2013).
Se calcul el rea de la circunferencia formada aplicando la frmula siguiente:
Donde:
A: rea de la circunferencia formada (cm2)
d1 y d2: dimetros perpendiculares a la circunferencia formada (cm)
E: extensibilidad del producto (cm2)
d) Propiedades viscoelsticas
La firmeza (N), la consistencia (g/s), la cohesividad (N), y el ndice de
viscosidad (m.pa.s) fueron determinadas mediante el empleo de un analizador
de textura (textureanalyzerTA HD plusStable Microsystems), utilizando 50 g de
muestra y las condiciones de trabajo siguientes: dimetro del vstago 18,8 mm,
modo de prueba compresin, velocidad de pre-test y
27
Materiales y Mtodos
II.5.2.2. ANLISIS POR
RESOLUCIN (CLAR)
CROMATOGRAFA
LQUIDA
DE
ALTA
28
Materiales y Mtodos
prolina por CLAR y control microbiolgico. Se segui la misma metodologa
descrita en los acpites II.5.1, II.5.2.2 y II.2.3.3.
Materiales y Mtodos
cortar las orejas a travs de las aristas. El porcentaje de inhibicin fue
calculado por la ecuacin siguiente:
30
CAPTULO III
RESULTADOS Y
DISCUSIN
Resultados y Discusin
31
Resultados y Discusin
(Acosta y Rodrguez, 2006). En cuanto al tiempo de secado influyen numerosos
factores, entre ellos estn la consistencia de la planta o del rgano vegetal
cosechado donde la relacin masa fresca: masa seca es sumamente variable
(prdida en peso de agua), la humedad relativa, la cantidad de agua
acumulada en la planta antes del proceso de colecta, entre otros factores. Los
resultados del estudio se exponen en la tabla I.
Tabla I. Resultados del estudio de secado en estufa del material vegetal
de M. paniculata
_
Parmetros X /S
Lotes
Febrero/2013
34,40/0,18a
7,0/0,9a
Enero/2014
34,60/0,23a
8,0/0,6b
Abril/2014
34,51/0,11a
7,0/0,2a
Octubre/2014
34,89/0,60a
7,0/0,6a
Leyenda:
_
X / S: valor medio/ desviacin estndar
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.
32
Resultados y Discusin
III.1.2. PARMETROS FSICO-QUMICOS DE LA DROGA CRUDA DE M.
paniculata
Dentro del estudio farmacognstico de una droga se encuentra la
determinacin de un conjunto de parmetros fsico-qumicos, los cuales son
indispensables para garantizar su calidad y pureza, lo que se traduce en el
valor intrnseco de la misma. A continuacin se muestran en la tabla II algunos
de los parmetros que le fueron evaluados a los cuatro lotes de M. paniculata.
Parmetros (%)
Febrero/2013
Enero/2014
Abril/2014
Octubre/2014
Humedad Residual
8,2/0,02a
8, 3/0,10a
8,5/0,20a
8,5/0,10a
Sustancias solubles
en etanol 80%
45,13/0,15b
40,33/0,10c
54,02/0,06d
49,23/0,12e
Cenizas totales
7,31/0,06f
7,39/0,09f
7,33/0,16f
7,37/0,06f
Cenizas solubles en
agua
1,87/0,07g
1,82/0,21g
1,85/0,14g
1,80/0,01g
Cenizas insolubles
en HCL al 10%
0,93/0,05h
0,98/0,08h
0,99/0,03h
0,96/0,02h
Leyenda:
_
X / S: valor medio/ desviacin estndar
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.
Resultados y Discusin
(Lou-Zhi-cen, 1980; WHO, 1998; Miranda y Cullar, 2001). En el estudio
efectuado a la planta, no se presentaron diferencias significativas entre las
cuatro muestras y el promedio de las determinaciones estuvo dentro del
intervalo exigido, o sea, se alcanzaron valores del 8,2 al 8,5 %, lo que demostr
la eficiencia del proceso de secado (estufa de recirculacin de aire a 38 C).
La determinacin de sustancias extrables o solubles es uno de los ndices
numricos ms importantes para seleccionar los mejores disolventes en el
proceso de extraccin. En la experiencia realizada se utiliz una mezcla
hidroalcohlica al 80 % considerando los resultados de estudios anteriores
donde se utiliza el mismo menstruo para la obtencin de la tintura a partir del
material vegetal en estado fresco. El anlisis estadstico de los resultados
mostr con un nivel de confianza del 95 %, que existen diferencias
significativas entre los lotes evaluados, siendo mayor el rendimiento de
sustancias extrables en la muestra procedente de la colecta de Abril/2014. Las
diferencias pudieran estar relacionadas con una mayor disponibilidad de
metabolitos por parte de la planta para favorecer algn proceso fisiolgico que
estuviese ocurriendo en ese momento (estado fenolgico) o con las
condiciones climatolgicas o ambas.
Las cenizas totales se definen como residuos que se obtienen al incinerar una
droga y su determinacin est incluida dentro de los parmetros de calidad de
inters a evaluar para el anlisis de un material vegetal. Adems, constituyen
una base para juzgar la pureza e identidad de este, brindando informacin
relativa a la posible adulteracin con materias inorgnicas o cuerpos extraos
que posea la misma, o la cantidad de estos en su contenido (Miranda y Cullar,
2001).
Las Farmacopeas plantean un ndice de cenizas totales hasta el 5 % (Lou-Zhicen, 1980; WHO, 1998), aunque los valores pueden variar significativamente
en dependencia del material vegetal y lugar de colecta. En la experiencia
realizada los valores obtenidos fueron algo elevados (entre 7,31 y 7,37 %),
aunque pueden ser caractersticos de esta planta. No se observaron
diferencias significativas entre las muestras evaluadas, aspecto lgico de
34
Resultados y Discusin
esperar pues las colectas a pesar de realizarse en pocas o estados
fenolgicos diferentes, el lugar de recoleccin siempre fue el mismo.
