LAS ENZIMAS

son molculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones

qumicas,
siempre que sean termodinmicamente posibles: una enzima hace que una
reaccin qumica que es energticamente posible ,pero que transcurre a
una velocidad muy baja, sea cinticamente favorable, es decir, transcurra a
mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas reacciones, las
enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se
convierten en molculas diferentes denominadas productos. Casi todos los
procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas
significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las
denomina reacciones enzimticas.
Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y
su velocidad crece solo con algunas reacciones, el conjunto (set) de enzimas
presentes en una clula determina el tipo de metabolismo que tiene esa clula.
A su vez, esta presencia depende de la regulacin de la
expresin gnica correspondiente a la enzima.
Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energa
de activacin (G) de una reaccin, de forma que la presencia de la enzima
acelera sustancialmente la tasa de reaccin. Las enzimas no alteran el balance
energtico de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el
equilibrio de la reaccin, pero consiguen acelerar el proceso incluso en escalas
de millones de veces. Una reaccin que se produce bajo el control de una
enzima, o de un catalizador en general, alcanza el equilibrio mucho ms
deprisa que la correspondiente reaccin no catalizada.
Al igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas en
las reacciones que catalizan, ni alteran su equilibrio qumico. Sin embargo, las
enzimas difieren de otros catalizadores por ser ms especficas. La gran
diversidad de enzimas existentes catalizan alrededor de 4000 reacciones
bioqumicas distintas. No todos los catalizadores bioqumicos son protenas,
pues algunas molculas de ARN son capaces de catalizar reacciones (como la
subunidad 16S de los ribosomas en la que reside la actividad peptidil
transferasa). Tambin
cabe
nombrar
unas
molculas
sintticas
denominadas enzimas artificiales capaces de catalizar reacciones qumicas
como las enzimas clsicas.
La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras molculas.
Los inhibidores enzimticos son molculas que disminuyen o impiden la
actividad de las enzimas, mientras que los activadores son molculas que
incrementan dicha actividad. Asimismo, gran cantidad de enzimas requieren
de cofactores para su actividad. Muchas drogas o frmacos son molculas
inhibidoras. Igualmente, la actividad es afectada por la temperatura, el pH,
la concentracin de la propia enzima y del sustrato, y otros factores fsicoqumicos.
Muchas enzimas son usadas comercialmente, por ejemplo, en la sntesis
de antibiticos o de productos domsticos de limpieza. Adems, son
ampliamente utilizadas en diversos procesos industriales, como son la
fabricacin
de alimentos,
destincin
de vaqueros o
produccin
de biocombustibles

ESTRUCTURAS Y MECANISMOS
Las enzimas son generalmente
protenas globulares que pueden
presentar tamaos muy variables,
desde 62 aminocidos como en el
caso
del monmero de
la 4oxalocrotonato tautomerasa,16 hasta
los 2500 presentes en la sintasa de
cidos grasos.
Las actividades de las enzimas vienen
determinadas por su estructura
tridimensional, la cual viene a su vez
determinada por la secuencia de
aminocidos. Sin embargo, aunque la
estructura determina la funcin,
predecir
una
nueva
actividad
enzimtica basndose nicamente en la estructura de una protena es muy
difcil, y un problema an no resuelto.
Casi todas las enzimas son mucho ms grandes que los sustratos sobre los
que actan, y solo una pequea parte de la enzima (alrededor de 3 a
4 aminocidos) est directamente involucrada en la catlisis. La regin que
contiene estos residuos encargados de catalizar la reaccin es
denominada centro activo. Las enzimas tambin pueden contener sitios con la
capacidad de unir cofactores, necesarios a veces en el proceso de catlisis, o
de unir pequeas molculas, como los sustratos o productos (directos o
indirectos) de la reaccin catalizada. Estas uniones de la enzima con sus
propios sustratos o productos pueden incrementar o disminuir la actividad
enzimtica, dando lugar as a una regulacin por retroalimentacin positiva o
negativa, segn el caso.
Al igual que las dems protenas, las enzimas se componen de una cadena
lineal de aminocidos que se pliegan durante el proceso de traduccin para dar
lugar a una estructura terciaria tridimensional de la enzima, susceptible de
presentar actividad. Cada secuencia de aminocidos es nica y por tanto da
lugar a una estructura nica, con propiedades nicas. En ocasiones, protenas
individuales pueden unirse a otras protenas para formar complejos, en lo que
se denominaestructura cuaternaria de las protenas.
La mayora de las enzimas, al igual que el resto de las protenas, pueden ser
desnaturalizadas si se ven sometidas a agentes desnaturalizantes como
el calor, los pHs extremos o ciertos compuestos como el SDS. Estos agentes
destruyen la estructura terciaria de las protenas de forma reversible o
irreversible, dependiendo de la enzima y de la condicin. Una consecuencia de
la desnaturalizacin es la prdida o merma de la funcin, de la capacidad
enzimtica.

ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS

Las enzimas suelen ser muy especficas tanto del tipo de reaccin que
catalizan como del sustrato involucrado en la reaccin. La forma, la carga y las
caractersticas hidroflicas/hidrofbicas de las enzimas y los sustratos son los
responsables de dicha especificidad. La constante de especificidad, es una
medida de la eficiencia de una enzima, ya que la velocidad de la reaccin se
encuentra directamente relacionada con la frecuencia con la que se encuentran
las molculas de enzima y sustrato. Las enzimas tambin pueden mostrar un
elevado grado de estereo especificidad,regioselectividad y quimioselectividad.
Algunas de estas enzimas que muestran una elevada especificidad y precisin
en
su
actividad
son
aquellas
involucrados
en
la replicacin y expresin del genoma. Estas enzimas tienen eficientes
sistemas de comprobacin y correccin de errores, como en el caso de la ADN
polimerasa, que cataliza una reaccin de replicacin en un primer paso, para
comprobar posteriormente si el producto obtenido es el correcto. Este proceso,
que tiene lugar en dos pasos, da como resultado una media de tasa de error
increblemente baja, en torno a 1 error cada 100 millones de reacciones en
determinadas polimerasas de mamferos. Este tipo de mecanismos de
comprobacin tambin han sido observados en laARN polimerasa, en la ARNt
aminoacil sintetasa y en la actividad de seleccin de los aminoacil-tRNAs.
Aquellas enzimas que producen metabolitos secundarios son denominadas
promiscuas, ya que pueden actuar sobre una gran variedad de sustratos. Por
ello, se ha sugerido que esta amplia especificidad de sustrato podra ser clave
en la evolucin y diseo de nuevas rutas biosintticas.
Modelo de la "llave-cerradura
Las enzimas son muy especficas, como sugiri Emil Fischer en 1894. Con
base a sus resultados dedujo que ambasmolculas, la enzima y su sustrato,
poseen complementariedad geomtrica, es decir, sus estructuras encajan
exactamente una en la otra, por lo que este modelo ha sido denominado como
modelo de la "llave-cerradura", refirindose a la enzima como a una especie
de cerradura y al sustrato como a una llave que encaja de forma perfecta en
dicha cerradura. Una llave solo funciona en su cerradura y no en otras
cerraduras. Sin embargo, si bien este modelo explica la especificidad de las
enzimas, falla al intentar explicar la estabilizacin del estado de transicin que
logran adquirir las enzimas.
MECANISMOS
Las enzimas pueden actuar de diversas formas, como se ver a continuacin,
siempre dando lugar a una disminucin del valor de G:32

Reduccin de la energa de activacin mediante la creacin de

un ambiente en el cual el estado de transicin es estabilizado (por ejemplo,
forzando la forma de un sustrato: la enzima produce un cambio de
conformacin del sustrato unido el cual pasa a un estado de transicin, de

modo que ve reducida la cantidad de energa que precisa para completar la

transicin).

Reduciendo la energa del estado de transicin, sin afectar la forma del

sustrato, mediante la creacin de un ambiente con una distribucin de
carga ptima para que se genere dicho estado de transicin.

Proporcionando una ruta alternativa. Por ejemplo, reaccionando

temporalmente con el sustrato para formar un complejo intermedio
enzima/sustrato (ES), que no sera factible en ausencia de enzima.

Reduciendo la variacin de entropa necesaria para alcanzar el estado

de transicin (energa de activacin) de la reaccin mediante la accin de
orientar correctamente los sustratos, favoreciendo as que se produzca
dicha reaccin.

Incrementando la velocidad de la enzima mediante un aumento

de temperatura. El incremento de temperatura facilita la accin de la enzima
y permite que se incremente an ms su velocidad de reaccin. Sin
embargo, si la temperatura se eleva demasiado, la conformacin estructural
de la enzima puede verse afectada, reduciendo as su velocidad de
reaccin, y solo recuperando su actividad ptima cuando la temperatura se
reduce. No obstante, algunas enzimas son termolbiles y trabajan mejor a
bajas temperaturas.

Cabe destacar que este efecto entrpico implica la desestabilizacin del estado
basal,33 y su contribucin a la catlisis es relativamente pequea.
COFACTORES Y COENZIMAS
Tiamina pirofosfato se muestra en
un superficie globular opaco con un
hoyuelo amarrado abierto donde el
submarino y cofactores demuestran
como diagramas de palos. y las
estructuras qumicas por tiamina
pirofosfato, cofactor en amarillo, y
el
submarino
de Xilulosa-5fosfato en negro.

