TESTE DE SENSIBILIDADE

AOS ANTIMICROBIANOS

Para que o antimicrobiano exera sua atividade,

primeiramente dever atingir concentrao ideal no local da
infeco, ser capaz de atravessar, de forma passiva ou
ativa, a parede celular, apresentar afinidade pelo stio de
ligao no interior da bactria e permanecer tempo
suficiente para exercer seu efeito inibitrio

Resistncia a Antimicrobianos
As bactrias utilizam com freqncia mais
de um mecanismo para evitar a ao do
antimicrobiano
A resistncia pode ser de uma
propriedade intrnseca de uma espcie
bacteriana ou adquirida por alterao no
DNA

Resistncia a Antimicrobianos
A alterao do DNA pode ocorrer de duas
formas:
Induo de mutao no DNA nativo
Introduo de um DNA estranho Genes
de resistncia que podem ser
transferidos entre gneros e espcies
diferentes

1. Alterao da permeabilidade
A permeabilidade
limitada responsvel
pela resistncia
intrnseca dos bacilos
Gram-negativos
penicilina, eritromicina,
clindamicina e
vancomicina e pela
resistncia de
Pseudomonas
aeruginosa ao
trimetoprim

Ocorre em bactrias
gram-negativas pela
perda de porinas

2. Alterao do stio de ao do
antimicrobiano
As bactrias podem
adquirir um gene que
codifica um novo produto
resistente ao antibitico,
substituindo o alvo
original
Staphylococcus aureus
resistente oxacilina e
estafilococos coagulasenegativos produzem uma
protena de ligao da
penicilina (PBP ou
PLP) resistente aos lactmicos

3. Bomba de efluxo
O bombeamento ativo de
antimicrobianos do meio
intracelular para o
extracelular, isto , o seu
efluxo ativo, produz
resistncia bacteriana a
determinados
antimicrobianos. A
resistncia s
tetraciclinas codificada
por plasmdeos em
Escherichia coli resulta
deste efluxo ativo.

4. Mecanismo enzimtico
O mecanismo de
resistncia bacteriano
mais importante e
freqente a degradao
do antimicrobiano por
enzimas
A resistncia quase
universal de S. aureus
penicilina mediada por
uma -lactamase
induzvel, codificada por
plasmdio

Nas bactrias Gramnegativas, o papel das lactamases na resistncia

bacteriana complexo e
extenso

ANTIBIOGRAMA
Teste de Sensibilidade
aos Antimicrobianos
(TSA)

Teste de Sensibilidade aos

Antimicrobianos (TSA)
Definio
Tcnica destinada determinao da
sensibilidade bacteriana in vitro frente a
agentes antimicrobianos

Teste de Sensibilidade aos

Antimicrobianos (TSA)
Avalia o padro de sensibilidade da
bactria diante de concentraes prestabelecidas de antimicrobianos,
correlacionados com nvel srico

Teste de Sensibilidade aos

Antimicrobianos (TSA)
Orienta a escolha da terapia antimicrobiana
mais adequada
Representa uma importante ferramenta no
monitoramento da evoluo da resistncia
bacteriana

Teste de Sensibilidade aos

Antimicrobianos (TSA)
Mtodo auxiliar na implantao de medidas
de controle que evitem a disseminao de
bactrias multirresistentes
Adaptao do uso racional para terapia
emprica atravs de dados locais

Teste de Sensibilidade aos

Antimicrobianos (TSA)
Indicado para:
- microrganismo cujo padro de suceptibilidade
no previsvel
- Isolados clinicamente significantes
- Importante nos estudos epidemiolgicos e de
novos agentes antimicrobianos
- Padronizaes definidas
para organismos
aerbios e facultativos (documento M100-S24CLSI) - 2014

Tcnicas para avaliao da

sensibilidade aos antimicrobianos
Metodos:
- Quantitativos: MIC Determina a
Concentrao Inibitria Mnima ou seja, a
menor concentrao do antimicrobiano
que inibe o crescimento bacteriano.
- Qualitativo: Categoria S, I, R.

Tcnicas para avaliao da

sensibilidade aos antimicrobianos

Macrodiluio em tubos
Microdiluio em caldo
gar-diluio
Etest
Disco-difuso (Kirby & Bauer)
Automao - sistemas automatizados

Tcnicas para avaliao da sensibilidade

aos antimicrobianos
Macrodiluio em tubos

Tcnicas para avaliao da

sensibilidade aos antimicrobianos
Microdiluio em caldo

Tcnicas para avaliao da

sensibilidade aos antimicrobianos
Microdiluio em caldo
Teste de microdiluio em caldo
para polimixina B com
concentraes de 16 g/mL (A) a
0.125 g/mL (G) cada coluna possui
um microrganismo.
Exemplo:
coluna 11 - Pseudomonas
aeruginosa com CIM 0,5 g/mL.

Tcnicas para avaliao da

sensibilidade aos antimicrobianos
Etest - baseia-se na difuso do gradiente
antimicrobiano no gar para a determinao da
sensibilidade
da
amostra
bacteriana
ao
antimicrobiano testado

Tcnicas para avaliao da

sensibilidade aos antimicrobianos
Disco-difuso
O teste de disco-difuso em gar foi
descrito em 1966 por Bauer e Kirby.

Teste de sensibilidade pelo mtodo de disco-difuso

Disco-difuso

Vantagens do mtodo em gar:

Fcil execuo;
Reprodutibilidade;
Utilizao de reagentes de baixo custo;
Resultados de fcil interpretao clnica;
Flexibilidade quanto escolha dos
antimicrobianos e a no exigncia de
equipamentos especiais.

Disco-difuso

Teste de sensibilidade aos antimicrobianos

Disco difuso - Procedimento
Inculo - cultura pura

Teste de sensibilidade aos antimicrobianos

Disco difuso - Procedimento

Teste de sensibilidade aos antimicrobianos

Disco difuso - Procedimento
Inoculao do meio Muller Hinton com swab

Mtodo de Difuso em Agar

Disco de
antibitico

Teste de sensibilidade aos antimicrobianos

Leitura - medida do halo de inibio

Interpretao do Antibiograma
Sensvel: o isolado inibido por concentraes
usuais de antimicrobianos
Intermedirio: eficcia clnica em stios do
corpo nos quais as drogas so fisiologicamente
concentradas (ex. quinolonas na urina) ou qdo
uma dose maior que a usual pode ser utilizada.
Resistente: Isolado no sers inibido pela
concentrao sistemica usualmente alcanada
pela droga.

Pontos de corte por

Disco Difuso

Referncias Bibliogrficas
Medidas de preveno e controle da resistncia
microbiana e programa de uso racional de
antimicrobianos em servios de sade. OPAS,
ANVISA, Rede RM, CGLAB/SVS/MS e
Disciplina de Infectologia da UNIFESP, 2007.
Boas Prticas de Microbiologia Clnica. OPAS,
ANVISA, Rede RM, CGLAB/SVS/MS e
Laboratrio Central do Hospital da Universidade
Federal de So Paulo, 2008
Manual para Antibiograma Laborclin