La cantidad
de
cenizas solubles
en agua
las
insolubles en cido
35
Resultados y Discusin
TABLA III. Parmetros fsico-qumicos determinados en el estudio de
estabilidad en estante de la droga cruda de M. paniculata de Febrero/2013
Parmetros
(%)
_
X/S
Tiempo
Humedad
(meses)
Residual
Sustancias
solubles en
etanol al 80%
Cenizas
totales
Cenizas
solubles
en agua
Cenizas
insolubles en
HCL al 10%
8,20 /0,02a
45,13/0,15d
7,51/0,06e
2,27/0,07f
0,97/0,05g
8,32 /0,01a
45,10/ 0,20d
7,53/0,03e
2,25/0,01f
0,97/0,02g
8,45 /0,02a
45,17/ 1,18d
7,60/ 0,06e
2,25/0,02f
0,94/0,09g
9,26/0,02b
45,24/1,22d
7,55/0,08e
2,20/0,01f
0,97/0,03g
12
10,58 /0,06c
45,22/1,35d
7,55/0,01e
2,25/0,09f
0,90/0,01g
36
Resultados y Discusin
colgeno, que presenta efecto antiinflamatorio y es importante para restaurar la
fluidez en las junturas, tendones y huesos. Sus beneficios como suplemento
diettico estn dirigidos fundamentalmente a la estructura y mantenimiento del
cuerpo, siendo fundamental en el tratamiento de la osteoartritis (Doulgkeris y
col., 2006; Mndez, 2010). Todas estas propiedades estn en concordancia
con las propiedades analgsicas y antiinflamatorias referidas para la especie
M. paniculata (Kumar y col., 2011; Narkhede y col., 2012; Rodanant y col.,
2012).
En la figura 4 puede observarse el comportamiento cromatogrfico similar de
los extractos hidroalcohlicos al 80 %, en su evaluacin inicial (Ms t0) y al
concluir el estudio (Ms t12), pudiendo apreciar en ambos casos la presencia
del aminocido L-prolina bajo las condiciones de trabajo ensayadas; el mismo
se mostr de color amarillo con un valor de Rf de 0,26, una vez asperjada la
cromatoplaca con ninhidrina y expuesta a una temperatura de 105 oC.
Resultados y Discusin
predominantes las especies aerbicas. Por otra parte, la posterior manipulacin
y produccin, son tambin causas adicionales de contaminacin microbiana,
siendo la presencia de aflatoxinas, provocadas por hongos contaminantes,
altamente peligrosa, de ah que se hace necesario, en el control de calidad de
una droga, determinar la presencia de microorganismos. (Miranda y Cullar,
2001)
Los lmites establecidos para la contaminacin microbiana, estn de acuerdo al
uso para el que ser destinado el material. En nuestro caso la droga objeto de
estudio (follaje de M. paniculata) ser pretratada, o sea, a partir de la misma
se elaborar una tintura para ser empleada en una formulacin por va tpica.
Los lmites mximos admisibles por gramo, establecidos por la literatura, as
como los resultados del estudio se muestran en la tabla IV.
Tabla IV. Resultados del anlisis microbiolgico de la droga cruda
M. paniculata durante el estudio de estabilidad en estante
Anlisis
Lmites
Microbiolgicos
Permisibles
(UFC/g)
Resultados (UFC/g)
Tiempo (meses)
0
Conteo total
de aerobios mesfilos
100
Ausencia
Conteo total
de hongos y levaduras
10
Ausencia
Staphylococcus aureus
Ausencia
Ausencia
Pseudomona aeruginosa
Ausencia
Ausencia
12
38
Resultados y Discusin
bolsas de polietileno, sin que se produzcan alteraciones en su apariencia,
parmetros farmacognsticos, qumico cualitativos y microbiolgicos.
III.2. OBTENCIN DE LA TINTURA DE M. paniculata
A partir del material vegetal de M. paniculata en estado seco, se elaboraron
tinturas al 20 %
hidroalcohlica
fsico-qumicos
de
cuatro
39
lotes
para
establecer
sus
Resultados y Discusin
especificaciones de calidad. Fueron considerados los aspectos siguientes:
propiedades organolpticas (olor y color), anlisis del pH, densidad relativa,
slidos totales, ndice de refraccin, contenido alcohlico y anlisis capilar. Los
resultados se presentan en la tabla V.
Desde el punto de vista organolptico todas las muestras ensayadas
presentaron un color verde intenso, traslcido con un olor aromtico
caracterstico.
El pH mostr valores dbilmente cidos (entre 6,09 y 6,40), los que pudieran
estar relacionados con la presencia de compuestos de naturaleza fenlica. Se
observaron diferencias significativas entre lotes, atribuibles fundamentalmente,
a la composicin qumica de dichos preparados.
Parmetros
Febrero/2013
Propiedades
organolpticas
Enero/2014
Abril/2014
Octubre/2014
pH
6,35/0,01a
6,40/0,01a
6,22/0,03b
6,09/0,01c
2,06/0,03d
1,75/0,19e
2,67/0,08f
2,16/0,02g
Densidad Relativa
(g/mL)
0,874/0,001h
0,875/0,001h
0,876/0,001h
0,878/0,002h
ndice de
refraccin
1,360/0,001i
1,361/0,003i
1,360/0,002i
1,362/0,001i
Contenido
Alcohlico (%)
76,9/0,18j
76,5/0,23j
76,5/0,12j
76,6/0,09j
Altura de la imagen
capilar (cm)
10,0/0,10k
10,1/0,06k
10,1/0,12k
10,0/0,10k
Leyenda:
_
X / S: valor medio/ desviacin estndar
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.
Resultados y Discusin
presentes en un extracto o tintura, adems de servir de referencia para los
ajustes de dosis en ensayos farmacolgicos y toxicolgicos, cuando no se
conoce la concentracin del principio activo que ejerce la accin. Al hacer una
comparacin entre lotes se constataron diferencias significativas, donde el
mayor porcentaje correspondi a la muestra de Abril/2014 (2,67 %) y el menor
valor para la tintura obtenida de la colecta de Enero/2014 (1,75 %). Los
resultados pueden estar relacionados con la poca de recoleccin de la planta,
donde la disponibilidad de metabolitos puede variar segn el proceso fisiolgico
que estuviese ocurriendo en ese momento, o con las condiciones
climatolgicas, o ambas.
La densidad relativa y el ndice de refraccin son caractersticos de cada
extracto o tintura, el primero da criterio del peso especfico de los mismos y el
segundo parmetro representa la relacin entre el seno del ngulo de
incidencia de la luz y el seno del ngulo de refraccin cuando la luz pasa
oblicuamente a travs de un medio (Miranda y Cullar, 2000). El anlisis de
ambos parmetros no evidenci diferencias significativas entre lotes.
El contenido alcohlico tampoco manifest diferencias significativas entre lotes.