COFACTORES
Algunas enzimas no precisan ningn componente adicional para mostrar una
total actividad. Sin embargo, otras enzimas requieren la unin de molculas no
proteicas denominadas cofactores para poder ejercer su actividad. Los
cofactores pueden ser compuestos inorgnicos, como los iones metlicos y los
complejos ferrosulfurosos, o compuestos orgnicos, como la flavina o el

grupo hemo. Los cofactores orgnicos pueden ser a su vez grupos prostticos,
que se unen fuertemente a la enzima, ocoenzimas, que son liberados del sitio
activo de la enzima durante la reaccin. Las coenzimas incluyen compuestos
como el NADH, el NADPH y el adenosn trifosfato. Estas molculas transfieren
grupos funcionales entre enzimas.
Un ejemplo de una enzima que contiene un cofactor es la anhidrasa carbnica,
en la cual el zinc (cofactor) se mantiene unido al sitio activo, tal y como se
muestra en la figura anterior (situada al inicio de la seccin "Estructuras y
mecanismos"). Estas molculas suelen encontrarse unidas al sitio activo y
estn implicadas en la catlisis. Por ejemplo, la flavina y el grupo hemo suelen
estar implicados en reacciones redox.
Las enzimas que requieren un cofactor pero no lo tienen unido son
denominadas apoenzimas o apoprotenas.
Una
apoenzima
junto
con
cofactor(es) es denominada holoenzima (que es la forma activa). La mayora
de los cofactores no se unen covalentemente a sus enzimas, pero s lo hacen
fuertemente. Sin embargo, los grupos prostticos pueden estar covalentemente
unidos, como en el caso de la tiamina pirofosfato en la enzima piruvato
deshidrogenasa. El trmino "holoenzima" tambin puede ser aplicado a
aquellas enzimas que contienen mltiples subunidades, como en el caso de
laADN polimerasa, donde la holoenzima es el complejo con todas las
subunidades necesarias para llevar a cabo la actividad enzimtica.
COENZIMAS

Las coenzimas son pequeas molculas orgnicas

que transportan grupos qumicos de una enzima a
otra.49 Algunos de estos compuestos, como
la riboflavina,
la tiamina y
el cido
flicoson vitaminas (las cuales no pueden ser
sintetizados en cantidad suficiente por el cuerpo
humano y deben ser incorporados en la dieta). Los
grupos qumicos intercambiados incluyen el
ion hidruro (H-) transportado por NAD o NADP+, el
grupo fosfato transportado
por
el ATP,
el
grupo acetilo transportado por la coenzima A, los
grupos formil, metenil o metil transportados por
el cido flico y el grupo metil transportado por la SAdenosil metionina.
Debido a que las coenzimas sufren una modificacin qumica como
consecuencia de la actividad enzimtica, es til considerar a las coenzimas
como una clase especial de sustratos, o como segundos sustratos, que son
comunes a muchas enzimas diferentes. Por ejemplo, se conocen alrededor de
700 enzimas que utilizan la coenzima NADH.50
Las coenzimas suelen estar continuamente regenerndose y sus
concentraciones suelen mantenerse a unos niveles fijos en el interior de la
clula: por ejemplo, el NADPH es regenerado a travs de la ruta de las

pentosas fosfato y la S-Adenosil metionina por medio de la metionina

adenosiltransferasa. Esta regeneracin continua significa que incluso pequeas
cantidades de coenzimas son utilizadas intensivamente. Por ejemplo, el cuerpo
humano gasta su propio peso en ATP cada da.
FUNCION BIOLOGIA
Las enzimas presentan una amplia variedad de funciones en los organismos
vivos. Son indispensables en la transduccin de seales y en procesos de
regulacin, normalmente por medio de quinasas y fosfatasas. Tambin son
capaces
de
producir
movimiento,
como
es
el
caso
de
la miosina al hidrolizar ATP para generar la contraccin muscular o el
movimiento de vesculas por medio del citoesqueleto. Otro tipo de ATPasas en
la membrana celular son las bombas de ionesimplicadas en procesos
de transporte activo. Adems, las enzimas tambin estn implicadas en
funciones mucho ms exticas, como la produccin de luz por la luciferasa en
las lucirnagas. Los virus tambin pueden contener enzimas implicadas en la
infeccin celular, como es el caso de la integrasa del virus HIV y de
la transcriptasa inversa, o en la liberacin viral, como la neuraminidasa del virus
de la gripe.
Una importante funcin de las enzimas es la que presentan en el sistema
digestivo de los animales. Enzimas tales como las amilasas y las proteasas son
capaces
de
degradar
molculas
grandes
(almidn o protenas,
respectivamente) en otras ms pequeas, de forma que puedan ser absorbidas
en el intestino. Las molculas de almidn, por ejemplo, que son demasiado
grandes para ser absorbidas, son degradadas por diversas enzimas a
molculas ms pequeas como lamaltosa, y finalmente a glucosa, la cual s
puede ser absorbida a travs de las clulas del intestino. Diferentes enzimas
digestivas son capaces de degradar diferentes tipos de alimentos.
Los rumiantes que tienen una dieta herbvora, poseen en sus intestinos una
serie de microorganismos que producen otra enzima, la celulasa, capaz de
degradar la celulosapresente en la pared celular de las plantas.
Varias enzimas pueden actuar conjuntamente en un orden especfico, creando
as una ruta metablica. En una ruta metablica, una enzima toma como
sustrato el producto de otra enzima. Tras la reaccin cataltica, el producto se
transfiere a la siguiente enzima y as sucesivamente. En ocasiones, existe ms
de una enzima capaz de catalizar la misma reaccin en paralelo, lo que permite
establecer una regulacin ms sofisticada: por ejemplo, en el caso en que una
enzima presenta una actividad constitutiva pero con una baja constante de
actividad y una segunda enzima cuya actividad es inducible, pero presenta una
mayor constante de actividad.
Las enzimas determinan los pasos que siguen estas rutas metablicas. Sin las
enzimas, el metabolismo no se producira a travs de los mismos pasos, ni
sera lo suficientemente rpido para atender las necesidades de la clula. De
hecho, una ruta metablica como la gluclisis no podra existir sin enzimas.
La glucosa, por ejemplo, puede reaccionar directamente con el ATP de forma
que quede fosforilada en uno o ms carbonos. En ausencia de enzimas, esta
reaccin se producira tan lentamente que sera insignificante. Sin embargo, si
se aade la enzima hexoquinasa que fosforila el carbono 6 de la glucosa y se

mide la concentracin de la mezcla en un breve espacio de tiempo se podr

encontrar nicamente glucosa-6-fosfato a niveles significativos. Por tanto, las
redes de rutas metablicas dentro de la clula dependen del conjunto de
enzimas funcionales que presenten.

CLASIFICACIN Y NOMENCLATURA DE ENZIMAS

El nombre de una enzima suele derivarse del sustrato o de la reaccin qumica
que cataliza, con la palabra terminada en -asa. Por ejemplo, lactasa proviene
de su sustrato lactosa; alcohol deshidrogenasa proviene de la reaccin que
cataliza que consiste en "deshidrogenar" el alcohol; ADN polimerasa proviene
tambin de la reaccin que cataliza que consiste en polimerizar
el ADN.La Unin Internacional de Bioqumica y Biologa Molecular ha
desarrollado una nomenclatura para identificar a las enzimas basada en los
denominados Nmeros EC. De este modo, cada enzima queda registrada por
una secuencia de cuatro nmeros precedidos por las letras "EC". El primer
nmero clasifica a la enzima segn su mecanismo de accin.
A continuacin se indican las seis grandes clases de enzimas existentes en la
actualidad:
EC1 Oxidorreductasas: catalizan reacciones de oxidorreduccin o redox.
Precisan
la
colaboracin
de
las coenzimasde
oxidorreduccin
(NAD+, NADP+, FAD) que aceptan o ceden los electrones correspondientes.
Tras la accin cataltica, estas coenzimas quedan modificadas en su grado de
oxidacin, por lo que deben ser recicladas antes de volver a efectuar una
nueva reaccin cataltica. Ejemplos: deshidrogenasas, peroxidasas.
EC2 Transferasas: transfieren grupos activos (obtenidos de la ruptura de
ciertas molculas) a otras sustancias receptoras. Suelen actuar en procesos de
interconversin
de monosacridos, aminocidos,
etc. Ejemplos:transaminasas, quinasas.
EC3 Hidrolasas: catalizan reacciones de hidrlisis con la consiguiente
obtencin de monmeros a partir de polmeros. Actan en la digestin de los
alimentos, previamente a otras fases de su degradacin. La
palabra hidrlisis se
deriva
dehidro
'agua'
y lisis
'disolucin'. Ejemplos: glucosidasas, lipasas, esterasas.
EC4 Liasas: catalizan reacciones en las que se eliminan grupos H2O, CO2 y
NH3 para formar un doble enlace o aadirse a un doble
enlace. Ejemplos: descarboxilasas, liasas.
EC5 Isomerasas: actan sobre determinadas molculas obteniendo o
cambiando de ellas sus ismeros funcionales o de posicin, es decir, catalizan
la racemizacin y cambios de posicin de un grupo en determinada molcula
obteniendo formas isomricas. Suelen actuar en procesos de
interconversin. Ejemplo: epimerasas (mutasa).

EC6 Ligasas: catalizan la degradacin o sntesis de los enlaces denominados

"fuertes" mediante el acoplamiento a molculas de alto valor energtico como
el ATP.

1. EVOLUCION DE LA ENZIMOLOGIA
Si bien algunos qumicos consideraron esos procesos como metamorfosis de
sustancias que provocaban excitaciones en otras que estaban cerca de ellas,
esta cuestin fue, como ya se ha dicho, definitivamente resuelta por Buchner
hacia finales del siglo XIX; exprimiendo masas celulares de Saccharomyces
cerevisie obtuvo un lquido sin clulas, capaz de producir la mismas reacciones
qumicas que se obtenan utilizando la suspensin de clulas, es decir, la
transformacin del azcar en alcohol y anhdrido carbnico. Por tanto, de la
levadura se poda extraer una sustancia capaz de regular un proceso
qumico concreto.Esto obligo a replantear las investigaciones contrarias a
la teora de que el proceso digestivo fuese debido a la trituracin de las
sustancias digeridas hasta el punto de reducirlas a partculas lo suficientemente
finas para poder ser asimiladas. En efecto, en el siglo XVIII R.A de Reaumur
(1683- 1757) haciendo ingerir a un halcn una cpsula de hierro agujereada,
que contena alimento, observ que este qued completamente disuelto por los
jugos gstricos y que, por tanto, no era, molturado de modo mecnico por la
robusta musculatura del robusto animal, pues la cpsula quedo intacta.
Ms adelante se constat que el almidn era degradado a monosacrido y
disacrido por la accin del jugo salival (ptialina) y se describi la presencia de
la pepsina en el jugo gstrico. Posteriormente, fueron aisladas sustancias
de carcter fermentativo a partir de numerosas especies vegetales. Se observ
que el extracto de algunas races tena capacidad para modificar el color azul
de determinadas sustancias y que el extracto de trigo era capaz de transformar
el almidn en disacridos y dextrina.
La va para el estudio de esas sustancias estaba ya abierta. Jons Jacob
Berzelius (1779 1848) interpreto su accin como si se tratase de unos
catalizadores que favorecan determinada reaccin qumica sin ser destruidos y
sin aparecer en los productos finales. Richard Kuhne (1900-1967) fue el
primero en dar a tales sustancias el nombre enzimas, tomado del griego, que
significa literalmente "en la levadura".
2. LAS ENZIMAS
La Enzima Como Unidad Fundamental De Vida
Cada clula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que comporta continuos
cambios en su estado bioqumico, en la base de la cual estn las enzimas, que
tienen el poder de catalizar, facilitar, y agilizar determinados procesos sintticos
y analticos. Los propios genes son reguladores de la produccin de las
enzimas; por tanto, genes y enzimas pueden considerados como las unidades
fundamentales de la vida.
Este concepto poco difundido casi hasta el siglo XX, se ha desarrollado y
concretado cada vez mas, y constituye un componente esencial de diversas
disciplinas: la microbiologa, la fisiologa, la bioqumica, la inmunologa y

