UAEMx

FACULTAD DE QUIMICA
QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO
LABORATORIO INTEGRAL DE FARMACOLOGIA

Reporte 2
Accin de agonistas y antagonistas colinrgicos y adrenrgicos sobre el
msculo cardiaco y recto abdominal de la rana y uso del fisigrafo (prctica
demostrativa)
Equipo #3
Len Hernndez Joel Eduardo
Martnez Cruz Alina Montserrat
Menera Rico Geovani
Miranda Caballero Felipe
Quiroz Reyes Adriana

7 Semestre
Grupo 73
Fecha de realizacin de la prctica: 23 de Agosto de 2016
Fecha de entrega de reporte: 30 de agosto de 2016

Agosto 2016, Toluca, Edo. Mex.

PRACTICA 2

ACCIN DE AGONISTAS Y ANTAGONISTAS COLINRGICOS Y

ADRENRGICOS SOBRE EL MSCULO CARDIACO Y RECTO ABDOMINAL
DE LA RANA Y USO DEL FISIGRAFO (PRCTICA DEMOSTRATIVA).
OBJETIVOS
Conocer el funcionamiento adecuado del fisigrafo para registrar e
interpretar el efecto farmacolgico de dosis de un agonista y/o antagonista
colinrgico
Demostrar la accin de agonistas y antagonistas colinrgicos (acetilcolina, y
atropina) y adrenrgicos (adrenalina, noradrenalina, propranolol) sobre el
msculo cardiaco y recto abdominal de la rana.
MARCO TEORICO
El fisigrafo
Es un aparato de registro multicanal que permite cuantificar eventos fisiolgicos. El
evento registrado (actividad cardaca, tensin muscular, presin sangunea, etc.)
se transforma en una seal elctrica, mediante un transductor, la cual es
procesada y reproducida grficamente sobre un papel. Los principales
componentes de este equipo incluyen un transductor, un amplificador de la seal y
un sistema de registro.
El transductor o captor:
Convierte proporcionalmente la respuesta producida por la accin de un frmaco
sobre un rgano, un segmento de un rgano o un organismo ntegro en una seal
elctrica; se encuentra conectado al rgano o a un animal ntegro. Existen
diferentes tipos de transductores dependiendo el tipo de fenmeno que se desea
registrar, por ejemplo un transductor de tensin o fuerza, o un transductor de
presin.
El amplificador o elaborador:
Recibe la seal del transductor para ampliarla y que pueda ser detectada por un
sistema de registro o un graficador. Su operacin se reduce al manejo de dos
controles: uno de amplitud (sensibilidad) y otro de posicin (centrado).
El registrador es el dispositivo que convierte la seal del amplificador en alguna
forma perceptible por los sentidos humanos. Por ejemplo con el uso de una
plumilla con tinta, se obtiene un trazo instantneamente donde se describe la
variacin en amplitud y en el tiempo del hecho fisiolgico estudiado.
Solucin Ringer
El rgano o tejido debe ser extrado rpidamente del organismo recin sacrificado,
procurando que no sufra estiramiento ni manipulacin excesiva, una vez aislado
para su lavado y mantenimiento se recurre a soluciones fisiolgicas que contienen
diversas sales que se aproximan a la composicin de los lquidos corporales
(liquido extracelular).

