Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
VETERINARA
FACULTATEA DE BIOTEHNOLOGII
SPECIALIZAREA BIOTEHNOLOGII INDUSTRIALE
COORDONATOR
Student,
Matache
Gabriela
BUCURESTI
2015
CUPRINS
Introducere..................................................................... 3
1. ETANOLUL........................................................................................................................ 5
1.1. Zaharificarea si fermentaia simultana.............................................................................. 5
1.2. Conversia microbian direct............................................................................................7
1.3. Fermentaia.......................................................................................................................10
1.4. Etanolul i mediul nconjurtor.........................................................................................11
2. Saccharomyces cerevisiae................................................................................................ 13
2.1.Generaliti.........................................................................................................................14
2.2. Particularitati morfo-fiziologice........................................................................................15
2.3. Utilizari in diferite ramuri ale industriei...........................................................................16
2.4. Model Biologic................................................................................................................ 20
2.5. Compoziie, actiune, indicatii terapeutice, precautii si contraindicatii.............................22
2.6. Factorii care influenteaza dezvoltarea si cresterea drojdiei de bere.................................23
3.Zymomonas mobilis .............................................................................................................31
3.1. Aspecte generale asupra bacteriei Zymomonas mobilis.....................................................31
3.2. Aspecte privind biochimia bacteriei Zymomonas mobilis...............................................32
Concluzii....................................................................................................................................... 35
INTRODUCERE
2
n 1925, Henry Ford a definit etanolul ca fiind combustibilul viitorului". El a mai spus c
acest combustibil va proveni din mere, semine, rumegu, aprope din orice. Exist combustibil
n fiecare materie vegetal care poate fi fermentat. La ora actual ideile vizionare ale lui Henry
Ford pot fi uor de neles.
Sursele de energie alternativ au devenit mai mult dect necesare, nu numai ca urmare a
limitrii resurselor de combustibil fosil. De asemenea, pentru o mai bun utilizare n condiii de
siguran i un
alternative de energie.
Utilizarea bioetanolului ca surs de energie ar fi eficient pentru a completa energia
solar, eolian i alte surse de energie regenerabile intermitente, pe termen lung. n ultimele dou
decenii, progresele tehnologice pentru producerea de etanol din biomas au fost dezvoltate la
nivel industrial. Producia de etanol din biomas cuprinde urmtoarele etape:
Producia de etanol din lume n 2004 a fost estimat la 40 de giga litri (GL). Brazilia i
SUA sunt liderii mondiali, care, mpreun, reprezint aproximativ 60% din producia mondial de
etanol din trestie de zahr i din porumb. n India, biomasa lignocelulozic (reziduurile plantelor
de cultur, din silvicultur, deeurile de fructe, legume i buruieni) este disponibil din belug.
Cel mai important aspect este faptul c producia de bioetanol, fr ndoial, are nevoie de
o abordare economic legat de nevoile globale de combustibil. Cercetrile se ndreapt ctre
proiectarea i mbuntirea procesului, ctre o producie durabil din punct de vedere economic
i fezabil din punct de vedere al transportului.
Pe termen lung, este foarte important nelegerea tehnologiilor de producie a
bioetanolului n termeni de viabilitate economic, de mediu i de oportunitile de ocupare a
forei de munc, nainte de punerea n aplicare a unei politici combustibil - etanol.
Alegerea celei mai bune tehnologii de conversie a lignocelulozei la bioetanol ar trebui s
fie stabilit pe baze economie (cel mai mic cost), de mediu (cel mai puin poluant) i energetice
(mai mare eficien). Optimizarea procesului este nc necesar pentru a face acest proces viabil
din punct de vedere economic.
1.1.
de etanol, fiind necesar o cantitare redus de enzim, deoarece inhibiia prin produsul final,
celobioz i glucoz, formate n timpul hidrolizei enzimatice este anulat de ctre fermentaia
drojdiei. Zaharificarea i fermentaia simultane la nivel industrial, la o rat sczut a hidrolizei
celulozei determin majoritatea microorganismelor folosite pentru obinerea de etanol s
folosesc o cantitate ct mai mare din glucidele disponibile. Pentru a nltura aceast problem,
amestecul enzimatic va fi mai stabil n limite variate de pH i temperatur. Microorganismele ce
sunt utilizate la fermentaii (drojdii i bacterii) sunt capabile s fermenteze substraturile glucidice
C5 i C6. Matthew i colaboratorii au gsit bacterii recombinante productoare de etanol pentru
utilizare industrial, ca Escherichia coli K011, Klebsiella oxytoca i Zymomonas mobilis.
Procesul simultan de zaharificare i fermentaie a fost mbuntit dup includerea cofermentrii
substratului glucidic multiplu prezent n hidrolizate. Aceast nou variant este cunoscut ca
zaharificarea i cofermentaia simultane. Ambele sisteme sunt realizate n acelai reactor,
rezultnd un cost sczut, o cantitate mare de etanol i un timp de procesare scurt.
1.2.
