Rponse varitale du mas face la diversit

des souches de Fusarium verticillioides et de

Fusarium proliferatum.
Varietal response of maize face to the diversity of Fusarium
verticillioides and Fusarium proliferatum strains.
Pradel, Benoist (1) ; Barreau, Christian (2) ; Brygoo, Yves (3)
(1) LIMAGRAIN VERNEUIL HOLDING, Domaine de Mons, B.P.
n115, F-63203 Riom cedex ml : benoist.pradel@limagrain.com
(2) INRA U.R. INRA 1264 - Mycologie et Scurit des Aliments
(MycSA) Ple Qualis, 71 avenue Edouard Bourleaux, B.P. n 81, F-33883
Villenave dOrnon Cedex ml : cbarreau@bordeaux.inra.fr
(3) INRA PMDV- Route de St Cyr, F-78028 Versailles cedex
ml : brygoo@versailles.inra.fr
Rsum
A partir dune collecte dpis de mas fusari issus de champs contamins
naturellement dans les rgions Midi-Pyrnes, Aquitaine, Poitou-Charentes
et Sud Finistre, lINRA a isol plus de 60 souches de Fusarium du
complexe Moniliforme. 75 % dentre elles sont des Fusarium verticillioides,
20 % sont des Fusarium proliferatum et le restant concerne des espces
minoritaires de Fusarium comme F. poae, F. equiseti.
Dix dentre elles ont fait lobjet dune tude dagressivit. Pour ce faire, un
panel de varits de mas a t choisi en fonction de leur sensibilit ou de
leur tolrance connue aux Fusarium spp. ainsi quen contrles, une ligne
rsistante et une ligne sensible.
A partir dinfection artificielle de chaque souche sur le panel, on retrouve
quelque soit la souche, la sensibilit ou la tolrance des varits tmoins,
de mme chez les deux lignes contrles. Cependant, deux souches B et F
ont montr le plus dagressivit, occasionnant une plus grande svrit sur
pi face aux autres souches, sans pour autant contourner la rsistance des
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varits tmoins. Les dix souches testes prsentent une mme virulence.
Seule lagressivit diffre chez deux dentre elles.
Des dosages de fumonisines ont t effectus. Ils rvlent quen test
artificiel dinfection, on obtient des teneurs trs leves. Le panel de
sensibilit est respect savoir que la varit la plus sensible accumule le
plus de fumonisines comme la ligne contrle sensible, et inversement la
varit la plus rsistante accumule le moins de fumonisines comme la
ligne contrle rsistante.
Toutefois, on note que trois des dix souches (C, G, J) produisent moins de
fumonisines malgr leur forte virulence sur les varits sensibles. Par
consquent, il n'y a pas de liaison directe (corrlation) entre une valeur de
svrit de la maladie et la teneur en fumonisines.
Une varit peu sensible la fusariose pi, peut nanmoins accumuler des
fumonisines si la souche du milieu a un fort pouvoir toxinogne, et
inversement, un pi fusari naccumule pas systmatiquement des
fumonisines si la souche du milieu est peu toxinogne.
Mots cls : Mas, fusariose, Fusarium spp., souche, pouvoir toxinogne,
pouvoir pathogne, fumonisine.

Abstract
Samples of maize ears rotten by Fusarium spp. were collected from
naturally infected fields in French regions as Midi-Pyrnes, Aquitaine,
Poitou-Charentes and Southern of Finistre. More than 60 Fusarium
strains of the Gibberella fujikoroi complex, were isolated by INRA. 75 % of
them belong to Fusarium verticillioides, 20 % belong to Fusarium
proliferatum and a few percents gather any minority strains of Fusarium as
F. poae, F. equiseti.
An aggressiveness study was done on ten of them. To do that, a panel of
maize varieties was chosen in function of their susceptibility or tolerance
known to Fusarium spp., and as controls, a resistant inbred line and a
susceptible one.
From artificial contamination of each strain on the panel, we recovered the
susceptibility or tolerance among the varieties, and for the two inbred lines,
as well. However, two strains B et F showed the most aggressiveness,
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resulting in a highest severity on ear versus others strains, but without