la taxonoma, formando adems parte del campo aplicado, en gran variedad

de industrias. El rasgo particular de las enzimas es que pueden catalizar
procesos qumicos a baja temperatura, compatible con la propia vida, sin
el empleo de sustancias lesivas para los tejidos. La vida es, en sntesis, una
cadena de procesos enzimticos, desde aquellos que tienen por sustratos
los materiales mas simples, como el agua (H2O) y el anhdrido carbnico
(CO2), presentes en los vegetales para la formacin de hidratos de carbono,
hasta los mas complicados que utilizan sustratos muy complejos.
La formacin de los prtidos, los glcidos y los lpidos es un ejemplo tpico: Son
a la vez degradados y reconstruidos por otras reacciones enzimticas,
produciendo energa a una velocidad adecuada para el organismo, sin el gasto
energtico que exigen los mtodos qumicos de laboratorio.
3. IMPORTANCIA BIOMEDICA DE LAS ENZIMAS
Sin enzimas, no sera posible la vida que conocemos. Igual que la biocatlisis
que regula la velocidad a la cual tienen lugar los procesos fisiolgicos, las
enzimas llevan a cabo funciones definitivos relacionadas con salud y la
enfermedad. En tanto que, en la salud todos los procesos fisiolgicos ocurren
de una manera ordenada y se conserva la homeostasis, durante los estados
patolgicos, esta ltima puede ser perturbada de manera profunda. Por
ejemplo, el dao tisular grave que caracteriza a la cirrosis heptica pueden
deteriorar de manera notable la propiedad de las clulas para producir enzimas
que catalizan procesos metablicos claves como la sntesis de urea. La
incapacidad celular para convertir el amoniaco txico a urea no txica es
seguida por intoxicacin con amoniaco y por ultimo coma heptico. Un conjunto
de enfermedades genticas raras, pero con frecuencia debilitantes y a menudo
mortales, proporciona otros ejemplos dramticos de las drsticas
consecuencias fisiolgicas que pueden seguir al deterioro de la actividad
enzimtica, inclusive de una sola enzima.
Despus del dao tisular grave (por ejemplo, infarto del miocardio o pulmonar,
trituracin de un miembro) o siguiendo a multiplicacin celular descontrolada
(por ejemplo, carcionoma prostatico), las enzimas propias de tejidos
especficos pasan a la sangre. Por lo tanto, la determinacion de estas enzimas
intracelulares en el suero sanguineo proporciona a los medicos informacion
valiosa para el diagnstico y el pronstico.
4. CARACTERISTICAS DE LAS ENZIMAS
Desde el punto de vista qumico, las enzimas estn formadas de carbono
(C), Hidrgeno (H), oxigeno (O), Nitrgeno (Ni), y Azufre (S) combinados, pero
siempre con peso molecular bastante elevado y comn propiedades catlicas
especficas. Su importancia es tal que puede considerarse la vida como un
"orden sistemtico de enzimas funcionales".
Cuando este orden y su sistema funcional son alterados de algn modo, cada
organismo sufre ms o menos gravemente y el trastorno puede ser motivado
tanto por la falta de accin como por un exceso de actividad de enzima.
Las enzimas son catalizadores de naturaleza protenica que regulan la
velocidad a la cual se realizan los procesos fisiolgicos, producidos por los
organismos vivos. En consecuencia, las deficiencias en la funcin enzimtica
causan patologas.

Las enzimas, en los sistemas biolgicos constituyen las bases de las complejas
y variadas reacciones que caracterizan los fenmenos vitales. La fijacin de la
energa solar y la sntesis de sustancias alimenticias llevadas a cabo por los
vegetales dependen de las enzimas presentes en las plantas. Los animales, a
su vez, estn dotados de las enzimas que les permiten aprovechar
los alimentos con fines energticos o estructurales; las funciones
del metabolismo interno y de la vida de relacin, como la locomocin, la
excitabilidad, la irritabilidad, la divisin celular, la reproduccin, etc. Estn
regidas por la actividad de innumerables enzimas responsables de que las
reacciones se lleven a cabo en condiciones favorables para el individuo, sin
liberaciones bruscas de energa a temperaturas fijas en un medio de pH,
concentracin salina, etc.; prcticamente constante.
A diferencia de un catalizador inorgnico que interviene en numerosas
reacciones las enzimas producidas por los organismos vivos habitualmente
solo catalizan un tipo de reaccin o solo una reaccin determinada; la
especificidad de las enzimas es tan marcadas que en general actan
exclusivamente sobre sustancias que tienen una configuracin precisa; por
ejemplo, si solo atacan a los aminocidos que tienen su carbono a , asimtrico,
con estructura L-, no muestran la menor actividad sobre formas idnticas de
dichos aminocidos, pero que sean del tipo D-.
En los sistemas biolgicos se llevan a cabo diversas reacciones a partir de la
misma sustancia; por ejemplo algunos microorganismos convierten
la glucosa en alcohol y bixido de carbono, al paso que otros grmenes la
convierten en cido lctico o cido pirvico o acetaldehido. Esto quiere decir
que la glucosa puede descomponerse en distintos productos y aunque todas
las posibilidades son tericas y prcticamente posibles la presencia de ciertas
enzimas favorece uno de los caminos que llevan a la acumulacin de
determinados compuestos.
Las enzimas, por lo tanto, se consideran como catalizadores altamente
especficos que:
Modifican la velocidad de los cambios promovidos por ellas.
Determinan que sustancias particulares, de preferencia a otras distintas
son las que van a sufrir los cambios.
Impulsan dentro de los distintos cambios posibles que pueda seguir una
sustancia, cul de ellos en especial, ser el utilizado.
Las enzimas representan las sustancias encargadas de graduar la
velocidad de una reaccin determinada en el interior de las clulas;
como en las diversas clulas se realizan infinidad de reacciones, ya que
en una de ellas se encuentran varios miles de sustancias, se deduce,
tambin, la presencia de varios miles de enzimas. Es posible, por lo
tanto, que la mayor parte de esta estructura protenica celular est
formada por enzimas, encargadas de las diversas funciones de sntesis,
degradacin, oxidacin, etc. caractersticas de la actividad vital de los
distintos organismos.
5. LA ESTRUCTURA ENZIMTICA

Por su estructura y composicin qumica puede afirmarse que el origen de las

enzimas est vinculando al origen de las sustancias proteicas. Al hablar
del origen de la vida se ha citado el xito de los experimentos realizados en el
laboratorio para la produccin de aminocidos; estos aminocidos son los que
precisamente constituyen la base del edificio proteico. Tambin en el
laboratorio se ha intentado la sntesis de protenas a partir de aminocidos.
La sede de las enzimas es el citoplasma. Los cloroplastos vegetales contienen
una amplia gama enzimas encargadas de la funcin cloroflica, proceso que a
travs de reacciones qumicas complejas y encadenadas transforman
compuestos inorgnicos, como el agua, y el anhdrido carbnico, en sustancias
complejas adecuadas para ser entre otras cosas el alimento fundamental de los
animales. En las mitocondrias existe un sistema de transporte de electrones
que determinan importantes fenmenos de xido reduccin, durante los cuales
se forman notables cantidades de ATP, que es un compuesto altamente
energtico del que depende la mayor parte de metabolismo, y coma, por
tanto el trabajo de las clulas; en las mitocondrias se produce el metabolismo
enzimtico de los cidos grasos, los cuales son en parte elaborados tambin
en el citoplasma.
En los ribosomas tiene lugar concretamente todas las sntesis de las sustancias
proteicas, mientras que en los lisosomas se producen enzimas hidrolticos
cuya misin escindir, con la intervencin del agua, molculas grandes en otras
menores, que pueden a su vez ser utilizadas por las clulas; en cambio, las
enzimas glucolticos estn difundidos en el citoplasma.
La localizacin de las sedes de las distintas operaciones enzimticas antes
mencionadas ha sido posible a travs del sistema de ruptura de las clulas y de
la separacin de los distintos componentes mediante centrifugacin diferencial
del homogeneizado de estas la ruptura celular y la subdivisin de los
componentes su celulares se realizan actualmente utilizando los tejidos, por
ejemplo con saltos bruscos desde temperaturas inferiores a 0 C hasta
temperaturas ms elevadas con cambios de presin osmtica o mediante
ultrasonidos.
6. NATURALEZA QUMICA DE LAS ENZIMAS
Existen numerosas razones para afirmar que las enzimas son protenas. La
Ms importantes son las siguientes:
a.

El anlisis de las enzimas obtenidas en forma ms pura, cristalizada,

demuestra que son protenas.

b.

Las enzimas son inactivadas a altas temperaturas y, en general, la

cintica de la desnaturalizacin trmica de las enzimas da resultados muy
parecidos a los de la desnaturalizacin trmica de las protenas; por ejemplo
el Q10 de la mayora de las reacciones qumicas es de 2 a 3, y, en el caso e
las enzimas, a temperaturas elevadas, alrededor de 60 a 70 C, la actividad
neta aumenta varios cientos, como sucede con la velocidad de la
desnaturalizacin trmica de las protenas.

c.

Las enzimas son activadas en una zona muy restringida de pH, y

presenta un punto ptimo de pH donde su actividad es mayor. Las protenas
en su punto isoelctrico, muestran propiedades parecidas desde el punto de

vista de viscosidad, solubilidad, difusin, etc., que resulta del todo similares
a las propiedades de este tipo que muestran las enzimas.
d.

Todos los agentes que desnaturalizan a las protenas tambin destruyen

o inactivan a las enzimas, ya sea el calor, los cidos fuertes, o
los metales pesados que pueden combinarse con ellas.

e.

Los problemas de solubilidad y de precipitacin son comunes a las

protenas y las enzimas; en general, son solubles en agua
o soluciones salinas, insolubles en alcohol, precipitan con determinadas
concentraciones de sales neutras, etc.