Conversia microbian direct este o metod prin care biomasa celulozic trece la etanol,
n cazul n care etanolul i toate enzimele necesare procesului sunt produse de ctre un singur
organism. Avantajul conversiei microbiene directe este acela c etapa separat de producie a
celulazei nu este necesar. Producia de celulaz contribuie n mod direct la costul procesului de
hidroliz enzimatic. n consecin, conversia microbian direct nu este considerat un proces
alternativ. Aceasta se datoreaz faptului c nu exist izolat un microorganism destul de stabil i
eficient ca s poat produce celulaze, alte enzime i etanol ntr-o cantitate semnificativ. Singh i
Kumar au descoperit c anumite tulpini de Fusarium oxysporum au un potenial nu doar pentru a
converti D xiloza, dar i celuloza la etanol ntr-o singur etap. Separarea Fusarium oxysporum
pentru producerea de etanol a fost realizat n comparaie cu alte microorganisme. Aceste tulpini
includ avantajul produciei de celulaze i fermentrii celulozei, fermentrii pentozei, toleranei la
glucide i etanol. Marele dezavantaj al Fusarium oxysporum este viteza de conversie mic a
glucidelor la etanol comparativ cu drojdiile.
Tabelul 1. Diferite materii prime pentru producia de etanol
Materie prim
Pretratament i
Condiii de
Tulpin microbian
6
zaharificare
fermentaie
utilizat
Batch
Candida shehatae
NCIM3501
Paie de gru
Zaharificare i
fermenteie
simultan,
Hidroliza i
fermentaia
separat
Paie de orez
Auto hidroliz
Batch
Candida shehatae
NCIM3501
Paie de sorg
Enzimatic, autoclavare
Zaharificare i
fermenteie
simultan
Kluyveromyces
marxianus
CECT10875
Resturi de orz
Enzimatic, autoclavare
Zaharificare i
fermenteie
simultan
Saccharomyces
cerevisiae
Floarea soarelui
Enzimatic, autoclavare
Batch
Saccharomyces
cerevisiae var.
ellipsoideus
Frunze de trestie de
zahar
Alcalin
Zaharificare i
fermenteie
simultan
Saccharomyces
cerevisiae NRRL-Y132
Tre de gru
Batch
Saccharomyces
cerevisiae
Coaj de nuci
Hidroliz acid
Batch
Saccharomyces
cerevisiae
Lucern
Ap fierbinte
Zaharificare i
fermenteie
simultan,
Hidroliza i
fermentaia
separat
Candida shehatae
FPL-702
Plop
Hidroliz acid
Continu, celule
imobilizate
Pichia stipitis R
Pin
Hidroliz acid
Batch, continu
Clostridium
thermosaccharolyticu
7
m ATCC 31925
Mesteacn
Hidrolizat acid
Batch
Saccharomyces
cerevisiae
Molid
Fed batch
Saccharomyces
cerevisiae
Salcie
Autoclavare
Batch
Amidon
Lichefiere
Batch, continu,
celule imobilizate
Saccharomyces
diastaticus,
Zymomonas mobilis
Zaharificare i
fermenteie
simultan
Saccharomyces
cerevisiae ATCC
24702
Tescovin uscat de
mere
Deeuri de mere
Extracie suc
Continu, celule
imobilizate
Saccharomyces
cerevisiae ATCC
24553
Deeuri de banan
Extracie suc
Continu
Saccharomyces
uvarum NCIM cultura
3528
Deeuri municipale
solide
Pretratament acid
Batch
Saccharomyces
cerevisiae
Hrtie de ziar
Hidrolizat acid
Batch
Escherichia coli B
Zaharificare i
fermenteie
simultan
Kluyveromices
marxianus,
Saccharomyces
cerevisiae
Deeuri industriale
1.3.
Fermentaia
1.4.
10
2.Saccharomyces cerevisiae
1 Note de curs, Emanuel Vamanu
11
2.1. Generalitati
Berea, vinul, pinea i cozonacii pufoi - c tot se apropie srbtorile -, attea bunti ale vieii,
n-ar fi putut exista fr umila drojdie. n vremuri mai recente, importante studii de biologie
molecular i genetic s-au sprijinit tot pe acest microorganism. Iar clipele de glorie ale drojdiei,
departe de a fi trecut, abia urmeaz s vin: modesta ciuperc microscopic a luat deja parte la
studii de astrobiologie i cine tie ce perspective tiinifice mree i va deschide viitorul...
Dar, mai nti, ce sunt drojdiile? Sunt ciuperci (adic aparin regnului Fungi) unicelulare,
microscopice; se cunosc aproximativ 1.500 de specii. Unele dintre ele sunt patogene (pot produce
mbolnviri), la plante, la animale sau la om: aa sunt, de pild, unele specii de Candida, (ce pot
produce la om infecii fungice numite candidoze) sau Cryptococcus neoformans , care provoac
maladia numit criptococoz, de obicei cu localizare pulmonar, dar care, la pacienii cu SIDA,
poate mbrca i forme foarte grave, cerebrale, determinnd meningite sau encefalite.
