PRCTICA No.

4
FRMULA ROJA

La frmula roja incluye un conjunto de determinaciones que tiene como objetivo valorar la
eritropoyesis eficaz del paciente.
Las partes que comprende son:
a)
b)
c)
d)
e)

Recuento de glbulos rojos.

Cuantificacin de la concentracin de hemoglobina.
Determinacin del hematocrito.
Clculo de los ndices eritrocticos.
Observacin de anormalidades de los eritrocitos.

A) RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS (Mtodo manual).

FUNDAMENTO
Es un examen de sangre que mide la cantidad de glbulos rojos (GR) que usted tiene.
Los glbulos rojos contienen hemoglobina, que transporta oxgeno. La cantidad de
oxgeno que los tejidos corporales reciben depende de cuntos glbulos rojos tenga usted
y de qu tan bien funcionen.
El conteo de glbulos rojos casi siempre forma parte de un CSC (conteo sanguneo
completo).
Este examen puede ayudar a diagnosticar diferentes tipos de anemia (bajo nmero de
GR) y otros problemas de salud que afectan los glbulos rojos.
Afecciones adicionales por las cuales se puede realizar el examen:
-Enfermedad que daa los vasos sanguneos del rin (sndrome de Alport).
-Cncer de los glbulos blancos (macroglobulinemia de Waldenstrom).
-Trastorno por el cual los glbulos rojos se descomponen ms pronto de lo normal
(hemoglobinuria paroxstica nocturna).
-Trastorno de la mdula sea por el cual dicha mdula es reemplazada por tejido
cicatricial (mielofibrosis).
PREGUNTAS GUIA
1. Cules pueden ser las diversas fuentes de error en esta determinacin?
El tiempo y la velocidad.

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

2. Si en lugar de hacer el recuento de eritrocitos utilizando una dilucin de

1:200 se requiere utilizar una dilucin 1:100 Cmo haras esta dilucin?
Cmo se haran los clculos?

3. Bajo qu condiciones del paciente debe hacerse la toma de muestra para

esta determinacin, es decir, Se debe dar alguna indicacin especial?
No se necesita preparacin especial para los adultos
4. Cules pueden ser las causes de que un paciente tenga elevado o
disminuido su recuento de eritrocitos?
Consumo de cigarrillo, problema con la estructura y funcionamiento del corazn
que est presente al nacer (cardiopata congnita), insuficiencia del lado derecho
del corazn (Cor pulmonale), deshidratacin (como por ejemplo, por diarrea
intensa), tumor renal (carcinoma de clulas renales), niveles bajos de oxgeno en
la sangre (hipoxia), cicatrizacin o engrosamiento de los pulmones (fibrosis
pulmonar) y enfermedad de la mdula sea que causa un aumento anormal en los
glbulos rojos (policitemia vera).
MATERIAL

Equipo para venopuncion (Tubo lila)

2 Tubos de ensaye de 13x100
1 Cmara de Neubauer con cubreobjetos.
Microscopio
Agitador mecnico para pipetas

REACTIVOS
E.D.T.A. al 10%
Solucin de Gower (lquido diluyente), el cual se prepara:
Sulfato de Sodio..12.5 g
cido actico glacial33.3 ml
Agua destilada...200.0 ml
TCNICA
1.

Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica puncin
venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA
2. Colocar el tubo de plstico y la boquilla para aspirar en la pipeta
3.

Llenar la pipeta de glbulos rojos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilucin
de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilucin ser 1/100. Limpiar la punta con gasa o papel
absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente.

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

4.

Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (Hayem) y llenar de

lquido de dilucin hasta la marca de 101.

5.

Se tapa la punta con papel parafin y se coloca en un rotador automtico o se hace rotar
manualmente de 2-3 minutos.

6.

Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequea cerca
de un extremo de la cmara para que por capilaridad se llene exactamente. Dejar 2
minutos que los eritrocitos se sedimenten.

7.

Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. luego con el objetivo
de 40x contar sobre el cuadro grande central de la cmara solo en 5 cuadrados
pequeos: uno central y cuatro angulares (80 cuadritos del total).

8.

En el recuento se incluyen las clulas que cubren o tocan por dentro o por fuera las
lneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeo de recuento y no se
consideran los que estn en los lmites inferior y derecho.

