MATERIAIS E MTODOS

Reagentes e solues

- Mtodo espectrofotomtrico
* NaOH 8M
* cido tricloroactico 3% P.A.
* NaNO2 0,07M P.A.
- Mtodo cromatogrfico

Luz fornecida por uma lmpada,

fracionada pelo prisma ou rede de
difrao (monocromador) nos
comprimentos de onda que a
compem (luzes monocromticas).
O comprimento de onda
selecionado dirigido para a
soluo contida em um recipiente
transparente (cubeta). Parte da luz
absorvida e parte transmitida.
Mede-se a quantidade de luz
absorvida pela amostra:

*
*
*
*
*

ter metil tert-butlico

K2CO3
KH2PO4
Metanol grau HPLC
Acetonitrila grau HPLC
Equipamentos

- Espectrofotmetro Thermo
scientific modelo Genesys 10S
UV-Vis

absorbncia que diretamente

proporcional com a concentrao
do analito.
- Cromatografia Lquida de Alta
Eficincia (CLAE) com sistema de
bombeamento, detector com
arranjos de diodo (PDA)
- Coluna analtica ODS HYPERSIL
C18 (150 x 2,1 mm 5 m) da
Thermo scientific

Sistema de solventes (KH2PO4

pH4,9/Metanol/Acetonitrila
88/09/03) passa pelo
pelo amortecedor de pulso para o
solvente no sair pulsado e
causar muitos rudos. Injeo da
amostra coluna reversa de C18
(polar sai antes) detector de
arranjo de diodos

Curva de calibrao

desgaseificador e pelo sistema de

bombas de duplo pisto com fluxo
de 1 mL/min, passando

- Mtodo cromatogrfico
A partir da soluo estoque de
paracetamol 10 mg/mL foram
obtidas as seguintes solues
diludas em metanol:

-Mtodo Espectromtrico
A partir da soluo estoque de
paracetamol 10 mg/mL foram
obtidas as seguintes solues
diludas em metanol:

A partir das solues acima,

mediu-se 50 L e adicionou-se a
500 L de plasma obtendo-se as
seguintes concentraes:

Reao de paracetamol com nitrito

de sdio forma o 2,4-nitro-4acetaminofenol que possui cor
amarela em meio alcalino e pode

A partir das solues acima,

mediu-se 20 L e adicionou-se a
200 L de plasma obtendo-se as
seguintes concentraes:

Procedimentos de anlise

- Mtodo espectrofotomtrico

ser quantificada no
espectrofotmetro.
- Mtodo cromatogrfico

- Validao:
Os processos de validao foram
conduzidos de acordo com a RDC
n27 de 17 de maio de 2012, da
ANVISA.
Foram avaliados os seguintes
parmetros:
- Linearidade: medida pela
equao da reta, coeficiente de
correlao (r).
- Preciso: o quanto as medidas
repetidas so prximas umas das
outras. Deve ser realizada no
mnimo 5x.

- Exatido: quo prximo do valor

real est o valor medido
- Limite de quantificao: a menor
[] de analito que possa ser medida
com nvel aceitvel de incerteza
- Curva de calibrao: relao
funcional do sinal observado dada
uma certa quantidade de analito,
os coeficientes linear e angular
indicam a equao da reta e o
coeficiente de determinao.
Deve-se fazer 3 vezes e no mnimo
6 amostras