Alte drojdii sunt inofensive pentru om - avnd totui roluri importante n ecosistemele n
care triesc - i, n fine, exist i specii de drojdii care aduc omului, n mod direct, foloase
imense. Iar dintre toate, cea mai cunoscut, mai utlizat i mai studiat este buna i vechea
noastr
prieten, drojdia
de
bere,
pe
numele
ei
tiinific Saccharomyces
12
face n bioreactoare de tip air lift. De asemenea, se menioneaz studii de inginerie genetic
care s conduc la o producie superioar de etanol. 3
2.2.
Particularitati morfo-fiziologice
conjugarea,
rezultnd
zigotul
diploid.
Locusul
tipului
de
mperechere
responsabil
pentru
diferenierea
homotalism/heterotalism.
Studiul
14
(extract de drojdie 1%, pepton 2%, glucoz 2% sau K 2HPO4 0,2%, MgSO4 0,1%,
(NH2)SO4 0,1%, autolizat de drojdie 1%) ii sunt utilizate n producia de proteine heteroloage.4
2.3.
Insuirea care ne-o face nou att de util este o particularitate a metabolismului ei: drojdia de
bere triete pe seama substanelor dulci, a zaharurilor, pe care le descompune, cu ajutorul
enzimelor proprii, printr-un proces numit fermentaie alcoolic, din care rezult alcool i dioxid
de carbon. Iar acestui proces i datorm existena n viaa noastr a pinii i a gogoilor, a vinului,
berii i a altor buturi fermentate - o ntreag istorie culinar care face parte integrant din istoria
cultural a omenirii.
Chiar fr s tie nimic despre metabolismul drojdiei, despre celule i detaliile procesului
de fermentaie, oamenii au descoperit de mult c "ceva" fcea berea i vinul s fermenteze, iar
aluatul de pine s creasc. Acel ceva erau drojdiile slbatice, prezente n aer sau pe coaja
bobului de strugure, de fapt mai peste tot n jur, i care, odat ajunse ntr-un mediu prielnic pentru
ele, - unul cu zaharuri multe - ncepeau s fac ceea ce tiu ele s fac: procesul de fermentaie,
descompunnd zaharurile i producnd alcool etilic i dioxid de carbon. Cu timpul, oamenii au
stpnit tot mai bine aceste proces i au renunat n mare msur la drojdiile slbatice, la ora
actual recurgnd, n general, la tulpini selecionate de drojdii, produse industrial, dup un
standard riguros. Dar esena procesului a rmas aceeai, iar drojdiile sunt la fel de utile, economic
i cultural, civilizaiei umane actuale, cum le erau i civilizaiilor vechi, de acum cteva milenii.
Spturile arheologice au scos la iveal dovezi ale utilizrii unor procese de fermentaie
cu drojdii, pentru fabricarea berii i a pinii, nc de acum 4.000 de ani, n Egipt, i indicii ale
fabricrii vinului nc de acum cel puin 6 milenii n Georgia, Armenia, Grecia... Organismul care
fcea posibile aceste procese - drojdia de bere - a fost observat la microscop n 1680 de ctre
Anton van Leeuwenhoek, naturalistul olandez considerat "printele microbiologiei", inventator al
microscopului i primul om care a observat i studiat organisme unicelulare. (Totui, n privina
drojdiei se pare c s-ar fi nelat niel, deoarece, cnd a vzut celulele ei la microscop, a crezut c
nu e vorba despre forme de via. ci despre nite formaiuni globulare oarecare.) Rolul drojdiei n
fermentaie a fost lmurit abia n 1857, de genialul Louis Pasteur, care a explicat n lucrarea
4 http://ebooks.unibuc.ro/biologie/drojdii/3.html
15
Iat cteva dintre utilizrile tradiionale ale drojdiei de bere, precum i cteva dintre cele
mai puin cunoscute. Cele tradiionale se nscriu, n general, n sfera alimentar, n vreme ce
utilizrile mai noi se leag de folosirea drojdiei n studii de biologie celular i molecular i n
cercetri de genetic, precum i de astrobiologie.
Fabricarea vinului se bazeaz pe capacitatea drojdiei de bere de a fermenta zaharurile
prezente n mod natural n zeama de struguri (must), transformndu-le n alcool. Mult vreme
lucrurile au fost lsate n seama naturii, mustul fermentnd datorit drojdiilor sbatice prezente n
aer i pe coaja boabelor de struguri. Dar rezultatele erau imprevizibile, cu toat grija
podgorenilor, cci nu tiai ce specii i ce tulpini de drojdie nimeresc n vin. Astzi, pentru a
controla procesul i a asigura vinurilor o calitate uniform, se folosesc culturi pure de drojdii,
anume selecionate, cu proprieti bine cunoscute; acestea sunt mai "puternice" i suprim
activitatea drojdiilor slbatice, acionnd singure i dnd astfel un rezultat previzibil.
