Sunteți pe pagina 1din 63

Senzori si Biosenzori

Biosenzor
Conform IUPAC (1996): un biosenzor este un dispozitiv
care este capabil s furnizeze anumite informatii analitice
cantitative sau semi-cantitative cu ajutorul unui element
de recunoastere biologic (receptor) care este n contact
direct cu un element numit traductor.
Biosenzorul nu este un sistem biologic
Un electrod pe baz de o enzim este un biosenzor

TRADUCTOR
Element de biorecunoastere

Semnal

TRADUCTOR
Element de biorecunoastere

Ce au in comun biosenzorii
cu senzorii umani?
Biosenzor

Analit / bioreceptor / traducator / procesor

Nas

Molecule mirositoare/ membrane olfactive/ celule nervoase/ creier

Ochii

Lumina vizibila/ conuri si bastonase / celule nervoase / creier

Principiul recunoasterii moleculare


semnal

+
receptor

analit

complex

Un instrument analitic ce ncorporeaz material


biologic sau biomimic (ex. tesut, microorganisme,
organite, receptori celulari, enzime, anticorpi, acizi
nucleici ...) legat sau integrat de un sistem traductor
fizico-chimic
Traductorii pot fi:
optici,
electrochimici,
magnetici sau
piezoelectrici

CHIMIA

BIOLOGIA

recunostere moleculara
sinteza
polimeri
membrane
imobilizare

FIZICA
optica
semiconductori

recunoastere moleculara
ingineria proteinelor
tehnologia receptorilor

ELECTRONICA

SENZORI
BIOSENZORI
INSTRUMENTATIE
microinstrumentatie
discreta
prezentarea
datelor
portabila

OPORTUNITATI
DE PIATA
in flux
in vivo
implantabile

optoelectronica
tehnologia siliciului
procesarea si
controlul datelor

ELECTRONICA
MOLECULARA
-bioelectronica
-retele neuronale

Evolutia constructiva
prima generatie
a doua generatie

a treia generatie

biomimetic

- biochip

CONCEPTUL GENERAL
sensor
date analitice
output: semnal fizic

traductor
receptor
imput: recunoastere moleculara

analit

DEFINIREA BIOSENZORILOR
Un biosenzor este prin definitie

v
un instrument (sistem) analitic
v
v v
ANALIT
care incorporeaza o componenta
v
biologic activa numita
bioreceptor,
bioreceptor integrata sau in
BIORECEPTOR
contact cu un traductor fizicochimic care transforma
semnalul biologic intr-un
semnal electric digital continuu
sau semicontinuu. Semnalul
TRADUCTOR
analitic inregistrat este
proportional cu compusul sau
clasa de compusi, care prezinta
AMPLIFICATOR
interes analitic.
DE SEMNAL
In comparatie cu tehnicile de
analiza clasice (cromatografia ,
Reprezentarea schematica si
spectroscopia) biosenzori sunt
principiul de functionare al
instrumente analitice care
prezinta o serie de avantaje
unui biosenzor.
precum detectia rapida,
sensibila si selectiva a analitului.

Principiul de functionare

semnal

proba

receptor traductor

electronica

Componentele principale
tehnicile chimice si bioanalitice
senzori chimici

biosenzori

bioanaliza

Receptori: enzime, celule, microrganisme,


anticorpi, ADN, chemo-receptori etc.
Traductori: electrochimici (ISE,O2, H2O2),
optici, tranzistori (ENFET), termistori,
piezoelectrici etc.
Semnale: substante chimice, lumina, pH,
temperatura etc.