overcoming the resistant varieties. The ten strains have the same virulence
but only aggressiveness differs in two strains.
Fumonisins dosages were performed on each infected varieties. The panel
was respected namely the more susceptible variety got the highest level of
fumonisins as well as the susceptible inbred line, inversely the more
resistant variety got the lowest level of fumonisins as well as the resistant
inbred line.
Nevertheless, we remark three of the ten strains (C, G, J) produce less
fumonisins despite their strong virulence on the susceptible varieties.
Consequently, there is not direct link (correlation) between a severity value
and the fumonisin level.
A resistant or moderately resistant variety to Fusarium ear rot can
accumulate fumonisins if the strain of the field is highly toxinogenic and
inversely, a Fusarium-infected ear doesnt accumulate consistently
fumonisins if the strain of the field is poorly toxinogenic.
Keywords: Maize, corn, strain, toxinogenic strain, severity, Fusarium,
fumonisin.

Introduction
En 2007, la rcolte du mas sera soumise des prlvements de benne de mas sorti champ
qui constitueront des lots analyser pour connatre leur teneur en mycotoxines, en
particulier en fumonisines B1 et B2. En effet, les rglementation europenne applicable
dans les pays de lUE impose des seuils ne pas dpasser sur la matire premire vgtale
telle que les crales, base des aliments pour les animaux et lhomme (Directive UE
n1881/2006). La slection de mas rsistant aux attaques de Fusarium du complexe
moniliforme est une voie privilgier (Robertson et al., 2006). Des varits de mas les
plus tolrantes montrent des teneurs en mycotoxines les plus basses, du moins infrieures
aux seuils rglementaires. Cependant, il nest pas rare de rencontrer des varits de mas
qui semblent saines cest--dire sans symptmes de pourriture fusarienne sur pi mais
parfois charges de fumonisines dans les grains. Linverse existe galement dans la nature
(Munkvold et al., 2003). Les interactions mas Fusarium restent tre lucides. La
caractrisation des souches de Fusarium spp., leur virulence (capacit du pathogne
parasiter une plante-hte) et leur agressivit (capacit du pathogne dvelopper
rapidement la maladie dans la plante-hte) doivent au pralable tre tudies (Mul et al.,
2005). Il ny a pas de rsistance totale aux pourritures fusariennes ni aux accumulations de
fumonisines. La rsistance gntique du mas semble polygnique avec parfois de faibles
hritabilits (Prez-Brito et al., 2001). Nanmoins, le germplasm lite et exotique du mas
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offre des perspectives damlioration en slection classique ou assiste par marqueurs

(Clements et al., 2004 and Schaafsma et al., 2006). Aussi, il est galement important de
bien connatre le potentiel infectieux (pouvoir pathogne et pouvoir toxinogne) des
souches fusariennes pour privilgier telle ou telle rsistance qui semble la plus stable et la
plus durable possible. On se propose ici dtudier dix souches dorigine gographique
diverse, et par inoculation artificielle sur un panel de mas, de caractriser leur virulence et
agressivit.

Matriel et mthodes
A lautomne 2004, une collecte d'chantillons d'pi de mas fusaris naturellement
contamins a t ralise partir du rseau exprimental de Limagrain. Trois rgions ont
t cibles du fait de leur importance en activit masicole : les rgions Midi-Pyrnes,
Aquitaine et Sud Bretagne. Aprs schage, les pis ont t expdis au laboratoire INRA de
Versailles (INRA-PMDV) pour une caractrisation molculaire des souches prsentes sur
les grains. Aprs isolement, les souches ont t caractrises. Une dizaine de souches a t
choisie et multiplie (Tableau 1 et 2) lINRA MycSA pour les exprimentations 2005 et
2006 en plein champ.
Souches INRA