En los ltimos aos se han desarrollado trabajos que muestran claramente cmo
los efectos del sistema nervioso parasimptico se producen mediante la liberacin
de una substancia qumica en las terminaciones nerviosas, la cual es directamente
responsable de la excitacin de las clulas inervadas. Esta substancia tiene accin
idntica a la de la acetilcolina. Como trabajos bsicos en el descubrimiento de este
mecanismo deben citarse los de Loewi, quien prob que la estimulacin del vago
en el corazn aislado de la rana produca acetilcolina, mientras que la estimulacin
del simptico liberaba una substancia semejante a la adrenalina. Este
descubrimiento fue luego confirmado por otros investigadores en otros rganos
aislados y ha servido para sentar la teora hormonal del control autnomo.
La accin de la acetilcolina liberada en las terminaciones nerviosas es
estrictamente local debido a la presencia, en la sangre, de una enzima poderosa
que destruye rpidamente cualquier cantidad de acetilcolina que se difunda desde
el sitio de liberacin; esta misma enzima, llamada colinesterasa, evita que la
accin local se prolongue indebidamente, ms all de lo correspondiente al
estmulo vagal.
La informacin conducida por las neuronas adrenrgicas hacia los tejidos
efectores se transmite a travs de la liberacin de noradrenalina, conjuntamente
con otros componentes intravesiculares. Esquemticamente, la neurotransmisin
adrenrgica se divide en cinco etapas fundamentales: 1) Sntesis del
neurotransmisor adrenrgico. 2) Almacenamiento de noradrenalina. 3) Liberacin
del mediador qumico. 4) Estimulacin de los receptores adrenrgicos. 5)
Terminacin de la actividad del neurotransmisor. El msculo cardiaco se encuentra
formando parte de la pared del corazn como una gruesa capa muscular llamada
miocardio tambin presenta caractersticas similares al msculo estriado y liso, por
ejemplo la presencia de estras como el msculo esqueltico o su accin
involuntaria como el msculo liso, pero tambin presenta caractersticas
particulares que lo diferencian de estos. Dentro de las propiedades fundamentales
que lo distinguen podramos enumerar las siguientes:
Excitabilidad: capacidad de responder a un estmulo o potencial de accin.
Conductibilidad: capacidad de transportar el impulso nervioso de un punto a otro.
Contractibilidad: capacidad del msculo de acortarse y engrosarse.
Elasticidad: capacidad de regresar a su estado natural despus de una
contraccin.
Automatismo: capacidad de generar su propio impulso nervio y responder de
acuerdo a este.

Bsicamente, el tejido cardiaco est constituido por dos tipos de tejido

especializado .El miocardio nodal formado por fibras y haces de conduccin, el
musculo cardiaco presenta discos intercalares, es el encargado de bombear la
sangre por el sistema circulatorio mediante la contraccin. El msculo cardaco
generalmente funciona involuntariamente, sin tener estimulacin nerviosa. Es un
msculo miognico, es decir autoexcitable (funcin barmotrpica). Las
contracciones rtmicas se producen espontneamente, as como su frecuencia
puede ser afectada por las influencias nerviosas u hormonales, como el ejercicio
fsico o la percepcin de un peligro. En su sinapsis intervienen neurotransmisores
como la acetilcolina y las catecolaminas: adrenalina y noradrenalina.
El msculo cardaco se contrae automticamente a su propio ritmo, de 60 a -100
veces por minuto. No se puede controlar conscientemente, sino que su ritmo de
contraccin est regulado por el sistema nervioso autnomo, dependiendo del
estado de actividad o reposo del cuerpo. Las propiedades antes citadas, pueden
ser estudiadas en un msculo cardiaco de batracio sapo ya que en estos
especmenes es ms fcil mantener el corazn de estos animales al descubierto
durante mucho ms tiempo conservando su vitalidad que en mamferos.

MATERIAL REQUERIDO PARA LA SESIN DEL LABORATORIO

Equipo:
Fisigrafo y transductor de tensin
Calculadora
Papel milimtrico
Tabla de diseccin
Estuche de disecciones
Tijeras
Estilete
Soporte universal
Pinzas Mhor
Cmara de rganos
Tubos de ensaye
Matraces aforados de 10 ml
Pipetas graduadas de 1 ml
Pizeta
Tubo de hule
Caja petri
Jeringas de insulina
Reactivos:
Solucin fisiolgica Ringer Rana (5 L)
Acetilcolina y/o carbacol

Acetiltiocolina (Tiene la ventaja de ser mas estable)

Atropina
Adrenalina
Noradrenalina
Propranolol
Organismo: Rana
METODOLOGA
PROCEDIMIENTO DE CALIBRACIN Y BALANCEO DEL FISIGRAFO
Quite
cubierta,
Quite la
la cubierta,
verifique
que el
el
verifique que
interruptor
interruptor est
est en
en
posicin
de apagado
apagado
posicin de
(OFF)
y
que
el
(OFF) y que el
voltaje
voltaje este
este correcto.
correcto.