ANALITI SI REACTII CONTROLATE


Biosenzorii pot fi clasificati dupa analiti, sau dupa
reactiile pe care le controleaza:
Monitorizarea directa a substratului reprezinta aplicatia
principala a biosenzorilor si se refera atat la detectia
substratului, cat si a compusilor care intervin sau se formeaza
in timpul procesului biocatalitic.
Un astfel de biosenzor poate fi aplicat cu succes pentru
monitorizarea directa a activitatii enzimatice prin masurarea
continua sau secventiala a produceri sau consumari unui
anumit compus.
Monitorizarea indirecta biosenzori bazati pe monitorizarea
directa a compusilor organici sau anorganici (metale grele,
fluor, cianuri etc.) si a altor substante ce inhiba sau
influenteaza proprietatile biocatalitice ale
elementului/receptorului biologic al biosenzorului.

Metode de analiza cu biosenzori


Sunt utilizate trei metode de analiza:

Analiza directa,
Analiza indirecta,
Analiza indirecta cu legatura necompetitiva.

In cazul analizei directe, analitul este legat de elementul sau de


biorecunoastere, care este detectat direct (acesta poate fi un antigen legat
de anticorpul sau).
In cazul analizei indirecte, trebuie sa aiba loc o reactie aditionala
pentru a detecta legatura analitului si elementul de biorecunoastere.
Aceasta reactie suplimentara poate fi competitiva sau necompetitiva.
In ambele cazuri o marcare este folosita in mod obisnuit pentru
urmatoarea detectie sau cuatificare.
Schema de detectie a analizei indirecte este mult mai putin limitata
decat in cazul abordari directe si depinde de natura marcari. Aceasta
marcare poate fi optica, electochimica sau asociata cu o variatie de masa
permitand utilizarea oricarui principiu de transductie cu prelevare indirecta
in contrast cu costrangerile date de prelevarea directa, care este limitata
de natura analitului insasi.
Analiza directa si analiza non-competitiva ofera semnale direct
proportionale cu concentratia analitului, in timp ce analiza competitiva
indirecta ofera o proportionalitate indirecta.

Biosenzorii enzimatici
Biosenzori enzimatici/metabolici pot fi reprezentati in mod schematic ca

fiind alcatuiti din doua parti principale si anume: biocomponenta care


asigura transformarea chimica a analitului si traductorul care transforma
semnalul chimic intr-un semnal fizic, de obicei electric. Analitul difuzeaza
din masa solutiei in stratul biocatalitic, unde are loc transformarea
enzimatica.
Biosenzori enzimatici reprezinta un grup mult mai mare de senzori cu
aplicatie in determinarea poluantilor din mediu sau a contaminantilor din
alimente decat biosenzori bazati pe acid nucleic.
Utilizarea biosenzorilor enzimatici se axeaza pe determinarea pesticidelor
din mediu .
Realizari:
dezvoltarea unui senzor electrochimic continuu pentru detectia fenolilor
din matricele complexe;
detectia dioxidului de sulf din curenti de gaz folosind electrozi
serigrafiati;
dezvoltarea unui biosenzor optic bazat pe reductaza in scopul
monitorizari cu o limita de detectie a nitritilor de numai 0,93M, valoare
sub limita admisa a concentratiei impuse de normele Comunitatii
Europene, care este de 2,2 M.

Imobilizarea enzimelor

De ce?
Pentru a asigura un contact si un
raspuns maxim
Reutilizarea biosenzorului

Atentie la:
Denaturarea enzimei
Pierderea activitatii
enzimatice

Garanteaza stabilitatea enzimei


Mai putin sensibile la interferente

Sensibilitatea semnalului
electrochimic

Immobilizarea enzimelor

Entrapare

Legare
covalenta

Adsorbtie

E
E
EE

EE

EE
E

EE

Micro-incapsulare

Reticulare
E

E
E

E
E

Example
electrozi
enzimatici
Part IV: Examples
ofde
enzyme
electrodes
(2/7)
Electrod de oxigen
L.C. Clark Jr and C. Lyons (1962) Ann. N. Y. Acad. Sci., 102, 29
GO x
Glucoza+O2 +H 2O
Acid Gluconic+H 2O2
Catre inregistrator
Electrolit