VALORES DE REFERENCIA
NIOS:
Recin nacidos. 5.5 a 6.5 millones/mm3
1 aos..4 a 4.5 millones/mm3
10 aos4.1 a 5 millones/mm3
ADULTOS:
Hombre5 a 6 millones/mm3
Mujer4.2 a 5.5 millones/mm3

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

RESULTADO
Clculos
N de hemates x mm3 = altura x dilucin x rea
N de hemates x mm3 = 1/10 x 1/200 x 1/5 = 1/10 000
N de hemates x mm3 = hemates contados x 10 000

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFA

Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos, articulo web

consultado
el
da
8
de
marzo
de
2012
en:
http://html.rincondelvago.com/fundamentos-y-tecnicas-de-analisis-hematologicosy-citologicos.html
Cmara de Neubauer, consultado el da 15 de abril de 2011 en http://2l2mlaboratoristaclinico.blogspot.com/2009/04/camara-de-neubauer.html
Martnez Fragoso, Vicente. Manual de Biometra Hemtica. CBTis199, Mxico,
2012. Pp. 9-11

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

B) CUANTIFICACIN DE LA CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA

FUNDAMENTO
La hemoglobina es una protena conjugada contenida en el interior de los eritrocitos a
razn de 300000000 molculas de hemoglobina por cada eritrocito en los humanos. Sirve
como vehculo para el transporte de oxigeno de los pulmones, donde la tensin de O2 es
elevada, hacia los tejidos, donde es baja. Una molcula de hemoglobina es un tetrmero
que consta de dos pares de cadena de poli pptidos, dos sub unidades alfa y dos betas
que estn enfrentadas entre s en torno a una cavidad en el centro de la molcula. Cada
sub unidad contiene un grupo hemo (regin ligante de oxgeno, que contiene un tomo de
hierro ferroso), por lo cual una molcula de hemoglobina puede unir 4molculas de
oxgeno. La hemoglobina reducida es hemoglobina con hierro no asociado al oxgeno.
Cundo cada grupo hemo se asocia con una molcula de oxgeno, la hemoglobina toma
la forma de oxihemoglobina. Tanto en la hemoglobina reducida como en la
oxihemoglobina, el hierro permanece en estado ferroso (Fe ++. Con el hierro oxidado al
estado frrico se forma Meta hemoglobina y la molcula pierde su capacidad para
transportar oxgeno y dixido de carbono. El mtodo que se utilizara para realizar esta
determinacin se denomina Mtodo de la Cian metahemoglobina y se fundamenta en que
al combinar un volumen determinado de sangre con una solucin que contiene k3fe (CN)6
y KCN (solucin de Drabklin), el ferrocianuro convierte el hierro ferroso de las
hemoglobinas en frrico, para formar metahemoglobina y la molcula pierde su capacidad
para transportar O2. Luego la meta hemoglobina se combina con el cianuro de potasio
para formar cianometahemoglobina de color rojo anaranjado brillante, apto para la
determinacin calorimtrica.
PREGUNTAS GUIA
1. Qu es la hemoglobina y cul es su funcin en nuestro organismo?
Pigmento rojo contenido en los hemates de la sangre de los vertebrados, cuya
funcin consiste en captar el oxgeno de los alveolos pulmonares y comunicarlo a
los tejidos, y en tomar el dixido de carbono de estos y transportarlo de nuevo a
los pulmones para expulsarlo.
2. Qu otros mtodos existen para la determinacin de hemoglobina?
Hematocrito, mtodo de la ciano-metahemoglobina, mtodo de la co-oximetra.,
principio de Coulter y conductividad.
3. Cules son las ventajas de este mtodo?
Tienen la ventaja de aportar informacin adicional sobre los valores de
Oxigenacin de la sangre, electrolitos y estado cidobase.
4. Qu precauciones deben tenerse al utilizar el lquido diluyente?
De no agregar ms de lo que se debe porque entonces la muestra ya no servir.

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

5. En qu casos se encuentra aumentada o disminuida la concentracin de

hemoglobina en un paciente?
La anemia normoctica/normocrmica (NC/NC) es causada por prdida repentina
de sangre, prtesis de vlvulas del corazn, infeccin de la sangre (sepsis), tumor,
enfermedad prolongada, anemia aplsica o una deficiencia de la hormona
eritropoyetina causada por insuficiencia renal.
La anemia microctica/hipocrmica es causada por deficiencia de hierro,
intoxicacin con plomo, un trastorno sanguneo llamado talasemia o inflamacin.
La anemia macroctica/normocrmica o anemia hipercrmica resulta de
quimioterapia, deficiencia de folato o deficiencia de vitamina B12.
MATERIAL

Equipo para venopuncion (Tubo lila)

2 Tubos de ensaye de 13x100
1 Pipeta graduada de ml
1 Pipeta de Sahli con boquilla o micropepita de 20 um
Espectrofotmetro con adaptador y 4 celdas.