7. COMPOSICIN QUMICA DE LAS ENZIMAS

Los conocimientos sobre la composicin qumica de las enzimas
constituyeron materia de numerosas controversias hasta 1926, cuando J.B
Sumner (1887-1955) consigui cristalizar la ureasa, enzima que transforma la
urea en anhdrido carbnico y amoniaco, y demostrar que era una sustancia
proteica.
A, partir de entonces fueron aisladas otras enzimas en forma pura, cristalina, y
el anlisis demostraba siempre la presencia de una protena, simple o
conjugada. Cuando los anlisis qumicos demuestran que la enzima es una
protena conjugada, pueden distinguirse en los dos partes bien diferenciados:
El grupo proteico (Coenzima)
La protena (Apoenzima)
En algunas enzimas oxidantes fue observada la presencia de la
promoporteinas, en las cuales el grupo prosttico est representado por un
compuesto que contiene Fe y otro elemento, el cual desempea un papel
importante en la combinacin de la protena con el sustrato; otras veces este
grupo prosttico es derivada de vitaminas (como la vitamina B); 4en muchos
casos resulta fcil de separar de la molcula proteica. No obstante una vez
separadas, las dos unidades no muestran actividad enzimtico; por tanto el
grupo proteico (coenzima) y el grupo proteico (apoenzima) han de estar
ntimamente ligados entre si para ser operativos. Por consiguiente, de las
enzimas pueden distinguirse los formados por:
Solo protenas, que difieren entre si por la secuencia con que los
aminocidos estn combinados, como la ureasa y las enzimas
digestivas (la pepsina y la tripsina)
Los conjugados, separados en dos entidades qumicas bien definidas: la
coenzima y la apoenzima.

 Despus del descubrimiento de Sumner, el nmero de las enzimas y el

estudio de sus actividades qumicas proporcionaron un notable impulso
en la enzimologa, y la gran cantidad de las enzimas que rpidamente se
acumulaban determinaron la necesidad de utilizar una clasificacin
o nomenclatura para evitar errores y facilitar la comprensin de futuros
investigadores.
8. NOMENCLATURA Y CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS
Cien aos atrs solo se conocan enzimas, muchas de estas, catalizaban la
hidrlisis de enlaces covalentes. Algunas enzimas, de manera especial las que
fueron descubiertas en un principio, recibieron nombres ligados ms bien a su
sitio de procedencia anatmica que no siguen ninguna regla ni sistema; tal es
el caso de la ptialina de la saliva, que ataca al almidn de la pepsina del
estmago y de la tripsina del pncreas, que atacan protenas; de la renina, que
cuagula la leche; de la papaina, enzima proteoltica que se encuentra en la
papaya y de las catepsinas, tambin proteasas, que se encuentran en las
clulas. Las enzimas relacionadas con la cuagulacin de la sangre, como son
la trombina, la plasmina, el plasmingeno, etc. reciben tambin nombres
sistematizados.
Al descrubir nuevas enzimas y proceder a su caracterizacin estricta se
aplicaron reglas de nomenclatura basadas en el nombre del sustrato atacado, o
en el tipo general de sustrato, o en la reaccin catalizada y se ha aadido
convencionalmente, la terminacin -asa. Por ejemplo: las lipasas (hidrolizan
lipidos o grasas), las amilasas (hidrolizan almidon), las proteasas (hidrolizan
proteinas), las esterasas (basado en la unin general de tipo ster presentes en
muchas sustancias), colesterol estrerasa (si la esterasa es especfica de los
esteres de colesterol) y acetilcolina esterasa (si la estersa de la acetilcolina).
Otros ejemplos: Las fosfatasas son enzimas que atacan las uniones ster, pero
en este caso, toman su nombre del grupo vecino a la unin que van a atacar,
de manera que se denominan fosfatasas (cuando quitan una molcula de
monofosfato), pirofosfatasas (cuando quitan el cido fosfrico como esteres
dobles (pirofosfatos), o triples, etc.) De la misma manera, las carbohidrasas se
denominan as genricamente, pero pueden comprender enzimas con nombres
proveniente del sustrato particular sobre el que actuan como la amilasa que
ataca al almidn y la celulosa que acta sobre la celulosa y, en otras
ocaciones, se denominan de acuerdo con la unin atacada, como la b
-glucosidasa que acta sobre las uniones b -glucosdicas. Los ejemplos se
pueden extender a todos los terrenos de la actividad enzimtica, como en las
enzimas proteolticas, las fosforilasas, las nucleasas, etc.
Esta manera de llamarlas, se demostro que era inadecuada porque al
descubrirse varias enzimas, notaron que varias enzimas catalizaban reacciones
diferentes del mismo sustrato, por ejemplo, oxidacion o reduccion de la funcion
alcohol de un azcar
Aunque el sufijo asa contina en uso; actualmente, al nombrar a las enzimas,
se enfatiza el tipo de reaccin catalizada. Por ejemplo: las hidrogenadas
catalizan la eliminacin de hidrogeno y las transferasas, reacciones de
transferencia de grupo. Con el descubrimiento de ms y ms enzimas,
surgieron ambigedades y con frecuencia no estaba claro cul era la enzima
que un investigador deseaba estudiar. Para remediar esta deficiencia, la

Comisin para el estudio de las enzimas, que constituye con respecto a los
sistemas anteriores un punto de vista ms uniforme, preciso y descriptivo; est
formada por la Unin Internacional de Bioqumica (IUB) adopto, en 1964, un
sistema complejo pero inequvoco de la nomenclatura enzimtica basado en el
mecanismo de reaccin.
El sistema se basa en la reaccin qumica catalizada que es la propiedad
especfica que caracteriza a cada enzima las cuales se agrupan en clases,
porque catalizan procesos semejantes, y en subclases que especifican con
mayor exactitud la reaccin particular considerada. En general, las enzimas
reciben un nombre de acuerdo con el sustrato o los sustratos que participan en
la reaccin seguido por el tipo de reaccin catalizada y, por fin, la terminacin
-asa. A menudo los nombres as obtenidos resultan largos y complejos, por lo
que es muy difcil que en la prctica se pueda excluir el uso de los nombres
triviales, consagrados por la costumbre. Sin embargo, con fines de
sistematizacin, se reconoce la necesidad de aceptar el nuevo sistema.
Aunque su claridad y carencia de ambigedad recomiendan al sistema de
nomenglatura IUB para trabajos de investigacion, nombres mas ambiguos, pero
basante mas cortos persisten en libros de texto y en el laboratorio clinico.
Por esta razon, a continuacion solo se presenta principios generales del
sistema IUB:
1.

Las reacciones y las enzimas que las catalizan se dividen en 6 clases

principales, cada una con 4 a 13 subclases.

2.

El nombre de la enzima tiene 2 partes: la primera es el nombre del o los

sustratos; la segunda, con terminacion asa, indica el tipo de reaccion
catalizada.

3.

Informacion adicional, si es necesario aclarar la reaccion, puede seguir

el parentesis. Por ejemplo: la enzima que cataliza L-malato + NAD= =
piruvato + CO2 NADH + H= , se denomina como 1.1.1.37 L-malato:NAD+
oxidorreductasa (descarboxilante).

4.

Cada enzima tiene un numero clave (E.C.) que caracteriza al tipo de

reaccion segn la clase (primer digito), subclase (segundo digito) y subclase
(tercer digito). El cuarto digito es para la enzima especifica. Asi, E.C. 2.7.1.1
denota la clase 2 (una transferasa), subclase 7 (transferencia de fosfato),
sub-clase 1 (una funcion alcohol como aceptor de fosfato). El ultimo digito
denota a la enzima hexocinasa o ATP: D-hexosa-6-fosforotransferasa,
enzima que cataliza la transferencia de fosfato desde el ATP al grupo
hidroxilo de carbono 6 de la glucosa.

Al final de sus y trabajos, clasifico las enzimas en seis grupos principales,

correspondientes por sus trminos a las raciones que cada enzima ejerce
sobre el sustrato. Estos grupos se subdividen en otro, segn el tipo de sustrato
y los tomos concretos que son sensibles a sus acciones. Estos seis grupos
son los siguientes:

1.

Oxidoreductasas

2.

Transferasas

3.

Hidrolasas

4.

Isomerasa

5.

Liasas

1. OXIDO-REDUCTASAS: Son las enzimas relacionadas con las oxidaciones y

las reducciones biolgicas que intervienen de modo fundamental en los
procesos de respiracin y fermentacin. Las oxidoreductasas son importantes a
nivel de algunas cadenas metablicas, como la escisin enzimtica de la
glucosa, fabricando tambin el ATP, verdadero almacn de energa. Extrayendo
dos tomos de hidrgeno, catalizan las oxidaciones de muchas molculas
orgnicas presentes en el protoplasma; los tomos de hidrgeno tomados del
sustrato son cedidos a algn captor.
En esta clase se encuentran las siguientes subclases principales:
Deshidrogenasas y oxidasas. Son ms de un centenar de enzimas en cuyos
sistemas actan como donadores, alcoholes, oxcidos aldehidos, cetonas,
aminocidos, DPNH2, TPNH2, y muchos otros compuestos y, como receptores,
las propias coenzimas DPN y TPN, citocromos, O2, etc.
2. LAS TRANSFERASAS: Estas enzimas catalizan la transferencia de una
parte de la molcula (dadora) a otra (aceptora). Su clasificacin se basa en la
naturaleza qumica del sustrato atacado y en la del aceptor. Tambin este
grupo de enzimas actan sobre los sustratos mas diversos, transfiriendo
grupos metilo, aldehdo, glucosilo, amina, sulfat, sulfrico, etc.
3. LAS HIDROLASAS: Esta clase de enzimas actan normalmente sobre las
grandes molculas del protoplasma, como son la de glicgeno, las grasas y las
protenas. La accin cataltica se expresa en la escisin de los enlaces entre
tomos de carbono y nitrgeno (C-Ni) o carbono oxigeno (C-O);
Simultneamente se obtiene la hidrlisis (reaccin de un compuesto con el
agua)de una molcula de agua. El hidrgeno y el oxidrilo resultantes de la
hidrlisis se unen respectivamente a las dos molculas obtenidas por la ruptura
de los mencionados enlaces. La clasificacin de estas enzimas se realiza en
funcin del tipo de enlace qumico sobre el que actan.
A este grupo pertenecen protenas muy conocidas: la pepsina, presente en el
jugo gstrico, y la tripsina y la quimiotripsina, segregada por el pncreas.
Desempean un papel esencial en los procesos digestivos, puesto que
hidrolizan enlaces ppticos, estricos y glucosdicos.
4. LAS ISOMERASAS: Transforman ciertas sustancias en otras ismeras, es
decir, de idntica formula emprica pero con distinto desarrollo. Son las enzimas
que catalizan diversos tipos de isomerizacin, sea ptica, geomtrica,
funcional, de posicin, etc. Se dividen en varias subclases.