Este resultado es lgico de esperar si se tiene en consideracin que se trabaj
con material vegetal seco de un contenido de humedad residual similar,
aspecto este que no propici disminucin significativa del contenido alcohlico
de las preparaciones aunque
porcentajes
obtenidos
(entre
Los
41
Resultados y Discusin
Respecto a las otras caractersticas de la imagen capilar (figura 5), las cuatro
muestras de tinturas mostraron una apariencia similar. En trminos generales
manifestaron una imagen vivamente coloreada, con
42
Resultados y Discusin
Tabla VI. Resultados del anlisis microbiolgico de las tinturas de
M. paniculata
Anlisis
Lmites
Resultados (UFC/g)
Microbiolgicos
Tiempo (meses)
Permisibles
(UFC/g)
Feb.
Ene.
Abr.
Oct.
2013
2014
2014
2014
Conteo total
de aerobios mesfilos
100
Conteo total
Ausencia
NR
Ausencia
NR
de hongos y levaduras
10
Staphylococcus aureus
Ausencia
Ausencia
NR
Pseudomona aeruginosa
Ausencia
Ausencia
NR
43
Resultados y Discusin
Tabla VII. Resultados del tamizaje fitoqumico efectuado a los lotes de
tintura de M. paniculata
Resultados
Ensayos
Metabolitos
Febrero
2013
Enero
2014
Abril
2014
Octubre
2014
Resina
Resinas
Fehling
Sustancias reductoras
++
++
++
++
Baljet
Lactonas y
coumarinas
++
Espuma
Saponinas
Lieberman
burchard
Triterpenos y/o
esteroides
++
Tricloruro
Frrico
Compuestos fenlicos
++
Ninhidrina
Aminocidos
++
++
++
++
Borntrager
Quinonas
Shinoda
Flavonoides
Antocianidina
Antocianidinas
Dragendorff
Alcaloides
Mayer
Alcaloides
Leyenda: +: Ensayo positivo, ++: muy positivo, : Ensayo dudoso, -: Ensayo negativo
44
Resultados y Discusin
III.3.3.2. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Se decidi realizar la cromatografa en capa delgada de aminocidos,
considerando los resultados del tamizaje fitoqumico, donde estos ofrecieron
resultados muy positivos en las muestras ensayadas. Por otro lado, se utiliz
como sustancia de referencia el aminocido L-prolina, considerando los
estudios efectuados a la tintura a partir de la droga fresca (Varona, 2013),
donde el mismo fue propuesto como uno de los biomarcadores de la planta, por
las propiedades antiinflamatoria y analgsica, referidas anteriormente en el
acpite III.1.3.2, las cuales pudieran correlacionarse con las descritas para la
especie vegetal objeto de estudio, tambin sealadas en ese acpite.
Se llev a cabo la combinacin de la cromatografa en capa fina con la reaccin
de la ninhidrina, con la cual se pueden identificar los aminocidos por la tincin
color magenta o morado que se presenta en ellos, excepto con la L-prolina, la
cual da un tono amarillo al reaccionar con dicho reactivo debido a que no
presenta el grupo amino libre, aspecto importante a la hora de diferenciarla del
resto de los aminocidos presentes (Lehninger, 2000).
El anlisis cromatogrfico (figura 6) permiti apreciar en todas las muestras la
presencia del aminocido L-prolina (mancha nmero 1) bajo las condiciones de
trabajo ensayadas, el mismo se mostr de color amarillo con un valor de Rf de
0,26, una vez asperjada la cromatoplaca con ninhidrina y expuesta a una
temperatura de 105 oC. Fue evidente tambin, la presencia de otras manchas
de color entre magenta y morado, las cuales variaron en intensidad y que
pudieran estar relacionadas con la presencia de aminocidos con grupos amino
libres.
45
Resultados y Discusin
CROMATOGRAFA
LQUIDA
DE
ALTA
Resultados y Discusin
ensayadas por cromatografa en capa delgada, y por ser uno de los
compuestos que pudieran estar relacionados con las propiedades analgsicas
y antiinflamatorias atribuidas a la planta.
Muestras
Tiempos de retencin
(min.)
reas (mAV.s)
L-prolina
2,72/0,08
164,84/6,23
Tintura de Febrero/2013
2,72/0,10
122,75/3,08
Tintura de Enero/2014
2,71/0,10
152,90/8,46
Tintura de Abril/2014
2,72/0,11
187,30/2,31
Tintura de Octubre/2014
2,73/0,06
109,54/2,19
47
Resultados y Discusin
Figura 7: Cromatogramas del anlisis por CLAR del patrn L-prolina y las
tinturas de M. paniculata
Leyenda: P: prolina
Tiempos de retencin
(min.)
reas (mAV.s)
Tintura de Febrero/2013
2,73/0,05
142,07/1,23
Tintura de Enero/2014
2,74/0,12
179,13/3,85
Tintura de Abril/2014
2,72/0,14
206,12/1,83
Tintura de Octubre/2014
2,74/0,09
128,61/4,90
48
Resultados y Discusin
En la determinacin cuantitativa del compuesto de inters en las tinturas, se
analiz aquel pico positivo para L-prolina y se consider el rea que
corresponda a la misma, se confeccion una curva de calibracin de
concentracin contra reas y se obtuvieron las concentraciones que se
muestran en la tabla X. Se evidenciaron diferencias significativas entre los lotes
evaluados, correspondiendo el mayor valor para la tintura de Abril/2014 y la
menor concentracin para la de Octubre/2014, lo cual pudiera estar relacionado
con la poca de recoleccin de la planta. Es importante sealar que los bajos
valores de prolina detectados en el mes de Octubre de 2014, estn en
correspondencia con los obtenidos en la tintura a partir del material vegetal
fresco, a un lote elaborado a partir de una colecta efectuada en el mismo mes
pero del ao 2010 (Varona, 2013).
Tabla X. Concentracin de L-prolina en las muestras de tinturas
Muestras
Resultados (g/mL)
_
X /S
Tintura de Febrero/2013
215,62/6,05a
Tintura de Enero/2014
247,24/10,50b
Tintura de Abril/2014
296,25/3,16c
Tintura de Octubre/2014
196,71/2,86d
Leyenda: Leyenda:
_
X / S: valor medio/ desviacin estndar
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.
49
Resultados y Discusin
El anlisis estadstico de los resultados de las determinaciones fsico-qumicas
(tabla XI), manifest un comportamiento estable de la tintura, al no encontrarse
diferencias estadsticamente significativas en la mayora de los parmetros
evaluados, a excepcin del contenido alcohlico que mostr una ligera
disminucin en el tiempo, aunque el mismo se mantuvo cercano al porcentaje
hidroalcohlico original de la tintura (80 %), no afectndose los dems
parmetros.