Fabricarea berii are la baz acelai fenomen: maltoza - un zahar prezent n mustul de
bere - trece prin procesul de fermentaie alcoolic, sub aciunea enzimelor specifice din drojdie,
rezultnd alcool i dioxid de carbon.
16
Aici trebuie specificat c la fabricarea berii (ca de altfel i a vinului) se utilizeaz predominant,
dar nu exclusiv, specia Saccharomyces cerevisiae, numit de noi drojdia de bere; n funcie de
tehnologia aleas de fiecare productor, se mai pot utiliza i alte specii de drojdii,
precum Saccharomyces
pastorianus, Saccharomyces
bayanus, Saccharomyces
uvarum (pentru
vin)
beticus, Saccharomyces
i
diferite
specii
din
17
drojdia alimentar (nutritional yeast ) este o drojdie de bere inactivat, apreciat mai
ales de adepii regimului vegetarian sau vegan, care folosesc drept aliment sau
condiment aceti "fulgi de drojdie", cu un gust ce amintete de brnz sau alune. Are
un coninut bogat de vitamine B, de diverse tipuri (dar nu i B12, foarte necesar
organismului; de aceea, uneori se adaug aceast vitamin - sub form sintetic - la
fulgii de drojdie, rezultnd o drojdie alimentar mbogit cu B12)
extractul de drojdie, obinut prin prelucrarea drojdiei de bere cu ajutorul unor enzime
sau prin alte procedee se prezint sub form de lichid, pudr sau past, de culoare
brun i, datorit coninutul su bogat de glutamat, se folosete adesea pentru a
crea gustul umami - unul dintre gusturile recunoscute "oficial" astzi, asociat oarecum
senzaiei gustative date de carne, dnd astfel un gust mai plin, mai biogat, unor
alimente care altfel ar fi mult mai fade. n unele ri se consum n mod obinuit past
pe baz de extract de drojdie, care se unge pe pine (adesea peste unt, fiindc e foarte
srat); un exemplu este Marmite, aliment tradiional n Marea Britanie.5
5 http://www.descopera.ro/stiinta/10405250-drojdia-de-bere-cea-mai-buna-prietena-a-omului
18
2.4.
Model Biologic
Dincolo de aceste utilizri tradiionale, drojdiei de bere i s-au gsit, n timpurile mai recente, i
alte ntrebuinri, n sfera cercetrilor de biologie.Astfel, drojdia de bere este unul dintre
organismele utilizate ca model biologic de ctre oamenii de tiin, pentru a studia organismele
eucariote
Drojdia de bere este foarte uor de cultivat n laborator i este o celul eucariot
simpl,care poate servi drept model pentru nelegerea unor procese biologice precum diviziunea
celular, ciclul
celular, recombinarea
genetic, replicarea
ADN-ului, mutaii
alte
interaciuni dintre gene,metabolismul. Aproximativ 31% dintre genele care exist la drojdia de
bere exist i la om. Multe proteine care exist i n organismul uman i au roluri vitale n celul
(precum proteine implicare n ciclul celular, n procesele de semnalizare celular sau diferite
enzime) au fost descoperite iniial la drojdia de bere.
Fig.76
6 http://www.uwyo.edu/virtual_edge/lab13/fungi_results.htm
19
Un domeniu interesant n care studiile pe drojdie de bere s-au dovedit fundamentale este cel al
biologiei procesului de mbtrnire, iar drojdia s-a dovedit un model foarte bun, cu ajutorul ei
fiind lmurile multe aspecte genetice ale acestui fenomen.
n 1996, drojdia de bere S. cerevisiae a fost primul organism eucariot al crui genom a fost
secveniat integral. Astzi, graie progreselor tehnologiei, acest proces este mai uor de realizat,
ntr-un timp mai scurt (dei nu e simplu nici acum), dar n anii 90 a fost nevoie de o munc
titanic pentru a realiza aa ceva. Timp de 7 ani, peste 100 de laboratoare din lume au muncit
pentru a duce la bun sfrit acest proiect.
Cu cele peste 12 milioane de perechi de baze azotate ale genomului ei, constituind 6.275
de gene, organizate n 16 cromozomi, drojdia de bere era, la vremea respectiv, cel mai complex
organism al crui genom fusese secveniat. (De atunci i pn n 2012, au fost secveniate i
publicate genoamele a peste 30 de specii de drojdii, ca i ale altor organisme mai evoluate. Cel
mai recent succes n domeniu este descifrarea genomului complex al grului, publicat n urm cu
cteva sptmni.)