Chteaulin
(29)

A : S1338

B : S1340

Lavelanet
(09)

C : S1273

D : S1274

Maubourguet
(32)

E : S1313

Meilhan
(40)

Marmande
(47)

Souprosse
(40)

F : S1281

G : S1257

H : S1324

I : S1316

J : S1258

Tableau 1. Dtails des dix souches du complexe "moniliforme" isoles en 2005 (INRA MycSA)

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362

proliferatum

1X10

1203

C: S1273

354

verticillioides

1X10

5130

D: S1274

355

verticillioides

1X10

3260

E: S1313 Remplace par K

358

verticillioides

4874

F: S1281 Remplace par L

357

verticillioides

na

G: S1257

350

verticillioides

1X10

na

H: S1324

360

verticillioides

1X10

2057

I:S1316

359

verticillioides

1X10

na

J: S1258

351

verticillioides

1X10

na

K: INRA 367

367

proliferatum

1X10

2696

L: INRA 415

415

proliferatum

1X10

1059

Souprosse (40)

4572

B: S1340

(47)

Marmande

1X10

Meilhan (40)

verticillioides

(65)

361

Maubourguet

Lavelanet (09)

A: S1338

(29)

Inoculum

Chteaulin

Code INRA
MycSA

Espce
Fusarium

Production
Fumonisine in
vitro (ppb)

Souches INRA VERSAILLES

x
x
x
x
x
x

Tableau 2. Dtails des dix souches du complexe "moniliforme" isoles en 2006. Les souches
verticillioides E et F ont t remplaces par 2 souches proliferatum K et L (INRA MycSA)

En 2005 sur la station de Recherche Limagrain Marmande puis en 2006 sur la station de
Recherche Limagrain Nrac, les tests d'agressivit des 10 souches de Fusarium section
Liseola ont t raliss selon le protocole suivant :

Semis de varits de mas pour exprimentation pathologique

- Bloc Fisher 2 rptitions randomises
- une varit tolrante : Var #1
- une varit intermdiaire : Var #2
- une varit sensible : Var #3
- une ligne sensible : Lig S
- une ligne rsistante : Lig R

Protection contre les Pyrales et Ssamies

Contamination artificielle des pis et notation (selon Reid et al., 1996)

- inoculum compos dune des dix souches de Fusarium section Liseola.
- concentration 5 x 105 spores / ml
- 2 ml dinoculum inject dans le canal des soies laide dune seringue
- notation de la svrit de la fusariose sur les pis en utilisant une chelle
de svrit usite (Figure 1).

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Figure 1. Echelle de svrit de la Fusariose Epi du mas (1=rsistant, 7=trs sensible)

(Daprs Reid et al., 1996)

Aprs notations, les pis infests ont t rcolts, schs, grens (Humidit du grain
infrieure 15 %). Une srie de dosages ELISA des fumonisines a t effectue sur la base
de farine des grains rcolts de chaque modalit (modalit = une varit, une souche, une
rptition). (kits R-biopharm / Ridascreen).

Rsultats
1. Agressivit des souches
Suite la collecte dchantillons de mas naturellement fusaris, 68 souches ont t isoles
par lINRA-PMDV. Les Fusarium du complexe Moniliforme prdominent : 20 sont
verticillioides, 17 sont proliferatum, 1 est subglutinans. Les autres souches sont
indtermines phylogntiquement mais nanmoins proches du clade moniliforme.
Dix dentre elles (Tableaux 1 et 2) ont t values pour leur agressivit.
En 2005 comme en 2006, le profil de sensibilit est conforme celui que lon connat des
trois varits de mas slectionnes pour ltude, quelle que soit la souche : la varit #1
reste toujours la plus tolrante et la varit #3 la plus sensible. Il en est de mme pour les
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deux lignes tmoins . La ligne connue rsistante est parfaitement rsistante, la ligne
connue sensible, reste sensible face aux dix souches (Figures 2 et 3).
7