REACTIVOS
E.D.T.A. al 10%
1 Frasco de solucin estndar de hemoglobina.
Solucin de diluyente de Drabklin (cianometa):
Bicarbonato sodico..1 g
Cianuro potsico...0.05 g
Ferricianuro potsico...0.2 g
Agua destilada c.b.p.1,000 ml
TCNICA
1. Aadir 5 ml de solucin de Drabklin en un tubo.
2. Mezclar suavemente la mezcla de sangre (agitar el frasco 20 veces).
3. Con la pipeta automtica tomar 20 ul de la sangre, limpiando cuidadosamente la
parte exterior de las puntas de las pipetas.
4. Introducir la pipeta y mezclar la sangre con el reactivo de Drabklin contenido con el
tubo.
5. Mezclar bien y esperar 5 minutos.
6. Leer la absorbancia utilizado como blanco un tubo con solucin de Drabklin-Para
el clculo de los resultados (concentracin de Hb) extrapolar en la curva patrn.
Concentracin de Hb (gr/dl)=Concentracin del estndar/Lectura del estndar X
Lectura del problema.

VALORES DE REFERENCIA

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

NIOS:
Recin nacidos. 16 a 19 millones/mm3
1 aos..12 a 13 millones/mm3
10 aos12.5 a 14 millones/mm3
ADULTOS:
Hombre14.5 a 18 millones/mm3
Mujer13 a 16 millones/mm3
RESULTADO
Clculos
N de hemates x mm3 = altura x dilucin x rea
N de hemates x mm3 = 1/10 x 1/200 x 1/5 = 1/10 000
N de hemates x mm3 = hemates contados x 10 000

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFA
http://www.ihrdiagnostica.com/tecnicas/pdf/Hemoglobinav2.pdf

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

C) DETERMINACIN DEL HEMATOCRITO

Segn la tcnica descrita en la prctica no. 4
RESULTADO

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

D) CALCULO DE LOS NDICES ERITROCTICOS.

Se lleva a cabo mediante las siguientes frmulas de Wintrobe:
1. VCM (Volumen Corpuscular Medio)= Hematocrito x 10 / No. Eritrocitos (mil/mm3)
Se expresa en micras cubicas (u3) o femtolitos (fl) y representa el volumen medio
de los hemates individuales. Los valores de referencia: 82 a 98 fl.
2. HCM (Hemoglobina Corpuscular Media)= Hemoglobina (g/dl) x 10/ No. De
eritrocitos (mil/mm3)

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

Se expresa en picogramos (pg) o microgramos (uug) y representa el contenido

medio en peso de hemoglobina en un hemate individual. Valores de referencia: 27
a 33 pg.
3. CCMH (Concentracin Corpuscular Media de Hemoglobina)=
Hemoglobina(g/dl)x100/Hematocrito.
Se expresa en % o en g/dl y representa la concentracin media de hemoglobina
por 100 ml de hemates concentrados. Valores de referencia: 31 a 35%
RESULTADO

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

E) OBSERVACIN DE ANORMALIDADES DE ERITROCITOS.

FUNDAMENTO
De acuerdo a su forma:
Normocroma: Trmino utilizado para indicar que el eritrocito contiene una
cantidad de hemoglobina igual al nivel normal determinado por la concentracin de
hemoglobina corpuscular media (PCHC).