Las racemasas y las epimerasas actan en la racemizacin de los aminocidos

y en la epimerizacin de los azcares. Las primeras son en realidad pares de
enzimas especficas para los dos ismeros y que producen un
solo producto comn. Las isomerasas cis trans modifican la configuracin
geomtrica a nivel de un doble ligadura. Las xido reductasas
intramoleculares cetalizan la interconversin de aldosas y cetosas, oxidando un
grupo CHOH y reduciendo al mismo tiempo al C = O vecino, como en el caso
de la triosa fosfato isomerasa, presente en el proceso de la gluclisis ; en otros
casos cambian de lugar dobles ligaduras, como en la (tabla) isopentenil fosfato
isomerasa, indispensable en el cambio biosintico del escualeno y el colesterol.
Por fin las transferasas intramoleculares (o mutasas) pueden facilitar el
traspaso de grupos acilo, o fosforilo de una parte a otra de la molcula, como la
lisolecitina acil mutasa que transforma la 2 lisolecitina en 3 lisolecitina, etc.
Algunas isomerasa actan realizando inversiones muy complejas, como
transformar compuestos aldehdos en compuestos cetona, o viceversa.
Estas ultimas desarrollan una oxidorreduccin dentro de la propia molcula
(oxido rreductasa intramoleculares)sobre la que actan, quitando hidrgeno, a
algunos grupos y reduciendo otros; actan ampliamente sobre los aminocidos,
los hidroxcidos, hidratos de carbono y sus derivados.

5. LAS LIASAS: Estas enzimas escinden (raramente construyen) enlaces entre

tomos de carbono, o bien entre carbono y oxigeno, carbono y nitrgeno, y
carbono y azufre. Los grupos separados de las molculas que de sustrato son
casi el agua, el anhdrido carbnico, y el amoniaco. Algunas liasa actan sobre
compuestos orgnicos fosforados muy txicos, escindindolos; otros separan el
carbono de numerosos sustratos.
6. LAS LIGASAS:
Es un grupo de enzimas que permite la unin de dos molculas, lo cual sucede
simultneamente a la degradacin del ATP, que, en rigor, libera la energa
necesaria para llevar a cabo la unin de las primeras. Se trata de un grupo de
enzimas muy importantes y recin conocidas, pues antes se pensaba que este
efecto se llevaba a cabo por la accin conjunta de dos enzimas, una
fosfocinasa, para fosforilar a una sustancia A (A + ATP A - + ADP) y una
transferasa que pasara y unira esa sustancia A, con otra, B (A - + B A B +
Pi ).
A este grupo pertenecen enzimas de gran relevancia reciente, como las
aminocido ARNt ligasas conocidas habitualmente con el nombre de
sintetasas de aminocidos ARNt o enzimas activadoras de aminocidos que
representan el primer paso en el proceso biosinttico de las protenas, y que
forman uniones C-O; las cido-tiol ligasas, un ejemplo tpico de las cuales es la
acetil coenzima. A sintetasa, que forma acetil coenzima. A partir de cido
actico y coenzima A ; las ligasas cido amoniaco (glutamina sintetasa), y las

ligasas cido-aminocido o sintetasas de pptidos, algunos de cuyos ejemplos

ms conocidos son la glutacin sintetasa, la carnosina sintetasa, etc.
La accin de estas enzimas se manifiesta con la formacin de enlaces entre
tomos de carbono y oxigeno de diversas molculas, o bien entre carbono y
azufre, carbono y nitrgeno y carbono y carbono. Las ligasas utilizan siempre,
para el proceso de reaccin, la energa proporcionada por el ATP o compuestos
homlogos que son degradados, Por consiguiente las enzimas de esta clase
son los nicos que intervienen en reaccin no espontnea desde un punto de
vista termodinmico
Actan sobre los sustratos ms diversos y revisten particular importancia en el
metabolismo de los cidos nucleicos.
Estas reacciones enzimticas se desarrollan en dos tiempos: en el primero se
forma un complejo intermedio con potencia energtica muy alta-, en el segundo
utilizan la energa obtenida para realizar la reaccin de sntesis.

Grupo

Accion

ejemplos

1. Oxidoreductasas

Catalizan
reacciones
de
oxidorreduccin. Tras la accin
catlica quedan modificados en su
grado de oxidacin por lo que debe
ser transformados antes de volver a
actuar de nuevo.

Dehidrogenasas
Aminooxidasa
Deaminasas
Catalasas

2. Transferasas

Transfieren
Transaldolasas
grupos activos (obtenidos de la Transcetolasas
ruptura de ciertas molculas)a otras Transaminasas
sustancias
receptoras.
Suelen
actuar
en
procesos
de
interconversiones de azucares, de
aminocidos, etc

3. Hidrolasas

Verifican reacciones de hidrlisis

con la consiguiente obtencin de
monmeros a partir de polmeros.
Suele ser de tipo digestivo, por lo
que normalmente actan en primer
lugar

Glucosidasas
Lipasas
Peptidasas
Esterasas
Fosfatasas

4. Isomerasas

Actan
sobre
determinadas
molculas obteniendo de ellas sus
ismeros de funcin o de posicin.
Suelen actuar en procesos de
interconversion

Isomerasas
azcar
Epimerasas
Mutasas

5. Liasas

Realizan la degradacin o sntesis Aldolasas

(entonces se llaman sintetasas) de Decarboxilasas
los enlaces denominados fuertes
sin ir acoplados a sustancias de
alto valor energtico.

6. Ligasas

Realizan la degradacin o sntesis Carboxilasas

de los enlaces fuertes mediante el Peptidosintetasas
acoplamiento a sustancias ricas en
energa como los nucleosidos del
ATP

de

PARTES DEL SISTEMA ENZIMTICO

Los sistemas enzimticos en general, estn formados por la enzima
propiamente dicha (apoenzima), el sustrato o los sustratos un grupo proteico
( o coenzimas) y sustancias activadoras. La estructura formada por la
apoenzima y la coenzima se denomina boloenzima; con cierta frecuencia se
reconocen sistemas enzimaticos que no tienen grupo prosttico o activadores
reconocidos.
Apoenzima: concepto del centro activo
La apoenzima es la enzima propiamente dicha, de naturaleza proteica formada
por cadenas de polipptidos, con peso molculas elevado, no dializable y
termolbil.
Las estudiadas analticamente hasta ahora, han sido, por razones tcnicas de
peso molecular bajo, 12 a 24 000, tienen una sola cadena polipeptdica
(ribonucleasa, papaina, tripsina, pepcina, etc.) excepto uno o dos casos (a quimotripsina y aldolasa) que tienen dos.
El anlisis de los aminocidos que componen a diversas enzimas demuestran
que tienen una estructura similar a la de cualquier protena; existen, de hecho
unos cuantos casos en los que se ha determinado su secuencia completa, es
decir, el orden en el que estn dispuestos todos ellos en la cadena.

El anlisis de la estructura secundaria de la protena, osea el modo como la

cadena peptdoica se dispone a lo largo de su eje mayor y el de la estructura
terciaria, osea la forma en que la cadena se pliega y se acomoda para formar
una estructura tridimensional se conocen muy mal para todas las enzimas. Solo
en el caso de la lisozima (enzima presente en las lgrimas donde funciona
como un antisptico suave y que tiene la capacidad de atacar a los
polisacridos que forman la pared de diversas bactrias) se ha determinado la
estructura tridimensional de una enzima; para este fin se aplican las tcnicas
de cristalografa de rayos x, con una solucin de dos , lo que demostr que la
lisosima es una protena con su cadena de 129 aminocidos ampliamente
plegada y en la que se reconoce una hendidura representante del centro activo
donde se acomodan muy bien los inhibidores ciertos compuestos del tipo
de carbohidratos que nulifican su actividad enzimtica. Se ha demostrado, en
este caso, que es cierta regla general de que el modo como se ordenan y
disponen los aminocidos de termoina el arreglo espacial que permite a las
otras partes del sistema enzimtico sustratos, cofactores, iones, etc.
adaptarse, en el espacio, en forma adecuada, para que se lleve a cabo la
accin cataltica. Por lo tanto, las estructuras indispensables que permiten la
combinacin con el sustrato y que confieren propiedades enzimticas a la
molcula se denomina "centro activo". Se acepta que el centro activo no es una
parte muy grande de la enzima completa y, en ciertos sistemas estudiados por
medio de bloqueos qumicos no parece constituir una zona de ms de 20 de
dimetro. Es muy posible que el centro activo est formado por la contribucin
de grupos funcionales de aminocidos situados en distintas cadenas o en
diferentes repliegues de una cadena, asiendo aparecer a dichos grupos muy
distantes entre ellos si se considera el orden que guardan a lo largo de la
cadena polipeptdica.
Un caso muy ilustrativo sobre lo que significa la estructura del centro activo
desde el punto de vista de la composicin de los aminocidos es el de la
triptofano pirrolasa, enzima ampliamente estudiada en bacterias desde el punto
de vista de la bioqumica gentica. En ella, la modificacin de algunos
aminocidos produce perdida e la actividad enzimtica, que se recupera si
vuelve a incluirse los aminocidos en el orden original; sin embargo, se pueden
reemplazar dos de ellos por otros completamente distintos, y la enzima vuelve
a ser totalmente activa. Es posible que con estos nuevos aminocidos se
consigan tambin las condiciones de distribucin espacial de grupos
funcionales y estructuras necesarias para la actividad enzimtica.
El concepto de arreglo tridimensional adecuado de los aminocidos que forman
la cadena polipeptdica de la enzima para lograr la actividad funcional correcta
permite entender numerosos denmenos: la necesidad de que la molcula
proteica ntegra est preservada en su forma; el hecho de que la
desnaturalizacin de la enzima al permitir la separacin de los pliegues,
conduce a la perdida de la actividad enzimtica; que al calentar una enzima
con su sustrato (por ejemplo, la invertasa con sacaroza, la transaminasa con
cido a -cetoglutrico), se impide una desnaturalizacin que sin ellos se
producira, pues es posible que el propio sustrato contribuya a sostener y
reforzar la aproximacin de los pliegues de la cadena, etc.
Tambin se entiende por que al atacar la ribonucleasa con pepsina y romper
una sola unin peptdica que separa un tetrapptido del extremo con grupo
carboxilo libre se pierde la actividad, mientras que si solo se quita los tres

