Determinacin experimental de

biomolculas II (Protenas y enzimas)

*Huamani Chvez Gissell Marisol

*Quispe Ccorahua Jose Antonio
*Quispe Avalos Mirtha Alondra
*Roca Dionicio Grenda Isarema

Contenido
1.

INTRODUCCIN......................................................................................... 3

2.

OBJETIVOS:................................................................................................ 3

3.

MARCO TERICO....................................................................................... 4

4.

MATERIALES............................................................................................... 6

5.

PROCEDIMIENTO...................................................................................... 10

5.1.

Experimento 1: desnaturalizacin de protenas...................................10

5.2. Experimento 2: Determinacin de la presencia de protenas (reaccin

de biuret)....................................................................................................... 11
5.3.

Experimento 3: reconocimiento de la enzima catalasa........................12

5.4.

Experimento 4: Reaccin aminoltica...................................................12

6.

RESULTADOS Y DISCUSIONES..................................................................13

6.1.

Resultados............................................................................................ 13

6.2.

Discusin............................................................................................... 15

7.

CONCLUSIONES....................................................................................... 15

8.

CUESTIONARIO........................................................................................ 15

9.

BIBLIOGRAFIA.......................................................................................... 15

PRCTICA N4
DETERMINACIN EXPERIMENTAL DE
BIOMOLECULAS II

PROTENAS Y ENZIMAS
1.

INTRODUCCIN
Las protenas son los materiales que desempean un nmero mayor de
funciones en las clulas de todos los seres vivos. Son molculas orgnicas
formadas bsicamente de Carbono, Hidrogeno, Oxgeno y Nitrgeno, en
algunos casos puede contener azufre y cobre. Por un lado forman parte de la
estructura bsica de los tejidos (piel, uas, msculos, tendones) y por otro
tambin desempean funciones metablicas y reguladoras (asimilacin de
nutrientes, transporte de oxgeno y grasas a la sangre y del reconocimiento de
organismos extraos en el sistema inmunitario (NUTRICIN21). La funcin
biolgica de cada protena depende de su estructura.
Las enzimas son biomoleculas orgnicas especializadas en la catlisis de las
reacciones qumicas que tienen lugar en la clula. Son eficaces como
catalizadores ya que son capaces de aumentar la velocidad de las reacciones.
Las protenas estn constituidas por unidades llamadas aminocidos. Estos se
caracterizan por tener un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-COOH),
son sustancias cristalinas, casi siempre de sabor dulce.
Los alimentos que ingerimos nos proveen de protenas, pero tales no se
absorben normalmente en la constitucin sino, luego de un desdoblamiento o
hidrolisis, causado por el proceso de digestin.
2. OBJETIVOS:
Identificar las protenas de las muestras vistas en clase y observar
experimentalmente la desnaturalizacin.

Observar la actividad enzimtica y los factores que afectan a esta.

3. MARCO TERICO
Protenas:
Las protenas son biomolculas de elevado peso molecular (macromolculas)
y presentan una estructura qumica compleja. Sin embargo, cuando se
someten a hidrlisis cida, se descomponen en una serie de compuestos
orgnicos sencillos de bajo peso molecular: los - aminocidos. Este rasgo lo
comparten las protenas con otros tipos de macromolculas: todas son
polmeros complejos formados por la unin de unos pocos monmeros o
sillares estructurales de bajo peso molecular. Existen 20 -aminocidos
diferentes que forman parte de las protenas. ("Las proteina", 2016)
Las protenas se organizan en cuatro niveles principales:
a. Estructura primaria:
Es el nivel ms sencillo y corresponde a la cadena polipeptdica; es
decir, a la secuencia lineal de los aminocidos que la forman. La
estructura primaria contiene toda la informacin necesaria para que
la protena sea nica y siempre tenga tanto la misma estructura y
funcin.
b. Estructura secundaria:
Es el plegamiento que la cadena polipeptdica adopta gracias a la
formacin de puentes de hidrgeno entre los tomos que forman el
enlace peptdico. Cuando la conformacin les hace formar una
hlice, sta poseer unos parmetros caractersticos, y se dice que
es la hlice . Cuando se disponen en zigzag lo hacen en forma
de hoja , que suelen asociarse unas a otras para formar lo que se
denomina una lmina . Las estructuras desorganizadas y
los giros sirven de nexo entre distintas lminas y/o hlices.
c. Estructura terciaria:
Se trata de un nivel superior de complejidad determinado por la
disposicin espacial de las distintas estructuras secundarias de una
cadena polipeptdica. Esta conformacin se mantiene estable gracias
a interacciones entre los distintos radicales (R) de los aminocidos;
estas interacciones pueden ser de varios tipos (no todos ellos
contribuyen por igual al mantenimiento de la estructura terciaria):
Los puentes disulfuro que se establecen entre dos Cys
Los enlaces amida, que se pueden establecer entre los carbonilos
(-COO-) de las cadenas laterales de los aminocidos (Asp y Glu),
con los grupos amino (-NH2) de Lys or Arg.
Los puentes elctricos que se establecen entre grupos cargados
positivamente y los cargados negativamente.