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

Hipocroma: Se origina por una sntesis anormal de hemoglobina, asociada a

deficiencia de hierro, anemia sideroblstica, talasemia y anemia de las
enfermedades crnicas. Se observa el eritrocito con una mayor palidez central.
Hipercroma: Trmino que no representa una situacin real y que por lo tanto no
se acoge.
Policromatoflia. Los eritrocitos policromatfilos (reticulocitos), suelen ser ms
grandes que las clulas normales en los frotis de sangre teidos con Romanowsky.
El tinte azuloso es producido por la presencia de RNA residual en el citoplasma.
Cantidades abundantes de estas clulas se presentan cuando hay disminucin en
la supervivencia del eritrocito o hemorragia, y una mdula sea hiperplsica
eritroide.
Knizocito. Deriva su nombre de la similitud con una canasta, presenta una
distribucin de la hemoglobina a manera de banda central que deja espacios no
coloreados a ambos lados. Se observa asociado a anemias hemolticas. Su
gnesis no es clara.
Leptocitos: Hemates maduros con un rea en la que se concentra una mayor
cantidad de hemoglobina en una zona central clara, lo que les confiere el aspecto
de diana. Tambin reciben el nombre de codocitos o de hemates en diana.
Picnocitos: Hemates maduros con un rea lateral clara, concentrndose la
hemoglobina en el otro lado. Se observan en pequea cantidad en los nios
pequeos, siendo ms abundantes en las viremias infantiles y otros desrdenes
hemolticos.
De acuerdo a su tamao:
Macrocitosis: est usualmente acompaada de un PVC por encima de 100 fL. Su
aparicin puede estar asociada a: Deficiencia de vitamina B12 y/o cido flico.
Estrs medular cuando hay eritropoysis acelerada. Trastornos hepticos.
Microcitos: Recibe este nombre el glbulo rojo que presenta un dimetro inferior
a 6.0 micras, la microcitosis est usualmente acompaada de un PVC por debajo
de 75 fL. Se observan microcitos en entidades que cursan con alteraciones
cuantitativas de la hemoglobina como son las anemias por deficiencia de hierro y
las talasemias. Generalmente los microcitos se acompaan de bajo contenido de
hemoglobina por lo cual se denominan microcitos hipocrmicos.
Megalocitos: Son los grandes macrocitos ovales, clulas donde se combina una
alteracin del tamao y de la forma, pueden llegar hasta tener 12 micras de
dimetro. Caractersticamente se observan en anemias megaloblsticas.
De acuerdo a su forma:
Equinocito: Caractersticamente aparece como una clula dentada que presenta
sobre su superficie pequeas progresiones redondeadas a manera de bombas o
vesculas de tamao uniforme y simtricamente distribuidas que con el MEB,
semejan un erizo de mar.
Acantocito: Al microscopio electrnico esta clula se observa como una
estructura densa e irregularmente contrada. Bajo el microscopio de luz es un
hemate con escasas proyecciones espiculadas que no presentan una distribucin

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

homognea y varan en longitud y nmero. Los acantocitos se generan cuando las

clulas rojas normales se exponen a condiciones que modifican el contenido
lipdico de su membrana, alterando la relacin colesterol libre / fosfolpidos en
ciertas zonas de membrana. Una vez producida esta forma, es irreversible.
Estomatocito: En los individuos normales el 3% o menos de las clulas rojas en
el extendido de sangre perifrica son estomatociticas. El estomatocito se define
como una clula unicncava que en los extendidos coloreados con Wright
presenta una depresin central elongada con apariencia de boca o estoma (de all
su nombre) que sustituye el rea de palidez central redondeada de los discos
bicncavos. Es un estado transicional en la transformacin discocito-esferocito.
Degmacitos: Tambin llamadas por su aspecto clulas mordidas, son hemates en
los que la hemoglobina ha sido desnaturalizada y precipitada, con lo que las
clulas muestran diferentes defectos. Estas clulas suelen ser eliminadas por el
bazo.
Esferocito: Hemates maduros de un dimetro entre 6.1 y 7 mm, esfricos y
uniformemente coloreados. Tienen un volumen algo ms pequeo que las clulas
normales y una concentracin mayor de hemoglobina.
Dianocito-codocito-Target cell: La verdadera forma circulante es la de
campana, en las extensiones convencionales sufre una redistribucin anmala de
la hemoglobina asumiendo la forma de clula blanco en diana (target cell). El
codocito es la expresin morfolgica resultante del incremento de la relacin.
Eliptocito u ovalocito: Es bsicamente un disco bicncavo oval con extremos
redondeados, su forma vara desde una simple distorsin ligeramente oval hasta
casi cilndrica elongada con polarizacin de la hemoglobina.
Clula falciforme o drepanocito: Es una clula elongada con extremos
puntiagudos o espiculados que semejan una hoz o media luna.
Dacriocito o clula en gotera: Se refiere este trmino a la clula roja
caracterizada por una elongacin nica asumiendo una forma periforme o gotera
rasgada. Su gnesis permanece oscura. Constituye un hallazgo ocasional en
anemias megaloblsticas, talasemias y mielofibrosis.
Esquistocito: Hemates maduros, de tamao y formas irregulares o fragmentos
celulares, debidos a roturas de la membrana.
Queratocito o clula mordida: Son los hemates parcialmente fragmentados,
producto de la funcin pitting del bazo, en la que la clula pierde una porcin de
la membrana sin alterar el contenido intracelular de la hemoglobina. Al observarlos
coloreados con Wright, en los extendidos de sangre perifrica, presentan
proyecciones que semejan cuernos, resultantes de la ruptura de la vacuola que se
forma alrededor del cuerpo de inclusin. Aparecen en entidades que cursan con la
formacin de cuerpos de Heinz, particularmente en la deficiencia de glucosa 6
fosfato deshidrogenasa y talasemias.