Quite
Quite la
la cubierta,
cubierta,
verifique
que el
verifique que
el
interruptor
de est
interruptor de
est
en
posicin
de
en posicin de
apagado
apagado (OFF)
(OFF) yy que
que
el
el voltaje
voltaje este
este
correcto.
correcto.

Que
Que la
la conexin
conexin del
del
tubo
al cartucho
tubo al
cartucho de
de
tinta
ya
a la
la pluma
pluma
tinta y
sea
adecuada.
sea adecuada.
Ajuste
el montaje
montaje de
Ajuste el
de
la
tinta
la tinta para
para proveer
proveer
un
flujo
continuo.
un flujo continuo.

Encender
Encender el
el aparato
aparato
con
de
con el
el botn
botn de
registro
(recorder),
registro (recorder),
se
mantiene en
en esas
se mantiene
esas
condiciones
por 15
condiciones por
15
min.
min.

Balanceo:
Balanceo:
colocar
colocar el
el botn
botn
filter en 10K, el
botn
botn
macromtrico
macromtrico en
en
1000
OmV/cm.
1000 OmV/cm.

El
botn de
de
El botn
tiempo
tiempo en
en 60
60 seg,
seg,
el de velocidad de
papel
papel en
en 0.0025
0.0025
cm/seg
y el
cm/seg y
el de
de
polaridad
polaridad en
en +.
+.

Presionar botn
de
encendido y
y
de encendido
con
el de
posicin
con el
de posicin
colocar
la pajilla
colocar la
pajilla
en
en horizontal.
horizontal.
Encender
Encender el
el botn
botn
de
registro.
de registro.

Si
la pajilla
Si la
pajilla se
se mueve
mueve
de
la posicin,
posicin,
de la
corregirla
con
corregirla con el
el
botn
de balance.
balance.
botn de
Apagar
el
botn
de
Apagar el botn de
registro
registro (blanco).
(blanco).

Calibracin:
Calibracin: Contar
Contar
con
con un
un peso
peso
conocido.
Llevar
conocido. Llevar la
la
pajilla
con el
el botn
pajilla con
botn
de
a una
de posicin
posicin a
una
lnea
medir
lnea basal,
basal, medir
con
con regla
regla la
la amplitud
amplitud
deseada.
deseada.

Colocar
Colocar en
en el
el
transductor
transductor el
el peso
peso
conocido,
conocido, encender
encender
botn
botn de
de registro,
registro,
Bajar
el botn
botn
Bajar el
macromtrico
hasta
macromtrico hasta
la
amplitud
la amplitud deseada.
deseada.

Si
pajilla se
se pasa
pasa
Si la
la pajilla
de
de amplitud
amplitud corregir
corregir
con
con el
el botn
botn
micromtrico.
micromtrico.

Apagar
Apagar el
el botn
botn de
de
registro
y la
registro y
la pajilla
pajilla
regresar
lnea
regresar a
a la
la lnea
basal.
El fisigrafo
fisigrafo
basal. El
esta
esta calibrado
calibrado y
y listo
listo
para
ser
para ser usado.
usado.

OBTENCIN DEL MSCULO RECTO ABDOMINAL DE LA RANA Y MONTAJE DE

LA PREPARACIN:
2.- Se coloca con el lado ventral
1.Sacrificar
a
la
rana
por
5.Se
deja
hacia
arriba,
exponiendo los
4.- Separar los msculos
3.- Disecar los msculos a nivel
descerebracin.
estabilizar
la
msculos internos.
en dos, uno se monta en
del xipisternum y la inervacin,
preparacin
y
la cmara y el otro se
despus se humedece con
despus
se
conecta al transductor.
solucin Ringer Rana.
suministra
el
frmaco a probar.

PREPARACIN IN SITU DEL CORAZN DE LA RANA

1.- Sacrificar a la rana por
descerebracin

2.- Se coloca la rana con la parte

ventral hacia arriba, se corta la
piel y se deja expuesto el
corazn.