ltimos disminuye su accin sugiriendo as la importancia del residuo de

cido asprtico para sostener el centro activo en condiciones deeficiencia, o lo
que es ms probable, para formar parte del propio centro activo. Si se parte la
ribonucleasa entre los aminocidos 20 y 21, y se separan los dos fragmentos,
ninguno es activo, pero basta mezclarlos para que se unan en tal forma que se
restablece la actividad, aunque un poco menor que la originalmente observada.
El estudio detallado de la estructura del centro activo se hace por medio de
inhibidores o de reactivos que se combinan de modo especfico, con algunos
de los aminocidos del centro activo tales como el diisopropilfluorofosfato
(DFP), que se combina con el OH del aminocido serina, en diversas
esterasas, peptidasas, etc. , e inactiva el centro activo del que forman parte
dicho aminocido; este inhibidor, an a concentraciones de 10-10 M, inhibe a la
acetilcolinesterasa; mucho de los derivados del DFP se utilizan
como gases de guerra o como insecticidas (parathion), y su utilidad se debe, en
rigor a su capacidad para destruir funcionalmente ciertas enzimas.
La unin del DFP al aminocido cedina es muy estrecha y a permitido el
anlisis de los aminocidos vecinos a l, haciendo un estudio de su
ordenamiento en el centro activo. La secuencia de los centros activos de
diversas enzimas hidrolticas sensibles al DFP, se demuestran que la mayora
tienen cerina y a dems un aminocido dicarboxlico (asprtico o glutmico) y
en el otro un aminocido neutro (alanina o glicina). Tambin se ha demostrado
que la histidina, cuando menos para el caso de la quimotripsina, forma parte
del centro activo an cuando el anlisis de la secuencia no demuestra que
exista cerca de la cerina ninguna histidina; se trata, por lo tanto, de otro
ejemplo de una aminocido, alejado e otro, y en distinto pliegue de la cadena,
que integra el centro activo.
Teniendo en cuenta estos hechos, se deduce, por lo tanto, que la actividad de
la enzima depende en parte de la disposicin o arreglos de los aminocidos y
grupos prostticos en determinada regin de la protena. Los aminocidos que
componen a las protenas pueden tener moderadas actividades catalticas,
aunque de ninguna manera comparable en su magnitud, cuando se les
considera en forma aislada, a las que muestran la gran molcula proteica. De
hecho para muchos sistemas enzimticos se han ideado modelos anlogos,
osea sustancias qumicas sencillas que suelen reproducir los efectos
ocasionados por la enzima, tal es el caso de los anlogos, a base de piridoxsal
que representan la parte activa de enzimas descarboxilantes y transaminantes.
Esto no significa que necesariamente, en el estado natural, la enzima funcione
como lo hace el anlogo pues muchos sistemas pudieran tener otro mecanismo
de operacin; la hidrlisis del almidn lo mismo se logra con la adicin del
cido que con la enzima especfica amilasa, an cuando en el primer caso se
atacan indiscriminadamente numerosas uniones glucosdicas, y con la enzima,
en cambio solo se desprenden, uno tras otro fragmentos de dos unidades de
glucosa de los extremos de las ramificaciones.
Conformacin de la enzima y propiedades del centro activo. La propiedad
cataltica de las enzimas parece depender de la facilidad con la que ayudan a
que se pongan en contacto las sustancias reaccionantes para dar el producto o
los productos de la reaccin. Esto implica que el sistema enzimtico tenga una
conformacin especial osea, una disposicin adecuada de os grupos
funcionales aminocidos de la apoenzima y grupos prostticos, cuando

existen estos y de las molculas mismas de los sustratos que se unirn a

aquellos y permitirn que se lleve a cabo la reaccin qumica. Este
acercamiento de las sustancias reaccionantes de los grupos prostticos y los
grupos funcionales fue las razn del modelo de Ehrlich, conocido clsicamente
como de la "llave y la cerradura". As la enzima sera un molde tridimensional
en negativo, de la estructura tambin tridimensional, en positivo de los
reaccionantes que se adaptaran perfectamente a ala disposicin de la enzima.
Sin embargo ha sido necesario reconsiderar esta situacin y sugerir de
acuerdo con Koshland la teora de un "acomodo inducido".
As las enzimas pueden sufrir un cambio en su estructura desde el momento en
que entran en contacto con los reaccionantes, sustratos y cofactores, y es
posible que todos ellos modifiquen el arreglo tridimensional de la enzima; la
enzima los recibe en un orden determinado y cada uno de ellos al unirse a la
enzima modifica su estructura. La nueva analoga es la del "guante y la mano";
aquel no representa una estructura de negativo tridimensional mientras no se
halla la mano en el, ya que antes pueden tener diversas formas y
disposiciones, una vez que ha entrado la mano - que a su vez tambin puede
adoptar distintas posiciones se ponen en contacto todas las partes
correspondientes, es decir, en el caso de la enzima, las partes reactivas del
sistema enzimtico, con las partes reaccionantes, osea los sustratos. Se ha
preservado con esta nueva idea, el aspecto de la armona estructural entre el
sustrato y la enzima pero se introduce el nuevo concepto de que es necesario
provocar un cambio en la estructura proteica que favorezca la colocacin
adecuada de todos los elementos que interviene en la reaccin enzimtica. Los
cambios de la estructura protica se denominan "conformacionales". El cambio
en la disposicin tridimensional puede hacerse a distancia y en muchas
ocasiones la unin del sustrato a una parte de la enzima modifica otras zonas
de ella y an su estructura completa, debido a plegamientos que acercan o
alejan diversos grupos colocados a lo largo del pptido que forma la enzima.
Esta alteracin mltiple y de tipo flexible, permite entender mejor el proceso de
entrada ordenada de los sustratos, y los cofactores y la reaccin en la que se
participan. Tambin permiten comprender porque un sustrato entra a una
enzima y es atacado y uno que no lo es an muy parecido a l, puede quedar
excluido del centro activo.
Se ejemplifican estas ideas en A se encuentra la enzima en una forma
desplegada con ciertos grupos reactivos (+) y (-), colocados en una zona de la
superficie de la enzima. La entrada de un cofactor F1, modifica una parte del
sistema (B); se introduce en el sistema un nuevo arreglo a base de la
reactividad de tipo electrnico entre la zona (+) y una parte del cofactor F1,
recin introducido; por fin la entrada de un nuevo reaccionate F2 modifica la
parte terminal de la enzima de manera que permite la entrada del otro
reaccionante (sustrato) que se acomoda en un lugar preparado previamente
por los reaccionantes F1 y F2, y permite de esta manera echar a andar la
reaccin cataltica. Los cambios conformacionales, se pueden demostrar con
diversos mtodos algunos de tipo fsico, como son las modificaciones en la
rotacin ptica o en el patrn de sedimentacin en el campo gravitacional de la
ultracentrfuga, o qumicos como el aumento o la disminucin de la actividad
enzimtica bajo la influencia de cambios trmicos o la adicin de agentes
desnaturalizantes. Basten unos cuantos ejemplos: la transaminasa a

-cetoglutrica se pude calentar a 65 C. en presencia de su sustrato sin que se

afecte, al paso que la enzima sola es rpidamente degradada, cambia de
configuracin y se precipita; la miosina, protena muscular contrctil, en
presencia de ATP hace ms notable su forma de espiral y permite el
reconocimiento de aminocidos previamente ocultos en sus pliegues; la Damino oxidasa, al unirse a su cofactor, el FAD, pasa de la forma espiral en a
-hlice, a una disposicin irregular distribuida al azar.
COENZIMA Y GRUPOS PROSTTICOS
Aparte del sustrato, cuya transformacin ser condicionada por la enzima,
existe otra parte del sistema enzimtico, de peso molculas bajo y por lo tanto
dializable, termostable y en general, no protica, adherida de mas o menos
laxa a la apoenzima y a la cual se le llama grupo prosttico, si est muy
intimanente ligada a la apoenzima como es el caso del ncleo porfirnico de
numerosas oxidasas o la estructura flavnica de la deshidrogenasa succnica
o coenzima cuando la unin es dbil y se separan fcilmente, como por
ejemplo el DPN y el TPN que asisten a las funciones de varias
deshidrogenasas. Es muy grande la importancia del grupo prosttico o de la
coenzima desde el punto de vista funcional pues suelen ceder y recibir
alternadamente parte de los productos de la reaccin. Por ejemplo en las
reacciones de oxido reduccin los hidrgenos desprendidos de un sustrato
deben ser captados por una sustancia con lo que se expulsa al sustrato
oxidado y es posible recibir una nueva molcula del sustrato con hidrgenos.
Tal sustancia es una coenzima, como el DPN, el TPN, el FAD, etc., que, a su
vez, suele cederlos a una tercera sustancia o, cuando las reacciones son
reversibles los pasan al sustrato oxidado para reducirlo. Algunos autores
denominan cosustratos a estos agrupamientos coenzimticos para hacer
nfasis en su carcter reversible, no cataltico y equimolecular con respecto al
sustrato. Una proporcin de las vitaminas forman parte de molculas mas
complejas que funcionan como coenzimas en diversas reacciones.