Tabla XI. Parmetros fsico-qumicos de calidad determinados en el
estudio de estabilidad de la tintura de M. paniculata de Febrero/2013
Parmetros
_
X /S
Tiempo (meses)
0
3
a
6,35/0,02
9
a
6,36/0,08
12
a
6,39/0,02a
pH
6,35/0,01
Slidos
totales (%)
2,06/0,03b
2,05/0,01b
2,04/0,00b
2,08/0,06b
2,08/0,03b
Densidad
Relativa
(g/mL)
0,874/0,001c
0,874/0,001c
0,875/0,002c
0,875/0,00c
0,875/0,001c
ndice de
refraccin
1,360/0,001d
1,361/0,00d
1,361/0,002d
1,362/0,002d
1,362/0,00d
Contenido
Alcohlico (%)
76,90/0,18e
75,90/0,13 f
75,82/0,10 f
75,65/0,30f
75,27/0,11g
Altura de la
imagen capilar
(cm)
10,0/0,10h
10,0/0,20h
10,0/0,10h
10,0/0,20h
10,1/0,20h
Concentracin
de L-prolina
(g/mL)
215,62/6,05a
213,24/1,87a
212,96/5,12a
Leyenda:
6,38/0,03
6
a
_
X / S: valor medio/ desviacin estndar
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.
50
Resultados y Discusin
Con relacin al contenido de L-prolina determinado por CLAR (tabla XI), se
confirm una vez ms la estabilidad de la preparacin, al no constatarse
diferencias significativas en los anlisis a tiempo cero y a los 12 meses de
estudio.
III.4. OBTENCIN DEL GEL A PARTIR DE LA TINTURA DE M. paniculata
El uso de plantas medicinales en el desarrollo de formulaciones resulta cada
vez ms interesante. Muchos fitoconstituyentes como compuestos fenlicos,
algunos aminocidos como la L-prolina, entre otros, proporcionan actividades
antiinflamatorias y analgsicas, siendo fundamental en el tratamiento de la
osteoartritis (Doulgkeris y col., 2006; Mndez, 2010).
Considerando que M. paniculata presenta entre sus marcadores qumicos el
aminocido L-prolina y basados en las propiedades antiinflamatorias de su
tintura (al 20 % elaborada con mezcla hidroalcohlica al 80 %), demostradas
por Varona (2013) y su uso en enfermedades osteomioarticulares, reportado en
el Formulario Nacional de Fitofrmacos y Apifarmacos (2010, 2014), se decidi
elaborar un gel a partir de este preparado galnico obtenido del material
vegetal en estado seco, con el propsito de extender su utilizacin a los centros
de producciones locales.
En el formulario aparece el empleo de las fricciones de M. paniculata,
utilizando droga fresca, sin embargo, se consider la posibilidad de diversificar
este tipo de preparacin mediante el desarrollo de un gel con similares
potencialidades
empleando
este
producto
natural
como
ingrediente
farmacolgico activo.
Para el desarrollo de la formulacin se consideraron los resultados del estudio
desarrollado por Snchez (2014), donde se dise un gel antiinflamatorio a
partir de la tintura obtenida de las hojas frescas de esta especie vegetal. La
optimizacin de los componentes del gel, fue llevada a cabo mediante el
empleo de un diseo D-optimal de tres componentes con restricciones,
evaluando como variables respuesta, diferentes parmetros como pH,
extensibilidad, fuerza de gel, firmeza, cohesividad, viscosidad relativa y
51
Resultados y Discusin
consistencia, obteniendo ecuaciones matemticas que permitieron optimizar los
componentes. Finalmente se obtuvo una formulacin ptima, la cual sirvi de
base para la realizacin de este trabajo.
A partir de los resultados obtenidos se procedi a preparar tres lotes de gel a
escala de laboratorio. Durante el proceso de elaboracin no se presentaron
dificultades que incidieran de forma negativa en la calidad del producto final. La
cantidad de tintura en la formulacin (30 %) se determin a partir de los
resultados establecidos por Snchez (2014) y los referidos por Varona (2013).
Se escogi como base, un gel de carbopol 940 (polmero del cido acrlico)
debido al alto contenido alcohlico (80 %) de la tintura. El resto de los
componentes se seleccionaron de acuerdo a los excipientes ms frecuentes en
este tipo de preparacin farmacutica. Otras materias primas empleadas se
discuten a continuacin:
Se incorpor el mentol al 1 % en la preparacin, a partir del anlisis de las
experiencias positivas de su empleo en las fricciones de M. paniculata que
aparecen reportadas en el Formulario Nacional de Fitofrmacos y Apifrmacos
(2010, 2014), adems de ser un excipiente farmacutico con utilidad como
coadyuvante de la penetracin cutnea, as como agente teraputico que
puede ser empleado en concentraciones entre 0,05 y 10 % en formulaciones
tpicas, segn Pharmaceutical Excipients v 1.0 (2000).
El propilenglicol fue utilizado como humectante en la formulacin a una
proporcin del 10 %. Es un lquido viscoso, higroscpico, miscible con agua y
con etanol al 96 % (Real Farmacopea Espaola, 2005) y es muy empleado en
productos farmacuticos, cosmticos, alimentarios, entre otros. (Diccionario de
Ingredientes Cosmticos, 2009).
Como preservos se utilizaron los steres del cido para-hidroxibenzoico, por
presentar estabilidad qumica en el rango neutral de pH, ser no txicos, no
irritantes y no alergnicos, adems de presentar amplio espectro de accin
antimicrobiana tanto en hongos como bacterias, y ser adecuadamente solubles
(Von y col., 1999; Soni y col., 2005). Son muy utilizados en las industrias
52
Resultados y Discusin
farmacutica y cosmtica. La mezcla de parabenos estuvo en la combinacin
clsica de 0,18 - 0,02 % de metil y propilparabenos, respectivamente.
El hidrxido de sodio se utiliz en una proporcin del 0,8 %. Su utilizacin tiene
como finalidad, estabilizar el pH de la formulacin. El mismo, conjuntamente
con otras bases orgnicas o inorgnicas puede influir en el tacto y en la
transparencia del preparado. La cantidad de base requerida debe incorporarse
a la dispersin del gelificante, determinando constantemente el pH que adopta
el preparado, hasta obtener aquel en el que se considera que la correlacin
entre la consistencia adquirida y el pH deseado (lo ms prximo posible al pH
de la piel) es idnea (Juv y col., 2007).
III.4.1.