- Prima generatie

Anod de argint

- Scaderea concentratiei de oxigen


Catod de platina
Membrana de teflon

- Reducerea oxigenului: -0,7V


Membrana de celofan
Glucozoxidaza in gel
poliacrilamidic

Example de electrozi enzimatici


Electrod de oxigen

Trei tipuri diferite de reactii:


Reducerea oxigenului-in reactii de oxidare catalitica

GO x

Glucoza+O2 +H 2O
Acid Gluconic+H 2 O2
Consum de oxigen prin oxigenare
tirozinaza

Fenol + O2
chinona+H 2O
Oxidarea NADH si NADPH

NADP + salicilat + O2
catecol+H 2 O+NADP
salicilat hidroxilaza

Exemple
de electrozi
enzimatici
Part IV: Examples
Example
of enzyme
electrodes
(3/7)
Electrod cu apa oxigenata
GO x

Glucoza+O2 +H 2O
Acid Gluconic+H 2O2

apa
H2O2
oxigen

igen
apa

H2O2
H2O2
H2O2

apa
oxigen

Membrana GOX Acetat de


policarbonat reticulat celuloza

Oxidarea H2O2: 0,7 V

ee ee

Exemple de electrozi enzimatici


Electrod cu apa oxigenata

Se obtine un curent in platou proportional cu cantitatea de glucoza


Rata de formare a apei oxigenate = Rata
de oxidare a apei oxigenate
Current (nA)

Time (s)

Factorul de limitare a
curentului este dat de difuzia
glucozei , limitarile nu sunt
legate de enzima

Exemple de electrozi enzimatici


Utilizarea mediatorilor

Contacte catre potentiostat

Electrod de lucru tiparit

Gox imobilizata
in membrana

Electrod de referinta
tiparit

Tehnica modern a creat device-uri


electrochimice care au urmatoarele
avantaje:
Foarte mici
Portabile
Usor de utilizat
Ieftine

Tipuri de biosenzori enzimatici


k1
E + S

kcat
E-S

E + P

reciclare substrat

direct

k2

E1

traductor

traductor

E
E
E

traductor

secvential

E2
competitiv

E1

E2
traductor

traductor

reciclare dubla

OPTRODE

indicator
colorat

ENFET / IMFET

produs de
reactie
analit

Si
SiO2
Al2O3

membrana selectiva

ER

amplificare

mediator

traductor
oxidare

traductor

reducere

analitox

analit

Biosenzori cu electrozi modificati

enzima
co-substrat

Mox

Mred

Ered

Eox

produs

analit

produs

Aplicatii industriale
senzor electrochimic

Sensor

biosenzor enzimatic

Biosenzori pe baza de anticorpi si receptori


Elementele de biorecunoastere bazate pe molecule de anticorpi si receptori

au arii de aplicatie si functionalitate similare.


Analitii vizati in ultimi ani acopera un domeniu larg de aplicati de la
antibioticele din lapte, monitorizarea generala a mediului pana la metalele
grele.
O arie de aplicati traditionala a imunosenzorilor o reprezinta detectia
pesticidelor din probele de mediu si matrici alimentare.

Realizari:

dezvoltarea unui senzor potentiometric pentru simazina si aplicat in analiza

alimentelor precum extractele din carne , lapte, rosi si castraveti.


alti poluanti ai mediului incluzand si PCB-urile sunt detectati folosind
electrozi serigrafiati.
utilizarea unor imonosenzori dezvoltati special pentru analize patogenice,
dar numai uni dintre acestia au demonstrat ca au limite de detectie excelente
intr-un timp de analiza relativ scurt.
Principalele directi in utilizarea acestui tip de biosenzori se indreapata
spre obtinerea unor limite de detectie din ce in ce mai mici.