 Los puentes de hidrgeno que se establecen entre molculas

polares pero que no tienen carga.
Las interacciones hidrofbicas que mantienen unidos los grupos
que no son polares.
d. Estructura cuaternaria:
Este nivel estructural slo lo presentan aquellas protenas formadas
por ms de una cadena polipeptdica, ya que se trata de la unin
mediante enlaces dbiles (puentes de hidrgeno, electrostticos o
hidrfobos) y ocasionalmente puentes disulfuro. Cada una de las
cadenas polipeptdicas recibe el nombre de protmero. El nmero
de protmeros puede variar desde dos (p. ej. la hexocinasa) hasta 12
(glutamina sintetasa) o ms. Los protmeros pueden ser
exactamente iguales (hexocinasa), muy parecidos, o estructural y
funcionalmente distintos (por ejemplo, unas subunidades son
reguladoras y otras tienen actividad enzimtica). Cada protena tiene
su nivel estructural propio y caracterstico que le permite ejercer
eficientemente su funcin concreta. A la conformacin tridimensional
caracterstica de cada protena en la clula se le denomina estado
nativo de la protena. ("Estructura de las protenas", 2016)
Aminocidos:
Son las unidades bsicas que forman las protenas. Su denominacin
responde a la composicin qumica general que presentan, en la que un
grupo amino (-NH2) y otro carboxilo o cido (-COOH) se unen a un carbono
(-C-). Las otras dos valencias de ese carbono quedan saturadas con un
tomo de hidrgeno (-H) y con un grupo qumico variable al que se
denomina radical (-R). (Luquen Gilln, 2016)
Enzimas:
Las enzimas son protenas altamente especializadas que tienen como
funcin la catlisis o regulacin de la velocidad de las reacciones qumicas
que se llevan a cabo en los seres vivos. Casi todas las reacciones qumicas
de las clulas son catalizadas por enzimas, con la particularidad de que
cada enzima solo cataliza una reaccin, por lo que existiran tantas
enzimas como reacciones, y no se consumen en el proceso. Los
catalizadores no biolgicos son inespecficos. En una reaccin catalizada
por enzima (E), los reactivos se denomina sustratos (S), es decir la
sustancia sobre la que acta la enzima. El sustrato es modificado
qumicamente y se convierte en uno o ms productos (P). La enzima libre
se encuentra en la misma forma qumica al comienzo y al final de la
reaccin. ("Enzimas", 2016)

4. MATERIALES
Materiales de los alumnos por grupo
1 huevo

Semillas frescas de frijol

1 papa

1 botella de agua oxigenada

Pequeos trozos de carne e hgado

Materiales del laboratorio

Tubos de ensayo

Vaso precipitado de 500mL

Lugol y bencina

cido sulfhdrico al 75%

Agua destilada

cido ntrico concentrado al 20%

CuSO4 al 1%

Solucin de albumina

Almidn

5. PROCEDIMIENTO
5.1. Experimento 1: desnaturalizacin de protenas
Colocar 6 tubos de ensayo (enumerados al 1 al 6) en la gradilla y verter 1ml
de solucin de albumina a cada uno de ellos (verificar que la solucin
albumina haya sido colocada adecuadamente)

realizar los siguientes tratamientos a cada uno:

Tubo 1: someter a bao mara
Tubo 2: aadir 1ml de bencina
Tubo 3: aadir 1ml de cido sulfhdrico al 75%
Tubo 4: aadir 1ml de cloruro de sodio al 20%
Tubo 5: aadir 1ml de cido ntrico concentrado
Tubo 6: control (solo albumina)

Observar y anotar en el cuadro los cambios ocurridos en cada uno de los

tubos
5.2. Experimento 2: Determinacin de la presencia de
protenas (reaccin de biuret)
En un tubo de ensayo colocar 1ml de solucin de albumina al 1%, agregar
1ml de solucin de NaOH al 40% y mezclar.