EVALUACIN
DE
LOS
PARMETROS
FSICO-QUMICOS
Lotes
Resultados
pH
_
X /S
5,38/
0,01a
Firmeza
(N)
0,399/0,
006b
Consistencia
(g/s)
830,16/
6,65c
Cohesividad
(N)
60,58/0,70d
Viscosidad
(m.Pa.s)
8066/57,70e
Extensibilidad
(cm2)
234,06/2,55f
5,37/
0,02a
0,398/0,
004b
832,30/
3,63c
60,76/0,45d
8051/71,01e
236,23/2,05f
5,37/
0,01a
0,396/0,
002b
830,33/
0,57c
60,54/0,42d
8059/57,73e
235,70/0,47f
Leyenda:
_
X / S: valor medio/ desviacin estndar
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.
53
Resultados y Discusin
El pH obtenido en cada formulacin, se encontr en el rango entre 5,37 y 5,38,
valores cercanos a la acidez caracterstica de la piel. Segn la literatura
consultada, el valor del pH de la piel es variable, segn la zona del cuerpo, la
edad, e incluso algunos autores incluyen la raza. La superficie tiene un pH
cido y oscila entre 4 y 6 (Gil y Howard, 1996; Schmid-Wendtner y Korting,
2006). No se apreciaron diferencias estadsticamente significativas entre los
tres lotes de geles, al aplicar ANOVA-1 para un 95 % de confianza.
La caracterizacin reolgica es fundamental en la investigacin y desarrollo de
formas farmacuticas semislidas como los geles, debido a que las
propiedades reolgicas tienen una gran influencia en la estabilidad y en la
textura de estos productos (Signorelli e Isla, 2005). Son vlidos varios
procedimientos. En este estudio se consideran las determinaciones de firmeza,
consistencia, cohesividad, ndice de viscosidad y la extensibilidad, debido a la
relacin existente entre estos parmetros para definir dicho comportamiento.
Es importante destacar que la prueba de extensibilidad proporciona una
medida del umbral de deformacin del sistema, y es inversamente proporcional
a la consistencia de las muestras (Signorelli e Isla, 2005). En la experiencia
realizada no se observaron diferencias significativas entre lotes para cada
parmetro ensayado.
III.4.2. ESTUDIO FITOQUMICO DEL GEL DE M. paniculata
Como parte del estudio de los parmetros de calidad del gel, se realiz una
evaluacin fitoqumica que contempl la cromatografa en capa delgada y un
anlisis por cromatografa lquida de alta resolucin, ambas destinadas a
detectar uno de los marcadores qumicos de la planta, el aminocido L-prolina.
III.4.2.1. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
El anlisis por cromatografa en placa delgada del gel elaborado permiti
visualizar el aminocido L-prolina, al compararlo con la sustancia de referencia
y la tintura de partida, con un valor de Rf de 0,26 (mancha 1). En la figura 8 se
representa el cromatograma.
54
Resultados y Discusin
Figura 8. Cromatografa en capa delgada del gel de M. paniculata, Lprolina y la tintura de Febrero 2013 (TF)
Soporte: Gel de slice sobre soporte de aluminio, Fase mvil: n-butanol: cido actico: agua
(4:1:1), Revelador: solucin de ninhidrina/calor.
CROMATOGRAFA
LQUIDA
DE
ALTA
55
Resultados y Discusin
La determinacin cuantitativa del marcador qumico no mostr diferencias
estadsticamente significativas entre los tres lotes ensayados. En la tabla XIII
se muestran los resultados del estudio.
Tabla XIII. Concentracin de L-prolina determinada a los tres lotes de geles
Lotes
Resultados (g/mL)
_
X /S
67,34/2,13a
67,29/2,03a
67,21/1,89a
_
X
Leyenda: / S: valor medio/ desviacin estndar
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.
56
Resultados y Discusin
estudio se muestran en la tabla XIV. Los lotes evaluados no mostraron
proliferacin microbiolgica.
Tabla XIV. Resultados del control microbiolgico de los lotes de gel de
M. paniculata
Lmites
Microbiolgicos
Permisibles
(UFC/g)
Resultados (UFC/g)
100
Ausencia
10
Ausencia
10
Ausencia
Staphylococcus aureus
Ausencia
Ausencia
Pseudomona aeruginosa
Ausencia
Ausencia
Anlisis
Lotes de gel
1
57
Resultados y Discusin
Como se puede observar, se alcanzan valores medios entre 3,14 y 4,06
puntos, los cuales se pueden ubicar entre las opciones me gusta
moderadamente y no me gusta ni me disgusta, por tanto puede ser aceptada
la formulacin, pues se alcanzan valores superiores a los 3 puntos.
La figura 10 muestra una representacin grfica ms detallada de
los
ME GUSTA MUCHO
100
80
ME GUSTA MODERADAMENTE
60
40
NO ME GUSTA NI ME DISGUSTA
20
ME DISGUSTA MODERADAMENTE
0
OLOR
COLOR
FRESCOR APARIENCIA
ME DISGUSTA MUCHO
Resultados y Discusin
prolina por CLAR y control microbiolgico. Los resultados de los mismos se
discuten a continuacin y un resumen de ellos se muestra en la tabla XVI.
El anlisis estadstico de los resultados a los parmetros evaluados durante el
estudio de estabilidad, mostr un comportamiento estable de la formulacin en
el periodo, al no ponerse de manifiesto diferencias estadsticamente
significativas entre los valores obtenidos.
Tabla XVI. Parmetros fsico-qumicos de calidad determinados en el
estudio de estabilidad de los lotes de geles de M. paniculata
Parmetros
_
X /S
Tiempo (meses)
0
12
5,38/0,01a
5,38/0,04a
5,37/0,01a
5,37/0,09a
5,36/0,06a
5,37/0,02a
5,37/0,01a
5,37/0,30a
5,35/0,06a
5,35/0,01a
5,37/0,01a
5,37/0,00a
5,36/0,08a
5,36/0,50a
5,35/0,03a
0,399/0,006b
0,396/0,02b
0,395/0,001b
0,396/0,007b
0,398/0,004b
0,395/0,009b
0,396/0,002b
0,393/0,005b
830,16/6,65c
829,10/4,15c
829,01/3,30c
828,11/1,25c
832,30/3,63c
830,13/2,10c
830,33/0,57c
828,00/4,39c
60,58/0,70d
61,18/0,20d
60,23/0,18d
60,10/0,50d
60,76/0,45d
60,24/0,33d
60,54/0,42d
60,00/0,01d
8066/57,70e
8059/63,10e
8059/42,18e
8060/37,12e
8051/71,01e
8047/23,06e
8059/57,73e
8050/35,23e
234,06/2,55f
234,24/0,34f
235,86/3,25f
235,27/1,35f
234,98/2,01f
Extensibilidad
(cm2)
236,23/2,05f
237,10/0,12f
236,32/2,17f
236,05/2,67f
236,73/3,06f
235,70/0,47f
235,42/0,24f
235,21/4,83f
236,41/2,90f
235,19/1,21f
Concentracin
de L-prolina
(g/mL)
67,34/2,13g
67,13/3,15g
66,18/2,11g
67,29/2,03g
66,36/1,87g
67,21/1,89g
66,24/2,31g
pH
Firmeza (N)
Consistencia
(g/s)
Cohesividad
(N)
Viscosidad
(m.Pa.s)
_
X
Leyenda: / S: valor medio/ desviacin estndar
- ensayo no realizado
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.