Biosenzorii cu celule sunt

instrumente analitice care


utilizeaza celulele ca
biocomponenta imobilizata
pentru a detecta sau a
raspunde la interacti specifice
cu substantele din mediu.
Biosenzorii cu celule pot fi
inclusi in clasa senzorilor
metabolici - recunoasterea
substratului de catre receptorul
imobilizat (enzime in diferite
grade de integrare, organele,
microorganisme sau tesuturi)
este urmata imediat de o
conversie chimica la un produs
corespondent care este
detectabil.
Intr-o ierarhie a
biocomponentelor utilizate la
realizarea biosenzorilor,
celulele se afla la polul opus
enzimelor, reprezentand gradul
cel mai inalt de complexitate.

Biosenzorii cu celule
Enzime izolate
cooperative
Sisteme de enzime
cuplate

competitive

Organite celulare
(mitocondri,
microzomi, perete
celular)
Celule bacteriene
intacte
Sectiuni de tesut
(animal, vegetal,
ciuperci)

bacterii
drojdii

secvential
cu
amplificare

Senzori celulari/microbieni
amperometric

NH3 H2S CO2 H+ potentiometric

oxigen

lumina

optic

caldura

termistor

componenta
traductor
biologica
amoniac, uree, nitriti, sulfati,
fosfati, fenol, naftalina, metan,
clorofenol, acid formic, benzoat, Fe,
Al, Hg, SO2

semnal

O2

NH3

H+

CO2
H2O

substrat

analit

O2

Datorita utilizari lor ca senzori pentru determinarea


toxicitati si a genotoxicitati, biosenzori bazati pe celule
intregi ca element de recunoastere au ca subiect de analiza
poluantiilor mediului si contaminantii din alimente.
Realizari:
- dezvoltarea unui senzor bacterian prevazut cu un
mecanism de corectie interna a raspunsului analitic prin
introducerea unei gene aditionale raportoare;
- folosirea biosenzorilor bazati pe detectia respiratorica pe
baza de microbi si celule din plante pentru analiza apelor
uzate;
- folosirea Pseudomonas sp. izolada din suprafetele de metal
corodat pentru detectia influentei microbiologice in
coroziunea metalului si dezvoltarea biosenzorilor
amperometrici.

Biosenzori bazati pe tesuturi si organisme intregi


(superioare)
Plante si tesuturi dar si organisme superioare intregi au fost utilizate in

constructia biosenzorilor.
Numarul aplicatilor cu acest tip de biosenzori este minuscul in
comparatie cu alte elemente de biorecunoastere, dar cu toate acestea
sunt aplicabili pe aproape orice tip de sistem biologic ca element de
biorecunoastere in biosenzori.
Realizari recente:
folosirea boabelor de soia si a raspunsului lor electropsihologic la ploaia
acida si alte conditi de stress din mediu ca un potential sistem de
biosenzori
tesutul de cartof dulce a fost imobilizat intr-un electrod de grafit ca sursa
de peroxidaza si utilizat pentru detectia hidrazinei din apa folosita la
fierberea alimentelor
chemoreceptori insectelor au fost inglobati cu tranzistori de silicon pentru
determinarea compusilor organici din aer
microalga Chlorella vulgaris a fost folosita pentru detectia metalelor grele
prin imobilizarea celulelor pe un fascicul de fibre optice si pentru
detectia acivitati fosfatazei alcaline.

Biosenzorii pe baza de Acizi nucleici (AND, ARN)

Utilizarea biosenzorilor bazati pe acizi nucleici in


industria alimentara si in controlul calitati mediului.
Rezultate:
S-a reusit astfel imbunatatirea imobilizari fragmentelor
de molecula ADN pe suprafata traductorului ;
Detectia bacteriilor si a altor patogeni din alimente, apa
de baut si aer bazata pe secvenctele proprii de ADN
prin folosind microbalante cu cristale de cuart si
sisteme de detectie optica.
Dezvoltarea biosenzorilor piezoelectrici cu ADN pentru
detectia toxicitatii bacteriilor bazati pe detectia unui
fragment de gena amplificat de PCR. Acest tip de
biosenzor a fost aplicat la legume, apa si probe
biologice umane.
Utilizarea ADN-ului si ARN-ului catalitic pentru detectia
metalelor cu potentiale aplicatii in domeniul controlului
mediului inconjurator si cel farmaceutic.
S-a reusit deasemenea determinarea unui numar de
27 de metale de la Ag la Zn cu ajutorul unui senzor
bazat pe ADN in incercarea de a extinde limitele de
detectie ale elementelor pentru analizele de mediu.