Muchas enzimas requieren una coenzima

Muchas enzimas que catalizan la transferencia de grupos y otras reacciones
requieren, adems de su sustrato, una segunda molcula orgnica conocida
como coenzima sin la cual son inactivas. Para distinguirlas de iones metlicos
activadores y de las enzimas mismas, las coenzimas se definen
como compuestos orgnicos termoestable, de peso molecular bajo, requeridas
para la actividad de las enzimas. La mayor parte de las coenzimas se unen a
las enzimas por fuerza no covalentes. Las que forman enlace covalentes con
las enzimas se denominan tambin grupos prostticos.
Entre las reacciones que requieren coenzimas estn las oxidorreducciones, las
reacciones de transferencia de grupo e isomerizacin y las reacciones que

forman enlaces covalentes (claves 1,2,5 y 6;IUB). Las reacciones lticas que
comprenden reacciones hidrolticas catalizadas por enzimas digestivas no
requieren de coenzimas.
Las coenzimas pueden considerarse como segundo sustrato
La coenzima puede considerarse como un segundo sustrato o cosustrato por
dos razones. En primer lugar, los cambios qumicos en la coenzima compensa
exactamente a los que realizan en el sustrato. Por ejemplo, en las reacciones o
oxidorreduccin (deshidrogenasa), una molcula de sustrato es oxidasa y una
molcula de coenzima es reducida.
Una segunda razn para dar igual nfasis a las reacciones de la coenzima es
que, en realidad, este aspecto de la reaccin es el que puede ser de significado
fisiolgico fundamental. Por ejemplo, la importancia de la capacidad del
msculo que trabaja en condiciones anaerobias para convertir el piruvato en
lactato no residen en el piruvato ni en el lactato.
La reaccin sirve solamente para oxidar la coenzima reducida NADH a NAD+.
Sin NAD+ la gluclisis no puede continuar y la sntesis anaerobias de ATP (y
por tanto, el trabajo) tiene que cesar. En condiciones anaerobias, la reduccin
del piruvato en lactato reoxida al NADH y permite la sntesis de ATP. Otras
reacciones pueden servir igualmente bien. Por ejemplo, en las bacterias o
levaduras que crecen en medio anaerobio, algunos metabolitos derivados del
piruvato son utilizados como oxidante para el NADH y son reducidos en
el proceso.
Las coenzimas funcionan como reactivos en la transferencia de grupos
Las reacciones bioqumicas de transferencia de grupo del tipo.
D G + A= A G + D
En la cual un grupo funcional, G es transferido de una molcula denadora, D-G,
a una molcula aceptora, A, por lo general comprende la participacin de una
coenzima como ltimo aceptor (por ejemplo, reacciones de dehidrogenacin) o
como portador intermediario del grupo (por ejemplo, reacciones de
transaminacin). El esquema siguiente muestra el ltimo concepto.
D-H CoE A-G
D CoE-G A
Aunque estos sugiere la formacin de un complejo sencillo CoE-G, durante el
curso de la reaccin global, pueden intervenir varios complejos intermediarios
CoE-G en una reaccin particular (por ejemplo, transaminacin).
Cuando el grupo transferido es el hidrgeno, es costumbre representar slo la
"mitad izquierda de la reaccin":
D-H CoE
D CoE-H
Que esto representa en realidad slo un caso especial de la transferencia
general de grupos puede apreciarse mejor en trminos de las reacciones que
ocurren en las clulas intactas. Se pueden representar de las siguientes
manera:
D-H CoE A-H
D CoE-H A

Las coenzimas pueden clasificarse de acuerdo al grupo cuya transferencia

facilitan
Basndose en este concepto podra clasificarse a las coenzimas como sigue:
Para la transferencia de grupos distintos del hidrgeno
Fosfatos de azcares
CoASH
Pirofosfato de tiamina.
Fosfato de piridoxal
Coenzimas del folato
Biotina
Coenzimas de cobamida (B12)
cido lipoico
Para la transferencia del hidrgeno:
NAD+, DADP+
FMN, FAD.
cido lipoico
Coenzima Q.
ESPECIFICIDAD ENZIMTICA
Los distintos grupos de enzimas muestran variaciones considerables en su
grado de especificidad. Algunas de ellas muestran requerimientos estrictos
tanto para el sustrato (o los sustratos si se trata de reacciones bimoleculares)
como para el tipo de unin qumica sobre el que van a actuar; pequeos
cambios en cualquiera de ellos bastn para inactivar la reaccin; tal es el caso
de la mayora de las enzimas. En otras ocaciones, la deshidrogenasa
alcohlica, que funciona con DPN como coenzima, es absolutamente
especfica para el DPN, pero pude actuar sobre diversos alcoholes aparte del
etlico que es su sustrato caracterstico. Asi mismo, las enterasas, las
fosfatasas y ciertas peptidasas a menudo solo son especficas para el tipo de
unin atacada ster, peptdica, etc. y no requieren estructuras definidas en
el sustrato, a ambos lados de la unin. Hay ejemplo de especificidad doble: la
xantina oxidasa, altamente especfica para la xantina a la que convierte en
cido rico, y por otro lado muy activa, pero en forma inespecfica, al mostrar
gran capacidad para mostrar la activacin de gran variedad de aldehidos.

El requisito de estereoespecificidad para los sustratos es muy importante. Las

enzimas que habitualmente atacan a los azcares naturales con configuracin
D-, no lo hacen sobre sus ismeros artificiales L-; las enzimas tan activas en
la naturaleza sobre los aminocidos comunes tipo L- so inactivas para los
aminocidos artificiales (o muy raros en los organismos vivos) de tipo D-. Esto
es tan absoluto que cuando existen mezclas racmicas de ismeros D- y L-,
un mtodo conveniente de separarlas, es el de dejar que actue sobre ellas una
enzima que degradar exclusivamente a uno de los dos ismeros dejando al
otro intacto.
Cuando el sustrato es simtrico y el producto es asimtrico, la enzima provoca,
especficamente, la formacin de uno solo de los productos asimtricos, aquel
para el que la enzima es activa; tal es el caso de la deshidrogenasa lctica que,
al actuar sobre el cido pirvico (simtrico) produce exclusivamente cido Dlctico y no cido L-lctico, y el de la deshidrogenasa glutmica que al atacar el
cido a -cetoglutrico produce solo cido L-glutmico:
CH3CH3
||
C = O HCOH
||
COOH COOH
CIDO PIRVICO CIDO D-LCTICO
Existen otras formas de isomerismo geomtrico aparte del isomerismo D-, L-,
suceptibles de ser reconocidas por enzimas. Tal es la situacin de los ismeros
cis trans en que solo uno de los tipos del par es atacado. La fumarasa
introduce una molcula de agua en el cido fumrico trans, pero el ismero cis,
o sea el cido maleico, no es atacado.
H C COOH H C COOH
HOOC C H H C COOH
CIDO FUMRICO (TRANS) CIDO MALICO (CIS)
Las enzimas tambin pueden distinguir molculas que desde el puntod e vista
estructural, como compuestos qumicos, son identicas. Por ejemplo, la glicerol
cinasa, por medio de ATP, convierte al glicerol en L-grlicerol 3- fosfato, osea
produce su fosforilacin, pero exclusivamente en la posicin 3, hecho que se
ha demostrado con glicerol marcado con C radiactio, C14, en las dos
posiciones posibles 1 y 3.
Los mismo sucede con el cido ctrico que al ser oxidado y descarboxilado
hasta producir cido a -cetoglutrico adquiere un grupo C=O, en uno de los
lados de la molcula, quimicamente simtrica. Esta capacidad de la enzima
para reconocer el sustrato obedece a que debe tener por lo menos tres grupos
qumicos orientados en el espaciod e tal modo que el sustrato, aunque en
apariencia simtrico, solo puede adaptarse por completo a la enzima en una
sola posicin. De todo esto se desprende por el sustrato a los sustratos
necesitan tener un patrn peculiar de grupos qumicos, especficos para cada
enzima particular, de modo que se adapte perfectamente a su centro activo;

mientras mayor y ms complejo sea este requerimiento mayor ser la

especificidad de la enzima.
PREPARACIN Y PURIFICACIN DE LAS ENZIMAS
Aun cuando se sabe que las propiedades de las enzimas in situ puden ser muy
diferentes a las de las enzimas puras estudiadas en el laboratorio, est
plenamente justificada la necesidad de tener preparaciones puras para hacer el
estudio qumico completo de su actividad. En la actualidad se han cristalizado o
purificado de manera adecuada cerca de unas 200 enzimas (del posible total
de unas 5000 ) y quizs en los prximos aos aumente de modo considerable
este nmero.
Para extraer las enzimas de las clulas que las contienen, a menudo es
necesario dividir finamente el tejido, por medio de un homogeneizador o una
licuadora; los tratamientos ms enrgicos comprenden la molienda del tejido
con arena el empleo de vibraciones ultrasnicas, los procesos alternados de
congelamiento y descongelamiento, la autolisis , el desecado con calor o el
emmpleo de solventes como la caetona, el ter y el tolueno. El desecado con
acetona y la produccin de los llamados polvos acetnicos constituyen un
excelente ejemplo de rotura de la menbrana celualr y la obtencin de un
material rico en enzimas y de fcil concervacin. Cuando las enziams estn
asociadas a lpidos, como sucede con als enzimas mitocondriales, es ventajoso
el tratamiento con sustancias de tipo detergente o con butanol que disgregan la
estructura lipoprotica y permiten la salida de las enzimas.
La purificacin de las enzimas con mtodo de precipitacin fraccionada recurre
a diversos procedimientos, el cambio de pH quita las nucleoprotenas y el
material grueso, con lo que se facilitan los pasos siguientes. Con el empleo del
calor a veces se logra la desnaturalizacin de material protico inactivo; por
ejemplo, en la purificacin de la transaminasa se aade el sustrato de la
enzima cido a - cetoglutrico al homogenado y se calienta hasta 65 C,
con lo que muchas enzimas se desnaturalizan y precipitan, lo que no sucede
con la transaminasa as protegida.
En otros casos se emplean solventes orgnicos como el etanol, muy utilizado
para separar diversas protenas del suelo sanguneo y la caetona; o las sales,
como el sulfato de amonio, que es muy soluble en agua, por lo que se puede
manejar a elevadas concentraciones, y en general no ataca la estructura de las
enzimas. la absorcin fraccional tiene gran utilidad para absorver gran material
indeseable o para absorber la enzima y luego desprenderla del material
absorbente en una forma ms pura; muy usado con este fin en el gel
de aluminio C.
En los ltimos aos se han logrado adelantos notables en materia de
fraccionamiento protico con el empleo de tcnicas coromatogrficas en
columnas que se basan en fenmenos de absorcin, de intercambio inoco o
de una verdadera "filtracin molecular". Se agraga a una columna con el
material activo la solucin de la enzima que queda fijada a dicho material; se
lava la columna con soluciones de sales, cada vez ms concentradas o con
distinto pH, etc. , y se recogen los lavados en fracciones de volmenes
determinadas; en alguna porcin sale la enzima en estudio, en forma ms pura.
Los materiales ms usados para este fin son ciertas formas de fosfato de calcio
hidroxiapatita -, resians de intercambio inico, como las Amberlitas o las