Note Fusariose Epi (1=rsistant)

5
A
B
C
D
E
F
G
H
I
J

0
LIG R

LIG S

Var#1

Var#2

Var#3

Figure 2. Test d'agressivit des souches (A J) de Fusarium moniliforme sur les pis de trois varits
commerciales, dune ligne rsistante et dune ligne sensible
Contamination artificielle des pis Nrac 2006

Note Fusariose Epi (1=rsistant) cumule

60

Cumul des notes

de svrit par
souche

50

40

J
I
H
G
F
E
D
C
B
A

30

20

10

0
LIG R

LIG S

Var#1

Var#2

Var#3

Figure 3. Test d'agressivit des souches (A J) de Fusarium moniliforme sur les pis de trois varits
commerciales, dune ligne rsistante et dune ligne sensible
Contamination artificielle des pis Nrac 2006
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En 2005, La souche A (S1338) semblait la plus agressive en termes de svrit de

pourriture sur pi. En 2006, ce sont les souches B (S1340) et F (INRA415) qui montraient
le plus dagressivit, occasionnant une plus grande svrit sur pi face aux autres souches
(Figure 4. Histogramme empil = cumul des notes de svrit par souche).

25.0

20.0
6.1

5.5

15.0
5.3

1.0

5.8

1.0

1.6

5.7
4.6

5.5

10.0
4.2

1.0

1.0

3.1

3.9

5.0

4.9
0.0

5.1

5.4

1.6

1.7

4.6

4.7

1.0

1.0

3.0

3.4

2.5

1.2

1.1

2.1

4.2

4.4

4.2

1.0

4.6
2.8

1.5

4.9

5.3

3.8
1.1

6.0

4.7

1.0

5.1

5.3

1.0
2.8
1.4

5.0

LIG S

5.3

5.5

4.6

5.7

5.8

6.1

4.7

5.5

6.0

4.9

LIG R

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.6

1.0

1.0

1.0

1.0

Var#2

4.2

5.1

3.1

3.9

4.6

5.3

3.0

3.4

2.5

2.8

Var#1

1.1

3.8

1.5

1.6

1.7

2.8

1.2

1.1

2.1

1.4

Var#3

4.9

5.1

5.4

4.6

4.7

5.3

4.2

4.4

4.2

5.0

Figure 4. Test d'agressivit des souches (A J) de Fusarium moniliforme sur les pis de trois varits
commerciales, dune ligne rsistante et dune ligne sensible
Contamination artificielle des pis Nrac 2006

Curieusement, ce sont ces deux mmes souches (B et F) qui ont le potentiel de production
de fumonisines in vitro le plus bas (Tableau 2. donnes INRA MycSA) 1203 ppb et 1059
ppb respectivement. Lanalyse ANOVA confirme une diffrence significative dagressivit
entre les souches B et F, et les souches A, C, D, E, G, H, I et J.

2. Pouvoir toxinogne des souches

Afin de confirmer le pouvoir toxinogne des dix souches, des prlvements dpis sur
chaque varit ont t faits. Compte-tenu de la nature des Fusarium, seules les fumonisines
ont t doses par test ELISA.
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A l'instar des notations des pis (note de svrit) sur chaque varit, les teneurs en
fumonisines confirment les premiers rsultats de 2005 savoir que la varit 1 reste bien
tolrante au Fusarium et aux fumonisines quelle que soit la souche, la varit 2 demeure
intermdiaire et la varit 3 est sensible toutes les souches et accumule le plus de
fumonisines. La ligne Rsistante reste rsistante quelque soit la souche et son potentiel
fumonisines, la ligne sensible reste trs sensible quelle que soit la souche (Figures 5 et 6).