Cei mai multi biosenzori de


acest tip sunt bazati pe
hibridizarea ridicata a lantului
particular al moleculelor de ADN
si totodata a moleculelor de ARN.

structura ADN

tranductor piezoelectric

Recunoastere moleculara
spatiala

imobilizare orientata

Producatorii comerciali
Compania
productoare

Analitul

Tehnologia de realizare

Life Scan
(Milpitas, CA, USA)

Glucoza din snge

Enzim GOD/POD

MediSense Inc.
(Waltham, MA, USA)

Glucoza din snge


(ExacTech)

Electrod cu enzime
amplificare

Oriental Electric Co.Ltd


(Tokyo, Japonia)

degradarea ATP (indicator al


prospeimii petelui)

Electrod enzimatic

Pegasus Biotechnology
(Agincourt,Ontario,Canada)

indicator pentru prospeimea


crnii i a petelui
(MICROFRESH)
Glucoz i lactat din snge
(ESAT)

Electrod enzimatic
amperometric

Acizi organici, uree, antibiotice,


metale grele,etc.

Detecia modificrilor de
temperatur n urma
reaciei enzim-analit.

Prfegertewerk
Medingen GmbH
(Feitel, Germania)
ThermoMetric AB
(Jrflla, Suedia)
YSI (Yellow Springs, OH,
USA)

Glucoz, alcooli, amidon

Electrod enzimatic

Electrod enzimatic

Numeroi biosenzori au fost dezvoltati de laboratoarele de cercetare insa putine


sisteme practice s-au bucurat de un succes comercial

Aplicatii ale Biosenzorilor


Masoara efectul substantelor chimice (toxicitatea,
genotoxicitatea,
mutagenicitatea,
efectul
compusilor
endocrinici dezintegrasi, BOD, microorganisme)
Identifica un compus sau un grup de compusi bazandu-se
pe biorecunoasterea specifica a unei molecule: compusi
organici (pesticide, ierbicide, hormoni, PCBs, dioxine, fenoli,
surfactanti, alcani, compusi aromatici, PAHs, antibiotice,
toxine, compusi anorganici: metale, fosfati anorganici, nitrati
Aplicarea biosenzorilor ca detectori in metodele de
separare de inalta performanta pot permite (imbunatatire)
detectia substantelor nedetectabile de catre detectori bazati
pe proprietati fizico-chimice
Combinarea metodelor fizico-chimice (cum ar fi HPLC, GC,
CE) si a biosenzorilor (ce utilizeaz sisteme vi, celule,
enzine) poate permite identificarea moleculelor care nu sunt
detectabile separat prin oricare din cele doua metode.

Prezinta avantaje analitice

Specificitate mare
Sensibilitate
Ofer posibilitatea determinarii nu numai a compusilor chimici
dar si a efectelor biologice
Pot furniza atat concentratia totala cat si cea biodisponibila a
substantei
Portabilitate, miniaturizare, lucrul on-site, capacitatea de a
masura substante direct din matricii complexa cu minim de
prelucrari, raspuns rapid etc.