Iar in 2011, S. cerevisiae a fost inclus printre alte probe de microorganisme trimise n
spaiu la bordul unei capsule spaiale ruseti Fobos-Grunt, n cadrul unui proiect numit Living
Interplanetary Flight Experiment. Scopul experimentului era acela de a afla dac anumite forme
de via terestre ar putea supravieui unei cltorii de mai muli ani prin spaiul cosmic. Era o
modalitate de a studia unul dintre aspectele transpermiei, ipoteza conform creia unele forme de
via ar fi putut supravieui cltoriilor inteplanetare dac ar fi fost protejate n interiorul unior
roci desprinse dintr-o planet, n urma unui impact, i ar fi ajuns pe o alt planet, unde ar fi gsit
condiii bune de dezvoltare. Zborul interplanetar urma s dureze trei ani, la captul crora capsula
urma s fie recuperat i eventualii supravieuitori analizai. N-a ieit chiar cum se ndjduia,
deoarece capsula n-a reuit s ias de pe orbita terestr i a reintrat n atmosfer, angajndu-se
ntr-o prbuire necontrolat, i pierzndu-se n apele Oceanului Pacific, n luna ianuarie a anului
2012.
20
Dar aceasta a fost doar o ncercare, vor urma i altele, poate reuite, iar drojdia de bere va
fi din nou vedeta astrobiologic a acestor studii, lund parte la explorarea cosmosului i devenind
astfel prta (i) la aventura spaial a omenirii.7
2.5.
Substane active importante din drojdia de bere: zaharuri, gluten, peptide (aminoacizi), vitamine
(mai ales vitaminele din grupa B, dar i D, H i E), sruri minerale, protide cu aminoacizi, fosfor,
magneziu, potasiu.Drojdia de bere este foarte bogat n vitaminele din grupa B.Drojdia de bere
are
proprieti
antianemice,
reconstitutive,
antidiabetice,
antimicrobiene,
depurative,
remineralizante, calmante.
Datorit acestor proprieti, drojdia de bere este indicat n oboseal fizic i psihic, n
agitaie i iritabilitate, dar i n intoxicaii alimentare, diabet, ficat grav bolnav. Drojdia de bere
este i un bun fortifiant al nervilor.
Foarte muli specialiti atrag atenia asupra rolului drojdiei de bere n combaterea unor
ageni patogeni intestinali i, din acest motiv, aceasta este folosit n afeciuni intestinale rebele,
precum i pentru refacerea florei intestinale.
Unul dintre cele mai importante domenii n care drojdia de bere are efecte pozitive este
cel al glandelor endocrine. Drojdia de bere contribuie la reechilibrarea activitii acestor glande
i, n consecin, la armonizarea tuturor sistemelor din organismul uman.
7 http://www.descopera.ro/stiinta/10405250-drojdia-de-bere-cea-mai-buna-prietena-a-omului
21
2.6.
pH-ul mediului
8http://www.csid.ro/plante-medicinale-fitoterapice-si-gemoterapice/drojdia-de-beresaccharomyces-cerevisiae-11853999/
11
scderea temperaturii.
Temperatura procesului de cultivare conditioneaz continutul n lipide din compozitia
membranelor celulare. Astfel, membrana drojdiilor psihrofile contine n cantitti mai mari acizi
grasi polinesaturati, cele termofile, acizi grasi mononesaturati, iar cele mezofile acizi mono- si
polinesaturati.
Celulele de drojdie pot suporta temperaturi foarte sczute, pn aproape de zero absolut.
Ele supravietuiesc mai usor la rece ntr-un mediu uscat, dect ntr-unul umed. S-a observat c
prin scderea temperaturii sub limita inferioar de 0 0C se constat o reducere a vitezei de
metabolism. Astfel, prin scderea cu 10 0C sub temperatura minim are loc o scdere cu 50% a
vitezei de metabolizare a substantelor nutritive.
Aceast scdere de activitate se explic prin faptul c, prin reducerea temperaturii are loc
o pliere a lanturilor proteice si mascarea centrilor activi ai enzimelor nct acestea nu mai fac
legtura cu substratul si nu mai ndeplinesc functia de biocatalizatori. La temperaturi sczute, se
11 Hunter si Rose, 1972
25
produc pierderi de ap intracelular, drojdiile trec n stare latent de viat, cnd metabolismul se
desfsoar foarte lent si pot rmne viabile timp ndelungat.
Prin congelare, drojdiile se pot pstra timp nelimitat, deoarece cantitatea de ap liber n
exteriorul si interiorul celulei se reduce, trecnd n stare solid si numai o parte rmnnd
disponibil pentru a fi folosit de celule, nct activitatea celulei este oprit. Campbell a
descoperit c o congelare a drojdiei Saccharomyces cerevisiae suspendat n ap la -300C sau
-500C a distrus 4894 % din celule. Dezghetrile si nghetrile repetate au provocat moartea
celulelor de drojdie. Aceste rezultate au fost confirmate de Baum cu o cultur pur de
Saccharomyces cerevisiae. Efectele multiple ale nghetrii asupra celulelor de drojdie au fost
descrise de Mazur (1966).
Scderea temperaturii de cultivare de la 300C la 150C contribuie la mrirea continutului de
lipide, la 300C el este de 12 %, iar la 15 0C este de 14,5 %. La Saccharomyces cerevisiae, prin
scderea temperaturii de crestere mai jos de optim, se mreste cantitatea de proteine si acizi
ribonucleici, iar cantitatea total de glucide ale celulei scade, n principal, prin scderea
continutului de trehaloz (Cerns, V.G., 1975).