4.- Colocar un gancho en

la parte interior del
ventrculo, con un hilo se
ata al transductor. Ajustar
tensin entre 0.5 y 1 g.

5.- Suministrar los diferentes

frmacos, realizar una curva
dosis-efecto.

RESULTADOS

3.- Mantener hmedo el corazn de la

rana con la solucin Ringer.

Acetilcolina:

Concentra
cin
1.00E-07
1.00E-06
1.00E-05
1.00E-04

Log
Conc.
-7
-6
-5
-4

Amplitud
(cm)
2.38
2.14
2.17
1.88

Frecuencia
Respues
(latidos/min
ta (%)
uto)
100
89.9
91.1
78.9

Dosis-Respuesta

f(x) = - 6.21x + 55.82

Dosis-Frecuencia

6.75
6.33
5.67
6.2

Adrenalina

dosis

log dosis

fuerza de
contraccin

% respuesta

0.0000001

-7

280

80.7707841

0.000001

-6

320

92.3094

0.00001

-5

346.66

100

0.0001

-4

296.66

85.57

Impacto de la adrenalina sobre la fuerza de contraccin del musculo cardiaco de la rana

dosis

log dosis

frecuencia
cardiaca
(latidos/min)

0.0000001

-7

39.85

0.000001

-6

46.9

0.00001

-5

61

0.0001

-4

48

imapacto de la adrenalina sobre la frecuencia cardiaca de la rana

Noradrenalina

Concentraci
n
1.00E-07
1.00E-06
1.00E-05

Log
Conc.

Frecuencia
Amplitud Respuest
(latidos/minut
(cm)
a (%)
o)
-7
2.83
100
49.2
-6
2.5
88.33
49.8
-5
2.46
86.92
48.6

Dosis-Respuesta

f(x) = - 6.54x + 52.51

Dosis-Frecuencia

Acetiltiocolina

Nombre
del
frmaco

Acetiltiocol
ina

Concentrac
in

Log
concentrac
in

1.00E-07

Distancia
Lnea
basal a
altura
mxima
(cm)
3.7

-7

1.00E-06
1.00E-05
1.00E-04

3.9
3.9
4.8

-6
-5
-4

Amplitu
d

Frecuen
cia
(latidos/
segundo
)

Respues
ta %

3.63

48

100

3.53
3.43
3.44

47.04
44.88
42.36

98
93.5
88.25

Dosis- Respuesta

Dosis-Frecuencia

Atropina

concentraci
n
0.0000001
0.000001
0.00001
0.0001
0.001

Log
(concentracin)
-7
-6
-5
-4
-3

FRECUEN
%
CIA
AMPLITUD
Respues
PROMEDI PROMEDIO
ta
O
6
2.43
85.8
7
2.3
81.2
6.66
2.6
91.8
7
2.63
92.9
7.66
2.83
100

Dosis-Respuesta

f(x) = 4.01x + 110.39

Dosis-Frecuencia

Metoprolol

dosis

log dosis

% respuesta

.0000001

10-7=-7

76.6

.000001

10-6=-6

81

.00001

10-5=-5

85.2

.0001

10-4=-4

85.6

.001

10-3=-3

86.5

dosis vs %respuesta

dosis

log dosis

.0000001

10-7=-7

Frecuencia
cardiaca por
minuto
34.6666

.000001

10-6=-6

36.6666

.00001

10-5=-5

36.6666

.0001

10-4=-4

36

.001

10-3=-3

36

dosis vs frecuencia

Efedrina

concentraci Log
n
(concentracin)
0.0000001
0.000001
0.00001
0.0001
0.001

Amplitud
-7
-6
-5
-4
-3

40
37
35
33
32

Frecuencia
33.6
32.4
31.8
31.8
32.4

Amplitud

Frecuencia Cardiaca

DISCUSIN DE RESULTADOS
Gracias a los resultados obtenidos mediante el fisiogrfo por la administracin de
distintos neurotransmisores realizando efectos de contraccin y dilatacin en el
musculo cardiaco afectando la frecuencia cardiaca de este organismo dichas
seales son captadas por el fisiogrfo y convertidas por el transductor nos
permiten conocer que tanto efecto ejercieron en el corazn mediante un grfico.
En este rgano encontraremos diferentes receptores que pertenecen a la regin
preganglionar y postganglionar, que al interactuar con los neurotransmisores ms
afines habr un respuesta dada por el musculo cardiaco, que corresponde a la