Aspecte practice la aplicarea biosenzorilor


Matricea probei poate afecta dramatic aplicarea biosenzorilor in

medii reale
Nivelul variat de carbon organic
Alegerea solventilor organici
Stabilitatea compusilor biologici

Aplicatiile biosenzorilor pe probe reale


Controlul proceselor determinarea parametrilor care influenteaza cresterea

bacteriilor (temperatura, pH, oxigen dizolvat, disponibilitatea nutrientilor)


Biosenzori pot fi utilizati in analiza compozitei alimentelor, in proteine,
glucide aminoacizi , vitamine sau alti compusi care se adauga in alimente
cum ar fi indulcitori artificiali, agenti de conservare, etc.
Biosenzori isi gasesc o larga aplicatie in determinarea toxicitatii unor
compusii chimici in special cei organici.
Analiza apelor de suprafa, apei potabile (imunosenzori optici RIANA la
determinarea pesticidelor i EDCs), apei subterane (senzori bacterieni
pentru identificarea toxicitii a apei sever contaminat cu solveni clorinai),
apei marine (biosenzori bacterieni pentru determinarea nitrailor i nitriilor,
biosenzori cu celule de alge marine Spirulina subsala), apelor uzate
(biosenzori amperometrici screen-printed modificai enzimatic - fabric de
celuloz).
Analiza calitatii aerului: biosenzor algal multispecie pentru analiza COV
formaldehid si metanol.
Biosenzori pot fi aplicati in controlul poluari apelor reziduale. Biosenzori au
capacitatea de a reduce timpul de determinarea a unui poluant foarte mult
comparativ cu metodele clasice. (exemplu: determinarea BOD care prin
metoda clasica dureaza 5 zile, utilizarea biosenzorilor reduce acest timp la
cateva ore cu aceleasi rezultate).

Tendinte actuale si perspective viitoare


Monitorizarea continua
Determinarea multi-analit
Nanotehnologii
Miniaturizarea
Elemente biosenzitive noi
- biosenzorii cu SPR (rezonanta suprafetei plasmei) constituie tipul cel mai de
succes al instrumentelor comerciale pentru monitorizarea mediului

Ingrijorarea la nivel global privind impactul pe care contaminarea mediului

o poate avea asupra sanatatii publice si a mediului va conduce la:

- cresterea cererii pentru biosenzori cu detectie rapida


- aparitia de aplicatii noi ale sistemelor de biosenzori bazati pe noi tehnologii

Validarea. Biosenzorii trebuie comparati cu sistemele analitice


conventionale in termenii sigurantei, sensibilitatii, selectivitatii, specificitatii
determinarilor. Validarea poate implica unele dificultati: aspecte legate de
stabilitatea elementului biologic sau a elementului imobilizat in/pe traductor.

Biosenzori bazati pe materiale biomimetice

Din moment ce elementul de recunoastere nu este o molecula


biologica derivata, includerea senzorilor biomimetici in
categoria biosenzorilor este discutabila. Desi, pe de alta parte,
din moment ce ei imita activitatea biologica a anticorpilor,
moleculele receptoare sunt aplicate exact in aceeasi maniera ca
si echivalentele lor biologice.
Cu imbunatatirile aduse stiintei materialelor si ingineriei ,
dezvoltarea unor materiale nanocompozite inedite si integrarea
nanotehnologiei si bioanalizei, acest domeniu este foarte
probabil sa creasca semnificativ in urmatori ani.
Printre cei mai recenti senzori biomimetici propusi pentru
analiza unor substante chimice complexe, este inclusa detectia
ricinei, pentru care lanturile A si B ale moleculei de AND au fost
fixate in polimeri organici ai silanului iar detectia foloseste
spectrometria de fluorescenta.

a IV-a generatie
biomimetici

miniaturizare
anod
catod
teflon
membrana
enzimatica
membrana
filtranta
0,6-0,8 mm senzor implantabil

potentiostat

sistem analitic
detectie
amperometrica

ER
EL
EA

Micro si nanobiosenzori reprezinta in mod cert una

din directiile viitoare in cercetarea din domeniul


biosenzorilor.
Posibilitatile par nelimitate atunci cand combinam
aceste ari diferite si sperantele rezolvarii
problemelor curente: prepararea probelor,
portabilitate, detectia moleculelor, pana la viteze
analitice veritabile si fiabilitate.
Multe obstacole tipice pentru subsisteme si pentru
senzori bioanalitici vor trebui depasite pentru a
indeplini toate aceste sperante.