59
Resultados y Discusin
Igualmente pudo corroborarse, desde el punto de vista organolptico, y
microbiolgico, la estabilidad de la misma, al ser encontrados resultados muy
similares para las determinaciones realizadas (las preparaciones presentaron
un color verde, olor a mentol y un aspecto homogneo con brillo) y la ausencia
de microorganismos durante el ao de estudio.
III.5. EVALUACIN PRECLNICA DE LA TINTURA DE M. paniculata Y EL
GEL
III.5.1. ENSAYO DE TOXICIDAD AGUDA DRMICA DE LA TINTURA DE M.
paniculata Y EL GEL
En el estudio toxicolgico efectuado se tuvo en cuenta en primer lugar el peso
corporal de los animales donde se evidencia una ganancia del peso de los
mismos como un aspecto indicativo de la no toxicidad (tabla XVII).
Tabla XVII. Variacin en el peso corporal (g) de los animales en el ensayo
de toxicidad aguda drmica de la tintura de M. paniculata (Febrero/2013) y
el gel
Valor promedio/ Desviacin estndar
GRUPO
Machos (ratas)
TIEMPO (das)
1
7
a
Tintura de M. paniculata
188,20/ 7,24
Gel de M. paniculata
180,40/4,65d
197,20 / 16,02
14
b
189,34/10,67e
209,0 / 12,16c
200,75/16,01f
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza
Tambin fueron evaluados los signos clnicos (ojo, mucosa, piel y otros
conductuales), no evidencindose durante los 14 das de estudio manifestacin
alguna y por ltimo, una vez sacrificado el animal, se examinaron durante las
autopsias algunos rganos (pulmn, corazn, bazo, riones, estmago) sin
afectaciones. Por lo anteriormente planteado y bajo las condiciones
experimentales evaluadas se evidencia que la administracin de forma aguda
de la Tintura de M. paniculata y el gel obtenido de la misma, por va tpica, no
produce efectos txicos en los animales de experimentacin. En la tabla XVIII
se presentan los resultados.
60
Resultados y Discusin
Tabla XVIII. Observaciones realizadas durante el ensayo de toxicidad
aguda drmica a la tintura de M. paniculata (Febrero/2013) y al gel
Das
Signos clnicos
10
11
12
13
14
Ojos
Mucosa
Sist. Respiratorio
Circulatorio
Autnomo
Nerv. Central
Mudanza de pelo
Temblores
Convulsiones
Salivacin
Piel
Sedacin
Somnolencia
Muerte
61
Resultados y Discusin
Tabla XIX: Resultados de los pesos medios de las orejas en el ensayo del
efecto antiinflamatorio de la tintura de M. paniculata (Febrero/2013) y el
gel
Peso medio de las orejas (mg)/ S
GRUPO
IZQUIERDA
DERECHA
Control (Croton)
9,81/0,23a
22,14/1,21e
6,85/0,27b
12,37/1,19f
Tintura de M. paniculata
7,28 /1,57c
14,14/0,67g
Gel de M. paniculata
7,92/1,02c
15,24/1,31h
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza
S: desviacin estndar
Porcentaje de inhibicin
Control (Croton)
44,12a
Tintura de M. paniculata
36,13b
Gel de M. paniculata
31,16c
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza
Resultados y Discusin
el anlisis de cualquier producto herbario (Mosihuzzaman y Choudhary, 2008;
Venil,
2010). En
la
experiencia
realizada,
fue
determinada
la
volumen,
marcadores
qumicos,
propiedades
fsico-qumicas,
63
Resultados y Discusin
en los Centros de Produccin Local, ni en los Laboratorios de Control de
Calidad, subordinados a las Empresas de Medicamentos, con procedimientos
homogneos, ni parmetros de calidad que permitan la estandarizacin del
material vegetal seco y su tintura (al 20 % elaborada con mezcla
hidroalcohlica al 80%) y los consiguientes controles de calidad y estudios de
estabilidad de las preparaciones, que de ella se derivan.
El trabajo que se presenta hace un aporte importante en este sentido ya que se
establecieron por vez primera los parmetros de calidad para la droga cruda
de M. paniculata (material vegetal en estado seco) y su tintura, los cuales se
mantuvieron estables durante un ao de estudio. As mismo, se propone una
formulacin a partir de la tintura, con buena estabilidad fsico-qumica y
tecnolgica, como alternativa a tener en cuenta dentro de nuestra Medicina
Natural y Tradicional.
Desde el punto de vista preclnico se demostr que la tintura y el gel no
evidencian signos de toxicidad aguda drmica en los animales de
experimentacin y pudo demostrarse una inhibicin de la inflamacin de ambos
productos bajo las condiciones ensayadas. Estos estudios tambin representan
un aporte al estudio de la especie que crece en Cuba.
Los resultados obtenidos en esta experiencia, nos permiten avalar la
factibilidad del uso de la droga seca de M. paniculata, lo que basado en los
beneficios econmicos que ofrecera a la industria de fitomedicamentos,
permitir la extensin de su uso, an ms cuando se cuenta con evidencias
farmacognsticas, fitoqumicas y preclnicas que garantizan su calidad,
seguridad y eficacia.
64
CONCLUSIONES
Conclusiones
CONCLUSIONES
65
RECOMENDACIONES
Recomendaciones
RECOMENDACIONES
66
REFERENCIAS
BIBLIOGRFICAS
Referencias Bibliogrficas
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Acevedo IP, Garca O, Contreras J, Acevedo I. Elaboracin y evaluacin
de las caractersticas sensoriales de un yogurt de leche caprina con
jalea semifluida de pia Revista UDO Agrcola. 2009;9(2):442-448.