S-a constatat c drojdia obtinut la temperaturi sczute (29300C) este mai bogat n azot
si fosfor si mai rezistent la pstrare. La temperaturi ridicate se nrutteste brusc calitatea
productiei, ca o consecint a faptului c poate avea loc, ocazional, multiplicarea drojdiilor atipice
si a microbiotei bacteriene. Microorganismele contaminante consum substratul, destinat pentru
drojdie, ceea ce conduce la scderea randamentului.
Obtinerea drojdiei de panificatie la temperaturi mai ridicate de 30 0C se face cu acumulare
n celula de drojdie a trehalozei. Acumularea maxim de trehaloz n celule s-a obtinut prin
cultivarea drojdiei la temperaturi de 400C. Cresterea n continuare a temperaturii nu numai c a
oprit considerabil multiplicarea drojdiei, dar a provocat si scderea cantittii de trehaloz n
celule. Mrirea cantittii de trehaloz n celule la temperaturi ridicate de crestere este nsotit de
scderea glicogenului. Viteza de acumulare a alcoolului, de asemenea, creste cu mrirea
temperaturii, atinge un maxim la 400C, dup aceea scade brusc la cresterea mai departe a
temperaturii.
Cresterea temperaturii de cultivare duce la reducerea randamentului n drojdie ca rezultat
al scderii n umiditate si ca o consecint, mrirea consumului de substante nutritive la
fermentare. Prin ridicarea temperaturii de crestere se nrutteste aprovizionarea celulei cu acizi,
26
Umiditatea
Apa este important pentru celula de drojdie nu numai pentru c este principalul
constituent din punct de vedere cantitativ, ea reprezentnd circa 80% din greutatea celulei vii, ci
si pentru c ndeplineste urmtoarele functii (Pirt,1975):
- ca reactant chimic prezent n celul, apa particip la reactiile de hidroliz;
- actioneaz ca solvent pentru metabolitii intracelulari;
- rol mecanic important n mentinerea formei si dimensiunilor celulei impuse de presiunea
hidrostatic care ia nastere n interiorul celulei;
- ndeplineste o functie structural n hidratarea proteinelor si a altor componente celulare.
De exemplu, de gradul de hidratare a mitocondriilor depinde intensitatea proceselor de
fosforilare oxidativ care au loc n aceste organite. Apa particip direct la formarea citoplasmei
celulare, de a crei stare depinde functia sa fiziologic. Formeaz legturi de H si particip la
structura unor compusi macromoleculari12 (Anghel, I. et al., 1993).
Unele reactii chimice, biochimice, enzimatice si n special microbiologice sunt strns corelate cu
umiditatea substratului. n conditiile n care umiditatea scade, se reduce viteza de metabolism,
enzimele trec n stare inactiv si celulele de drojdie se mentin viabile n stare de anabioz.
Drojdiile pot folosi numai apa liber, nelegat de componentii chimici ai mediului si nu
pot folosi apa legat chimic sau fizic. Drojdiile necesit, pentru o dezvoltare normal, o cantitate
de ap liber care s asigure un transfer corespunztor al substantelor nutritive n celul. Marea
12 Anghel, I., et al., 1993 . Biologia si tehnologia drojdiilor, vol.III, Editura Tehnica, Bucuresti
27
majoritate a drojdiilor nu pot s se dezvolte n medii cu indice de activitate al apei (aw) inferior
valorii 0,90, dar exist si drojdii osmotolerante care rezist la presiuni osmotice mai ridicate
corespunztoare unui aw = 0,60.13
Aerarea si agitarea mediului
n procesul de biosintez, aerarea urmreste asigurarea continu a celulei cu oxigen, eliminarea
dioxidului de carbon format care are efect inhibitor asupra procesului de multiplicare, transportul
rapid la celule a substantelor nutritive adugate si mentinerea celulelor n stare de suspensie
(Stoicescu, A., 1985).
Asigurarea necesittii drojdiilor cu oxigenul din aer reprezint o etap de consum
energetic mare n cadrul procesului tehnologic care se reflect n final asupra avantajelor
economice n productia de drojdie. S-a stabilit c, o cauz important a scderii de randament
este insuficienta aerare a mediului de cultur (Dmitriev,D., 1983). La fabricarea drojdiei,
consumul de aer este prevzut ca o norm de productie de consum, la volumul mediului cultural
si este de 50100 m3/1m3 plmad.
Problema principal este asigurarea continu a celulei de drojdie cu oxigen dizolvat n
lichid. S-a luat n considerare, c la 1 kg de melas cu un continut n zahr de 50 % sunt necesari
aproximativ 19 m3 aer.
Randamentul maxim n drojdie s-a obtinut, cnd pentru fiecare gram de zahr folosit a
corespuns 1,6 g (si mai mult) oxigen. La reducerea cantittii de oxigen drojdia obtinut scade
proportional.