Microbiosenzori
Nanobiosenzori

Realizari recente:
dezvoltarea unui sistem complet automat de

preparare a probelor pentru detectia organismelor


patogene.
dezvoltarea unei biosenzor bazat pe fibre optice
folosind bacteri recombinate pentru detectia
toxicitati mediului.
dezvoltarea unui microsenzor in care anticorpii au
fost discret imobilizati pe o varietate de suprafete,
prin aceasta asigurandu-se o separare a
elementelor de biorecunoastere.

BIOCHIPUL
-lab on a chip-

Aplicare:
Sanatate, Economie, Legalitate, Religie

Biosenzorul identifica
prezenta sau absenta a
33 de specii animale
diferite in orice produs
alimentar prin detectia
secventelor AND specifice.

Bazati pe
chipuri/arrays
anticorpi,
probe bazate pe
activitate, suprafete
activate chimic
Eliberarea
controlata

Detectie
multipla

Electrozii

Biozenzori

Utilizarea biochipurilor cu ADN


IN ANALIZA CLINICA:
Detectia polimorfismului apo-lipoproteinei E din sangele uman
Detectia genelor specifice legate de speciile de Mycrocystis
Denaturarea oxidativa a ADN
Detectia hibridizarii ADN legate de virusul hepatitei B
Interactia intre AND cu echinomicina, mitomicina, tiotepa, complexul Cu(II)-mitoxantrona
Determinarea originii unor boli

IN ANALIZA MEDIULUI:
Detectia aminelor aromatice toxice din apele reziduale
Detectia aducturilor formate intre benzo[]pyrene si ADN
Detectia interactiei intre ADN si carboplatin
Detectia poluantilor mutagenici: atrazina, PCB, PAH, bifenoli,
daunomicina, aflatoxina B1

Analiza directa cu
biosenzori
Elementul de biorecunoastere
este imobilizat pe suprafata
traductorului.
Proba continand analit si alti
componenti este incubata cu
biosenzorul (A), analitul se
leaga in mod specific cu
elementul de biorecunoastere si
un semnal este produs de
traductorul (B).
In cel de-al doilea exemplu,
proba nu contine analit ci
numai alti compusi (C).
Niciun semnal nu este
obtinut dupa incubare, din
moment ce nu are loc nicio
interactie intre elementul de
biorecunoastere si celelalte
componente.

B
Legenda
Elementul de
biorecunoastere

D
Traductor
Analit
Alti compusi din
proba

Semnal
proportional cu
concentratia
analitului

Nu s-a obtinut
niciun semnal din
moment ce niciun
analit nu a fost
prezent

Sunt nite senzori de mas extrem de sensibili, capabili s


msoare diferne de ordinul nanogramelor.
QCM-urile sunt dispozitive piezoelectrice fabricate dintr-o
plcu subire de cuar, cu 2 electrozi de aur pe fiecare parte
a plcuei

Cuar

Electrod de aur

Electrod de aur
(partea ce msoar)

Aur (Au)
Platin(Pt)
Argint(Ag)

Ligand

Contra-ligand

Anticorp

Antigen, virus, celul

Inhibitori

Enzime (liganzii sunt de obicei analogi de


substrat sau de cofactori)

Receptori

Proteine membranare, celule

Acizi nucleici

Proteine de legtur a acizilor nucleici (enzime


sau histone)

Hormoni, vitamine

Receptori, proteine transportoare

antigen - anticorpi

protein - protein

contralgand - ligand

enzim - substrat

receptor - ligand

Moleculele pot fi imobilizate:


pasiv prin adsorbie prin interacii:

Hidrofobe
Ionice

Covalent prin reacii cu grupri specifice

Cea mai bun metod e imobilizarea covalent (unele


suprafete adsorb slab sau nu pot adsorbi deloc), astfel
crete si activitatea biomoleculei, reducnd adsorbia
nespecific, i crescnd stabilitatea