Acosta LL y Rodrguez CA. Plantas Medicinales. Bases para su
produccin sostenible. Agrinfor. Impresiones MINAG. 2006. p. 28-36.
Ahmad I, Aqil F and Owais M. Modern Phytomedicine. Turning Medicinal
Plants into Drugs. WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim.
Wickramasinghe M. B. Quality Control, Screening, Toxicity, and
Regulation of Herbal Drugs. 2006. p. 25-53.
Ainia - Centro Tecnolgico. Aplicacin de las Ciencias Sensoriales en el
desarrollo de productos farmacuticos y nutraceticos. Consumidor y
Nuevos Productos. http://tecnoalimentalia.ainia.es/,30 de noviembre de
2011.
lvarez AR, Gonzlez JA, Urquiola A, Garca M, Monteagudo R.
Influencia del mtodo de secado y el tiempo de almacenamiento en
estante de las hojas de Erythroxylum minutifolium GRISEB sobre la
actividad citotxica y antiherptica tipo 1. Revista Cubana de Qumica.
2007;XIX(1):33-35.
Arcila N y Mendoza Y. Elaboracin de una bebida instantnea a base de
semillas de amaranto (Amaranthus cruentus) y su uso potencial en la
alimentacin humana. Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2006;23:114-124.
Ashihara H, Watanabe S. Accumulation and function of trigonelline in
non-leguminous plants. Natural Product Communication. 2014;9(6):7958.
Bhatterjee, S. K. Hand book of Aromatic Plants, Popular Offset Services
Pvt. Ltd., Jaipur 302004 (India). 2000. p. 299.
Busse W. The significance of quality for efficacy and safety of herbal
medicinal products. Drug Information Journal. 2000;34:15-23.
Carreto A. Evaluacin sensorial. Apuntes Cientficos. Escuela nacional
de Ciencias Biolgicas- Instituto Politcnico Nacional, Mxico. 2012.
Referencias Bibliogrficas
Casado CMM, Gutirrez YG, Rodrguez EA. Acercamiento al gnero
Murraya (Rutaceae) y a la especie Murraya paniculata (L) Jack. Revista
de plantas Medicinales. 2011;16(4):408-418.
Castaeda B, Manrique R, Gamarra F, Muoz A y Ramos F.
Formulacin y elaboracin preliminar de un yogurt mediante sustitucin
parcial con harina de tarwi (Lupinus mutabilis Sweet). Medicina
Naturista. 2009;3(1):2-9.
CYTED. Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnologa para el
Desarrollo. Lima. 1996.
Chimezie A, Ibukun A, Teddy E, Francis O. HPLC analisys of
nicotidamide, pyridoxine, riboflavin and thiamin in some selected food
products in Nigeria. Afr. J. Pharm Pharmacol. 2008;2(2):29-36.
Choudhary N, Singh BS. An overview of advances in the standardization
of
herbal
drugs.
Journal
of
PharmaceuticalEducationResearch.
2011;2(2).
Chowdhury JU, Bhuiyan MNI & Mohammed Y. Chemical composition of
the leaf essential oils of Murraya koenigii (L.) Spreng and Murraya
paniculata (L.) Jack. Bangladesh Journal of Pharmacology. 2008;3(2):5963.
Dash GK, Patro CP, Maiti AK. Anti-inflammatory and analgesic activity of
leaf essential oil from Murraya koenigii Spreng. Hamdard Medicus. 2004;
47:22-26.
Dash GK, Patro CP, Maiti AK. Anti-inflammatory and analgesic activity of
leaf essential oil from Murraya koenigii Spreng. Hamdard Medicus. 2004;
47:22-26.
Desert-Tropicals. Orange jasamine. 2002. Disponible en: http://www.
desert- tropicals.com/Plants/Rutaceae/Murraya_paniculata.html.
Diccionario
de
Ingredientes
Cosmticos,
Ed.
2009.
Ed:
www.imagenpersonal.net.
Doulgkeris CM, Galanakis D, Kourounakis AP, Tsiakitzis KC, Gavalas
AM, Eleftheriou PT, Victoratos P, Rekka EA, Kourounakis PN. Synthesis
and
pharmacochemical
combining
study
anti-inflammatory,
of
novel
antioxidant,
polyfunctional
and
molecules
hypocholesterolemic
Referencias Bibliogrficas
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. Sexta Edicin.
Secretara de Salud. Mxico. 1994.
Fazal R, Muhammad F, Irid K, Inamullah K, Huma S, Sarfaraz KM.
Analgesic activity of carbazole alkaloid from Murraya paniculata Linn.
(Rutaceae).
American-Eurasian
Journal
of
Agricultural
and
Referencias Bibliogrficas
Jingtao Z, Xiaofeng Y, Shaochun Q, Xuwen L, Yongri J, Dayuan S.
Protective effect of total flavonoids extracted from the leaves of Murraya
paniculata (L.) Jack on diabetic nephropathy in rats. Food and Chemical
Toxicology 2014;64:231-237.
Jorge RE, Ramis RG, Vander HY, Sim AEF, Lerma GMJ, Saucedo HY,
Monteagudo U, Morales Y, Holgado B, Herrero MJM. Chemical
composition, antioxidant properties and antimicrobial activity of the
essential oil of Murraya paniculata leaves from the mountains of central
Cuba. Natural Product Communications. 2012;7(11):1527-30.
Juv J, Viscosillas A, del Pozo A. Geles en dermatologa: conceptos
generales y elementos para su formulacin. Aula de la Farmacia. 2007.
p. 58-68.
Kartik CP, Surendra kP, Ranjit kH, Jayaram KK. Traditional Approaches
towards Standardization of Herbal Medicines. A Review. Journal of
Pharmaceutical Science and Technology. 2010;2(11):372-379.
Kinoshita T, Shimada M. Isolation and structure elucidation of a new
prenylcoumarin from Murraya paniculata var. omphalocarpa (Rutaceae).
Chem Pharm Bull. 2002;50(1):118-20.
Kong YC, Cheng KF, Cambie RC, Watermand PG. Yuehchukene: a
novel lndole alkaloid with anti-implantation activity. J Chem Soc Chem
Commun.
1985;47-8.
Disponible
en:
http://pubs.rsc.org/en/content/articlepdf/1985/c3/c39850000047.
Kumar MP, Nath BD, Saha A and Ahmed M. Analgesic activity of bark of
Murraya paniculata. Full Length Research paper. International Journal of
Medicine and Medical Science. 2011;3(4):105-108.