PREGUNTAS GUIA

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

1. Menciona las distintas anormalidades morfolgicas que pueden presentarse

en los eritrocitos.
De acuerdo a su tamao: Normocroma, Hipocroma, Hipercroma,
Policromatoflia, Knizocito, Leptocitos y Picnocitos.
De acuerdo a su tamao: Macrocitosis, Microcitos y Megalocitos
De acuerdo a su forma: Equinocito, Acantocito, Estomatocito, Degmacitos,
Esferocito: Dianocito-codocito-Target cell, Eliptocito u ovalocito, Clula falciforme
o drepanocito, Dacriocito o clula en gotera, Esquistocito, Queratocito o clula
mordida.
MATERIAL

Equipo para venopuncion (Tubo lila)

1 Tubos de ensaye de 13x100
Portaobjetos y cubreobjetos
Puente de tincin
Microscopio

REACTIVOS

E.D.T.A. al 10%
Colorante de Wright
Solucin amortiguadora de fosfatos
Aceite de inmersin
Preparacin del colorante de Wright:
Triturar en un mortero 3 g de colorante de Wrigth y agregarle un poco de glicerina
hasta formar una pasta. Agregar poco a poco un litro de metanol disolviendo
perfectamente todo el colorante; una vez disuelto colocarlo en bao de agua a
37C durante 24 horas. Filtrar antes de usarlo.
Preparacin de la solucin amortiguadora de fosfatos.
Na2HPO4 2.56 g
KH2PO4...6.63 g
Disolver juntos y aforar a 1 litro de agua destilada.

TCNICA
1. Preparar frotis sanguneos en portaobjetos tal como se describi en la prctica no.
2
2. Colocar la placa con la extensin secada al aire hacia arriba en un puente de
tincin
3. Cubrir la extensin con lquido colorante mediante un goteo. Emplese suficiente
cantidad de colorante con el fin de evitar la evaporacin excesiva y la precipitacin
consiguiente, sin embargo tampoco debe ser tan abundante que rebose y se
derrame.
4. Dejar reposar durante 3 minutos y aadir sobre el lquido colorante en la extensin
una cantidad ms o menos igual de solucin amortiguadora con un segundo
gotero. Para conseguir la mezcla del colorante con el diluyente se sopla con
suavidad en varios puntos de la placa para establecer corrientes suaves igualando

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.

5.

6.
7.
8.
9.

as la distribucin. Dejar reposar de 8 a 10 min, esperando la aparicin de una

capa metlica verdosa.
Quitar el colorante con un chorro de agua destilada, primero suave y luego ms
fuerte hasta que haya desaparecido todo exceso de aquel, manteniendo siempre
horizontal la placa. El lavado tardar de 5 a 30 segundos.
Despus del lavado, quitar el exceso de agua inclinando la placa y tocando con un
papel secante el borde inferior. Limpiar la parte posterior del porta o cubreobjetos.
Secar las preparaciones al aire.
Si se utilizan cubreobjetos, montarlos con la extensin hacia abajo sobre un
portaobjetos con blsamo de Canad o bien con una gota de aceite de inmersin.
Examinar minuciosamente la extensin con objetivo de inmersin en aceite.
Clasificar y anotar las anormalidades que se observar en los eritrocitos.

RESULTADO

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFA
1. Rodak B. Hematologa: fundamentos y aplicaciones clnicas.
2. 2 ed. Rondinone S, trad. Buenos Aires: Mdica Panamericana, 2004. 884p. 2.
Prez JR., Fernndez J. Manual de prcticas de laboratorio de hematologa. 3 ed.
Guatemala: Universidad de San Carlos, 1997. 102p.

Stephanie Patricia Snchez Jimnez.