Densitatea de suprafa a liganzilor ar trebui


optimizat
Densiti reduse dau un semnal corespunztor redus
Densiti ridicate pot da interferene sterice ntre
liganzii moleculelor imobilizai steric, mpiedicnd
accesul la moleculele int

1) Situsuri active.
2) situsuri inaccesibile.
3) situsuri inaccesibile cnd situsurile vecine sunt
ocupate.
4) situsuri legate si restricionate

Modificarea suprafeei electrozilor de aur pentru a


crea grupe funcionale
Descarcare corona
Scufundare in agenti corozivi
Depunere electrochimic
Modificarea biomoleculelor petru legarea covalent
de suprafaa electrodului

Soluie chimic

Curarea suprafeei

Imobilizarea biomoleculelor Proteine

ADN-ss

Proteine

ADN-ss

Adiia agentului de blocare


Glicerin
6-mercapt-1-hexanol
Etanolamin HCl

Proteine

ADN-ss

Proteine

ADN-ss

Interacia cu
antigenul

Interacia cu lanul
complementar

Proteine

ADN-ss

EXEMPLE
Cristalele curate au fost
imersate intr-o soluie de etanol i
acid 16-mercaptohexanoic
(MHDA).
Cristalele modificate-MHDA au
fost tratate cu EDC NHS(carbodiimid) (Nhidroxisuccinimid) petru a activa
grupa terminal a acidului
carboxilic ntr-un ester NHS.
Dup splare cu ap i uscare,
au fost adugai anti-E coli
O157:H7 (antigeni) pe electrozii
de aur i inui la 4 C (cel putin
15h).
Excesul de anticorpi a fost spalat
cu PBS

Feritinele

Feritinele sunt o clas de proteine de depozitare larg rspndite la


vertebrate, neertebrate, plante, fungi i bacterii. Principala lor funcie este s
acumuleze i s detoxifice fierul intracelular. La concentraii ridicate de fier,
feritina poate fi disproporional de crescut. Nivelul ridicat de feritin se tie c
este un marcr nespecific al proceselor inflamatorii i neoplasmidice.
Sa demonstrat concentraii ridicate la pacieni cu diferite tumori
precum:
Cancer de sn
Carcinoame celulare renale
Carcinoame hepatocelulare
Cancer de laringit
Neoplasmide maligne de maxilar, etc.
Sau la boli precum:
Infecii cu HIV
Leucemie
Sindromul hemopatologic reactiv.

EXEMPLE
Sa dezvoltat un nou imunosenzor ce
folosete anticorpi umani antiferitin(Abs) imobilizai pe plcue de
aur al QCM.
Unele din avantaje ar fi : sensibilitate
ridicat, specificitate ridicat,
necesit un numar redus de probe,
reutilizare ridicat.
Cristalul a fost imersat ntr-o soluie
de cistamin.
n continuare a fost imersat ntr-o
soluie apoas de glutaraldehid.
apoi cristalul a fost imersat ntr-o
soluie de anticorpi (Ab) (IgM).
Cristalul a fost blocat cu o soluie de
glicerin-PBS.

Tehnica modern a creat device-uri


electrochimice care au urmatoarele
avantaje:
Foarte mici
Portabile
Usor de utilizat
Ieftine

Exemple de biosenzori
Test de sarcina

Detecteaz proteina hCG din urina.


Interpretarea si analiza datelor se efectuate de
catre utilizator.
Dispozitiv de monitorizare a glucozei
(pentru pacientii cu diabet zaharat)
Monitorizeaza nivelul de glucoz din sange.
Interpretarea i analiza datelor sunt efectuate
de catre un microprocesor.
Biosenzor pentru depistarea
bolilor infectioase
Analiza datelor si interpretarea
acestora este realizata de
catre un microprocesor