A la mezcla aadir 2 gotas de sulfato de cobre al 1%.

Hacer blanco negativo o control repitiendo el experimento y sustituir la
albumina por agua destilada.

5.3. Experimento 3: reconocimiento de la enzima catalasa

Coger aproximadamente el mismo peso de hgado, carne, papa picada,

frijol seco y fresco, y colocarlos en tubos de ensayo enumerados.

Luego al mismo tiempo aadir 1ml de H2O2 a cada uno.

5.4. Experimento 4: Reaccin aminoltica

Utilizar los 4 pocillos extremos de una placa de porcelana.
Colocar en cada pocillo:
a. 4 gotas de lugol
b. 15 gotas de almidn + 2 gotas de lugol
c. 15 gotas de almidn + 10 gotas de saliva, despus de 10 minutos
aadir 2 gotas de lugol
d. 10 gotas de saliva + 10 gotas de cido sulfhdrico, despus de 10
minutos aadir 10 gotas de almidn, despus de 7 minutos, 2 gotas
de lugol

6. RESULTADOS Y DISCUSIONES
6.1. Resultados

Experimento 1. Desnaturalizacin de la protena

Despus de someter a la albumina a los diferentes tratamientos se
obtuvieron los siguientes resultados.
Tub
oN

Someter a :

Bao mara

Acetona

cido
sulfhdrico

NaCl

Observacin: ha
cambiado algo en los
tubos de ensayo?
Se torn de color blanco
y se solidifico, es una
reaccin irreversible.
La reaccin es reversible
por su polaridad.
La reaccin es
irreversible, por los
cambios bruscos de pH.
La reaccin es

Desnaturalizac
in
(+) (-)
(+)

(-)
(+)

(+)

HNO

control

irreversible, por ser

formado por iones.
La reaccin es
irreversible, por los
cambios bruscos de pH.

(+)

Experimento 2. Determinacin de presencia de

protena (Reaccin de Biuret)
Observacin
Muestra
Albumina Se torn de color
violeta
Agua
Se torn color celeste

Reaccin
(positiva o
negativa )
Positiva
Negativa

Experimento 3 Reconocimiento de la enzima

catalasa.
Actividad

Contenido del
tubo

Muy buena actividad

Buena actividad
Poca actividad
Muy poca actividad

Hgado
Carne
Papa
Frejoles

Completar la ecuacin:
H2O +

O2

15 gotas de almidon
+ 2 gotas de lugol
H2O2 + catalasa ------------------------->
4 gotas de lugol
(se torna color
marron)

Experimento 4. Reaccin aminoltica

15 gotas de almidon + 10 Gotas de saliva y despue de 10 min
10 gotas de saliva +10 gotas de ac sulfhdrico Despus de 10min
2 gotas de lugol
10 gotas de almidn y 7min 2 gotas de lugol

6.2.

Discusin

Enzima catalasa en la carne:

La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos
animales y vegetales.
La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el
metabolismo celular, se forma una molcula txica que es el perxido de
hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo descompone
en agua y oxgeno, por lo que se soluciona el problema. ("Enzimas", 2016)
En el experimento realizado en clase pudimos comprobar la gran actividad
que el perxido de hidrgeno ocasiona en la carne debido a la presencia de
la enzima catalasa.

7. CONCLUSIONES
8. CUESTIONARIO
9. BIBLIOGRAFIA

Enzimas. (2016). Biologia.edu.ar. Retrieved 11 September 2016, from

http://www.biologia.edu.ar/metabolismo/enzimas.htm
Estructura de las protenas. (2016). Biorom.uma.es. Retrieved 11
September 2016, from
http://www.biorom.uma.es/contenido/av_bma/apuntes/t5/t5.htm
Las proteina. (2016). Bionova. Retrieved 11 September 2016, from
http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema08.pdf
Luquen Gilln, M. (2016). estructura y propiedades de la proteina. uv.
Retrieved 11 September 2016, from
http://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf
Enzimas. (2016). Lourdes-luengo.org. Retrieved 11 September 2016,
from http://www.lourdesluengo.org/unidadesbio/proteinas/practica_enzimas.htm