cantidad de dosis que se es administrada y de acuerdo a esta respuesta se

identificaran como neurotransmisores agonistas, los cuales son afines a
determinados receptores que ejercern una accin sobre el msculo cardiaco
dependiente de la dosis, y por otro lado habr neurotransmisores antagonistas, los
cuales son afines a ciertos receptores.
Se hace una comparacin entre todos los neurotransmisores administrados para
comprobar su efecto, determinado por la frecuencia cardiaca del rgano a
estudiar, dichas seales son captadas por el fisiografo y convertidas por el
transductor nos permiten conocer que tanto efecto ejercieron en el corazn
mediante un grfico donde muestran amplitud y distancia basal entre cada pico.
El sistema nervioso simptico incrementa la frecuencia y la fuerza de los latidos
cardacos. As mismo, produce la liberacin de las hormonas adrenalina
(epinefrina) y noradrenalina (norepinefrina), que estimulan el corazn y los vasos
sanguneos sustancias exgenas a la rana puesto que inducimos la respuesta
artificialmente.
Se utiliz una solucin Ringer Rana para la preparacin de las disoluciones de los
neurotransmisores ya que es una solucin fisiolgica que permite una correcta
osmolaridad en el corazn y por esto tambin se utiliz para realizar lavados entre
la administracin de cada neurotransmisor.
CONCLUSIONES
Los experimentos in situ son bastante cercanos a lo que ocurre en
experimento in vivo, para ello se han apoyado en instrumentos como el
fisigrafo el cual es muy til para medir el efecto dosis respuesta de
algunos neurotransmisores ya que este mide los impulsos que presenta
cada rgano en este caso el movimiento mecnico del efecto (contraccin y
relajacin del corazn) transformndolos en seales elctricas que son
traducidas por el equipo, toda esta informacin ser procesada en una
grfica sobre un papel para su interpretacin posteriormente, la cual nos
marcara el ritmo y amplitud de la seal , en este caso se observ la
actividad cardiaca de una rana,
al variar las dosis del diferente
neurotransmisor se presentara una reaccin aumentada o disminuida
Al variar la dosis del neurotransmisor o cambiarlo se presentar una
reaccin aumentada o disminuida, el hacer este tipo de estudios en
animales como la rana nos permiten medir con mayor veracidad las
respuestas ante estmulos con diversos neurotransmisores:
La acetilcolina produce un efecto de disminucin de la velocidad de la
frecuencia cardaca y la fuerza de contraccin cardiaca a diferencia de la
Atropina que por ser un antagonista competitivo de los receptores
muscarinicos produce un efecto incremento de la frecuencia cardiaca, y
contrarrestar completamente el efecto del primero.

La Noradrenalina produce un efecto de aumento de la fuerza y el ritmo de

contraccin cardiaca a diferencia del Propanolol que produce un efecto de
disminucin del gasto cardiaco por ser un antagonista competitivo de los
receptores adrenrgicos produce un efecto, y contrarrestar completamente
el efecto del primero.

