1 Entendemos por crecimiento microbiano el aumento del nmero de microorganismos a lo largo del

tiempo. Por tanto, no nos referimos al crecimiento de un nico microorganismo (ciclo celular), sino al
demogrfico. El crecimiento de una poblacin es el aumento del nmero de clulas como
consecuencia de un crecimiento individual y posterior divisin
En este tema nos centraremos en el crecimiento de bacterias, el estudio que se hace puede servir
tambin para entender el crecimiento de levaduras y de otros hongos. El crecimiento de los virus se
produce de otra forma diferente y ser tratado al final de este captulo.
2 MEDIDA DEL CRECIMIENTO Y ENUMERACIN DE MICROORGANISMOS
Existen diferentes sistemas para detectar y medir el crecimiento de microorganismos.
Los principales, se enumeran a continuacin:
1.- Recuento directo: consiste en la observacin al microscopio de volmenes muy pequeos de
suspensiones de bacterias. Se usan unos portaobjetos especiales denominados cmaras de PetroffHausser. Para que la medida sea correcta es necesario que la densidad de clulas sea del orden de
105 por ml.
2.- Medida de la masa de clulas: el sistema se basa en que las clulas en suspensin dispersan la
luz causando la turbidez del cultivo. La turbidez depende de la masa en suspensin y, por tanto,
midiendo esta se puede estimar aquella. Este es el parmetro de medida ms fcil de usar en los
cultivos de laboratorio. La densidad de clulas debe ser del orden de 105 por ml.
3.- Recuento de viables: consiste en sembrar un volumen determinado de cultivo o muestra sobre el
medio de cultivo slido adecuado para estimar el nmero de viables contando el nmero de colonias
que se forman puesto que cada una de estas deriva de una clula aislada. Para que la medida sea
correcta desde el punto de vista estadstico, es necesario contar ms de 300 UFC.

En ciertas ocasiones en las que la densidad de microorganismos es demasiado baja, stos se pueden
recolectar por filtracin a travs de una membrana (de 0.2 m de tamao de poro) y posterior
colocacin de la membrana en un medio de cultivo adecuado para que se formen las colonias.
4.- Medida del nmero de partculas usando contadores electrnicos de partculas. Estos sistemas no
nos indican si las partculas corresponden a clulas vivas o muertas; pero nos pueden dar una idea
del tamao de las partculas.
5.- Medida de parmetros bioqumicos tales como la cantidad de ADN, ARN, protenas,
peptidoglicano, etc. por unidad de volumen de cultivo.
6.- Medida de actividad metablica de las bacterias como que respiran producen una disminucin del
potencial redox del medio en que se encuentran como consecuencia del consumo de oxgeno
(utilizacin de colorantes sensibles a oxidacin-reduccin tales como el azul de metileno).

Entre los mtodos principales de recuento de microrganismos podemos destacar:

1.- Las tcnicas de recuento microscpico de clulas sin fijar usando microscopa de contraste de fae.
Para ello se cuenta el nmero de partculas en un volumen determinado usando una clula de PetroffHauser o de Neubauer (portaobjetos modificado en e que una rejilla nos permite conocer el volumen
que estamos observando). El procedimiento es rpido y sencillo; pero no permite distinguir clulas
vivas inmviles de clulas muertas.
2.- Contaje de partculas utilizando sistemas automticos del tipo Coulter Counter. La operacin de
estos sistemas es sencilla (mtodo de empleo) y permite rpidamente determinar el nmero de
patculas presentes en una suspesin y la distribucin de sus tamaos. El problema es que no
distingue entree clulas vivas y muertas ni entre clulas y agregados de material insoluble presente
en la suspensin del cultivo.