Dowex (aunque tienen el inconveniente de desnaturalizar a las protenas y de

tener poca superficie til) y diversos derivados de la celulosa, tales como la
dietilaminoetil celulosa (DEAE celulosa) y la carboximetil celulosa (CM
celulosa). Ejemplos de los filtros moleculares lo constituye el material que est
compuestod e un polisacrido que forma una rejilla tridimensional, el
Sephadex, que puede retener protenas con peso molecular aproximado de 25
000 hasta 200 000 segn el tipo que se emplee.
El paso final de la purificacin es el de la cristalizacin de la enzima que debe
repetirse varias veces pues los primeros cristales suelen estar contaminados
con otras enzimas. A pesar de esto, la obtencin de cristales no demustra que
la enzima est 100% pura, es solo obtencin de una actividad especfica de un
valor constante ante las recristalizaciones repetidas la que ofrece
la seguridad de su pureza.
El estudio de la pureza de una enzima comprende la aplicacin de las tcnicas
empleadas para el estudio de la pureza de las portenas, el anlisis por
ultracentrfuga, el anlisis el electrofortico, etc. Sin embargo, an es podsible,
si se somete la enzima a fraccionamientos ms sensitivos, como losd e la
electroforsis en gel de agar, de almidn, o de acrilamida demostrar que la
enzima en cuestin puede estar formada por varias protenas, algunas de las
cuales tienen la misma actividad enzimtica, pero que por tener propiedades
fsicas o estructurales diferentes se deben considerar como isoenzimas, y otras
que son proteinas que se han procesado a lo largod e todas las etapas de
purificacin.
En general las enziams se consideran especies qumicas homogneas y puras
cuando llenan requisitos como los siguientes: su actividad no debe aumentar
despus de que se la recristaliza repetidas veces; su solubilidad no aumenta al
elevar la cantidad de cristales de la protena problema que se pone en solucin;
tanto en el anlisis realizado con la ultracentrfuga como en los
diversos mtodos electroforticos se encuentra un patrn de mobilidad nico y
persistente.
ISOENZIMAS
Al hacer el estudio electrofortico del suero humano normal y hacer un
revelado de la actividad de la deshidrogenasa lctica se encontr distribuida en
cinco bandas diferentes; se lleg as al concepto que es posible que en un tipo
de tejido existan diversas y mltiples formas moleculares de una enzima, a las
que se denominan isoenzimas. Son por lo tanto protenas con actividad
cataltica que favorece la misma reaccin pero que pueden distinguirse por
alguna caracterstica fsica, estructural, inmunolgica, etc. En el ejemplo
antereior
sus
diferencias
se
rejistraron
en
la
velocidad
de migracin electrofortica. En otras ocaciones la diferencia eside en las
propiedades cinticas; por ejemplo, existen dos deshidrogensas mlicas que
catalizan la misma reaccin; sin embargo, actuan de modo distinto cuando se
les pone en contacto con los anlogos artificiales del DPN y, adems, una es
de origen mitocondrial, la otra se encuentra en el sobrenadante celular.
Sin embargo, este concepto tiene sus limitaciones; el caso de la
deshidrogenasa lctica es muy ilustrativo. Esta enzima se diferencia en 5
isienzimas denominadas I, II, III, IV y V que parecen ser caractersticas de
distintos tejidos; en el corazn dominan el I y la II, el higado tiene un

predominio de la V, etc. al tratar la enzima que pesa 135 000 con rea o
guanidina, su molcula se fragmenta en cuatro porciones, cada una de las
cuales tiene un peso molecular de unos 35 000. Las cinco isoenzimas comunes
de la hidrogenasa lctica parecen sermezclas de dos tipos bsicos A y B, o H
(de "heart", corazn) y de m (msculo) de la siguiente manera:
HHHH Tipo I, miocrdico, H
HHHM Tipo II
HHMM Tipo III
HMMM Tipo IV
MMMM Tipo V, muscular, M
Se ha confirmado inmunolgicamente su presencia; los anticuerpos preparados
contra ambas molculas originales H o M nomuestran reaccin cruzada entre
si, pero si reaccionan con los hbridos formados de H y de M. Del mismo modo,
muestran diferencias considerables en su composicin de aminocidos.
No solo las caractersticas fisicoqumicas son diferentes; quiz aun ms
importante sea el aspecto funcional. La actividad de las deshidrogenasas
lcticas ante sus sustratos normales, lactato, piruvato, y ante los anlogos del
DPN indican el papel de la enzima en la regulacin de las relaciones
DPN/DPNH2, que a su vez, regulan funciones celulares importantes. Es muy
notable la diferencia en la inhibicin producida por un exceso de piruvato
sugerente de que, en rigor, la enzima tipo M o V funciona ms bien como una
reductasa del piruvato. Esta forma (M o V) es muy til en
los msculos voluntarios que presentan demandas bruscas de energa
proporcionadas por la gluclisis, o en tejidos con poco oxgeno (anaerobiosis).
Por el contrario la tipo H (I) funcionan preferentemente en msculos que deben
realizar un ejercicio sostenido y en los que las necesidades energticas se
satisfacen por medio de un metabolismo aerbico intenso; este tipo, por lo
tanto, est capacitado, funcionalmente, para lograr una mayor exidacin del
lactato a cido pirvuco
La distribucin de la enzima con respecto a la aerobiosis (o anaerobiosos) del
tejido se ha comprobado en varios casos: la de tipo H (I) es ms abundante en
la corteza renal (cerca de 100%) que en la mdula (50%) en las papilas (10%),
en razn directa con el grado deaerobiosis de esas zonas renales. Lo mismo
sucede con msculos de un mismo animal; si tienen que trabajar
constantemente muestran grandes proporciones de la forma H (I), como el
dorsal ancho de las gallinas que casi en el 100% muestran dicha forma; el
pectoral, en cambio tiene menos del uno por ciento de ella, en cambio, en los
pectorales de las aves migratorias que deben sostener por horas y aun das,
esfuerzoz extraordinarios, aparece nuevamente la forma H (I) de preferencia a
la M (V).
Es obio que cuando son muy marcadas las diferencias de pesos moleculares,
composicin de aminocidos, caractersticas cineticas y otras propiedades
fsicas, es dificil hablar de isoenzimas; ms conveniente es considerarlas
entonces como enzimas distintas que simplemente catalizan la misma reaccin
reservando el trmino de isoenzima para aquellas situaciones como la de la
deshidrogenasa lctica que representan agregados hbridos de composicin
relativamente parecida.

La constante de Michaelis, KM, indica en trminos generales, las relaciones de

afinidad entre el sustrato y la enzima; un KM, implica la necesidad de una alta
concentracin de sustrato que, al combinarse con una enzima, produzca la
mitad de la velocidad mxima, o sea, que la afinidad por la enzima y sustrato
es pobre; por el contrario, si la concentracin de sustrato que se requiere para
alcanzar la mitad de la velocidad es muy pequea (KM pequea), quiere decir
que el sustrato tiene una gran afinidad por la enzima.
En ocasiones, la misma enzima puede ser ms afn a un sustrato que a otro;
por ejemplo, la sacarasa es 16 veces ms activa para atacar a la sacarosa que
a la rafinosa. Se conocen con exactitud los valores de KM para muchos
sustratos y enzimas, con los siguientes: la pepsina, actuando sobre albmina,
de huevo: KM de 4.5. por ciento; la tripsina sobre la casena :KM de 2 por
ciento; la amilasa sobre el almidn en presencia de Cl : KM de 0.4 por ciento ;
la sacarasa de levadura, sobre la sacarosa : KM 0.016 a 0.04 M, etc.
La explicacin de la curva hiperblica que implica la formacin del complejo
enzima sustrato parece depender de la existencia fsica, en la enzima, de
determinados sitios donde se absorbe el sustrato para ser activado.
Al principio de la curva se puede aumentar la concentracin del sustrato y la
enzima es capaz de activarlo con toda eficiencia; pero como una vez activado
el sustrato se separa en forma de los productos, y la velocidad con la que stos
se separan no es igual a la velocidad con la que captado el sustrato, y en vista
de la cantidad creciente del sustrato, la lnea obtenida no es una recta, sino la
curva sealada. Cuando la cantidad de sustrato ha sobrepasado la capacidad
fsica de la enzima para recibirlo y poder transformarlo, la curva alcanza una
meseta, lo que significa que la reaccin prosigue a la misma velocidad,
independientemente de la cantidad de sustrato adicionada. De acuerdo con los
trminos ligados a la velocidad de reaccin, expresados en la pgina 36, se
encuentra que, al principio del experimento, la reaccin depende
exclusivamente de la concentracin del sustrato y se trata de una reaccin de
primer orden; al final de ella, cuando hay un exceso de sustrato, la reaccin es
independiente de la cantidad de sustrato y, por lo tanto, es de orden cero.Otra
caracterstica en relacin con la finalidad de la enzima por el sustrato es la
comprendida en el llamado nmero de recambio, el cual representa los moles
de sustrato atacados por un mol de enzima en una unidad de tiempo
determinada, generalmente un minuto. Este nmero de recambio, en algunas
ocasiones, es muy elevado, como sucede con la catalasa que a 0 C., tiene un
nmero de recambio de 2.5 millones; es decir, un mol de enzima es capaz, en
un minuto, de desdoblar dos y medio millones de moles de H2O2 ; el citrocomo
c, a 38 C, tiene un nmero de recambio de 1.4 X 103 ; la carboxialasa a 30
C., da un nmero de recambio de 1 X 103 , etc.
Mecanismo Ping Pong
En la transaminacin, la reaccin avanza a travs de los fenmenos alternos
de adicin de sustrato y liberacin de producto .
Iones sustrato

Estos facilitan la fijacin del sustrato y la catlisis por creacin de varias de

complejo de puente constituidos por un enzima, metal y sustrato en la que os
iones metlicos pueden actuar como catalizadores cidos generales o facilitar
la aproximacin de los reactantes.

.
. BIBLIOGRAFIA:
Rodwel. et alli Bioquimica de Harper, 13 ed., s.d.
Laguna, Jose Bioquimica, 2 ed., Facultad de
Medicina, UNAM, Mexico D.F., Fournier S.A., 1969.
Tema : Enzimas
Curso : Qumica
Ao:1999
Resumen: trata de las enzimas, que tienen el poder de
catalizar, facilitar, y agilizar determinados procesos
sintticos y analticos de la vida , contiene la evolucion
de la enzimologia caracteriasticas como actuan en el
organismo , etc
Trabajo
enviado
y
realizado
por:
Marco
Ludea
Universidad Peruana
Cayetano
Heredia
2
ao
en
la
facultad
de
estomatologia
marcolud[arroba]LatinMail.com

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ms: http://www.monografias.com/trabajos5/enzimo/en
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