Teneur en Fumonisines (ppm)

250

200

150

100

50

Var #1

Var #2

Var #3

Figure 5. Production de Fumonisines en fonction des souches (A J) de Fusarium moniliforme sur

pis de trois varits commerciales - Contamination artificielle des pis - Marmande 2005

Ct souche, le cumul des teneurs en fumonisines par varit, montre que les souches C, G
et surtout J sont les souches les moins toxinognes alors qu'elles produisent des niveaux
d'infection et de pourriture importante chez les varits intermdiaire et sensible (Figure 6).

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1600

cumul des teneurs en fumonisines par varit

1400

1200

1000

800

600

400

200

Var #3

216

293

168

154

453

230

98

55

140

39

Var #2

103

124

53

147

256

208

46

122

70

12

Var #1

74

231

35

45

159

92

39

40

56

Lig S

691

272

153

301

482

272

123

396

318

45

Lig R

87

25

21

68

91

50

10

19

51

Figure 6. Production de fumonisines B1-B2 des souches (A J) de Fusarium moniliforme sur les pis
de trois varits commerciales, dune ligne rsistante et dune ligne sensible
Contamination artificielle des pis Nrac 2006

Par consquent, il n'y a pas de liaison directe (corrlation) entre une valeur de svrit de la
maladie et la teneur en fumonisines.
Une varit peu sensible la fusariose pi, peut nanmoins accumuler des fumonisines si la
souche du milieu a un fort pouvoir toxinogne, et inversement, un pi fusari naccumule
pas systmatiquement des fumonisines si la souche du milieu est peu toxinogne.
Cette conclusion est identique celle de l'anne 2005.

Discussion
Au cours de ces deux annes dexprimentation en plein champ, le panel de varits rpond
sans surprise aux dix souches de Fusarium collectes et isoles en 2005. Quelle que soit la
souche, le profil de sensibilit ou de tolrance des varits nest pas remis en cause.
Cependant, il est remarquable de noter limportance de la notion dagressivit de certaines
souches qui occasionnent davantage de pourriture sur les pis. Les dosages fumonisines
montrent quil n'y a pas de liaison directe (corrlation) entre une valeur de svrit de la
maladie et la teneur en fumonisines.
Lutilisation de gnes de rsistance aux Fusarium est la voie privilgier en slection.
Couple de bonnes pratiques culturales, le risque daccumulation de mycotoxines dans les
grains est fortement rduit.
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Remerciements
Etude ralise avec le soutien financier du Ministre de lEnseignement Suprieur et de la
Recherche, Direction Gnrale de la Recherche et de lInnovation, dans le cadre du projet
de Recherche RARE Fusariotoxines 2003-2006 .
Remerciements aux exprimentateurs de Limagrain des stations de Marmande et de Nrac
pour leur contribution la mise en place des essais, des inoculations et des notations.

Rfrences
Clements M.J. et al., 2004. Sources of resistance to fumonisin accumulation in grain and
Fusarium ear and kernel rot of corn, Phytopathology, 94, p.251-260.
Mul G., et al., 2005. Advances in molecular diagnosis of toxigenic Fusarium species: A
review, Food Additives and Contaminants, 22(4), p316 323.
Munkvold G., 2003. Epidemiology of Fusarium diseases and their mycotoxins in maize
ears, European Journal of Plant Pathology, 109, p.705-713.
Prez-Brito D. et al., 2001. QTL mapping of F. moniliforme ear rot resistance in Highland
maize, Mexico, Agrociencia, 35, p.181-196.
Reid L.M. et al., 1996. Screening maize for resistance to Gibberella ear rot. Agriculture
Agri-Food Can. Tech. Bull. 1996-5E.
Robertson L.A. et al., 2006. Heritabilities and Correlations of Fusarium Ear Rot Resistance
and Fumonisin Contamination Resistance in Two Maize Populations, Crop Sci., 46,
p.353361.
Schaafsma A.W. et al., 2006. Fumonisin B1 accumulation and severity of fusarium ear rot
and gibberella ear rot in food-grade corn hybrids in Ontario after inoculation according
to two methods, Canadian Journal of Plant Pathology, 28(4), p.548-557.

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