3.- Tcnicas de recuento en placa, basadas en colocar en un medio de cultuivo adecuado un volumen
determinado de muestra. Cada una de las clulas aisladas dar lugar, despus de la incubacin
correspondiente, a una colonia de forma que el nmero de estas nos permitir estimar el nmero de
clulas presentes en la muestra plaqueada (sembrada). El sistema es fcil de utilizar en el caso de
clulas aisladas (no sirve en el caso de hongos filamentosos, por ejemplo). Puede realizarse
sembrando en superficie (extendiendo un volumen dado de muestra sobre el medio de cultivo slido)
o en profundidad (mezclando un volumen dado de muestra con el medio de cultivo antes que
solidifique). Esta ltima opcin permite realizar el recuendto de microorganismos microaerfilos que
no crecen bien en la superficie de las placas de cultivo. Para que el sistema de recuento en placa
tenga validez estadstica, es necesario contar entre 30 y 300 colonias con objeto de disminuir el error
de la medida.
4. Tcnicas turbidomtricas basadas en la medida de la turbidez de los medios de cultivo en los que
crecen microorganismos unicelulares. La turbidez es proporcional a la masa de las partculas en
suspensin (clulas) y su medida nos permite estimarla. Para ello se utiliza un equipo similar al que
se emplea en la medida de la absorbancia de luz por disoluciones coloreadas (colormetro, por
ejemplo). Las medidas se hacen a una longitud de onda adecuada (normalmente en el entorno de
550 nm) y los valores se suelen denominar valores de densidad ptica. La limitacin de este sistema,
por otra parte muy sencillo, es que no distingue clulas vivas de muerta y que normalmente no es
capaz de detectar densidades celulares menores a 10.000 clulas por mililitro.
5.- Medida de peso seco. El sistema consiste en la filtracin del cultivo a travs de una membrana
que retenga las clulas y su posterior desecacin hasta peso constant. El sistema, obviamente, no
disferencia clulas vivas de muertas y su sensibilidad es limitada.
6.- Medida del ATP. Es una medida relativamente sencilla basada en la emisiin de luz por la
luciferasa de lucirnaga (Photimus pyralis) en presencia de O2 y de ATP. De esta forma se puede
medir la concentracin de ATP en un volumen dado de cultivo. Esta medida es interesante porque la
concentracin de ATP decae rpidamente en las clulas muertas, de forma que esa medida indirecta
detecta nicamenta las clulas vivas.

Los sistemas de medida del crecimiento celular se han adaptado tcnicamente para poder ser
utilizados como sistemas online. En una opracin on line no es necesario extraer la muestra del
cultivo para realizar la medida. Esto es muy importante en el caso de fermetaciones en gran volumen
porque permite realizar medidas en tiempo real y disminuye los riesgos de contaminacin.
La medicin en laboratorio del crecimiento microbiano, se puede llevar a cabo de distintas formas:
Contaje de unidades: tambin llamado contaje en placa. Es un buen mtodo, ya que permite contar
tan solo las clulas viables, es decir, aquellas capaces de dividirse para dar descendencia.
Tericamente, cada clula viable puede dar lugar a una colonia. Hay dos formas de llevar a cabo este
conteo: por siembra en superficie o por vertido en placa. En la siembra en superficie se coloca menos
de 0,1 mililitro en la superficie del medio, usando una barra de vidrio doblada y estril. En el vertido
en placa, el medio estril se mezcla con el inoculo y se incuba. En este caso, el inoculo puede ser de
0,1 a 1 mililitro. Adems, por medio de ultrasonidos se pueden separar un poco las colonias para
contarlas mejor. En cuanto al nmero de diluciones que debe tener el inoculo, se hacen diluciones
seriadas, generalmente en base diez. El nmero de colonias multiplicado por el factor de dilucin nos
da el nmero de colonias reales.
Cmara de contaje: se emplea para medios lquidos. Su mayor inconveniente es que no distingue
las clulas vivas de las clulas muertas o de las partculas en suspensin. En estas cmaras la
superficie del porta lleva marcada una rejilla que facilita el conteo.
Medidas de masa celular y turbidez: las clulas pueden dispersas la luz. Cuantas ms clulas haya
en una suspensin, ms luz se dispersa. Esta dispersin se puede medir con un espectrofotmetro o
con un fotmetro. Para los organismos unicelulares, la densidad ptica unidad de medida del
espectrofotmetro-, es proporcional, dentro de unos lmites, a la masa celular y al nmero de clulas,
por lo que se puede usar como medida de contaje indirecta. Para evitar cometer mucho error, hay
que realizar una curva estndar que relacione las medidas directas con las medidas indirectas de
turbidez. Adems, tambin se puede relacionar el peso seco con el nmero de clulas: se filtra un