Lapcik O, Klejdus B, Davidov M, Kokoska L, Kubn V, Moravcov J
Isoflavonoids in the Rutaceae family: 1. Fortunella obovata, Murraya
paniculata and four Citrus species. Phytochem Anal. 2004;15(5):293-9.
Le Hir A. Farmacia Galnica. Masson, S.A, Barcelona. 1995.
Lehninger AL, Nelson DL, Cox MM. Principles of Biochemistry. 3rd ed.,
New York: W. H. Freeman. ISBN 1-57259-153-6. 2000.
Lou Zhi-cen. General control methods for vegetabla drugs. Comparative
study of methods included in thirteen pharmacopoeias an proposals on
their internacional unification. WHO/PHARM/80.502. 1980. p. 8-39.
Referencias Bibliogrficas
Mat RT, Wat NH. Some morphological and anatomical studies of leaves
and flowers of Murraya paniculata (Jack) Linn. in vivo and in vitro.
Pakistan journal of biological sciences. 2008;11(7):1021-1026.
Mndez A. The Function and Uses of L-Proline. 2010. Disponible en:
http://ezinearticles.com/the function and uses of L-proline. ID. 4589629.
Mesquita SG, Martinez MF, Romoff P, Favero OA, Lieber SR & Lago
JHG. Chemical constituents from leaves of Murraya paniculata
(Rutaceae). Revista Brasilera de Farmacognosia. 2008;18(4):563-568.
Miranda MM, Cullar
Droga
Referencias Bibliogrficas
NRSP 312. Norma Ramal. Medicamentos de origen vegetal. Extractos
fluidos y tinturas. Mtodos de ensayo. 1992. pp. 15-19.
OECD # 402. Organizacin para la Cooperacin Econmica y el
Desarrollo. Guidelines for testing of Chemicals. 1987.
Olawore NO, Ogunwande IA, Ekundayo O & Adeleke KA. Chemical
composition of the leaf and fruit essential oils of Murraya paniculata (L.)
Jack. (Syn. Murraya exotica Linn.). Flavour & Fragrance Journal.
2005;20(1):54-56.
Osorio DE. Aspectos bsicos de Farmacognosia. Universidad de
Antioquia. Colombia. 2009. p. 27.
Pacific Island Ecosystems at Risk. Invasive plant species: Murraya
paniculata
(L.)
Jack,
Rutaceae.
2002.
p.
2.
Disponible
en:
http://www.hear.org/pier/species/murraya_paniculata.htm.
Parrotta JA. Healing plants of Peninsular India. Wallingford, UK and New
York: CABI Publishing. 2001. p. 917.
Prez PR, Nieto OMA, Bilbao OR, Lpez AT, Gonzlez LC. Diseo de
una crema regeneradora con quitina para despus del bronceado.
Revista Cubana de Farmacia. 2013;47(2):239-251.
Pharmaceutical Excipients. Version 1.0.
American Pharmaceutical
12-002.
Edicin
02-02.
Determinacin
de
caracteres
Referencias Bibliogrficas
Rao U, Anna NP. Stability-indicating HPLC method for thr determination
of efavirenz in bulk drug and in pharmaceutical dosage form. Afri J.
Pharm. Pharmacol. 2009;3(12):643-650.
Real Farmacopea Espaola. Tercera Edicin, 3.0. 2005. p. 2531.
Regulacin No. 28. Requerimientos de los estudios de estabilidad para
el registro de productos farmacuticos nuevos y conocidos. Repblica de
cuba. Ministerio de Salud Pblica. Centro para el Control Estatal de la
Calidad de los Medicamentos (CECMED). 2000. p. 4-5.
Remington Farmacia. Tomo I, 19 ed. Editorial Mdica Panamericana,
Buenos Aires. 1998.
Rodanant P, Surarit R, Srichan R and Korsuwanwong S. Cytotoxic and
anti-inflammatory activity of some Thai medicinal plants.
Research
Paper.
Journal
of
Medicinal
Plants
Full Length
Research.
2012;6(23):4063-4068.
Roig JT. Diccionario botnico de nombres vulgares cubano. Editorial
cientfico tcnico, La Habana, Cuba. 1988. p. 695.
Rothman L. Pruebas de aceptacin y preferencia. ASTM International
Standardization News. http://www.astm.org. Marzo -Abril, 2011.
Rout PK, Rao YR, Sree A, Naik SN. Composition of essential oil,
concrete, absolute, wax and headspace volatiles of Murrarya paniculata
(L.) Jack flowers. Flavour Fragr J. 2007;22:352-7.
Saied S, Uddin S. 1', 2'-o-isopropylidene murrangatin from Murraya
paniculata. J Basic Applied Sciences. 2008;4(1):13-5.
Snchez AF. Diseo de un gel antiinflamatorio a partir de la tintura de
Murraya paniculata (L.). Tesis de Diploma. 2014.
Saravanan J, Shajan A, Joshi NH, Valliappan K. A simple and validated
RP-HPLC method for the estimation of methylcobalamin in bulk and
capsule dosage form. Int. J. Chem. Pharm Sci. 2010;1(2):323-324.
Sawangjaroen N, Phongpaichit S, Subhadhirasakul S, Visutthi M,
Srisuwan N, Thammapalerd
Referencias Bibliogrficas
Schmid-Wendtner MH, Korting HC. The pH of the skin surface and its
impact
on
the
barrier
function.
Pharmacol
Appl
skin
physiol.
2006;19:296-302.
Sharapin
N. Fundamentos de
la
tecnologa
de
los
productos
Referencias Bibliogrficas
WHO. World Health Organization. General Guidelines for methodologies
on
research
and
evaluation
of
traditional
medicine.
La
Enciclopedia
libre.
2009.
Disponible
en:
http://es.wikipedia.org/wiki/Murraya.
Zhang JY, Li N, Che YY, Zhang Y, Liang SX, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF.
Characterization of seventy polymethoxylated flavonoids (PMFs) in the
leaves of Murraya paniculata by on-line high-performance liquid
chromatography coupled to photodiode array detection and electrospray
tandem mass spectrometry. J Pharm Biomed Anal. 2011;56(5):950-61.
Zhou J, Chan L, Zhou S. Trigonelline: A plant alkaloid with therapeutic
potential for diabetes and central nervous system disease. Current
Medicinal Chemistry. 2012;19:3523-3531.
ANEXOS
Anexos
Anexo 1. Boleta de evaluacin sensorial del gel de M. paniculata
Criterios
Olor
Me gusta mucho
Me gusta
moderadamente
No me gusta ni me
disgusta
Me disgusta
moderadamente
Me disgusta
mucho
Atributos
Color
Frescor
Apariencia