Alimentarea cu aer n vasul de cultivare trebuie s se realizeze n concordant cu
alimentarea cu zahr si se urmreste viteza de multiplicare a drojdiei. Perturbarea regimului de
aerare brusc, schimb mersul procesului de dezvoltare al drojdiei, n directia metabolismului
anaerob, cu formare de alcool si alti produsi secundari.
Producerea de biomas scade brusc. n prezenta oxigenului n exces ritmul multiplicrii
celulelor ncepe s scad, iar randamentul se reduce prin mrirea consumului de zahr si formare
de CO2.
13 Dan, Valentina, 1991 . Controlul microbiologic al produselor alimentare,
Universitatea Galati, 1991
28
aceasta, recircularea aerului mbuntteste un indice foarte important pentru activitatea drojdiei,
activitatea maltazic. Eficienta recirculrii aerului s-a exprimat prin cresterea procentului de
celule nmugurite, numrate la un interval de dou ore pentru fiecare generatie (Dmitriev, A.D.,
1982).
O important deosebit o reprezint calitatea aerului, care poate fi o surs de contaminare
n fazele de multiplicare a drojdiilor. De aceea este necesar operatia de filtrare/sterilizare a
aerului nainte de utilizarea lui n procesul tehnologic.
Fig.314
3. Zymomonas mobilis
3.1.
14 http://www.nasa.gov/centers/ames/news/releases/2004/yeast/yeast_prt.htm
30
n numeroase zone tropicale, buturile alcoolice populare, se obin prin procese de fermentaie, la
care particip bacterii aparinnd genului Zymomonas. La mijlocul secolului al XX-lea, Gibbs si
DeMoss au constatat c bacteriile aparinnd genului Zymomonas prezint un catabolism anaerob
al glucozei ce urmeaz calea metabolic Entner-Doudoroff, fiind printre primele exemple de
organisme anaerobe ce utilizeaz o cale metabolic ntlnit strict la bacteriile aerobe. Cele dou
proprieti ale acestei bacterii Gram negative, mobil i cu flageli, respectiv: consumul rapid de
glucoz prin fermentaie alcoolic, capacitatea de a crete la un pH sczut n mediul de cultur,
marea toleran la concentraii de glucoz de pn la 25% i zaharoz (pn la 40%) cu producere
de etanol, au suscitat interes i au sugerat un numr promitor de aplicaii. Pe lng aplica iile
biotehnologice, au fost raportate i o serie de proprieti terapeutice, datorit capacit ii acestor
bacterii de a competiiona cu alte microorganisme patogene
.
3.2.
Zymomonas mobilis este un microorganism care fermenteaz glucoza, fructoza si zaharoza prin
intermediul cii metabolice EntnerDoudoroff considerat cea mai puin eficient din punct de
vedere energetic dintre tipurile de fermentaie. n cursul acestui proces se produce un mol de ATP
per mol de glucoz metabolizat. n contrast cu alte bacterii, se consider c Z. mobilis foloseste
un sistem de difuzie facilitat, cu o protein transportor pentru glucoz (GLF) de tip uniport, ce
nu utilizeaz energie metabolic, fapt deosebit de avantajos n condiiile cresterii cu glucoz drept
singur surs de carbon.
Metabolismul zaharozei: La Z. mobilis, transportul prin membran a zaharozei nu
necesit un sistem de asimilare datorit faptului c aceasta este clivat extracelular, iar unit ile
sale componente (glucoza si fructoza) sunt ulterior preluate n celul prin intermediul unui sistem
de difuzie facilitat. Datorit ratei crescute de transport a glucozei si a fructozei, echilibrul ntre
concentraia extern si cea intern de zaharuri se poate realiza rapid ceea ce conduce la ajustarea
i compensarea presiunii osmotice.
Aerotolerana la Z. mobilis: Proprietatea de a crete n prezena oxigenului
(aerotolerana) este datorat, n parte, prezenei lanului respirator, dar si a existen ei unor enzime
antioxidante ca superoxid dismutaza si catalaza. La concentraii mai mari de glucoz i n
31
prezen de aer, oxigenul poate induce inhibiia procesului de crestere bacterian, urmat de
direcionarea cilor metabolice spre acumulare de acetaldehid. Acest fenomen se datoreaz unei
concentraii mai sczute de NADH realizat n procesul de producere al etanolului. Desi se
cunoaste faptul c lanul respirator conine citocromi b, c si d, compoziia si funciile sale nu sunt
pe deplin elucidate. Pe lng NADH oxidaze, Z. mobilis posed i o serie de enzime membranare
NADPH dependente cu funcii similare: o glucozo oxidaz care necesit piroloquinolin n actul
catalitic, o ubiquinon oxidoreductaz si o D-lactat oxidaz.
Hopanoizi. Coninut i semnificaie: Datorit similitudinii lor cu sterolii, rolul lor este
de a stabiliza membrana bacterian. Fiind compui foarte stabili, hopanoizii sunt greu degrada i.