volumen conocido y se dejan secar las muestras. La masa seca de las clulas bacterianas es
aproximadamente un diez o veinte por ciento de la masa hmeda.
Contaje de colonias: otras veces, no se parte de clulas sino de un nmero conocido de esporas. Los
contadores de colonias miden el paso de las partculas por una solucin salina por unidad de
volumen. Se pueden fijar lmites para que solo se midan las partculas de un determinado tamao,
por ejemplo de entre 0,2 y 1 nanmetro. El problema de este mtodo es que solo cuenta partculas, y
no diferencia las clulas vivas de las muertas.
1 El ciclo de Krebs es una ruta metablica anfiblica, ya que participa tanto en procesos catablicos
como anablicos. Este ciclo proporciona muchos precursores para la produccin de algunos
aminocidos, como por ejemplo el cetoglutarato y el oxalacetato, as como otras molculas
fundamentales para la clula.
El ciclo de Krebs es catablico porque la molcula de acetil coenzima A que entra al ciclo
(proveniente del piruvato de la gluclisis o de la oxidacin de los cidos grasos) se rompe formando
dos molculas de CO2, es decir, se forman molculas ms pequeas y con un contenido de energa
muy bajo; pero tambin se le considera un ciclo anablico por dos razones, la primera es porque que
en l se forman molculas de alta energa como GTP, NADH y FADH y la segunda porque a partir de
varios intermediarios del ciclo se pueden sintetizar diferentes tipos de molculas, por ejemplo a partir
del oxalacetato se pueden sintetizar algunos aminocidos o incluso glucosa (a travs de vas
diferentes).
2 La Gluclisis se realiza en el Citoplasma de la clula en condiciones Anaerbicas(sin la presencia o
intervencin del O2 atmosfrico), en cambio el Ciclo de Krebs se realiza en la Matrz Mitocondrial en
presencia del O2 atmosfrico.
En cuanto a la cosecha neta de energa qumica la Gluclisis solo proporciona 8 molculas de ATP, en
cambio en Ciclo de Krebs proporciona la mayor cantidad de ATP que se libera en la Respiracin
celular aerobia(24 molculas de ATP).

La glicolisis es un proceso en el cual la molecula de 6 carbonos de la glucosa se degrada para

producir dos moleculas de piruvato. La glicolisis se divide en 2 partes: 1 de gasto de ATP, en donde se
producen, a partir de una molecula de glucosa, Diacilglicerol y Gliceraldehido 3- fosfato. La segunda
parte es de produccion de ATP, en la qwe El gliceraldehido 3-fosfato se convierte en Diacilglicerol, y
estas dos moleculas de Diacilglicerol van a producir cada una una molecula de piruvato, osea se
producen en total dos moleculas de piruvato por molecula de glucosa*
El Ciclo de Krebs es el proceso en el qwe el piruvato ingresa a la mitocondria, en el mitosol mas
exactamente, y se degrada a Acetilo, el cual va a reaccionar con Coenzima A para producir
Acetilcoenzima A, molecula qwe reaccioara con oxalacetato (moleculade inicio del ciclo de krebs) y
dara asi inicio al ciclo de krebs....Es importante qwe sepas qwe en el ciclo de krebs NO SE PRODUCEN
LAS 34-36 MOLECULAS DE ATP*. Lo qwe se producen son atomos de hidrogeno por
deshidrogenizacion de los metabolitos e intermediarios de este proceso, y estos atomos mediante la
cadena respiratoria van a producir el ATP por su paso a traves de la ATP sintetasa (proteina qwe
produce el ATP).