CUESTIONARIO
PREGUNTAS EXPERIMENTALES:
1.
Compare las curvas dosis respuesta obtenidas para acetilcolina
aplicados a tres dosis diferentes a la preparacin (10 E-5 M a 10 E-9 M).
En el de acetilcolina al aumentar la concentracin la fuerza disminua (la amplitud
se haca ms pequea) lo que nos quiere decir que la respuesta dosis respuesta
es que a mayor concentracin mayor relajacin del musculo cardiaco lo que
disminuye el gasto cardiaco a pesar de que no se manejaron esas
concentraciones, pero iban de menor a mayor concentracin.
2.
Aada previamente atropina (10 E-6 M) a la preparacin, y proceda a
aplicar diferentes dosis de acetilcolina, Qu dosis de estos compuestos se
requiri para alcanzar una respuesta equivalente a la observada en ausencia
de atropina?
Para poder producir una respuesta equivalente de ambos frmacos se tuvo que
adicionar la misma concentracin ya que ambos son antagonistas respetivamente,
dado que la acetilcolina acta sobre los receptores muscarinicos 2 para realizar
una accin agonista, sin embargo una antagonista de estos receptores es la
atropina.
3.
A qu conclusiones llega con los resultados de este experimento?
Que la actividad de cardiaca depender de la dosis administrada en el organismo
problema, ya que este puede actuar como agonista o antagonista y por
consiguiente reflejar un efecto teraputico deseado. Es importante mencionar que
el efecto depende de los receptores a los cuales se est haciendo la respuesta
Receptor Frmaco
4. En la preparacin de corazn de rana in situ, compare las respuestas
obtenidas al aplicar dosis crecientes de acetilcolina y posteriormente atropina.
Describa sus observaciones y tomando como base el mecanismo de accin de
estos compuestos en el corazn explique lo que ha ocurrido
Se llev a cabo una respuesta de relajacin del musculo cardiaco al adicionar
concentraciones crecientes de acetilcolina , posteriormente al realizar la dosis ms
concentrada se observ una disminucin notable en el corazn, sin embargo
mientras se agregaban las concentraciones de atropina se observ que entre
mayor concentracin se iba recuperando la accin normal de dicho rgano. Por
lo que se concluye que ambos son antagonistas recprocos

5. En esta misma preparacin agregue dosis crecientes de adrenalina,

explique la respuesta observada en los trazos obtenidos, posteriormente
agregue propranolol y vuelva a agregar concentraciones crecientes de
adrenalina, anote sus observaciones.
Este experimento nos permite conocer diferente frmacos que realizan los efectos
agonistas y antagonistas como el ejemplo de la pregunta 4 que relaciona la
atropina y acetilcolina sus efectos son inversos en este caso no se actan sobre
los receptores muscarinicos, sin embargo si realizan una accin sobre los
receptores beta adrenrgicos que realiza la adrenalina que aumenta el ritmo
cardiaco causando vasoconstriccin, elevando el gasto cardiaco, por otro lado el
propanolol hace una accin antagonista realiza una vasodilatacin. Ya que
compite con los neurotransmisores catecolaminicos.
En la grfica realizada por el fisiografo se observ un comportamiento de aumento
cardiaco, la amplitud de la grfica iba siendo notoria posteriormente cuando se
agreg el propanolol se fue disminuyendo la accin del vasoconstriccin originada
por la adrenalina, y creci de nuevo cuando se aplic de nuevo adrenalina

REFERENCIAS
Lorenzo P., Moreno A., Lizasoain I., Leza J.C., Moro M.A., Portols A.
(2008). Velzquez Farmacologa Bsica y Clnica. (18 ed). Mxico. Ed.
Panamericana.
Actividad mecnica y elctrica en rana, Universidad Nacional Autnoma de
Mxico, Garduo Snchez Marco Alan, Disponible en:
http://es.slideshare.net/kcortestello/reporte-ecg-rana
Consultado el da 28 de agosto a las 11:33 pm.
PORTAL FARMACOLOGA
DISPONIBLE EN:
http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/neurobioq
uimica/catecolaminas(dopa,5HT,noradrena).htm
Consultado: 28 de Agosto de 2016 22:13
FARMACOLOGA DE LOS AGONISTAS Y ANTAGONISTAS
DISPONIBLE EN:
http://www.imbiomed.com.mx/1/1/articulos.php?
method=showDetail&id_revista=28&id_seccion=811&id_ejemplar=765&id_articulo
=7239
Consultado: 28 de Agosto de 2016 23:19
Estudio de la accin de los frmacos Agonistas de los receptores
Adrenrgicos.
Francisco Javier Tendillo Cortijo. Universidad complutense de Madrid. Facultad de
veterinaria. Tesis doctoral. 1992