Se consider c hopanoizii prezeni la Z. mobilis au rolul de a contracara efectele negative induse
de prezena produilor metabolici (etanolului) la nivelul membranei celulare bacteriene,
permind astfel tolerarea unor concentraii mari de alcool. n plus, aceti steroizi joac un rol
important n semnalizarea celular i inducia proteinelor de stres.
Osmotolerana bacteriei Zymomonas mobilis: Majoritatea tulpinilor bacteriene din
specia Z. mobilis sunt apte s se dezvolte n prezena unor concentraii mari de zaharoz, ceea ce
conduce la diminuarea concentraiei de ap ca solut n mediul de cultur. Astfel, se instaleaz o
presiune osmotic, comparabil cu cea produs de soluiile saline concentrate. Paradoxal,
intolerana bacteriei fa de sruri nu se datoreaz nivelelor mari ale presiunii osmotice, ci unor
efecte specifice ale electroliilor prezeni n mediul de cultur. Transportul facilitat uniport,
mediat de un transportor de mare afinitate, al glucozei, reprezint una dintre ipotezele valabile
pentru a explica tolerana bacteriei Z. mobilis la concentraii crescute de glucoz. Astfel,
concentraia de glucoz intracelular atinge rapid un nivel crescut fa de concentraia extern de
zaharuri i se realizeaz un echilibru ntre concentraiile de zaharuri intra i extracelulare. Aceasta
balana este meninut pe de alt parte i de afinitatea crescut a enzimelor glicolitice
fa de substratele lor.
Rspunsul bacteriei Zymomonas mobilis la diferite condiii de cretere
Cresterea si rspunsul celular fa de diferite condiii de crestere depinde de tulpinile
bacteriene. Z. mobilis tolereaz valori ale pH cuprinse ntre 3,4-7,5. Prezena unor sruri n
mediul de cultur (cianur de potasiu, clorur de sodiu) induce rezisten/sensibilitate la tulpinile
32
studiate. Unele tulpini posed o bun toleran fa de compusi precum oxgal (0,2%), 2,3,5trifenilterazoliu (0,1%), sulfat de cadmiu (0,001%), dioxid de sulf 0,05%. De asemenea,
Z.mobilis posed capacitatea de a reducere HgCl2.
Rspunsul bacteriei Z. mobilis la prezena unor ageni antimicrobieni
Un
numr
mare
de
tulpini
bacteriene
au
manifestat
un
grad
ridicat
de
15 Obtinerea, caracterizarea i efectele biologice ale unor polizaharide microbiene , Cristina Sturzoiu,
2012,Bucuresti
33
Fig.416
16 http://moonshinemakers.pbworks.com/w/page/50220188/FrontPage
34
Fig.517
CONCLUZII
n comparaie cu drojdia, bacteria are o serie de avantaje care o fac mai des utilizat la nivel
industrial, cum ar fi:
-
17 http://aragec.com/zymomonas.html
18 Note de curs, Emanuel Vamanu
35
A.
B.
BIBLIOGRAFIE
1.Anghel, I., et al., 1991 . Biologia si tehnologia drojdiilor, vol.II, Editura Tehnic, Bucuresti
2.Anghel, I., et al., 1993 . Biologia si tehnologia drojdiilor, vol.III, Editura Tehnica, Bucuresti
3.Dan, Valentina, 1991 . Controlul microbiologic al produselor alimentare, Universitatea Galati,
1991
4.Esteghlalian, A., Hashimoto, A.G., Fenske, J.J., Penner, M.H. (1997) Modeling and
optimization of the dilute-sulfuric-acid pretreatment of corn stover, poplar and switchgrass.
Bioresource Technology
19 Note de curs, Emanuel Vamanu
20 openclipart.org.
37
5.Kim, T.H., Kim, J.S., Sunwoo, C., Lee, Y.Y. (2003) Pretreatment of corn stover by aqueous
ammonia. Bioresource Technology
6.Kohl, S. (2003, 2004) Technical Connections. Ethanol today
7.McMillan, J.D. (1997) Bioethanol production: status and prospects. Renewable Energy
8.Nigam, J.N. (2000) Continuous ethanol production from pineapple cannery waste using
immobilized yeast cell. Journal of Biotechnology
9.Niven, R.K. (2005) Ethanol in gasoline: environmental impacts and sustainability review
article.Renewable and Sustainable Energy Reviews
10.Note de curs, Emanuel Vamanu
11.Pimental, D., (2003) Ethanol Fuels: Energy Balance, Economics, and Environmental Impacts
are Negative. Natural Resources Research
38
16.http://aragec.com/zymomonas.html
17.http://www.descopera.ro/stiinta/10405250-drojdia-de-bere-cea-mai-buna-prietena-a-omului
18. http://ebooks.unibuc.ro/biologie/drojdii/3.html
19.http://www.uwyo.edu/virtual_edge/lab13/fungi_results.htm
20.http://www.csid.ro/plante-medicinale-fitoterapice-si-gemoterapice/drojdia-de-beresaccharomyces-cerevisiae-11853999/
21.http://www.nasa.gov/centers/ames/news/releases/2004/yeast/yeast_prt.htm
22. openclipart.org.
39